紫外线对人皮肤成纤维细胞中Hrd1及Nrf2表达的影响

目的探讨紫外线(UV)照射对人皮肤成纤维细胞中羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白(Hrd)1及核因子E2相关因子(Nrf)2表达的影响及可能机制。方法共收集12份人皮肤组织标本,曝光及非曝光部位标本各6份,免疫组化检测2组Hrd1及Nrf2的表达。将体外培养人皮肤成纤维细胞分为对照组、UVA组、UVB组,照光后用Western blot法检测各组成纤维细胞中Hrd1及Nrf2的表达。应用Hrd1-siRNA转染体外培养人皮肤成纤维细胞,下调细胞中Hrd1的表达后,Western blot检测成纤维细胞Nrf2的表达。应用免疫荧光分析检测细胞中Hrd1与Nrf2在细胞中的共定位情况,应用免疫共沉淀检测体外培养人成纤维细胞中Hrd1与Nrf2是否存在内源性结合。结果临床标本实验中,曝光部位皮肤组织中Hrd1表达(0.4756±0.0785)明显高于避光部位(0.1270±0.0253,t=7.317,P<0.05),曝光部位皮肤组织中Nrf2表达(0.1190±0.0217)明显低于避光部位(0.2629±0.0263,t=7.306,P<0.05)。体外培养成纤维细胞实验中,经紫外线照射后,UVA组与对照组相比,Hrd1蛋白表达水平明显增高(t=7.227,P<0.05),Nrf2蛋白表达水平明显下降(t=6.456,P<0.05);同样,UVB组与对照组相比,Hrd1蛋白表达水平明显增高(t=2.980,P<0.05),Nrf2蛋白表达水平明显下降(t=13.52,P<0.05)。应用Hrd1-SiRNA下调体外培养人纤维细胞中Hrd1的表达后,无论是经UVA照射还是UVB照射,被下调Hrd1组细胞内Nrf2的表达较未下调组明显升高。免疫荧光分析结果显示Hrd1与Nrf2在体外培养人皮肤成纤维细胞中的均有表达,并且在细胞中存在Hrd1与Nrf2共定位。免疫共沉淀验证了Hrd1与Nrf2在体外培养人皮肤成纤维细胞中存在内源性结合。结论Hrd1与Nrf2在人皮肤成纤维细胞中存在结合,紫外线照射可通过增加细胞中Hrd1的表达从而抑制Nrf2的表达。     

紫外线及全反式维A酸对人皮肤及成纤维细胞中Hrd1表达的影响

目的 探讨紫外线照射及全反式维A酸（ATRA）对人皮肤及成纤维细胞中Hrd1表达的影响及机制。方法 2017年12月至2018年6月于南京医科大学附属第一医院皮肤科收集12份人皮肤组织标本,30 ~ 40岁、60 ~ 70岁曝光及非曝光部位标本各3份,免疫组化检测各组Hrd1表达。将40只BALB/c小鼠分为对照组、紫外线组、ATRA组及紫外线 + ATRA组,其中紫外线组、紫外线 + ATRA组每日照射UVA 10 J/cm2和UVB 30 mJ/cm2,紫外线 + ATRA组（照光前给药）、ATRA组小鼠背部剃毛区域每日均匀涂抹1次0.1 ml 0.1% ATRA药膏,对照组既不涂药也不照射紫外线。14周后处死小鼠并取背部皮肤免疫组化观察Hrd1的表达。体外培养的人皮肤成纤维细胞分为对照组、紫外线组、ATRA组及紫外线 + ATRA组,紫外线组和ATRA + 紫外线组照光前用磷酸盐缓冲液覆盖细胞上层,照射10 J/cm2 UVA或30 mJ/cm2 UVB,ATRA + 紫外线组（照光后给药）和ATRA组用含ATRA 1 μmol/L的培养基继续培养24 h。Western印迹法检测各组成纤维细胞Hrd1表达,荧光显微镜观察各组细胞内活性氧水平。组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验,P < 0.05认为差异有统计学意义。结果 30 ~ 40岁、60 ~ 70组曝光部位皮肤组织中Hrd1表达水平分别为0.307 ± 0.256、0.486 ± 0.579,均明显高于避光部位（0.196 ± 0.330、0.199 ± 0.375）,t值分别为5.486、10.579,P < 0.05。BALB/c小鼠体内实验中,对照组、紫外线组、ATRA组及紫外线 + ATRA组小鼠皮肤中Hrd1表达水平分别为0.189 ± 0.015、0.288 ± 0.017、0.187 ± 0.020、0.226 ± 0.021,差异有统计学意义（F = 19.553,P < 0.001）,紫外线组高于对照组（t = 5.337,P = 0.033）和ATRA + 紫外线组（t = 4.891,P = 0.039）。体外实验中,人皮肤成纤维细胞分别经UVA、UVB照射后,4组细胞Hrd1水平差异均有统计学意义（F值分别为120.704、102.119,均P < 0.001）,UVA或UVB照射对Hrd1表达水平的影响基本一致,紫外线组Hrd1水平均明显高于对照组和ATRA + 紫外线组（均P < 0.05）。紫外线照射后,紫外线组活性氧水平均明显高于对照组和ATRA + 紫外线组（均P < 0.05）。结论 ATRA可以抑制紫外线介导的皮肤成纤维细胞中Hrd1的表达,其机制可能与ATRA抑制细胞内活性氧生成有关。     

紫外线对人皮肤成纤维细胞的影响

紫外线辐射可造成皮肤损伤,引起皮肤出现红斑、光老化等。紫外线作用于成纤维细胞,引起细胞因子分泌及基因表达的改变,不仅能造成真皮层的损伤,还可被用来治疗某些疾病,如局限性硬皮病。从紫外线对皮肤成纤维细胞的损伤、成纤维细胞对紫外线的防御反应及紫外线的应用等方面阐述了紫外线对成纤维细胞的影响。     

薏苡仁提取物对人皮肤原代成纤维细胞MMP1/3 mRNA表达的影响

目的 探讨薏苡仁提取物(ESC)对中波紫外线(UVB)照射、体外培养人皮肤成纤维细胞(HDF)的基质金属蛋白酶1、3(MMP1、MMP3)mRNA表达的影响.方法 采用酶消化法和组织块法培养HDF.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测ESC对HDF增殖的影响.用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测1、2.5、...     

中波紫外线对皮肤成纤维细胞纤维连接蛋白及EDA、EDB表达的影响

目的探讨中波紫外线UVB照射对皮肤成纤维细胞纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及其选择性剪接片段EDA、EDB的影响。方法用RT-q PCR法检测UVB照射后成纤维细胞各时相FN及其EDA、EDB片段的mRNA表达水平。结果 UVB100m J/cm2照射后成纤维细胞FN及FN-EDA、EDB的mRNA表达均有下降。照射后1、2、4、8、12、24h组与对照组(0h)比较,差异有统计学意义(P均0.05)。结论中波紫外线UVB下调皮肤成纤维细胞FN及FN-EDA、EDB mRNA表达,在UVB引起的皮肤成纤维细胞急性光损伤过程中,FN及FN-EDA、EDB可能发挥着重要作用。     

Twist1在人皮肤成纤维细胞中的表达及其对细胞增殖的影响

目的探讨Twist1对人皮肤成纤维细胞增殖的影响及其可能机制。方法组织块贴壁法提取人皮肤成纤维细胞(HSFs),通过连续传代建立人皮肤成纤维细胞的复制性衰老模型。将传代的HSFs分为年轻组(P3～7)、衰老组(P20～25),通过β-半乳糖核苷酶染色法比较衰老染色率、EdU检测细胞增殖率的变化以及Western blot法检测衰老相关蛋白p21表达的差异来验证复制性衰老模型是否成功建立。通过Western blot法检测Twist1分别在年轻组与衰老组的表达情况。接着在年轻组中,通过转染Si-Twist1序列,使Twist1的表达下降,EdU检测HSFs增殖率的变化。结果相比于年轻组,衰老组HSFs的SA-β-gal染色率明显增加,细胞增殖率明显下降,衰老相关蛋白p21的表达明显增加,差异均有统计学意义(P0.05)。以上实验结果表明,已成功建立了HSFs的复制性衰老模型。另外Western blot发现Twist1蛋白在年轻组HSFs中的表达水平显著高于衰老组(P0.05),EdU提示在Si-Twist1组比NC组的细胞增殖率明显下降(P0.05)。结论 Twist1在衰老组HSFs中表达明显下调,在体外抑制Twist1的表达可引起HSFs的增殖率的下降,这为探讨Twist1与皮肤成纤维细胞衰老的相关研究提供了依据。     

香烟烟雾提取物对成纤维细胞Fibulins家族的影响及黄芪甲苷干预作用

目的 探索吸烟对皮肤成纤维细胞Fibulins家族的影响以及黄芪甲苷的干预作用.方法 在光镜下观察香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)染毒后成纤维细胞形态变化；采用MTr比色法检测不同浓度的CSE对成纤维细胞存活力的影响及黄芪甲苷(AST)干预后其存活力的变化；荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测成纤维细胞中Fibulin-3,Fibulin-4,Fibulin-5在CSE处理及加入AST干预后的表达变化.结果 光镜下可见CSE染毒后的成纤维细胞失去正常形态；MTT结果显示,CSE对体外培养的成纤维细胞有显著的抑制作用,其抑制率呈剂量依赖性；向CSE染毒后的成纤维细胞加入黄芪甲苷,可使其增殖率升高,且呈现剂量依赖性,在100 mg/L浓度时促进增殖活性最强；荧光定量PCR结果显示,CSE处理后Fibulin-3,Fibulin-4,Fibulin-5的mRNA表达水平明显降低,加入黄芪甲苷干预后表达上升(P＜0.05).结论 吸烟可通过影响Fibulins家族的表达引起弹力纤维组装的异常,造成弹性组织变性,而黄芪甲苷对其有逆转性保护作用.     

中波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞自噬对凋亡影响的初步研究

[目的]探讨不同剂量中波紫外线(UVB)照射人皮肤成纤维细胞诱导的自噬对细胞凋亡活性的影响.[方法]人皮肤成纤维细胞来自于23岁健康男性环切术后包皮的原代培养,连续传代培养后取第3～ 10代的细胞进行实验.通过单丹酰戊二胺(MDC)染色和免疫荧光标记微管相关蛋白1轻链3(LC3)的方法,确定不同剂量3-甲基腺嘌呤(3-MA)对自噬的抑制作用.UVB照射后立即加入0.5 mmol/L 3-MA孵育细胞4h作为自噬的抑制方法.Hoechst和碘化丙啶(PI)染色结合Annexin V-异硫氰酸荧光索(FITC)和PI标记细胞后流式细胞仪检测作为细胞凋亡的定性和定量方法.[结果]0.5 mmol/L 3-MA能明显抑制人皮肤成纤维细胞自噬活性(饥饿诱导组自噬细胞阳性百分数为63.037％±5.876％,3-MA孵育后下降至34.425％±5.183％).空白对照组、30、50、100mJ/cm2UVB照射组标记LC3绿色荧光信号逐渐增强,照射后立即对上述4组加入3-MA孵育4h则LC3蛋白表达差异不明显.0.5 mmol/L 3-MA对细胞活性影响最小.50 mJ/cm2 UVB照射下加入3-MA孵育较未加3-MA孵育细胞强Hoechst和强PI双染细胞增多;100 mJ/cm2 UVB照射后加3-MA孵育较未加3-MA孵育细胞强Hoechst和强PI双染细胞减少.Annexin V -FITC和PI标记细胞后流式细胞仪分析显示,在50 mJ/cm2 UVB照射下,抑制自噬的细胞中晚期凋亡水平[( 10.933±0.839)％]较未抑制细胞[(7.267±0.473)％]上升,两者之间差异具有统计学意义(t=5.20,P＜ 0.05);而在100mJ/cm2UVB照射下,抑制自噬的细胞中晚期凋亡水平[(7.100±0.781)％]较未抑制细胞[( 10.133±0.681)％]下降,两者之间差异具有统计学意义(t=6.29,P＜ 0.05).[结论]50 mJ/cm2 UVB照射诱导人皮肤成纤维细胞自噬通过抑制凋亡对细胞起到保护作用,而在100 mJ/cm2 UVB照射下发生的较高水平自噬可能诱导了自噬性细胞死亡.     

UVB对皮肤成纤维细胞相关骨架蛋白表达的影响

目的:确定UVB对皮肤成纤维细胞骨架蛋白的影响.方法:用150 mJ/cm2的UVB照射培养的皮肤成纤维细胞,用MTT法检测细胞活性,用Western blot法检测α-微管蛋白、β-微管蛋白、β-肌动蛋白和波形蛋白的含量.结果:150 mJ/cm2 UVB照射后β-微管蛋白含量逐渐降低,波形蛋白逐渐升高,α-微管蛋白和β-肌动蛋白改变不明显.结论:在UVB诱导人皮肤成纤维细胞光损伤过程中,β-微管蛋白和波形蛋白可能发挥着重要作用.     

中波紫外线对人真皮成纤维细胞中长链非编码RNA表达的影响

目的 对中波紫外线(ultraviolet rays B,UVB)照射后人真皮成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)中差异表达的长链非编码RNA(long non-ucoding RNAs,LncRNA)进行筛选和功能分析.方法 将处于对数生长期8～11代的HDFs分为对照组和UVB ...     

长波紫外线照射对人皮肤成纤维细胞表达一氧化氮合成酶和一氧化氮的影响

目的 通过检测UVA照射后人皮肤成纤维细胞的细胞形态及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS) 和一氧化氮(NO)表达,初步探讨UVA引起成纤维细胞光损伤的发病机制.方法 以1J/cm2,5J/cm2和10J/cm2 UVA分别照射人成纤维细胞后24h,用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR )和化学细胞免疫方法检测iNOSmRNA和蛋白表达情况,Griess 法检测NO的含量,MTT试验检测细胞增殖能力,倒置显微镜和HE染色观察细胞形态变化.结果 10J/cm2UVA照射人成纤维细胞后24h出现皱缩最为明显,其细胞增殖能力(MTT)(OD值,0.2472±0.0328)与其他三组比较明显减退(P均<0.05),且iNOSmRNA(1.0568±0.0778)和iNOS蛋白表达强于1J/cm2和5J/cm2(P均<0.05),同时NO的含量(51.11±2.2760)nmol/mL高于1J/cm2的(32.44±3.1620)nmol/mL和5J/cm2的(41.32±2.4460)nmol/mL(P均<0.05).结论 人成纤维细胞iNOS和NO的表达与UVA照射呈剂量依赖.成纤维细胞的光损伤与iNOS和NO产生有关.     

UVA1对人体皮肤成纤维细胞的影响及临床应用

UVA1作用于皮肤成纤维细胞,使其凋亡增加、酶活性及细胞因子的分泌改变,造成真皮层损伤,还可促进伤口愈合,被用于治疗某些与皮肤成纤维细胞增生相关的皮肤病,如硬皮病、瘢痕疙瘩及增生性瘢痕等。本文就UVA1对皮肤成纤维细胞的影响及其在皮肤病治疗中的应用作以综述。     

α硫辛酸对人皮肤成纤维细胞自噬的影响

目的：评价α硫辛酸对人皮肤成纤维细胞自噬水平的影响。方法人皮肤成纤维细胞与终浓度分别为0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L 的α硫辛酸孵育4、12和24 h 后,采用噻唑蓝法检测细胞增殖活性,单丹酰戊二胺（MDC）染色法检测细胞自噬水平,Western 印迹法检测微管相关蛋白1轻链3-B（LC3-B）表达。结果孵育4 h 和12 h 时,0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L α硫辛酸组间人皮肤成纤维细胞增殖活性（A490值）差异均无统计学意义（F 值分别为2.85、1.34,均 P >0.05）;孵育24 h 时,各组间差异有统计学意义（F =10.41,P <0.01）。MDC 法检测显示,孵育4 h 和12 h 时,0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L α硫辛酸组间自噬体阳性细胞百分率差异均无统计学意义（F 值分别为0.11、0.10,均 P >0.05）;孵育24 h 时,各组间差异有统计学意义（F =8.03,P <0.05）。Western 印迹法检测显示,孵育4 h 和12 h 时,0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L α硫辛酸组间细胞 LC3-Ⅰ向 LC3-Ⅱ转化（LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ）水平差异均无统计学意义（F 值分别为3.38、2.13,均 P >0.05）,但孵育24 h 时各组间差异有统计学意义（F =37.49,P <0.01）。结论α硫辛酸可能抑制人皮肤成纤维细胞基础自噬。     

长波紫外线对人皮肤成纤维细胞自噬水平的影响

目的 探讨长波紫外线（UVA）对人皮肤成纤维细胞（HSF）自噬水平的影响。 方法 HSF慢性UVA照射分组：未照射组、5 J/cm2组、10 J/cm2组和20 J/cm2组,每天照射1次连续4 d;HSF急性照射分组：未照射组、5 J/cm2组、10 J/cm2组、30 J/cm2组和60 J/cm2组,单次照射。采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐分析法（MTT）检测细胞增殖活力。单丹酰戊二胺染色法（MDC）检测细胞自噬体。Western印迹法检测细胞LC3蛋白LC3-I向LC3-II转化分析（LC3-II/LC3-I）。 结果 与未照射组HSF比较,5、10、20 J/cm2慢性UVA照射组细胞增殖活力降低（F = 155.5,P < 0.05）。与未照射组HSF比较,5、10、30、60 J/cm2急性UVA照射后1、6和12 h,细胞增殖活力均降低（F值分别为1 335、1 649、2 774、均P < 0.05）。MDC法标记细胞自噬囊泡,与未照射组比较,5、10、20 J/cm2慢性照射均可上调细胞自噬水平（F = 748.62,P < 0.05）,而5、10、30、60 J/cm2急性照射后1、6和12 h对细胞自噬水平无明显影响（F值分别为0.014、0.004、0.002,均P ＞ 0.05）。5、10和20 J/cm2慢性照射组LC3-I向LC3-II转化（LC3-II/LC3-I）均增加（t 值分别为9.002、21.772、18.33,均P < 0.05）,细胞自噬水平上调。与未照射组比较,5、10、30、60 J/cm2急性照射后1、6和12 h,细胞LC3-I向LC3-II转化均无明显变化（F值分别为0.13、0.27、0.06,均P ＞ 0.05）,对细胞自噬水平无明显影响。 结论 慢性UVA照射可上调HSF自噬水平,急性UVA照射HSF自噬无明显变化。     

咪喹莫特对人皮肤成纤维细胞活性和凋亡的影响

目的：观察咪喹莫特（imiquimod）溶液对人真皮成纤维细胞（FB）细胞毒性、细胞增殖及细胞凋亡率的影响，探讨其治疗瘢痕疙瘩的可能机制。方法：分离培养人真皮成纤维细胞，用四甲基偶氮唑蓝（MTF）法检测不同浓度咪喹莫特溶液对成纤维细胞毒性及细胞增殖的影响：用流式细胞技术检测咪喹莫特对成纤维细胞凋亡率的影响。结果：不同浓度咪喹莫特加入成纤维细胞培养体系孵育24h后，成纤维细胞形态均有不同程度受损，且细胞增殖活性下降，尤以20mg/L浓度时细胞活性下降明显；各浓度咪喹莫特处理组细胞凋亡率均高于对照组（P〈0．05），但在不同时间点检测的细胞凋亡率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：咪喹莫特可以降低成纤维细胞增殖活性并增加细胞凋亡率，这些可能是其促进皮肤瘢痕组织消退的相关机制。     

茶多酚对人皮肤成纤维细胞Nrf2/Bach1mRNA及核蛋白的影响

目的 探讨茶多酚对人皮肤成纤维细胞(HSF) Nrf2/Bach1 mRNA及Nrf2/Bach1核蛋白表达分布的影响.方法 不同浓度茶多酚(0、2.5、5、10、20、40 mg/L)孵育HSF 24 h,MTT法检测细胞增殖活性,筛选出适宜浓度茶多酚,并用该浓度药物孵育HSF 24 h,RT-qPCR法检测Nrf2和Bach1mRNA表达,Western印迹法检测Nrf2、Bach1核蛋白表达,免疫荧光法检测Nrf2、Bach1蛋白核分布情况.结果 MTT法检测显示,当茶多酚浓度为5 mg/L时,对HSF增殖无明显影响,故后续实验采用5 mg/L茶多酚,对照组浓度为0.HSF加入茶多酚孵育后,Bach1 mRNA相对表达量(0.629±0.077)低于对照组(0.940±0.033,t=6.397,P＜0.05),Nrf2 mRNA(1.467±0.076)高于对照组(0.977±0.091,t=7.133,P＜0.05);Nrf2核蛋白表达(6.929±0.121)高于对照组(3.537±0.126,t=33.636,P＜0.05),而Bach1核蛋白(1.424±0.171)低于对照组(16.966±1.702,t=15.730,P＜0.05).免疫荧光结果显示,Nrf2蛋白在细胞核内的聚集增多,Bach1蛋白在细胞核内聚集减少.结论 茶多酚可促进Nrf2mRNA、Nrf2核蛋白的表达及核分布,抑制Bach1 mRNA、Bach1核蛋白的表达和核分布,从而发挥抗氧化作用.     

紫外线对皮肤角质形成细胞和成纤维细胞产生MMP-1和MMP-3的影响

目的:研究中波紫外线辐射对体外培养的表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞产生基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和MMP-3的直接和间接影响,研究绿茶中的主要活性成分表没食子儿茶酚没食子酸酯(EGCG)对此影响的保护作用。方法:体外培养角质形成细胞株HaCaT和真皮成纤维细胞,中波紫外线辐射、不同浓度IL-6刺激及EGCG处理后,ELISA方法测定上清液中Pro-MMP-1和MMP-3蛋白含量,半定量RT-PCR方法测细胞中mRNA含量。结果:UVB30mJ/cm2辐射后角质形成细胞分泌的pro-MMP-1和MMP-3并未增加(P>0.05),真皮成纤维细胞合成和分泌MMP-1和MMP-3mRNA含量和蛋白水平均显著增加(P<0.05),IL-6(8、16、24pg/mL)可显著增加成纤维细胞产生MMP-1和MMP-3(P<0.05)。EGCG(0.15、0.3mM)能够显著抑制紫外线诱导成纤维细胞产生MMP含量的增加(P<0.05),但IL-6刺激成纤维细胞所产生的MMP-1和MMP-3的增加不受EGCG的影响(P>0.05)。结论:中波紫外线辐射并不能直接导致角质形成细胞分泌MMP-1和MMP-3增加,但紫外线辐射后角质形成细胞分泌的IL-6可促进成纤维细胞产生MMP。EGCG对IL-6刺激成纤维细胞产生MMP增加没有影响,但它可以显著抑制紫外线辐射直接导致的成纤维细胞产生MMP-1和MMP-3的增加,对防治皮肤光老化可能有一定作用。     

UVA1对人工皮肤成纤维细胞光损伤的影响

目的探讨不同UVA1照射剂量对人工皮肤真皮细胞形态及细胞活性的影响,为建立人工皮肤光损伤模型提供依据。方法以不同剂量UVA1（0J／cm^2-80J／cm^2）照射人工皮肤,通过HE染色,从形态学上观察经UVA1照射后真皮成纤维细胞数量的变化,通过MTT法检测真皮成纤维细胞的活性。结果HE染色示真皮成纤维细胞的数量随UVA1剂量的增大而减少,于真皮浅层较为明显;MTT法示与0J／cm^2组相比,20J／cm^2和30J／cm^2UVA1照射人工皮肤时成纤维细胞活性未受到明显的抑制（P〉0．05）．UVA1剂量大于40J／cm^2时细胞活性下降明显（P〈0．05,P〈0．001）,呈剂量依赖性。结论UVA1照射剂量大于40J／cm^2是造成人工皮肤真皮成纤维细胞光损伤的始剂量。     

芒果苷抑制中波紫外线诱导人成纤维细胞提前衰老的相关研究

【摘要】 目的 研究芒果苷是否对反复亚毒性剂量中波紫外线（UVB）诱导的人二倍体成纤维细胞的早衰起抑制作用及其可能的机制。 方法 实验分成空白对照组（不做处理）,UVB-应激诱导的提前衰老（SIPS）组（单纯照光）,芒果苷4.0 mg/L组（单纯加药）,UVB + 芒果苷1.0 mg/L组、UVB + 芒果苷2.0 mg/L组、UVB + 芒果苷4.0 mg/L组（UVB照射联合药物处理）。成纤维细胞经5次UVB 10 mJ/cm2照射后,用细胞计数法（CCK8法）检测细胞增殖活性,β半乳糖苷酶染色（SA-β-Ga1）计算衰老细胞百分比,流式细胞仪测定细胞周期,蛋白印迹检测衰老相关蛋白p53、p21、p16含量,实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测基质金属蛋白酶1（MMP1）、基质金属蛋白酶3（MMP3）、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和衰老相关基因p53、p21、p16 mRNA表达。采用单因素方差分析进行数据统计分析。 结果 UVB + 芒果苷1.0 mg/L组、UVB + 芒果苷2.0 mg/L组、UVB + 芒果苷4.0 mg/L组以及UVB-SIPS组细胞增殖活性（A450）依次为0.322 9 ± 0.011 3、0.336 1 ± 0.016 3、0.342 6 ± 0.014 4、0.288 2 ± 0.020 7（F = 110.08,P < 0.05）,β半乳糖苷酶染色阳性率依次为（88.83 ± 4.54）%、（46.33 ± 5.51）%、（32.17 ± 6.05）%、（93.67 ± 3.75）%（F = 283.54,P < 0.05;与UVB-SIPS组比较,除UVB + 芒果苷1.0 mg/L组外,其他两组均P < 0.05）;G1期细胞阻滞率依次为（72.19 ± 3.42）%、（60.99 ± 2.70）%、（49.80 ± 2.10）%、（82.09 ± 0.89）%（F = 156.01,P < 0.05）。与UVB-SIPS组相比,UVB + 各浓度芒果苷组细胞MMP1和MMP3 mRNA表达降低（F = 69.41、106.41,均P < 0.05）,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达增加（F = 66.41、46.81,除UVB + 芒果苷1.0 mg/L组P > 0.05外,其他各组均P < 0.05）,衰老相关基因p53、p21、p16 mRNA表达降低（F = 265.60、151.82、329.85,均P < 0.05）,衰老相关蛋白p53、p21和p16的合成减少（F = 160.51、158.53、75.38,均P < 0.05）,各指标检测值的变化与芒果苷浓度之间呈一定依赖性。 结论 芒果苷可能通过下调p53、p21、p16基因的表达来抑制UVB诱导的人二倍体成纤维细胞的早衰。     

白藜芦醇对UVB照射的人皮肤成纤维细胞MMP-1水平及细胞凋亡的影响

目的初步探寻红葡萄酒中主要活性成分白藜芦醇对紫外线照射皮肤保护作用的可能机制。方法白藜芦醇对UVB照射的人皮肤成纤维细胞基质金属蛋白酶(MMP)-1水平及细胞凋亡的影响。将培养的人皮肤成纤维细胞分为5组,A组:无UVB照射无干预组,B组:UVB照射无干预组,C组:UVB照射1μmol/L白藜芦醇干预组,D组:UVB照射10μmol/L白藜芦醇干预组,E组:UVB照射100μmol/L白藜芦醇干预组。UVB照射剂量均为30mJ/cm2。用免疫组织化学方法分别检测5组细胞中MMP-1水平,用磷脂酰丝氨酸外翻分析(AnnexinV法)检测细胞凋亡率。结果 A～E组5组细胞MMP-1阳性细胞评分及凋亡率差异均有统计学意义(P均<0.05)。A组评分及凋亡率均明显低于B组,两组比较差异有统计学意义(P均<0.05),B组与C,D,E组评分及凋亡率比较差异均有统计学意义(P均<0.05),C～E组3组评分及凋亡率比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论白藜芦醇可以抑制UVB照射诱导的人皮肤成纤维细胞MMP-1水平的升高,并可减少细胞因UVB照射引起的凋亡,白藜芦醇可能通过此机制对紫外线照射皮肤起到保护作用。