一种分离提取非实体瘤凋亡细胞的方法

分离提取凋亡细胞对许多研究有重要意义 ,我们参考Ｍａｒｔｉｎ等[1] 的方法 ,建立了一种简便易行的非实体瘤凋亡细胞分离提取方法。1　材料和方法1 1　细胞培养　ＨＬ 6 0细胞株 (本院血液病研究室提供 ) ,常规ＲＰＭＩ 16 40培养基 (Ｇｂｉｃｏ产品 )培养 ,隔天换液 ,所有用于实验的细胞均处于对数生长期。1 2　凋亡细胞诱导　调整细胞浓度至 10 6/ｍｌ,加入以二甲基亚砜 (ＤＭＳＯ)溶解的抗癌药物ＶＰ 16 (Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ ,Ｓｉｇｍａ产品 )至所需浓度 (0、5、10、2 0、40 μｇ/ｍｌ)作用 3 5ｈ ,ＰＢＳ(ｐＨ 7 2 ,不含Ｃａ+ 、Ｍｇ2…     

硫化砷诱导NB4细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究

硫化砷(ａｒｓｅｎｉｃｓｕｌｆｉｄｅ,ＡＳ)包括三硫化二砷(Ａｓ2Ｓ3)及四硫化四砷(Ａｓ4Ｓ4)。Ａｓ2Ｓ3是雌黄的主要成分,Ａｓ4Ｓ4是雄黄的主要成分。我所近年应用硫化砷治疗急性早幼粒细胞白血病(ＡＰＬ),取得满意效果[1]。为研究ＡＳ治疗ＡＰＬ的机制,我们以ＮＢ4细胞为体外模型,探讨了ＡＳ对ＡＰＬ的作用,发现ＡＳ能够在体外诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞,而二巯基丙醇能够部分抵消ＡＳ对细胞凋亡及细胞周期阻滞的诱导作用。提示ＡＳ是治疗ＡＰＬ的有效药物。材料和方法1　试剂　Ａｓ2Ｓ3购自美国Ａｃｒｏｓ公司,纯度99.99%,溶于ＲＰＭＩ…     

三氧化二砷诱导NB4细胞凋亡的端粒酶活性研究

我们检测了三氧化二砷 (Ａｓ2 Ｏ3 )诱导ＮＢ4细胞凋亡时的端粒酶活性 ,旨在探讨细胞凋亡与端粒酶调控之间的关系。材料和方法1　细胞株　ＮＢ4细胞株由苏州大学第一医院 ,江苏省血液病研究所惠赠。2　主要试剂　Ａｓ2 Ｏ3 购自Ｓｉｇｍａ公司 ,用 1ｍｏｌ/ＬＮａＯＨ将Ａｓ2 Ｏ3 溶解 ,调ｐＨ值至 7.2 ,双蒸水配制成 1ｍｍｏｌ/Ｌ贮存液 ,使用时用ＲＰＭＩ 16 40完全培养基稀释到所需浓度。端粒酶检测试剂盒(ＴＲＡＰ ｅｚｅｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｋｉｔ)购自德国宝灵曼公司。3　细胞培养　ＮＢ4细胞在 37℃、饱和湿度、…     

从人体未消毒部位分离MRSA的新型选择培养基——PANO-DNA琼脂

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (ＭＲＳＡ)是医院较常见的多重耐药菌株 ,已成为世界性医疗难题。实验室在控制ＭＲＳＡ传播中起重要作用。至今 ,分离ＭＲＳＡ尚无标准方法 ,许多选择培养基依靠葡萄球菌的表型特征 ,如碳水化合物发酵、脂酶活性和菌落色素特征等。作者报道了一种含ＤＮＡ染料和多种抗生素的选择培养基 ,能直接观察到菌落周围的ＤＮＡ酶活性。ＰＡＮＯ ＤＮＡ琼脂含有营养琼脂、ＤＮＡ、1 0 0ｍｌ培养基中加入 0 .3 4 %的甲基绿和沙黄Ｏ各 1ｍｌ以及ＰＡＮＯ抗生素混合液 :氨曲南 1 0 μｇ/ｍｌ,制霉菌素 1 0 0 μｇ/ｍｌ,多粘菌素…     

抗PML-RARα反义核酸的设计、合成和对NB4细胞生长、凋亡的影响

目的合成针对长型ＰＭＬＲＡＲα融合基因ｍＲＮＡ起始部位和融合位点的反义核酸（ＡＳ），探讨ＡＳ的稳定性、特异性及其对ＮＢ４细胞生长、凋亡的影响。方法以ＮＢ４细胞株为研究对象，采用台盼蓝拒染法进行细胞计数；聚丙烯酰胺凝胶进行寡核苷酸的电泳；流式细胞仪、ＤＮＡ电泳、细胞荧光染色进行细胞凋亡检测。结果合成的ＡＳ稳定、耐细胞内外核酸酶、无非特异性作用；起始部位ＡＳ（ＳＴＡＳ）和融合位点ＡＳ（ＦＵＡＳ）明显抑制细胞增殖，且呈剂量依赖性。浓度２０μｇ／ｍｌ时增殖抑制率０％～１１．３％；８０μｇ／ｍｌ时，抑制率５０．０％～６７．７％。ＦＵＡＳ（６０μｇ／ｍｌ）处理第７天、第９天出现明显的凋亡细胞群，处理后３天、５天、７天、９天的凋亡细胞率分别为９．３％、２４．５％、４１．０％、３４．２％。结论针对长型ＰＭＬＲＡＲα融合基因的ＡＳ设计、合成是成功的；抗ＰＭＬＲＡＲαＡＳ能抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡。     

骨髓增生异常综合征造血干/祖细胞体外增殖、分化特征研究

我们对骨髓增生异常综合征 (ＭＤＳ)患者骨髓ＣＤ34 细胞进行检测和富集 ,并对富集后的骨髓细胞进行体外培养 ,以研究其增殖分化特征及对不同造血因子的反应。病例和方法1　病例来源　 1 993年 3月～ 1 997年 1 0月于我院住院的ＭＤＳ患者 2 9例 ,其中男性 2 0例 ,女性 9例 ;中位年龄 3 7岁(2 4～ 65岁 )。按ＦＡＢ诊断及分型标准[1]1 1例为低危组 (ＲＡ/ＲＡＳ) ,1 8例为高危组 (ＲＡＥＢ/ＲＡＥＢ ｔ)。2　试剂来源　所用单克隆抗体包括抗Ｔ细胞 (ＣＤ3、ＣＤ2 )、ＮＫ细胞 (ＣＤ5 6 )、Ｂ细胞 (ＣＤ2 0 )、粒细胞 (ＣＤ11ｂ)、红细胞 (…     

多发发性骨髓瘤患者胸腔积液检出骨髓瘤细胞1例

患者 ,男 ,5 7岁。因近 1个月感头晕、乏力、气短不能平卧 ,伴右侧胸背部疼痛明显 ,于 2 0 0 1年 10月 2 2日入院。实验室检查 :血Ｈｂ 4 2 ｇ/Ｌ ,ＲＢＣ 1.2× 10 12 /Ｌ ,ＷＢＣ 4 3×10 9/Ｌ。分类 :Ｎ 0 6 6 ,Ｌ 0 2 7,Ｍ 0 0 7,Ｐｌｔ 91× 10 9/Ｌ ,ＥＳＲ12 0ｍｍ/ｈ ,血清总蛋白 113 8ｇ/Ｌ ,白蛋白 2 0 7ｇ/Ｌ ,球蛋白93 1ｇ/Ｌ ,ＢＵＮ 5 0ｍｍｏｌ/Ｌ ,Ｃｒ 114 μｍｏｌ/Ｌ ,免疫球蛋白ＩｇＧ6 .4 2 ｇ/Ｌ ,ＩｇＡ 2 0 .98ｇ/Ｌ ,ＩｇＭ 0 .4 2ｇ/Ｌ ,血清蛋白电泳 :总蛋白 12 3 2 ｇ/Ｌ ,Ａ 38.2ｇ/Ｌ ,α11 1ｇ/Ｌ ,α…     

三氧化二砷对K562及其多药耐药细胞系K562/A02细胞的诱导凋亡研究

Ｐ170表达阳性的白血病细胞往往对多种不同化学结构和作用靶点的药物同时发生耐药。我们观察了三氧化二砷(Ａｓ2 Ｏ3 )对体外培养的人急性红白血病细胞系Ｋ5 6 2及其多药耐药细胞系Ｋ5 6 2 /Ａ0 2细胞的凋亡诱导作用 ,以探讨Ａｓ2 Ｏ3 对多药耐药白血病细胞的作用。材料和方法1　药品　Ａｓ2 Ｏ3 (Ｓｉｇｍａ公司 )溶于Ｈａｎｋｓ缓冲液中 ,配制成 1ｍｍｏｌ/Ｌ ,保存于 4℃。2　细胞株及细胞培养　Ｋ5 6 2及其多药耐药细胞系Ｋ5 6 2 /Ａ0 2细胞 (中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所提供 )置于含体积分数为 10 %小牛血清的ＲＰＭ…     

三丁酸甘油酯对早幼粒细胞白血病细胞株的诱导分化及促凋亡作 …

目的 研究三丁酸甘油酯（ＴＢ）与全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）不同浓度组合对ＮＢ４及ＭＲ２细胞的诱导分化作用,并观察ＴＢ对ＮＢ４,ＭＲ２细胞是否具有促凋亡作用。方法 通过硝基四唑氮蓝（ＮＢＴ）还原率及细胞表面抗原ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ３３表达观察细胞分化程度;通过细胞形态、ＤＮＡ片段化电泳,流式细胞术（ＦＣＭ）ＤＮＡ含量分析及凋亡细胞原位标记（ＴＵＮＥＬ）试剂盒检测细胞凋亡;用逆转录－聚合酶链反应（     

新维甲类化合物对早幼粒细胞白血病和正常造血增殖分化作用的体外研究

目的：发掘维甲１号、维甲２号、维甲３号和维甲４号（与全反式维甲酸结构不同的新维甲类化合物）应用价值。方法：在体外研究其对人急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）细胞株ＮＢ４和原代ＡＰＬ细胞诱导分化和克隆增殖的抑制及其对正常造血细胞的促增殖作用。结果：细胞形态学、ＮＢＴ反应、细胞周期动力学和ＣＦＵ－Ｌ克隆形成抑制率等多参数研究表明，新维甲类化合物具有诱导ＮＢ４细胞株和原代ＡＰＬ细胞分化成熟及抑制ＣＦＵ－Ｌ克隆生长的作用，作用强度与结构有关，维甲２号活性较强，明显高于全反式维甲酸及其它新维甲类化合物（Ｐ＜０．０１）。半固体造血祖细胞集落培养研究表明，新维甲类化合物能促进ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｍｅｇ增殖。结论：研制的新维甲类化合物对ＡＰＬ细胞具有诱导分化并对其克隆生长有抑制作用，且能促进正常造血，其中以维甲２号分化作用为突出，进一步研究开发它的临床应用有一定的价值。     

正常人骨髓基质细胞支持造血的实验研究

我们对正常人骨髓基质细胞在体外传代培养情况、ＣＦＵ Ｆ及基质细胞上清对造血的影响及基质细胞层有核细胞的粘附能力进行了观察 ,现报道如下。材料和方法1　正常人骨髓细胞的来源　取无血液疾患的胸外科手术患者肋骨 5～ 7ｃｍ ,取出骨髓分离单个核细胞 (ＭＮＣ) ,调浓度至(2～ 5 )× 10 6 ｍｌ备用。2　骨髓基质细胞培养　将 2× 10 6 ｍｌＭＮＣ置ＩＭＤＭ培养基中 (含体积分数为 30 %的人ＡＢ型血清 ,10 - 4 ｍｏｌ Ｌ氢化考的松 ,0 .1ｍｌｂＦＧＦ) ,在 37℃ ,体积分数 5 %的ＣＯ2 ,饱合湿度条件下培养 3～ 5ｄ ,半量换液。 7～ 9ｄ形…     

雄黄对NB4及HL-60细胞的促凋亡作用

目的：研究复方青黛片的主要成分雄黄治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的机制。方法：应用细胞形态、ＤＮＡ电泳及流式细胞仪测定等多项方法，在体外研究雄黄诱导ＮＢ４细胞和ＨＬ６０细胞凋亡的作用。结果：雄黄具有诱导ＮＢ４细胞和ＨＬ６０细胞凋亡作用，雄黄浓度在２５．０～２００．０ｍｇ／Ｌ之间这种诱导作用无明显差异。浓度为１２．５ｍｇ／Ｌ，培养７２小时，ＮＢ４细胞表现典型的凋亡特征而ＨＬ６０细胞则无。二硫化二砷（Ａｓ２Ｓ２）与雄黄在相同条件下实验结果一致。结论：雄黄诱导ＮＢ４和ＨＬ６０细胞凋亡是其主要成分Ａｓ２Ｓ２的作用，而非其所含少量其它重金属元素的作用。在一定范围，其作用随时间和浓度增加而增强。雄黄是复方青黛片治疗ＡＰＬ取得高缓解率的中药成分。     

氧化砷诱导维甲酸耐药早幼粒细胞白血病细胞（MR—2）凋亡的体外 …

目的：深入了解氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的机制。方法：以对全反式维甲酸耐药的ＡＰＬ细胞株ＭＲ－２为模型，用细胞生长，活力测定，形态学观察和流式细胞仪分析，四氮唑蓝还原反应及免疫荧光等指标观察Ａｓ２Ｏ３治疗ＡＰＬ的效应途径。结果：１．０μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３可诱导ＭＲ－２细胞凋亡，并能降解ＡＰＬ特异蛋白ＰＭＬ－ＲＡＲα融合蛋白。结论：Ａｓ２Ｏ３治疗ＡＰＬ的效应途径可能不同     

慢性乙型肝炎的治疗现状

慢性乙型肝炎 (ＣＨＢ)病人呈全球性分布 ,据统计世界上大约有 3 .5亿ＨＢＶ慢性感染者。每年大约有 10 0万人死于ＨＢＶ引起的疾病。 75 %～ 85 %肝癌 (ＨＣＣ)与ＨＢＶ感染有关。迄今为止 ,对ＣＨＢ的治疗尚不令人满意 ,本文就ＣＨＢ的治疗现状综述讨论如下。1　干扰素 (ＩＦＮ α)据美国Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ报道 ,经选择对象用干扰素ＨＢｓＡｇ阴转率约 6% ,ＨＢｅＡｇ阴转率约 2 1% ,ＨＢＶ ＤＮＡ阴转率为 2 0 % (检测阈为 1.5～ 3 0 .0 ｐｇ/ｍｌ或 5 0～ 10 0万拷贝 /ｍｌ)。干扰素每日5ＭＵ或 10ＭＵ每周 3次或隔日一次是较好的治疗…     

氧化砷诱导维甲酸耐药早幼粒细胞白血病细胞(MR-2)凋亡的体外研究

目的：深入了解氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的机制。方法：以对全反式维甲酸耐药的ＡＰＬ细胞株ＭＲ２为模型，用细胞生长、活力测定、形态学观察和流式细胞仪分析、四氮唑蓝还原反应及免疫荧光等指标观察Ａｓ２Ｏ３治疗ＡＰＬ的效应途径。结果：１．０μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３可诱导ＭＲ２细胞凋亡，并能降解ＡＰＬ特异蛋白ＰＭＬＲＡＲα融合蛋白。结论：Ａｓ２Ｏ３治疗ＡＰＬ的效应途径可能不同于ＡＴＲＡ，但ＰＭＬＲＡＲα可能是二者的共同作用靶点     

干扰素和三氧化二砷诱导淋巴瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞的协同作用

干扰素 (ＩＦＮ)局部应用可直接杀伤肿瘤细胞 ,其作用机制和疗效尚不十分清楚。为探讨ＩＦＮ α直接抗肿瘤机制 ,我们研究了ＩＦＮ α对ＥＢ病毒感染的Ｂｕｒｋｉｔｔ淋巴瘤细胞株Ｒａｊｉ和ＥＢ病毒阴性细胞株Ｄａｕｄｉ凋亡和细胞周期阻滞的诱导作用及其与三氧化二砷 (Ａｓ2 Ｏ3)的协同作用 ,旨在探索难治性淋巴瘤治疗的新手段。材料和方法1　药品和试剂　ＩＦＮ α为天津华立达生物制品公司产品 ,Ａｓ2 Ｏ3为哈尔滨伊达制药公司产品 ,溶于ＲＰＭＩ 16 4 0培养液中 ,1ｍｍｏｌ Ｌ作为贮存液于 4℃保存 ,应用前稀释为 1μｍｏｌ Ｌ工作液。…     

灵芝多糖对人脐血LAK细胞增殖活性的影响

本研究表明，灵芝多糖（ＧＬＰ）能直接刺激人脐血单个核细胞（ＣＢＭＣ）增殖，并能协同ＰＨＡ刺激ＣＢＭＣ增殖在ｒＩＬ－２诱导人脐血ＬＡＫ细胞（简称ＣＢ－ＬＡＫ）早期加入ＧＬＰ，能明显增强ＣＢ－ＬＡＫ细胞增殖活性，最佳浓度１０μ／ｍｌ；ＧＰＬ本身不能诱导ＣＢＭＣＩＬ－２Ｒ的表达，但能协同ｒＩＬ－２提高ＣＢ－ＬＡＫ细胞表达ＩＬ－２Ｒ的表达。     

氧化砷诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡及其分子机制的初步研究

目的：了解氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的细胞和分子机制。方法：以早幼粒细胞白血病细胞株ＮＢ４细胞等为研究对象，利用流式细胞仪，ＤＮＡ电泳，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ、Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹，免疫组化等手段，观察Ａｓ２Ｏ３对ＡＰＬ的作用。结果：Ａｓ２Ｏ３能显著诱导ＮＢ４细胞凋亡，而不影响ＨＬ－６０和Ｕ９３７的生长和存活。氧化砷能有效降低ＮＢ４细胞中ｂｃｌ－２基因的表达，而对其它几种凋亡相关基因（包括ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ、ｂａｘ和ｂｃｌ－ＸＬ）的ｍＲＮＡ水平无影响。结论：这可能是Ａｓ２Ｏ３诱导ＮＢ４细胞凋亡的分子机制之一。     

盐水反应性抗Mur引起配血不合1例

患者应某 ,女 ,92ｙ ,育有 4个子女 ,1998年曾输ＡＢ型血80 0ｍｌ。 2 0 0 1年 3月因结肠肿瘤需手术治疗 ,术前血红蛋白仅 6 4ｇ/Ｌ ,与献血员戈某盐水配血时主侧凝 ,次侧不凝。1　材料与方法1 1　血型检定　病人血型ＡＢ型Ｒｈ阳性 ,结果见表 1表 1　患者血型定型ＲＢＣ与下列抗体反应抗Ａ抗Ｂ抗Ｄ血清与试剂红细胞反应ＡｃＢｃＯｃ4+4+4+0 0 01 2　Ｍｕｒ抗原鉴定　经上海市血液中心鉴定 :病人应某Ｍｕｒ抗原阴性 ,献血员戈某Ｍｕｒ抗原阳性。1 3　不规则抗体筛选及鉴定　患者血清与谱细胞 1～ 10 (上海市血液中心产品 )反应 ,Ｍｕｒ抗原…     

多发性骨髓瘤耐药细胞株核基质蛋白的变化

为进一步阐明多发性骨髓瘤 (ＭＭ)细胞的耐药机制 ,我们从核基质蛋白 (ｎｕｃｌｅａｒｍａｔｒｉｘｐｒｏｔｅｉｎ ,ＮＭＰ)水平研究ＭＭ细胞的多药耐药 (ＭＤＲ)机制。材料和方法1　人骨髓瘤细胞Ｓｋｏ 0 0 7及骨髓瘤长春新碱 (ＶＣＲ)耐药细胞Ｓｋｏ 0 0 7 ＶＣＲ的培养和标本处理　人骨髓瘤细胞株Ｓｋｏ 0 0 7由本校微生物免疫学教研室刘乐和教授提供。细胞培养用含 10 %小牛血清的ＲＰＭＩ 16 40培养液 ,培养条件 :37℃ ,5 %ＣＯ2 ,饱和湿度。人骨髓瘤长春新碱耐药细胞的诱导参照Ｓｃｈｅｐｅｒ等介绍的方法[1 ] 进行 ,主要步骤包括收获…