系统性红斑狼疮患儿外周血辅助性T17细胞表达的初步研究

目的 观察系统性红斑狼疮(SLE)患儿外周血辅助性T17(Th17)细胞表达变化,探讨Th17细胞及其相关的细胞因子在SLE患儿发病中的作用.方法 以15名健康儿童为健康对照组,流式细胞术(FCM)检测25例SLE患儿(SLE组)外周血Th17细胞百分率,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测外周血血浆白细胞介素(IL)-17、IL-21水平,分析Th17细胞与SLE活动度之间的关系.统计学处理采用t检验和Spearman相关性检验.结果 与健康对照组相比,SLE患儿外周血中CD3+CD8-IL-17+T细胞的频率[(1.24±0.64)%,(0.59±0.21)%],CD3+CD8-IL-21+T细胞的频率[(1.5±0.6)%,(0.8±0.4)%]明显增高,P均＜0.01;血浆中IL-17,IL-21水平明显升高(P＜0.01).CD3+CD8-IL-17+T细胞频率与疾病活动度相关(r=0.732,P＜0.01),CD3+CD8-IL-21+T细胞频率与疾病活动度无相关性(r=-0.002,P＞0.05).结论 Th17细胞及其相关细胞因子参与儿童SLE发病及病情发展.

Abstract：

Objective To investigate the Th17 cell expression in peripheral blood of childron with systemic lupus erythematosus (SLE) and explore the role of Th17 cells and the cytokines in the pathogenesis of SLE. Methods Twenty-five children with SLE were enrolled and 15 healthy children were controls. Flow cytometry (FCM) was employed to detect the expression of Th17 cells in peripheral blood of SLE children (SLE group, n=25), and IL-17, IL-21 levels in plasma were detected by ELISA. Two-independent sample t-test and Spearmen's test were used for correlation analysis. Results Compared with that of the control, the frequencies of CD3+CD8-IL-17+T[(1.24±0.64)% vs (0.59±0.21)%], CD3+CD8-IL-21+T cells[(1.5±0.6)%vs (0.8±0.4)% ] increased significantly in SLE patients (P＜0.01) and the plasma concentrations of IL-17, IL-21 were significantly higher (P＜0.01). The SLE activity was positively correlated with the frequencies of CD3+CD8-IL-17+T cells, but not with CD3+CD8-IL-21+T cells. Conclusion Th17 cells and the related cytokinesplay an important role in the pathogenesis of childhood SLE.     

CD4~+LAP~+T细胞在慢性心力衰竭患者中的变化及意义

目的:探讨CD4+LAP+T细胞在慢性心力衰竭(CHF)患者中变化及意义。方法:本研究共纳入85例研究对象,其中CHF患者55例(病例组):缺血性心脏病(IHD)30例,非缺血性心脏病(NIHD)25例;对照组30例。采用流式细胞术分别测定病例组和对照组外周血中CD4+LAP+T细胞在CD4+T细胞中的比例;采用夹心酶联免疫法(ELISA)测定转化生长因子(TGF)-β1、白细胞介素(IL)-10的浓度。结果:病例组外周血中CD4+LAP+T/CD4+T细胞比例显著低于对照组[(2.23±0.76)%∶(3.66±0.84)%,P0.05];病例组血浆中TGF-β1的水平显著低于对照组[(256.52±78.74)pg/ml∶(386.83±85.27)pg/ml,P0.05],病例组血浆中IL-10水平显著低于对照组[(16.82±5.21)pg/ml∶(25.71±5.81)pg/ml,P0.05]。相关性分析提示CD4+LAP+T细胞比例与血浆TGF-β1、IL-10、左室射血分数呈显著正相关,与左室舒张末期内径、C-反应蛋白水平呈显著负相关。结论:CD4+LAP+T细胞比例在CHF患者中显著减少,相关细胞因子表达下调,预示CD4+LAP+T细胞减少在CHF的进展中发挥促进作用。     

CX3CL1/CCL26-CX3CR1通路在原发性胆汁性胆管炎免疫机制中的作用

目的探究CX3CL1/CCL26-CX3CR1通路在原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis, PBC)免疫机制中的作用。方法收集PBC患者和健康对照者外周血及肝脏病理标本,采用ELISA检测血浆CX3CL1及CCL26水平,流式细胞术检测外周血单个核细胞各亚群中CX3CR1~+细胞比例。使用免疫组化分析肝活检组织中CX3CL1和CCL26表达情况。采用ELISA和流式细胞术检测不同细胞因子及LPS刺激下,体外培养的人肝内胆管上皮细胞中CX3CL1/CCL26-CX3CR1通路表达水平变化。结果共纳入PBC患者40例、健康对照者18例。PBC患者血浆CX3CL1水平[(0.690±0.271)ng/mL]较健康对照者[(0.540±0.101)ng/ml]显著升高(P=0.044)。PBC患者血浆CCL26浓度[(8.94±4.09)pg/mL]较健康对照者[(6.75±1.86)pg/mL]有升高趋势,但无统计学差异(P=0.104)。与健康对照者相比,PBC患者CX3CR1表达水平在NKT-like细胞[(63.5±25.4)%vs.(78.6±18.0)%,P=0.026]和CD4~+ T细胞[(5.5±5.4)%vs.(13.7±9.0)%,P=0.003]中显著增高,且后者这一差异在其CD28~+和CD28~-亚群中均显著。PBC患者肝脏胆管上皮细胞同时高表达CX3CL1和CCL26,健康对照者则弱表达CX3CL1,无CCL26表达。人肝内胆管上皮细胞CX3CL1表达水平在IFN-γ刺激下显著增加,CCL26表达在IL-4、IL-13刺激下显著增加;在IFN-γ刺激下,CX3CR1表达显著升高。结论 PBC患者肝内胆管上皮细胞可能在IFN-γ刺激下CX3CL1表达增加,在IL-4和IL-13刺激下CCL26表达增加,其受体CX3CR1在外周血NKT-like细胞和CD4~+ T细胞中表达上调。CX3CL1和CCL26可能通过CX3CR1协同介导PBC胆管上皮损伤。     

羟氯喹抑制紫外线诱导的系统性红斑狼疮CD4+T细胞白细胞介素-10和干扰素-γ的表达

目的 研究紫外线对系统性红斑狼疮(SLE)CD4+T细胞因子的影响和羟氯喹的抑制作用.方法 选择SLE 30例,健康对照10名.磁珠分选SLE患者和健康人的CD4+T细胞,紫外线311 nm窄谱中波紫外线暴露,加入羟氯喹共培养,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清白细胞介素(IL)-10和干扰素-γ的表达水平.采用t检验进行统计学分析.结果 SLE患者CD4+T细胞IL-10表达高于健康对照[(27±4)和(18±3) pg/ml,P=0.011];经45、100 mJ/cm2紫外线暴露后,SLE活动患者CD4+T细胞IL-10表达升高[(27±4)和(77±42) pg/ml,(40±18)和(77±42) pg/ml,P=0.022,P=0.048],经100 mJ/cm2紫外线暴露后,活动患者CD4+T细胞IL-10表达高于稳定患者[(77±42)和(24±4)pg/ml,P=0.029];羟氯喹降低SLE活动患者CD4+T细胞IL-10和干扰素-γ表达[(2.6±4.0)和(17.9±2.3)pg/ml,P=0.018,P=-0.017)];羟氯喹降低经45,100 mJ/cm2紫外线暴露后SLE活动患者T细胞IL-10表达[(40±18)和(22±6)pg/ml,(77±42)和(21±5) pg/ml,P=0.037,P=0.04];羟氯喹降低经100 mJ/cm2紫外线暴露的SLE活动和稳定患者T细胞干扰素-γ表达[(18±3)和(13±14) pg/ml,(19±7)和(12±5) pg/ml,P=0.013,P=0.049].结论 紫外线加重SLE患者体内Th1/Th2细胞因子的比例失衡;羟氯喹抑制了紫外线诱发SLE患者干扰素-γ和IL-10的表达.

Abstract：

Objective To explore the role of hydroxychloroquine (HCQ) in ultraviolet B (UVB)- induced expression of interleukin (IL)-10 and interferon (IFN)-γ from CD4+T cells in patients with systemic lupus erythematosus (SLE). Methods Thirty patients with SLE and 10 healthy controls were enrolled in the study. CD4+ T cells were isolated using magnetic beads from SLE patients and healthy controls. HCQ was added in culture media before and after irradiation with UVB 311 nm narrow band ultraviolet B (NB-UVB). The levels of IL-10 and IFN-γ in the supernatant were detected with enzyme-linked immunosorbent (ELISA). Comparisons between groups were performed by t-test. Results The level of IL-10 was higher in SLE patients [(27±4) pg/ml] than that in healthy controls [(18±3) pg/ml, P=0.011]. After exposure of CD4+T cells to UVB in 45 or 100 mJ/cm2 dosages, the level of IL-10 was increased significantly in patients with active disease (P=0.022, P=0.048). After exposure of CD4+T cells to UVB in 100 mJ/cm2 dosages, the levels of IL-10 was higher in patients with active disease [(77±42) pg/ml] than patients with stable disease [(24± 4) pg/ml, P=0.029]. When CD4+ T cell were cultured with HCQ, IL-10 and IFN-γ levels in patients with active disease [(2.6±4.0), (17.5±2.3) pg/ml] were decreased significantly (P=0.018, P=0.017). HCQ reversed UVB-induced IL-10 expression in active SLE patients after exposure of CD4+T cells to UVB in 45 or 100 mJ/cm2 dosages (P=0.037, P=0.04). HCQ also reversed UVB-induced IFN-7 expression in active SLE patients and stable SLE patients after exposure to CD4+T cells with UVB in 100 mJ/cm2 dosages (P=0.013, P= 0.049). Conclusion UVB can aggravate the imbalance of Th1 and Th2 cytokines. HCQ inhibits UVB-induced IL-10 and IFN-7 expression of CD4+T cells in patients with SLE, especially in patients with active disease.     

非小细胞肺癌患者外周血调节性T细胞和辅助性T细胞17的平衡表达特征

目的 通过检测辅助性T(Th)细胞17、调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)相关细胞因子及特异性转录因子维A酸相关孤核受体(RORγt)和叉头转录因子3(forkhead box P3,FoxP3) mRNA的表达变化,探讨非小细胞肺癌患者外周血Treg和Th17的平衡表达特征.方法 57例非小细胞肺癌患者作为研究对象,25名健康人作为对照.通过荧光定量PCR方法检测外周血单个核细胞(PBMC)中RORγt和FoxP3 mRNA的表达.应用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测患者外周血转化生长因子β(transforming gowth factor-β,TGF-β)和Th17相关细胞因子白介素17 A(IL-17A)、IL-6的表达.结果 Ⅳ期非小细胞肺癌患者PBMC的RORγt mRNA水平[(11.30±4.07)×10-4]高于健康组[(7.50±2.75)×10-4]及Ⅰ～Ⅲ期非小细胞肺癌患者[(5.18±2.10)×10-4](q值分别为7.53、6.82,P值均＜0.01).Ⅳ期患者血浆TGF-β水平[(69.52±10.04) pg/ml]明显高于I～Ⅲ期非小细胞肺癌患者[(42.24±16.64)pg/ml]和健康对照组[(24.51±10.96)pg/ml](q值分别为3.91、3.87,P值均＜0.05).血浆IL-6、IL-17A各组间差异无统计学意义[非小细胞肺癌Ⅳ期组、Ⅰ～Ⅲ期组、健康对照组血浆IL-17A含量分别为(25.20±4.58)pg/ml、(18.58±5.92)pg/ml、(18.93±5.24)pg/ml];[非小细胞肺癌Ⅳ期组、Ⅰ～Ⅲ期组、健康对照组血浆IL-6含量(pg/ml)分别为(39.53±11.30) pg/ml]、(42.41±12.38)pg/ml、(38.15±12.09)pg/ml(血浆IL-17A组间两两比较q值分别为1.21、1.09、1.12;血浆IL-6组间两两比较q值分别为1.19、1.76、1.06,P值均＞0.05).结论 晚期非小细胞肺癌中RORγt mRNA表达增强、外周血TGF-β表达增高,Th17以及Treg细胞可能同时参与了非小细胞肺癌的肿瘤远处转移过程,从而影响肿瘤进程.     

干燥综合征患者唇腺组织与外周血B淋巴细胞活化因子及其受体的表达及意义

目的 检测原发性干燥综合征(pSS)及重叠其他结缔组织病的干燥综合征(SS)患者外周血B淋巴细胞活化因子(BAFF)和外周血B淋巴细胞/唇腺组织中BAFF受体(BAFF-R)的表达,进一步观察和研究BAFF在SS发病过程中的作用,并探讨将唇腺组织BAFF-R水平检测作为SS病理诊断指标的可能性.方法 选取确诊pSS患者和与类风湿关节炎(RA)或系统性红斑狼疮(SLE)重叠的SS患者唇腺组织及外周血样本各15例,并选择15例非SS颌面部手术患者的正常唇腺组织及外周血作为对照.同步采用免疫组织化学技术检测唇腺组织BAFF-R表达情况,以流式细胞术检测外周血CDl9~+B淋巴细胞表面BAFF-R的表达水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定外周血清中可溶性BAFF的水平.采用X~2检验、Fisher确切概率法、单因素方差分析、LSD-t检验进行统计学处理.结果 与对照组15例唇腺组织BAFF-R弱阳性着色相比,13例占87%的pSS患者唇腺组织中BAFF-R特异性染色旱强阳性;SS患者外周血中CDl9~+B淋巴细胞膜表面BAFF-R表达和血清中可溶性BAFF均高于对照组[(21.4±4.6)%与(4.0±1.6)%,P<0.01;(7.5±2.3)ng/ml与(2.0±0.8)ng/ml, P<0.01].而15例与RMSLE重叠的ss患者,其唇腺组织的BAFF-R的表达占75%,外周血CD19~B淋巴细胞膜表面BAFF-R的表达为(23.3±5.0)%.其血清中可溶性BAFF的表达为(7.8±1.9)ng/ml均高于对照组(P值均<0.01).但与pSS组相比差异无统计学意义(P值均>0.05).结论 SS患者唇腺组织与外周血中B淋巴细胞膜表面BAFF-R以及血清可溶性BAFF的表达水平均上调.可能通过激活自身反应性B淋巴细胞参与SS的发病过程;检测唇腺组织B淋巴细胞膜表而BAFF-R可能有助于SS的诊断和疾病活动的判定.     

骨髓间充质干细胞移植对MRL/Ipr鼠B细胞活化因子及B细胞活化的影响

目的 探讨正常鼠骨髓问充质干细胞(BM-MSCs)移植对MRL/Ipr狼疮鼠B细胞活化因子(BAFF)表达及B细胞活化的影响.方法 18只雌性MRL/Ipr鼠随机分为MSCs治疗组和对照组,18周龄时治疗组经尾静脉移植MSCs 1×10~6/只;5只同周龄雌性BAL B/C小鼠作为健康阴性对照.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清BAFF、干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-2、IL-10水平,流式细胞术检测脾脏中边缘区、T1期、T2期B细胞百分率及细胞数.结果 ①MSCs治疗8周后,治疗组血清BAFF水平[(32±14)ng/ml]显著低于对照组[(47±13)ng/ml](P＜0.05);血清IL-10[(19±7)pg/ml]显著低于对照组[(40±13)pg/ml](P＜0.01);血清IFN-γ、IL-2低于对照组[(26±20)pg/ml与(38±25)pg/ml、(73±10)pg/ml与(80±14)pg/ml],但差异无统计学意义.②MSCs治疗8周后,可降低治疗组脾脏边缘区B细胞百分率(15±4)%,对照组为(21±5)%,但差异无统计学意义,并能显著降低边缘区B细胞数[(9±6)×10~6与(19±10)×10~6,P＜0.05].③MSCs治疗8周后,可降低治疗组脾脏T1期、T2期B细胞百分率[(3.4±2.1)%与(7.3±4.0)%]、[(2.6±1.4)%与(4.8±2.7)%],但差异无统计学意义,并能显著降低T1期B细胞绝对数[(2.7±1.7)×10~6与(5.1±2.0)×10~6,P＜0.05]、T2期B细胞绝对数[(2.0±1.2)×10~6与(3.7±1.7)×10~6,P＜0.05].结论 BM-MSCs移植可能通过抑制体内BAFF的过量表达,进而抑制狼疮鼠B细胞的过度活化.     

滤泡辅助性T细胞在肝棘球蚴病患者外周血中的表达

目的检测肝棘球蚴病患者和健康对照者外周血中滤泡辅助性T细胞(Tfh)和白细胞介素-21(IL-21)表达水平,探讨它们与肝棘球蚴病进展的关系。方法收集青海省人民医院肝棘球蚴病患者和健康体检者各50例,采用流式细胞术检测和比较肝棘球蚴病患者和健康对照者外周血中Tfh细胞表达水平,采用酶联免疫吸附试验检测和比较肝棘球蚴病患者和健康对照者血清中IL-21水平,分析肝棘球蚴病患者外周血Tfh细胞表达水平和血清IL-21含量之间的相关性。结果肝棘球蚴病患者外周血中CD4+CXCR5+T细胞(18.49%±5.67%vs. 16.18%±4.04%,P0.05)、CD4+CXCR5+PD-1+T细胞(4.94%±1.91%vs. 2.29%±0.79%,P0.05)和CD4+CRCR5+ICOS+PD-1+T细胞比例(30.93%±24.10%vs.21.07%±14.25%,P0.05)均显著高于健康对照者,但肝棘球蚴病患者和健康对照者外周血CD4+CRCR5+ICOS+T细胞比例差异无统计学意义(0.29%±0.32%vs. 0.25%±0.31%,P 0.05)。肝棘球蚴病患者血清IL-21含量显著高于健康对照者([293.35±2 03.65)pg/mL vs.(192.72±70.09)pg/mL,P0.05],但肝棘球蚴病患者外周血Tfh细胞表达水平和血清IL-21含量无相关性(P 0.05)。结论肝棘球蚴病患者外周血Tfh细胞及血清IL-21表达水平升高,Tfh细胞和IL-21可能参与了肝棘球蚴病进展。     

IL-6对肝细胞癌患者CD8+T淋巴细胞程序性死亡受体1表达和功能的影响

目的观察血浆IL-6及程序性死亡受体(PD-1)在肝细胞癌(HCC)患者外周血CD8~+T淋巴细胞中的表达,评估IL-6对HCC患者CD8~+T淋巴细胞中PD-1表达和功能的影响。方法纳入2019年1月—2019年9月期间在陕西省人民医院或空军军医大学第二附属医院(第四军医大学唐都医院)就诊的HCC患者44例(HCC组),同时纳入年龄和性别匹配的健康对照者19例(HC组),采集外周血,分离血浆和外周血单个核细胞,分选CD8~+T淋巴细胞,ELISA法检测血浆IL-6水平,流式细胞术检测PD-1在CD8~+T淋巴细胞中的表达水平。使用IL-6中和抗体刺激分选的CD8~+T淋巴细胞24 h,CCK-8法检测细胞增殖,ELISA法检测培养上清IFNγ和TNFα水平,实时定量PCR法检测穿孔素、颗粒酶B和颗粒溶素mRNA相对表达量,Western blot法检测STAT3和Src磷酸化水平。计量资料两组间比较采用t检验或配对t检验;计数资料组间比较采用χ~2检验。结果 HCC组患者血浆IL-6水平较HC组显著升高~([(99.67±20.92) pg/m L vs (81.05±16.76) pg/m L,t=3.427,P=0.001 1])。虽然CD3~+CD8~+T淋巴细胞比例在HCC组和HC组患者之间的差异无统计学意义(P 0.05),但PD-1~+CD8~+细胞比例在HCC组患者中显著升高(3.79%±1.36%vs 2.20%±0.47%,t=5.335,P 0.000 1)。使用IL-6中和抗体抑制HCC组患者CD8~+T淋巴细胞的IL-6虽不影响细胞增殖,但可降低PD-1表达(2.67%±0.91%vs 3.33%±1.12%,t=2.177,P=0.035),增加IFNγ分泌~([(13.50±3.82) pg/m L vs (10.82±1.37) pg/m L,t=3.170,P=0.002 8]),穿孔素和颗粒酶B mRNA相对表达量亦显著升高(t值分别为6.161、14.140,P值均0.000 1),同时伴有磷酸化STAT3水平降低(P 0.000 1)。结论抗人IL-6中和抗体可能通过增加穿孔素和颗粒酶B水平、增强细胞因子分泌以及抑制PD-1表达增强HCC患者CD8~+T淋巴细胞的功能。     

慢性心力衰竭患者血浆BNP、IL-27水平及其临床意义

目的探讨血浆脑钠肽(BNP)、白介素-27(IL-27)的水平变化在慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)发生发展中的临床意义。方法选取50例CHF患者作为观察组,50例健康人作对照组。采用酶联免疫吸附法检测血浆中BNP、IL-27水平变化,观察不同程度CHF患者左心室射血分数(LVEF)与血浆BNP、IL-27的关系。结果观察组血浆BNP的表达水平[(512.42±324.43)pg/ml]明显高于对照组[(30.50±20.30)pg/ml](P0.05),血浆IL-27表达水平[(0.58±0.21)pg/ml]低于对照组[(0.89±0.43)pg/ml],且BNP与IL-27的表达水平呈负相关(r=-0.54,P0.05)。血浆BNP水平从心功能Ⅱ级[(756.45±184.82)pg/ml]、心功能Ⅲ级[(1090.78±220.32)pg/ml]、心功能Ⅳ级[(2130.26±265.89)pg/ml]依次上升,差异有统计学意义(P0.05);IL-27表达水平从心功能Ⅱ级[(0.51±0.18)pg/ml]、心功能Ⅲ级[(0.32±0.15)pg/ml]、心功能Ⅳ级[(0.18±0.10)pg/ml]依次降低,差异有统计学意义(P0.05);LVEF与血浆BNP、IL-27相关性分别为(r=-0.51,r=0.61,P0.05)。结论血浆BNP、IL-27水平变化均可反映CHF程度,而BNP表达的更为敏感,且两者之间有一定影响。     

Notch信号通路对慢性丙型肝炎患者CD8~+T淋巴细胞功能的影响

目的观察Notch信号通路对慢性丙型肝炎患者CD8~+T淋巴细胞功能的影响,初步阐释Notch信号通路在慢性丙型肝炎发病中的作用。方法收集2016年1月-8月在陕西省人民医院就诊的慢性丙型肝炎初治患者38例和健康志愿者17例,分选CD8~+T淋巴细胞,应用实时定量PCR法检测CD8~+T淋巴细胞中Notch1和Notch2 mRNA的表达水平。分别应用直接接触培养系统和间接接触培养系统将从HLA-A2限制性丙型肝炎患者分选的CD8~+T淋巴细胞与HCV感染的Huh7.5细胞共培养,加入Notch信号通路抑制剂DAPT,通过检测乳酸脱氢酶和细胞因子水平分析CD8~+T淋巴细胞的细胞毒性和非细胞毒性功能的变化。2组间计量资料的比较采用t检验。结果 Notch1和Notch2 mRNA在慢性丙型肝炎患者CD8~+T淋巴细胞中的表达水平较健康志愿者均显著升高,分别升高约10倍和4倍,差异均有统计学意义(t值分别为6.63、18.88,P值分别为0.003、0.001)。抑制Notch信号通路可增加直接接触培养系统中细胞死亡的比例[(26.41±4.76)%vs(13.65±4.65)%,t=3.32,P=0.029];但抑制Notch信号通路对间接接触培养细胞中CD8~+T淋巴细胞毒性无明显影响。抑制Notch信号通路后,IFNγ的表达在直接接触培养系统[(52.19±12.38)pg/ml vs(18.62±5.66)pg/ml,t=4.27,P=0.013]和间接接触培养系统[(18.86±3.09)pg/ml vs(5.52±2.52)pg/ml,t=5.79,P=0.004]中均显著升高。TNFα的表达在抑制Notch信号通路后仅在直接接触培养系统中显著升高[(1296.0±293.3)pg/ml vs(585.3±32.62)pg/ml,t=4.17,P=0.014],而在间接接触培养系统中无明显变化[(297.3±175.4)pg/ml vs(273.7±105.9)pg/ml,t=0.20,P=0.851]。结论抑制Notch信号通路可增强慢性丙型肝炎患者中CD8~+T淋巴细胞的细胞杀伤和非细胞杀伤功能,Notch信号通路在慢性HCV感染中可能通过抑制CD8~+T淋巴细胞功能发挥诱导免疫耐受的作用。     

沉默信息调节因子1在具核梭杆菌诱导肠上皮细胞炎症和凋亡中的作用

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)在具核梭杆菌(Fn)诱导肠上皮细胞炎症和凋亡中的作用。方法建立Fn感染肠上皮细胞模型并分为3组,即Fn感染组、Fn+Sirtinol组(SIRT1抑制剂)、Fn+白藜芦醇组(SIRT1激动剂),另设未感染对照组。在Fn感染肠上皮细胞6 h后,采用qRT-PCR、ELISA、Western blot、流式细胞术检测4组细胞中SIRT1基因mRNA和蛋白表达情况、炎症因子的量、NF-κB信号通路的表达、凋亡率、凋亡相关蛋白的表达。结果与Fn感染组相比,Fn+白藜芦醇组细胞中SIRT1 mRNA和蛋白质的表达升高,Fn+Sirtinol组细胞中SIRT1 mRNA和蛋白质的表达降低(P0.01)。Fn+Sirtinol组上清液中4种炎症因子含量[IL-1β:(35.975±2.995)pg/ml,IL-6:(954.250±37.340)pg/ml,IL-8:(598.500±23.014)pg/ml,TNF-α:(398.296±20.663)pg/ml]显著高于Fn+白藜芦醇组[IL-1β:(6.925±1.053)pg/ml,IL-6:(242.009±18.850)pg/ml,IL-8:(5.375±6.067)pg/ml,TNF-α:(79.537±8.334)pg/ml]和Fn感染组[IL-1β:(11.125±1.374)pg/ml,IL-6:(525.425±21.247)pg/ml,IL-8:(262.000±14.071)pg/ml,TNF-α:(180.412±11.826)pg/ml](P0.01)。Fn+Sirtinol组细胞中3种NF-κB信号通路相关蛋白质的表达量与其余3组比较差异有统计学义(P0.01);Fn感染组细胞中3种蛋白质的表达量明显高于Fn+白藜芦醇组和对照组(P0.01,P0.05)。Fn+Sirtinol组细胞在Fn感染6 h后凋亡率达峰值[(27.028±3.319)%],与其余3组的细胞的凋亡率比较差异有统计学义(P0.01);Fn感染组细胞的凋亡率[(16.864±2.213)%]明显高于Fn+白藜芦醇组[(5.584±1.148)%]和对照组[(2.510±0.763)%](P0.01)。Fn+Sirtinol组细胞中Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9蛋白高表达,与其余3组比较差异有统计学义(P0.01)。Fn+Sirtinol组细胞中Bcl-2蛋白低表达,与Fn+白藜芦醇组和对照组表达量比较差异有统计学义(P0.01或P0.05),Fn+白藜芦醇组组细胞中Bcl-2蛋白的表达量则明显高于对照组(P0.01)。结论在Fn感染的体外模型中,SIRT1可抑制肠上皮细胞分泌炎症因子,下调NF-κB信号通路的表达,可能通过线粒体凋亡途径抑制细胞的凋亡。     

Y链细胞因子对慢性乙型肝炎患者CD8+T细胞上TIM-3表达的调节

目的 通过检测T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子(TIM-3)在慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)CD8+T细胞上的表达,探讨共用γ链细胞因子对CHB患者CD8+T细胞上TIM-3表达的影响.方法 选取2014年1-5月在第四军医大学唐都医院传染科就诊的CHB初治患者15例,以及健康体检者8例.抽取两组全血,利用Ficoll密度梯度离心法分离出PBMC.分别给予γ链细胞因子白细胞介素(IL)2、IL-7、IL-15、IL-21和人抗CD3/CD28刺激,未刺激孔作为阴性对照.培养4d后,用单克隆抗体染色,采用流式细胞仪检测CD8+T细胞上TIM-3的表达情况.计量资料比较采用成组t检验.结果 与未刺激组相比,TIM-3在CD8+T细胞上表达如下:人抗CD3/CD28和IL-2、IL-15、IL-7刺激组显著升高,分别为(9.629 ±9.916)％,P=0.000 1;(3.817 ±2.694)％,P=0.000 6;(5.772±4.732)％,P=0.005 4;(3.560 ±2.045)％,P=0.030 2.IL-21刺激组表达虽有所增加,为(2.503 ±2.117)％,但差异无统计学意义,P=0.934 l.结论 人抗CD3/CD28、γ链细胞因子中的IL-2、IL-7和IL-15都能够有效上调TIM-3在CHB患者CD8+T细胞上的表达,提示通过抑制它们不仅可以下调TIM-3的表达,而且可能会增强CHB患者体内CD8+T细胞的杀伤作用.     

霉菌性阴道炎患者体内真菌分布、T淋巴细胞及相关细胞因子水平变化特点及意义

目的探讨霉菌性阴道炎患者体内真菌分布、T淋巴细胞及炎性细胞因子水平变化特点及意义。方法选取2017年1月—12月在我院治疗的霉菌性阴道炎患者182例作为观察组,同时选取女性健康志愿者110例作为对照组,检测2组受试者阴道分泌物中T淋巴细胞及细胞因子水平,同时对观察组阴道分泌物进行真菌培养。结果 182例患者中,病原菌以白色念珠菌为主,占43.41%;观察组阴道分泌物CD3~+、CD4~+和CD8~+T淋巴细胞水平分别为(52.12±10.45)%、(33.30±8.23)%和(25.10±9.22)%,明显低于对照组(P均0.05);观察组阴道分泌物IL-2、TNF-α和IFN-γ分别为(7.21±1.42)pg/ml、(17.90±4.55)pg/ml和(19.81±4.50)pg/ml,明显低于对照组(P均0.05),而IL-4和IL-10分别为(40.32±8.33)pg/ml和(25.66±4.33)pg/ml,明显高于对照组(P均0.05);复杂性霉菌性阴道炎患者阴道分泌物CD3~+、CD4~+、CD8~+T淋巴细胞以及IL-2、TNF-α和INF-γ水平明显低于普通霉菌性阴道炎患者(P均0.05),而IL-4和IL-10明显高于普通霉菌性阴道炎患者(P均0.05)。结论霉菌性阴道炎病原体以白色念珠菌为主,Th1/Th2细胞介导的细胞免疫参与了疾病过程。     

IL-21对HIV-1感染者外周血CD19~+IgD~+CD38~(hi)B细胞及IL-10表达水平的影响

目的探讨白细胞介素-21(IL-21)/信号传导与转录激活因子3(STAT3)信号通路对1型艾滋病病毒(HIV-1)感染者外周血中调节B细胞(Breg)和IL-10表达水平的影响及与HIV-1感染疾病进展的关系。方法 CD40L单独或联合IL-21刺激联合抗反转录病毒治疗(cART)前后的HIV感染者及健康对照者外周血单个核细胞(PBMC)20 min或120 h,用流式细胞术(FCM)检测CD19~+IgD~+CD38~(hi)B细胞的比例变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清中IL-21及IL-10水平,并用蛋白印迹试验(WB)结合FCM检测B细胞中STAT3的磷酸化水平。结果本次研究纳入的健康对照(HC)、未经治疗的HIV-1感染者及cART48周的HIV-1感染者各15例。相对于健康对照组,HIV-1感染者CD4~+T淋巴细胞数量显著降低(P0.000 1),cART后显著升高(P=0.035 7);HIV-1感染者血浆中病毒载量为(5.025±0.952 6)Lg10拷贝/mL,cART后其病毒载量被有效抑制;HIV-1感染者Breg的比例(P=0.003 6)及IL-10水平(P=0.003)显著上调,且cART前后HIV-1感染者的IL-10水平与IL-21均呈正相关[(r=0.582 3,P=0.022 5),(r=0.578 9,P=0.023 7)];IL-21联合CD40L刺激能诱导HIV-1感染者STAT3磷酸化(P=0.003 9),进而上调其CD19~+IgD~+CD38~(hi)B细胞的比例(P=0.034 8)及IL-10的表达水平(P=0.015 3)。结论 HIV-1感染导致CD19~+IgD~+CD38~(hi)B细胞比例及IL-10表达水平均上调,且上调的IL-10水平与IL-21水平呈正相关。IL-21可能通过STAT3信号通路调控HIV-1感染者Breg细胞的分化及IL-10的分泌。     

白细胞介素33在肝细胞癌患者中的表达及其对CD8+T淋巴细胞功能的调节作用

目的观察肝细胞癌(HCC)患者外周血白细胞介素33(IL-33)的变化,探讨IL-33对HCC患者CD8⁺T淋巴细胞的调节作用和可能机制。方法选择2019年4月—2020年1月陕西省人民医院收治的44例HCC患者和20例健康对照者为研究对象。采集外周血,分离血浆和外周血单个核细胞(PBMC),酶联免疫吸附试验检测血浆IL-33及其受体肿瘤抑制素2(ST2)的水平,实时定量PCR法检测PBMC中IL-33和ST2 mRNA相对表达量。纯化CD8⁺T淋巴细胞,使用重组IL-33刺激培养,CCK-8法检测细胞增殖,酶联斑点吸附试验检测穿孔素和颗粒酶B分泌,流式细胞术检测程序性死亡受体-1(PD-1)、淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)表达,比较IL-33刺激前后细胞增殖、毒性分子分泌、免疫检查点分子的变化。CD8⁺T淋巴细胞与HepG2细胞共培养,通过检测乳酸脱氢酶表达计算CD8⁺T淋巴细胞诱导HepG2细胞死亡比例,比较IL-33刺激前后CD8⁺T淋巴细胞杀伤功能的变化。计量资料两组间比较采用t检验或配对t检验,相关性分析采用Pearson分析法。结果HCC组血浆IL-33水平低于对照组[(269.80±63.08)pg/mL vs(339.50±64.43)pg/mL,t=4.072,P<0.001],HCC组PBMC中IL-33 mRNA相对表达量低于对照组(1.07±0.14 vs 2.45±0.87,t=10.250,P<0.001)。血浆ST2水平和PBMC中ST2 mRNA相对表达量在HCC组和对照组之间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。CD8⁺T淋巴细胞比例与血浆IL-33、ST2水平均无明显相关性(P值均>0.05)。HCC组CD8⁺T淋巴细胞分泌穿孔素、颗粒酶B的水平均低于对照组(P值均<0.05),而HCC组CD8⁺T淋巴细胞中PD-1、LAG-3、CTLA-4阳性细胞比例均高于对照组(P值均<0.05)。重组IL-33刺激对两组CD8⁺T淋巴细胞增殖和免疫检查点分子表达均无显著影响(P值均>0.05),但可促进穿孔素、颗粒酶B的分泌(P值均<0.05)。HCC组CD8⁺T淋巴细胞杀伤活性较对照组降低(P<0.05),重组IL-33刺激可提升CD8⁺T淋巴细胞杀伤功能,主要表现为诱导HepG2细胞死亡比例升高(P<0.05),IFNγ和TNFα分泌水平增加(P值均<0.05)。结论HCC患者血浆IL-33水平降低。IL-33可通过促进穿孔素和颗粒酶B的分泌增强HCC患者CD8⁺T淋巴细胞杀伤活性,为HCC治疗提供新的靶点。     

γ链细胞因子对慢性乙型肝炎患者CD8~+T细胞上TIM-3表达的调节

目的通过检测T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子(TIM-3)在慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)CD8+T细胞上的表达,探讨共用γ链细胞因子对CHB患者CD8+T细胞上TIM-3表达的影响。方法选取2014年1-5月在第四军医大学唐都医院传染科就诊的CHB初治患者15例,以及健康体检者8例。抽取两组全血,利用Ficoll密度梯度离心法分离出PBMC。分别给予γ链细胞因子白细胞介素(IL)2、IL-7、IL-15、IL-21和人抗CD3/CD28刺激,未刺激孔作为阴性对照。培养4 d后,用单克隆抗体染色,采用流式细胞仪检测CD8+T细胞上TIM-3的表达情况。计量资料比较采用成组t检验。结果与未刺激组相比,TIM-3在CD8+T细胞上表达如下:人抗CD3/CD28和IL-2、IL-15、IL-7刺激组显著升高,分别为(9.629±9.916)%,P=0.000 1;(3.817±2.694)%,P=0.000 6;(5.772±4.732)%,P=0.005 4;(3.560±2.045)%,P=0.030 2。IL-21刺激组表达虽有所增加,为(2.503±2.117)%,但差异无统计学意义,P=0.934 1。结论人抗CD3/CD28、γ链细胞因子中的IL-2、IL-7和IL-15都能够有效上调TIM-3在CHB患者CD8+T细胞上的表达,提示通过抑制它们不仅可以下调TIM-3的表达,而且可能会增强CHB患者体内CD8+T细胞的杀伤作用。     

1,25-(OH)_2维生素D3对再生障碍性贫血患者T细胞亚群的影响

目的:研究再生障碍性贫血(AA)患者外周血中的T细胞亚群变化与血清中1,25-(OH)_2维生素D3水平的关系。方法:利用流式细胞仪检测15例AA患者和25例健康对照者外周血T细胞亚群的变化,并用ELISA法检测AA患者和健康对照者血清中1,25-(OH)_2维生素D3的水平。结果:AA患者血清中1,25-(OH)_2维生素D3水平明显低于健康对照者[(35.5±11.8)pmol/L∶(51.8±12.6)pmol/L,P0.05]。与健康对照者比较,AA患者外周血中CD4在淋巴细胞中比率无明显变化[(31.8±4.7)%∶(33.6±4.2)%,P=0.217],但CD8在淋巴细胞中比率显著升高[(31.5±5.2)%∶(24.8±3.8)%,P0.01],故CD4/CD8比值降低(P0.01);其中在CD4~+细胞中,TH1/TH2比值较健康对照者明显升高[(4.09±1.05)∶(3.12±0.89),P=0.003]。结论:AA患者外周血清中1,25-(OH)_2维生素D3水平异常降低,可能影响AA患者CD4~+T细胞的分化。     

CD8~+调节性T细胞在ITP发病中的意义及大剂量地塞米松的影响

目的:研究大剂量地塞米松治疗前后免疫性血小板减少症(ITP)患者体内CD8~+ 调节性T细胞(Treg)及相关细胞因子的变化,了解CD8~+ Treg在ITP发病中的意义及大剂量地塞米松的影响。方法:流式细胞仪分析初诊ITP患者大剂量地塞米松治疗前后CD8~+ Treg的变化,ELISA法检测患者治疗前后血浆转化生长因子(TGF)-β1和白细胞介素(IL)-10的水平。结果:治疗前ITP患者CD8~+ T细胞亚群中的CD8~+ CD28~-Treg,尤其是CD8~+ CD25~+ Foxp3~+ Treg细胞比例较正常对照明显下降,血浆TGF-β1和IL-10的水平明显降低;大剂量地塞米松治疗后,获得缓解的ITP患者的CD8~+ CD28~- Treg及CD8~+ CD25~+ Foxp3~+ Treg细胞比例较治疗前明显升高,而与正常对照比较差异无统计学意义;血浆TGF-β1和IL-10的水平亦明显升高。结论:在初诊ITP患者CD8~+ T细胞亚群中,CD8~+ Treg细胞比例减少,获得缓解后CD8~+ Treg细胞比例增加,说明CD8~+ Treg参与了ITP的发病过程,增加CD8~+ Treg细胞比例和上调血浆TGF-β1和IL-10的水平可能是大剂量地塞米松发挥作用的机制之一。     

白介素-1 7在溃疡性结肠炎表达的研究

目的研究白介素-17(IL-17)在溃疡性结肠炎(UC)的表达和分泌及与疾病活动性的关系.方法用ELISA法测定UC患者及正常对照者血清或细胞培养液中,IL-17、IL-6和IL-8的浓度,逆转录聚合酶链反应(RT-PCT)测定IL-17mRNA的表达.结果32例UC患者外周血中IL-17,IL-6和IL-8的浓度与40例正常对照者比较,差异无显著性(P＞0.05),但外周血CD+4T细胞在PMA和抗CD3的刺激下,表达IL17mRNA及分泌IL-17的水平均明显高于对照组[(23.6±5.7)pg/ml和(13.1±3.2)pg/ml,P＜0.01].UC患者病变部位的黏膜固有层CD+4T细胞(LP-CD+4T)与非受累部位的LP-CD+4T细胞比较,它们表达大量的IL-17mRNA并自发分泌大量的IL-17蛋白,且IL-17浓度与该部位的单个核细胞(LPMC)分泌的IL-6,以及患者外周血中的C-反应蛋白,血沉均呈显著正相关.在刺激剂的作用下,病变部位的LP-CD+4T细胞IL-17的分泌进一步增加,且明显高于非受累部位LP-CD+4T细胞的分泌水平.另外,UC病变部位LPMC分泌的IL-6和IL-8的水平均明显高于非受累部位的LPMC,但在培养液中加入抗IL-17单克隆抗体后,LPMC细胞IL-6和IL-8的分泌均明显被抑制.结论UC患者病变部位的LP-CD+4T细胞表达和分泌IL-17明显增加,并与疾病的活动性呈正相关.抗IL-17抗体可明显抑制LMPC产生炎性细胞因子.IL-6和IL-8.结果说明,IL-17在UC肠道的炎症病理中起重要作用;阻断IL-17的分泌可能是治疗UC的一种有效手段.