Fas信号在同型半胱氨酸致人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的:研究Fas信号在同型半胱氨酸致人脐静脉内皮细胞凋亡过程中的作用。方法:以人脐静脉内皮细胞株为实验对象,用含不同浓度的同型半胱氨酸的DMEM培养液对其处理,MTT法测定细胞增殖能力;流式细胞术测定细胞凋亡水平;荧光定量PCR测定Fas基因、caspase-3基因及caspase-8基因的mRNA表达;Western blot测定Fas蛋白、caspase-3蛋白及caspase-8蛋白表达量。结果:同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞的增殖能力有明显抑制作用,随着同型半胱氨酸浓度增高,实验结果显示细胞增殖能力逐渐降低,细胞凋亡率呈上升现象;与对照组相比,实验组Fas、caspase-3及caspase-8mRNA及蛋白表达明显上升。结论:同型半胱氨酸可能通过上调Fas、caspase-3及caspase-8的mRNA及蛋白的表达,促进人脐静脉内皮细胞的凋亡。     

bcl-2在神经酰胺致人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的研究bcl-2在神经酰胺诱导人脐静脉内皮细胞凋亡过程中的作用。方法原代培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度神经酰胺进行诱导并观察bcl-2的表达及细胞凋亡情况,采用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法测定bcl-2mRNA和蛋白的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果神经酰胺以剂量依赖性诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,对照组和5、12.5、25及50μmol/L神经酰胺处理24h后各组细胞凋亡率分别为2.13%±0.12%、13.24%±1.32%、29.67%±2.32%、34.43%±3.36%及38.56%±2.21%,神经酰胺处理组bcl-2mRNA及蛋白的表达较对照组显著降低(P<0.05)。结论神经酰胺在诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞时,bcl-2表达减低,从而引起细胞凋亡。     

高同型半胱氨酸血症与血管内皮细胞凋亡

<正> 高同型半胱氨酸血症(HHcy)是指血浆同型半胱氨酸(Hcy)浓度>15 μmol/L。由于多种因素,如遗传或环境因素导致的胱硫醚缩合酶或~5N,~(10)N-甲烯四氢叶酸还原酶的基因突变引起酶活性下降,饮食中VitB、叶酸缺乏,肝肾功能不全等,均可引起血浆Hcy浓度升高。诸多文献均报道,HHcy是冠心病等心脑血管疾病的独立危险因素,是冠心病     

Diplacone对同型半胱氨酸致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的采用同型半胱氨酸(Hcy)孵育体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),建立血管内皮细胞炎性损伤模型,后用Diplacone加以干预,观察Diplacone对HUVEC的影响,探讨Diplacone对血管内皮细胞可能的保护作用。方法先用不同浓度的Hcy预处理HUVEC,选出Hcy的最适损伤浓度(2 mmol/L)和时间(12 h),在HUVEC培养基中加入不同浓度Diplacone预处理2 h后加入2 mmol/L Hcy作用12 h,通过MTT法检测细胞活性变化,Hoechst33342核染色检测细胞核损伤程度,Western blot检测与细胞损伤有关的血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和P-选择素的表达水平,以此衡量Diplacone对Hcy诱导的HUVEC损伤的保护作用。结果与对照组相比,2 mmol/L Hcy组细胞活性显著降低(P0.01),10μmol/L以内Diplacone具有明显的剂量依赖性抑制2 mmol/L Hcy诱导的HUVEC活性损伤并抑制Hcy所致的VCAM-1和P-选择素的表达升高(P0.01)。结论 Diplacone对Hcy所致的HUVEC内皮损伤具有保护作用。     

激活TRPV1在高同型半胱氨酸促内皮细胞凋亡中的作用

目的:研究激活TRPV1在高同型半胱氨酸促内皮细胞凋亡中的作用。方法:培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度同型半胱氨酸(0 mmol/L、0.05 mmol/L、0.1 mmol/L、0.2 mmol/L、0.5 mmol/L、1 mmol/L、2mmol/L、4mmol/L)及不同时间(6h、12h、24h、36h、48h)进行干预后CCK-8检测细胞增殖及活性情况,选择合适的干预浓度及干预时间;用免疫学方法检测TRPV1是否在人脐静脉内皮细胞上表达;Western blotting检测各组TRPV1蛋白的表达,TUNEL染色了解各组细胞凋亡情况。结果:(1)同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞的增殖能力有明显的抑制作用,OD值从(1.03±0.12)渐下降至(0.42±0.05),且呈明显的剂量效应关系(P0.01);同型半胱氨酸在0.5mmol/L开始、干预24h后对人脐静脉内皮细胞增殖有抑制作用(P0.05);(2)细胞免疫荧光检测人脐静脉内皮细胞上有TRPV1表达,而对照组无表达;(3)不同浓度同型半胱氨酸干预细胞后TPRV1蛋白表达及细胞凋亡有差异(P0.05);(4)辣椒素干预后TRPV1表达及细胞凋亡较单纯同型半胱氨酸干预组有统计学差异(P0.05)。结论:高同型半胱氨酸可通过对TRPV1蛋白表达水平的下调,促进内皮细胞凋亡;激活TRPV1可抑制高同型半胱氨酸促内皮细胞凋亡。     

同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡的研究进展

近年的研究发现，血浆同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)水平升高是心肌梗死、脑梗死等心脑血管疾病以及外周阻塞性血管疾病的一个独立危险因素。动物实验发现，HCY可以通过损伤血管内皮细胞，启动粥样斑块和血栓形成。在粥样斑块内存在明显的内皮细胞凋亡。体外内皮细胞培养也显示HCY能诱导其凋亡，提示HCY可能通过内皮细胞凋亡而促进动脉粥样硬化。目前关于HCY引起内皮细胞凋亡的机制尚不明确，作者就HCY的代谢、HCY与内皮细胞凋亡的关系以及细胞凋亡的产生机制综述如下。     

高同型半胱氨酸血症致血管炎症作用

目的 探讨高同型半胱氨酸血症是否引发兔主动脉的血管炎症反应。方法 20只雄性新西兰兔随机分成对照组（正常饮食）和蛋氨酸组（高蛋氨酸饮食），每组各10只，12周后测定血浆同型半胱氨酸。观察主动脉病理变化，酶联免疫吸附法检测白细胞介素8蛋白水平，免疫组织化学检测血管核因子κB的表达和活化。结果 高蛋氨酸饮食显著增加血浆同型半胱氨酸水平，蛋氨酸组主动脉切片发现内皮细胞脱落，局部内膜增厚；白细胞介素8分泌增加；主动脉内皮细胞核因子κB表达增强。结论 高同型半胱氨酸血症可以导致血管炎症反应。而炎症反应是高同型丰胱氨酸血症加速动脉粥样硬化潜在的分子机制之一。     

上调SIRT1减少同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞凋亡

目的 研究同型半胱氨酸处理对血管内皮细胞中SIRT1表达的影响,并探讨上调血管内皮细胞中SIRT1表达对同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞凋亡的影响.方法 建立同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞凋亡模型,通过CCK8试剂盒检测细胞活性,通过流式细胞仪检测细胞凋亡,通过qPCR法检测mRNA表达和通过免疫印记法检测蛋白表达.结果...     

内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对同型半胱氨酸致人血管内皮细胞损伤的拮抗作用

目的探讨内皮抑素(ENDO)-血管内皮细胞抑制因子(VEGI)重组腺病毒对同型半胱氨酸(Hcy)致人血管内皮细胞损伤的拮抗作用。方法应用内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子融合蛋白重组腺病毒(Ad-hENDOVEGI151)转染Hcy损伤的人血管内皮细胞ECV304,用免疫印迹法检测受染细胞融合蛋白的表达,用自动生化分析仪检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,用台盼蓝染色法计算细胞存活率,用ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达。结果制备的重组腺病毒具有较高的转基因效率,Ad-hENDO-VEGI151重组腺病毒能够在ECV304细胞中表达41 kDa大小的融合蛋白,Hcy(0.1~1.0 mmol/L)呈浓度依赖性地增加细胞LDH漏出量和降低细胞存活率,重组腺病毒能够有效地拮抗Hcy对人血管内皮细胞的损伤作用(P0.05)。结论内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对Hcy致人血管内皮细胞损伤有拮抗作用,为治疗高同型半胱氨酸血症等疾病提供新的思路。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞骨架的影响

目的:研究同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)对内皮细胞形态及细胞骨架肌动蛋白的影响,并探讨骨架变化与内皮损伤的关系.方法:将体外培养的ECV-304内皮细胞株随机分为正常对照组、低剂量Hcy组、中剂量Hcy组和高剂量Hcy组.倒置相差显微镜观察各组培养24 h的内皮细胞的形态变化;并用Rhodamine-Phalloidin标记纤维状肌动蛋白(F-actin),Alexa flour 488-DnaseⅠ标记球状肌动蛋白单体(G-actin),激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察各组内皮细胞骨架肌动蛋白的不同变化.结果:正常对照组内皮细胞基本为梭形,呈典型的鹅卵石样外观;各Hcy组内皮细胞形态则明显不同,随着Hcy浓度的增加,胞体出现收缩,细胞变圆、渐至不规则,且轮廓增强,细胞间隙增大,甚至坏死脱落.LSCM下发现,正常对照组内皮细胞F-actin在周边形成致密周围带,胞质内有部分应力纤维;随着Hcy浓度的递增,外周致密带逐渐出现断裂、甚至消散;胞质内应力纤维变短、增粗,最终消失.而G-actin正常时仅局限在核周,在受到不同浓度Hcy作用后,明显向外周扩散,且荧光强度增大.结论:内皮细胞骨架肌动蛋白的形态变化与重排,可能是Hcy损伤内皮细胞的重要机制之一.     

血管内皮细胞生长因子与同型半胱氨酸检测在贫血诊断中的意义

目的：了解血中血管内皮细胞生长因子（VEGF）和同型半胱氨酸（Hcy）检测在再生障碍性贫血（AA）和营养不良性贫血诊断中的意义。方法：通过对AA、缺铁性贫血（IA）和巨幼细胞性贫血（MA）患者血中VEGF和Hcy检测,观察3组贫血患者检测结果并与正常对照组进行比较分析。结果：AA组血中VEGF浓度较正常明显减低,Hcy浓度较正常增高,差异无统计学意义;IA组血中VEGF和Hcy浓度均较正常增高,差异均无统计学意义;MA组血中VEGF和Hcy浓度均较正常明显增高。结论：VEGF与Hcy检测对AA和IA、MA的诊断和鉴别诊断具有重要意义。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞骨架与内皮细胞功能的影响

目的:通过动态观察同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)作用后的血管内皮细胞功能的变化,以及对内皮细胞骨架肌动蛋白G-actin和F-actin的定量分析,探讨骨架肌动蛋白在Hcy损伤内皮中的作用及机制。方法:将体外培养的人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)分为正常对照组、低剂量Hcy组(0.1mmol/L)、中剂量Hcy组(0.5mmol/L)和高剂量Hcy组(1.0mmol/L),观察各组细胞培养24h时其细胞骨架和相关功能的变化;中剂量Hcy组及高剂量Hcy组还观察了6h、12h时的相应变化。分别采用硝酸还原酶法、硫代巴比妥酸法检测各组条件培养基中一氧化氮(NO)、脂质过氧化代谢产物丙二醛(MDA)的含量。用Rhodamine-Phalloidin标记纤维状肌动蛋白(F-actin),Alexa Flour488-DnaseⅠ标记球状肌动蛋白单体(G-actin),激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测内皮细胞骨架G-actin、F-actin含量,并计算G/F比值。结果:随着Hcy作用时间的延长或剂量的增大,NO含量总体呈下降趋势,而MDA含量增高;G-actin、F-actin总体含量及G/F比值上升,并呈一定的时间、剂量相关性。结论:Hcy可通过改变骨架蛋白G-actin和F-actin含量,以及G/F比值引致内皮细胞功能的损伤,这也可能是其诱导动脉粥样硬化早期变化的重要机制之一。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞合成蛋白聚糖的影响

为探讨同型半胱氨酸对血管内皮细胞合成蛋白聚糖的影响，采用400umol／L同型半胱氨酸作用于培养的人脐静脉内皮细胞，以^35S-Na2SO4为示踪物标记细胞合成的蛋白聚糖，通过离子交换层析，凝胶过滤层析分离蛋白聚糖。结果发现，实验组培养液中总蛋白聚糖降低，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖及硫酸软骨素-硫酸皮肤素蛋白聚糖含量也降低，但其百分含量未见改变。细胞层中蛋白聚糖未见明显变化。     

依那普利抑制同型半胱氨酸致血管内皮损伤的保护作用

目的 探讨依那普利对同型半胱氨酸（Hcy）引起的血管内皮细胞损伤的保护作用。 方法 取大鼠主动脉内皮细胞，培养并传代备用，进行血管内皮细胞药物保护实验。分为正常对照组（正常组）:不加Hcy及依那普利；损伤组:给予Hcy 2000 μmol/L；干预组:在给予Hcy 2000 μmol/L的同时再给予依那普利，依那普利的浓度不同又分为干预A、B、C、D和E组，其依那普利的浓度依次为10，20,40,80和160 nmol/L。内皮细胞的鉴定利用因子VIII间接免疫荧光；利用光学仪器进行血管内皮细胞形态学观察；测定各组细胞乳酸脱氢酶（LDH）的活性；利用CCK8试剂检测各组血管内皮细胞活力；利用细胞计数板测定活细胞百分率。 结果 :① Hcy损伤组血管内皮细胞呈现出细胞损伤形态学改变；② 各组细胞LDH活性与正常对照组(100%)比较分别为:损伤组细胞LDH活性为（157 ± 17）%，干预C组（依那普利浓度40 nmol/L）细胞活性为（126 ± 7）%。干预C组较损伤组LDH活性显组降低（P<0.01）;③血管内皮细胞活力:正常组细胞活力定为 100%，损伤组为（52 ± 6）%，干预C组为（75 ± 6）%。干预C组细胞活力较损伤组相比细胞活力显著升高（P<0.01）；④ 活细胞百分率测定，与正常对照组[（98 ± 1）%]比较，损伤组活细胞比例[（72 ± 4）%]显著降低（P<0.01）；干预C组活细胞比例为(87 ± 3)% 较损伤组显著增加（P<0.01）。 结论 依那普利可改善Hcy对血管内皮细胞的损伤，具有保护作用。     

同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡及舒降之的拮抗机制

目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy）是否通过caspase途径诱导内皮细胞凋亡,以及辛伐他汀是否可以通过调节内源性凋亡抑制蛋白c—IAP发挥其拮抗效应。方法：Hcy、辛伐他汀或两者联合处理人脐静脉内皮细胞（HUVEC）24h后,用An—nexinV染色加流式细胞技术及末端脱氧核苷酸转移酶原位标记技术了解细胞凋亡状态;RT—PCR和蛋白质印迹技术检测caspase3、c—IAP1和c—IAP2的mRNA和蛋白质水平。结果：0．5mmol／L和3mmol／L的Hcy均可导致HUVEC凋亡,Hcy浓度高时凋亡细胞数较多,并伴有caspase3表达和活化增强,以及c—IAP1和c—IAP2的mRNA和蛋白质水平降低,辛伐他汀可以上调c—IAP1和c—IAP2的表达。结论：Hcy诱导HUVEC凋亡,此种作用可能涉及caspase3相关途径。辛伐他汀可促进C—IAP系统的表达,从而部分桔抗Hcy的作用。     

同型半胱氨酸对内皮细胞凋亡及JNK表达的影响

目的了解同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)对内皮细胞凋亡及JNK表达的影响。方法用不同浓度的Hcy处理内皮细胞后,TUNEL方法检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞磷酸化JNK的表达。结果随着Hcy浓度的升高,细胞凋亡数目明显增加,各组细胞磷酸化JNK的表达也逐步增强,且具有显著性正相关。结论Hcy能引起内皮细胞凋亡及磷酸化JNK表达的增强。     

同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡及舒降之的拮抗机制

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)是否通过caspase途径诱导内皮细胞凋亡,以及辛伐他汀是否可以通过调节内源性凋亡抑制蛋白c-IAP发挥其拮抗效应。方法:Hcy、辛伐他汀或两者联合处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC)24h后,用An-nexinV染色加流式细胞技术及末端脱氧核苷酸转移酶原位标记技术了解细胞凋亡状态;RT-PCR和蛋白质印迹技术检测caspase3、c-IAP1和c-IAP2的mRNA和蛋白质水平。结果:0.5mmol/L和3mmol/L的Hcy均可导致HUVEC凋亡,Hcy浓度高时凋亡细胞数较多,并伴有caspase3表达和活化增强,以及c-IAP1和c-IAP2的mRNA和蛋白质水平降低,辛伐他汀可以上调c-IAP1和c-IAP2的表达。结论:Hcy诱导HUVEC凋亡,此种作用可能涉及caspase3相关途径。辛伐他汀可促进c-IAP系统的表达,从而部分拮抗Hcy的作用。     

阿魏酸钠对TNF-α致血管内皮细胞凋亡的作用

目的 探讨阿魏酸钠（sodium femlate，SF）对TNF-α引起的血管内皮细胞（VEC）凋亡的作用及机制。方法 以培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为实验模型，采用电镜、TUNEL法观察凋亡细胞，用免疫组化技术检测bcl-2和bax的表达。结果 电镜观察TNF-α组可见VEC凋亡典型特征；TUNEL法检测TNF-α组VEC凋亡率为35．2％，显著高于对照组，SF组和TNF-d＋SF组（JD〈0．01）；TNF-α组bcl-2表达聪显减少，同时加入SF后bcl-2表达明显上升，而TNF-α可诱导bax表达增加，加入SF后明显降低。结论 TNF-d能诱导VEC凋亡，SF可抑制细胞凋亡，同时SF可使TNF-α诱导的VEC中bcl-2表达明显恢复，而对bax表达明显降低。     

温胆汤干预同型半胱氨酸致内皮细胞损伤的机制研究

目的观察温胆汤干预同型半胱氨酸(Hcy)致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的作用机制。方法选取SPF级雄性健康SD大鼠,采用体外培养HUVEC,分别设为空白对照组、模型组、温胆汤低剂量组、温胆汤高剂量组及维生素E组。MTT法检测HUVEC增殖情况,比色法检测细胞上清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)水平,ELISA法检测细胞上清中高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-6(IL-6)含量,Western Bloting法检测细胞中P38MAPK、P-P38MAPK、ERK1/2、p-ERK1/2、核转录因子-κB(NF-κB)、p-NF-κB、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和p-eNOS表达水平。结果经Hcy造模后,温胆汤可有效增强HUVEC存活能力,促进其增殖,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05或P0.01);与模型组比较,温胆汤不同浓度含药血清可明显减少细胞MDA、ROS、hs-CRP、TNF-α及IL-6的分泌(P0.05或P0.01),显著增加SOD、NO含量(P0.05或P0.01);同时温胆汤能明显抑制p-P38、p-ERK1/2、p-NF-κB表达,促进p-eNOS的表达(P0.05或P0.01),且呈浓度依赖性。结论温胆汤可通过缓解Hcy诱导的氧化应激,下调P38MAPK/NF-κB信号传导,从而缓解内皮细胞炎症损伤。