四氢吡咯二硫代氨基甲酯对人脐静脉内皮细胞模拟缺血再灌注诱导炎症因子的影响

目的通过四氢吡咯二硫代氨基甲酯(PDTC)研究核因子(NF)-κB对人脐静脉内皮细胞(HUVECS)模拟缺血再灌注后炎症因子表达的影响。方法分为五组对HUVECs进行培养,即对照组(正常培养基培养)、缺血再灌注组(模拟缺血培养液培养30 min后换正常培养液再培养4 h)、缺血再灌注+0.1 mmol/L PDTC组、缺血再灌注+0.25 mmol/L PDTC组和缺血再灌注+0.5 mmol/L PDTC组。后三组均于模拟缺血再灌注培养前1 h在培养液中添加相应浓度PDTC。实时定量PCR和酶联免疫吸附法分别检测不同浓度PDTC对肿瘤坏死因子(TNF)-α、细胞间黏附分子(ICAM)-1 mRNA和蛋白表达水平的影响。结果模拟缺血再灌注刺激TNF-α、ICAM-1的mRNA表达水平显著升高(P0.05,P0.01)。同时,模拟缺血再灌注刺激HUVECS上清液TNF-α和ICAM-1蛋白表达水平显著升高(P0.05)。0.1、0.25、0.5 mmol/L PDTC均显著降低模拟缺血再灌注所诱导的TNF-α和ICAM-1的mRNA表达水平(P0.05)。0.5 mmol/L PDTC显著降低模拟缺血再灌注所诱导的TNF-α和ICAM-1的蛋白表达水平(P0.05)。结论 PDTC通过沉默p65,抑制模拟缺血再灌注诱导的TNF-α和ICAM-1表达水平。     

血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化因子-1表达的影响

目的　探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)分泌单核细胞趋化因子 1(MCP 1)的影响。方法　用RT PCR和ELISA方法检测AngⅡ在不用时间和浓度以及氯沙坦干预后对HUVECs分泌MCP 1的影响。结果　AngⅡ显著刺激HUVECs表达MCP 1,MCP 1mRNA分别在AngⅡ的浓度为 1× 10 - 7mol/L和刺激 4h时表达最强烈 ;而MCP 1蛋白质分泌随刺激时间延长而增加 ;氯沙坦干预则明显减低MCP 1的表达。结论　AngⅡ可强烈刺激HUVECs表达MCP 1,氯沙坦可拮抗该作用     

HDL3氧化修饰后对人脐静脉内皮细胞t-PA表达的影响

目的探讨HDL3氧化修饰后对人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12细胞组织型纤溶酶原激活物(tissue plasminogen activator;t-PA)表达的影响以及相关信号转导机制。方法 HUVEC-12细胞分别经不同浓度(0、20、40和80 mg/L)、不同时间(0、6、12、24和48 h)HDL3、ox-HDL3孵育,采用实时定量PCR、ELISA和免疫细胞化学法检测t-PA表达情况。用Western blot检测HDL3、ox-HDL3对Phospho-p38 MAPK、细胞核内NF-κB p65的影响。分别用p38 MAPK和NF-κB的特异性抑制剂SB203580(0.1μmol/L)和BAY11-7085来探讨HDL3、ox-HDL3影响HUVEC细胞t-PA表达的机制。结果与0 mg/L组细胞比较,ox-HDL3呈剂量和时间依赖性下调t-PAmRNA的表达,以80 mg/L浓度组减少最明显,较0 mg/L ox-HDL3下降了30%(P<0.05),其中以24 h组细胞中减少最明显,较0 h ox-HDL3组下降了19%(P<0.05);ELISA结果显示,ox-HDL3也呈剂量和时间...     

瘦素对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨瘦素对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:用不同浓度的瘦素刺激原代培养的HUVECs,检测HUVECs表达VEGF的情况。结果:在相同作用时间下,随着瘦素浓度的升高,VEGF蛋白及VEGF mRNA的表达也随之升高,经统计学检验有相关性;在相同瘦素浓度下, 随着作用时间的延长,VEGF蛋白及VEGFmRNA的表达也随之升高,且有相关性。结论:瘦素可以刺激HU- VECs表达VEGF而且呈时间和剂量相关性。     

醛固酮对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的醛固酮对人脐静脉内皮细胞增殖的影响及其机制。方法应用MTT法测试细胞的生长曲线,检测不同浓度的醛固酮对人脐静脉内皮细胞的增殖,流式细胞仪检测醛固酮对人脐静脉内皮细胞的凋亡,半定量RT-PCR及Western印迹分别检测人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子mRNA水平及蛋白水平的表达。结果①MTT比色法显示,醛固酮对人脐静脉内皮细胞增殖具有抑制作用且呈浓度依赖性;②当醛固酮浓度增加到800μg/L后,其增殖抑制率不再升高,而此浓度时人脐静脉内皮细胞的凋亡率达到峰值的26.5%±3.3%;③经过醛固酮处理,人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子mRNA及蛋白水平的表达量均显著下降。结论醛固酮通过降低人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子表达抑制人脐静脉内皮细胞增殖并促进人脐静脉内皮细胞凋亡。     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

采用逆转录聚合酶链反应和Western Blot方法，观察促炎症因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β对体外培养人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子及其受体表达的影响，并以辛伐他汀干预，观察其对上述过程的影响。结果发现，肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β显著促进人脐静脉内皮细胞中血管内皮生长因子及其受体的表达，在不同水平辛伐他汀对促炎症因子的上述作用具有一定的抑制效应，由此推断辛伐他汀可能具有一定的抗炎症反应及抗动脉粥样硬化的作用。     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管细胞粘附分子表达的影响

观察辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管细胞粘附分子1和细胞间粘附分子1表达的影响。采用免疫细胞化学及Westem blot蛋白印迹方法，观察促炎症因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β对体外培养的人脐静脉内皮细胞中血管细胞粘附分子1和细胞间粘附分子1表达的影响，并以辛伐他汀干预，观察其对上述作用的影响。结果发现，肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β明显增加人脐静脉内皮细胞中血管细胞粘附分子1和细胞间粘附分子1的表达，辛伐他汀可一定程度抑制上述作用。结果提示，辛伐他汀一定程度抑制促炎症因子刺激导致的细胞粘附分子表达上调，可能具有增加粥样斑块稳定性和延缓动脉粥样硬化进程的作用。     

氧化低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞Connexin40表达的影响

目的:研究氧化低密度脂蛋白(OxidizedLDL,Ox-LDL)对体外培养的人脐静脉内皮细胞缝隙连接蛋白(Gap junction protein)Connexin40基因表达的影响。方法:不同浓度Ox-LDL的干预:体外培养的内皮细胞分为4组:对照组,50mg/L,100mg/L,200mg/LOx-LDL干预组,干预24小时后通过RT-PCR方法检测各组Connexin40基因mRNA的表达有无差异;不同时间Ox-LDL干预的内皮细胞分为对照组,50mg/L的Ox-LDL干预6小时、12小时、24小时、48小时和72小时组共6组,通过RT-PCR方法检测各组Connexin40 mRNA的表达有无差异;蛋白表达水平的检测:通过免疫细胞化学方法检测对照组和100mg/LOx-LDL干预组之间Connexin40蛋白的表达水平有无差异。结果:不同浓度(50mg/L,100mg/L,200mg/L)的Ox-LDL干预24小时能引起内皮细胞Connexin40mRNA的表达增加(P<0.01);50mg/L的Ox-LDL干预不同时间后Connexin40mRNA表达增加,以6小时和12小时最明显(P<0.01);100mg/L的Ox-LDL干预24小时内皮细胞Connexin40蛋白表达增加(P<0.01)。结论:Ox-LDL短期干预可引起人脐静脉内皮细胞Connexin40基因的mRNA和蛋白表达水平增加。     

高糖对人脐静脉内皮细胞内皮抑素表达的影响

目的 研究高糖对人内皮细胞内皮抑素(ES)mRNA及蛋白表达水平的影响及其意义.方法 培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为正常糖(5.6mmol/L)对照组,高糖(11.2、22.4mmol/L)组.培养24、48、72、96h后,收集各组不同作用时间点细胞,用RT-PCR法检测ES mRNA表达水平,Western blot法检测ES蛋白的表达.结果 高糖对HUVECs中ES mRNA和蛋白表达水平的影响是双相的:短时间内起促进作用,具有时间依赖性;随作用时间延长转为抑制作用,22.4mmol/L糖培养HUVECs 96h时组ES mRNA和蛋白表达水平较对照组明显降低(P<0.05).结论 糖尿病(DM)慢性病程中,ES表达的降低可能与DM血管病变的发生有关.     

锌离子对人脐静脉内皮细胞的影响

目的探究氯化锌(Zn Cl2)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响。方法体外培养HUVECs,氯化锌浓度6~34μM分别处理细胞,MTS检测生长活性,筛选促细胞增殖的最佳浓度作为实验组浓度。实验组和对照组(未处理)流式细胞术检测HUVECs凋亡情况;鬼笔环肽-异硫氰酸荧光素(FITC)染色检测HUVECs骨架重构;Transwell小室检测HUVECs迁移和侵袭;Real-time PCR检测细胞迁移相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)m RNA相对表达水平;明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性;ELISA法检测HUVECs上清液MMP-2、MMP-9水平。结果与对照组相比,浓度范围在10~22μM内Zn Cl2处理的细胞,其相对增殖率升高,差异具有统计学意义(P均0.05)。选取促进HUVECs增殖的最佳浓度14μM作为实验组浓度。实验组的HUVECs凋亡率为(12.02±0.84)%,高于对照组的(4.05±0.52)%,差异有统计学意义(P0.01)。实验组HUVECs细胞迁移个数为(112.20±10.83)个,高于对照组的(94.80±9.50)个,差异有统计学意义(P0.05)。实验组HUVECs细胞侵袭个数高于对照组,[(36.20±3.22)个vs.(32.80±1.07)个],差异有统计学意义(P0.05)。实验组HUVECs细胞迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9的m RNA相对表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P均0.05)。实验组细胞迁移相关蛋白MMP-2的光密度值显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);实验组细胞MMP-9的光密度值高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。实验组细胞上清液中MMP-2和MMP-9的吸光度值高于对照组,差异有统计学意义(P均0.05)。结论 14μM氯化锌处理HUVECs,使其处于增殖和凋亡平衡的生长活跃状态,并且促进HUVECs骨架重塑和细胞迁移。     

阿司匹林抑制肿瘤坏死因子α诱导的人脐静脉内皮细胞分形趋化因子表达

背景分形趋化因子通过介导炎症细胞的趋化与血管内皮损伤相关,阿司匹林具有抗炎作用,抑制多种细胞因子表达,其对分形趋化因子的影响尚无报道。目的探讨阿司匹林对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分形趋化因子表达的影响和作用机制。方法将 HUVEC 随机分为:空白组(无TNF-α刺激和药物干预),TNF-α刺激组,TNF-α+PDTC 干预组(PI)TC 系核因子 kB 的特异性活性抑制剂),TNF-α+NS398干预组(NS398是 COX-2的特异性活性抑制剂)。TNF-α+阿司匹林0.02 mol/L 干预组,TNF-α+阿司匹林0.2 mol/L,干预组,TNF-α+阿司匹林1 mol/L 干预组,TNF-α+阿司匹林5 mol/L 干预组,共8组,每组3例。分别用 RT-PCR 法和 Western blot 法检测各组细胞分形趋化因子(分形素)和核因子 kB p65(NF-kBp65)的 mRNA 水平和蛋白表达。结果 1)4μg/L TNF-α使 HUVEC 的分形趋化因子 mRNA 水平和蛋白表达明显增加(P<0.01)。2)阿司匹林浓度依赖性抑制 TNF-α诱导的 HUV...     

阿司匹林抑制肿瘤坏死因子α诱导的人脐静脉内皮细胞分形趋化因子表达

背景 分形趋化因子通过介导炎症细胞的趋化与血管内皮损伤相关,阿司匹林具有抗炎作用,抑制多种细胞因子表达,其对分形趋化因子的影响尚无报道.目的 探讨阿司匹林对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分形趋化因子表达的影响和作用机制.方法 将HUVEC随机分为:空白组(无TNF-α刺激和药物干预),TNF-α刺激组,TNF-α PDTC干预组(PDTC系核因子κB的特异性活性抑制剂),TNF-α NS398干预组(NS398是COX-2的特异性活性抑制剂).TNF-α 阿司匹林0 02 mol/L干预组,TNF-α 阿司匹林0 2 mol/L干预组,TNF-α 阿司匹林1 mol/L干预组,TNF-α 阿司匹林5 mol/L干预组,共8组,每组3例.分别用RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞分形趋化因子(分形素)和核因子κB p65(NF-κB p65)的mRNA水平和蛋白表达.结果 1)4 μg/L TNF-α使HUVEC的分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达明显增加(P<0 01).2)阿司匹林浓度依赖性抑制TNF-α诱导的HUVEC分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达(P<0 01);阿司匹林浓度依赖性地抑制HUVEC的NF-κB p65 mRNA水平和蛋白表达(P<0 01).3)PDTC抑制TNF-α诱导的HUVEC分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达(均P<0 01).结论 阿司匹林通过NF-κB p65途径抑制TNF-α诱导的HUVEC 分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达,并可能借此发挥抗动脉粥样硬化作用.     

氨基胍对非酶糖基化人脐静脉内皮细胞信号转导物DAG影响

目的： 为探讨氨基胍（ＡＧ）对非酶糖化（ＮＧＥｓ）引起的人脐静脉内皮细胞信号（ＤＡＧ）转导的影响及其机制。方法：采用薄层层析、放射自显影及放射酶标法分离、检测细胞中ＤＡＧ含量,应用荧光法检测ＮＧＥｓ的含量。结果：氨基胍组荧光值从２７．８±５．９（ＡＦＵ）降为８．５±２．８（ＡＦＵ） ,ＤＡＧ含量从５４１．５±４６．２３ ｐｍ ｏｌ·Ｌ－ １ 降为２５３．５±１８．２０ ｐｍ ｏｌ·Ｌ－ １。结论：氨基胍明显阻断糖基化终末产物（ＮＧＥｓ）的形成,并且由ＮＧＥｓ刺激内皮细胞产生的ＤＡＧ含量显著降低。这对糖尿病的慢性并发症防止提供了重要的理论依据     

冠心病患者血小板对人脐静脉内皮细胞黏附因子表达的影响

目的 探讨冠心病患者血小板与人脐静脉内皮细胞相互作用后内皮细胞表面CD54、CD106的表达水平。方法 选择急性冠状动脉综合征患者43例、稳定型心绞痛患者21例及对照者33例,采用流式细胞术分别检测血小板与内皮细胞相互作用后内皮细胞表面CD54、CD106的表达水平。结果 急性冠状动脉综合征组内皮细胞表面CD54的表达水平较对照组显著升高（P<0.01）,较稳定型心绞痛组也升高（P<0.05）;稳定型心绞痛组和对照组比较,CD54表达水平无显著性差异（P>0.05）。CD54与心肌标志物肌钙蛋白T和肌酸激酶同工酶呈显著正相关（P<0.01）。CD106的表达水平在各组中均未见明显差异（P>0.05）。结论 与急性冠状动脉综合征患者血小板相互作用后,人脐静脉内皮细胞表面CD54的表达水平显著提高,并且与心肌坏死标志物水平呈正相关,提示CD54可能是预示急性冠状动脉综合征及其严重程度的重要指标。     

腺苷对人脐静脉内皮细胞中肝细胞生长因子合成表达的影响

将人脐静脉内皮细胞(HUEVC)按加入腺苷浓度的不同分为A组(10-4mmol/L)、B组(10-8mmol/L)和空白对照组,48 h后检测各组肝细胞生长因子(HGF)合成,RT-PCR方法检测HGF mRNA表达。结果对照组HGF染色阳性细胞少,染色程度轻;A组HGF染色阳性细胞多,染色深,平均吸光度与对照组比较有显著差异(P<0.05),B组平均吸光度与对照组比较无显著差异(P>0.05);RT-PCR分析A组中HGF mRNA表达含量与对照组比较有显著差异(P<0.05),B组与对照组比较无显著差异(P>0.05)。表明HUEVC中存在HGF表达,腺苷可部分通过促进内皮细胞中HGF合成表达而实现其促进内皮细胞生长和血管新生的作用。     

氨氯地平对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1表达的影响

目的为研究氨氯地平独立于降压外的血管保护作用,观察其对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1表达的影响,进一步明确其抗动脉粥样硬化作用的可能机制。方法用不同浓度氨氯地平预处理人脐静脉内皮细胞1h,与氧化型低密度脂蛋白共同孵育24h后,采用逆转录聚合酶链反应检测氨氯地平对体外培养的人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1mRNA表达的影响,酶联免疫试剂盒检测培养基中单核细胞趋化蛋白1活性。结果氧化型低密度脂蛋白上调人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1的表达,各浓度氨氯地平处理组人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1mRNA与蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论氨氯地平呈浓度依赖性抑制氧化型低密度脂蛋白刺激导致的人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1表达上调。     

瘦素对人脐静脉内皮细胞表达白细胞介素-8的影响

目的:探讨瘦素对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)表达白细胞介素-8(IL-8)的影响。方法:用不同浓度的瘦素刺激ECV-304,检测ECV-304表达IL-8的情况。结果:在相同作用时间下,随着瘦素浓度的升高,IL-8蛋白及IL-8的mRNA的表达也随之升高;在相同瘦素浓度下,随着作用时间的延长,IL-8蛋白及IL-8的mRNA的表达也随之升高。结论:瘦素可以刺激ECV-304表达IL-8,而且呈时间和剂量相关性。     

黄连素对人脐静脉内皮细胞分泌一氧化氮的影响

目的 探讨黄连素对高糖、高脂损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌一氧化氮的影响及其保护内皮细胞的作用机制.方法 体外培养HUVECs,采用MTT法检测细胞生长存活率,并建立Glu+ ox-LDL损伤HUVECs模型.实验分组如下:正常组:DMEM培养液+10％胎牛血清;模型组:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L;黄连素低组:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L+黄连素1.25 μg/ml;黄连素中组:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L+黄连素2.5μg/ml;黄连素高组:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L+黄连素5μg/ml.采用硝酸还原酶法检测培养HUVECs上清液中NO含量,比较各组细胞NO的分泌水平.结果 模型组NO水平显著低于正常对照组(P＜0.01),黄连素处理组NO水平显著高于模型组,以5 μg/ml剂量组作用最显著(P＜0.01).结论 高糖、高脂处理HUVECs,可以降低HUVECs存活率,减少NO释放;黄连素可以提高Glu、ox-LDL联合诱导的HUVECs损伤的活性,并提高增殖率;黄连素改善Glu、ox-LDL联合诱导的HUVECs损伤的作用机制与其促进NO释放有关.