大鼠急性肺栓塞后TGF-beta对SM_(22)-alpha表达的调节

目的:研究大鼠急性肺栓塞模型肺组织中SM22-alpha的表达变化以及TGF-β信号转导系统对SM22-alpha表达的调节作用。方法:建立大鼠急性肺栓塞模型,分别在急性肺栓塞后1、8、24和48h开胸取出肺组织。常规提取肺组织总RNA和总蛋白,以正常组为对照,采取半定量RT-PCR的方法研究SM22-alpha,TGF-β1和TGF-βR在mRNA水平表达的变化;采用Western-blot方法进一步验证SM22-alpha,TGF-β1,TGF-βR,Smad7以及磷酸化的pSmad2和pSmad3在蛋白水平的表达变化;采用免疫组织化学方法检测大鼠肺组织中SM22-alpha,TGF-β1和TGF-βR在肺栓塞前后表达的变化及其组织分布情况。结果:在大鼠急性肺栓塞后的不同时间点,SM22-alpha的mRNA水平和蛋白水平均逐渐降低,在24和48h下降最为明显。参与SM22-alpha表达调节的TGF-β1和TGF-βR在mRNA水平和蛋白水平的表达也逐渐减低;免疫组化研究表明SM22-alpha主要分布在肺动脉中膜的平滑肌细胞(SMCs),在急性肺栓塞后表达显著降低。TGF-β1和TGF-βR主要分布在肺动脉壁、支气管壁和肺泡壁,急性肺栓塞后TGF-β1和TGF-βR在上述组织内的表达均明显降低。Western-blot检测发现急性肺栓塞后TGF-β信号转导分子中磷酸化的pSmad2和pSmad3在蛋白水平的表达逐渐减低,而对于TGF-β信号转导系统起抑制作用的Smad7分子的表达却明显上升。结论:大鼠急性肺栓塞后肺组织内TGF-β信号转导系统的抑制导致了SM22-alpha的表达下降,从而影响了肺动脉系统内SMCs的收缩功能。     

孟鲁司特对失血性休克复苏大鼠BALF中LTB_4、LTC_4和总蛋白含量的影响及肺保护作用

目的:观察孟鲁司特对失血性休克复苏致急性肺损伤大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中LTB4、LTC4和总蛋白含量的影响,探讨孟鲁司特的肺保护作用机制。方法:选取健康成年大鼠24只,随机分为3组(n=8):假手术组、失血性休克复苏致急性肺损伤模型组和孟鲁司特治疗组。制备失血性休克复苏急性肺损伤模型。模型组休克1 h后开始复苏并回输全部血液和2倍失血量的乳酸林格氏液;治疗组大鼠在放血前30 min接受孟鲁司特7mg/kg腹腔内注射,在复苏之前同样的剂量再注射一次。复苏后2 h处死大鼠分离气管进行支气管肺泡灌洗,采用ELISA试剂盒定量测定BALF中LTB4和LTC4,使用双缩脲法测定总蛋白含量;肺组织取样进行组织病理学检查。结果:与假手术组比较,模型组BALF中LTB4、LTC4水平及总蛋白含量明显升高(P<0.05),肺组织病理改变为中度肺损伤(P<0.05)。与模型组比较,治疗组BALF中LTB4、LTC4水平及总蛋白含量明显降低(P<0.05),肺组织病理改变明显减轻,为轻度肺损伤(P<0.05)。结论:孟鲁司特能够降低失血性休克复苏大鼠BALF中LTB4、LTC4水平及总蛋白含量,从而减轻肺损伤,具有一定的肺保护作用。     

大鼠急性肺栓塞后hnRNP-E1的表达及胶原代谢的变化

目的 研究大鼠急性肺栓塞模型肺组织中异源性核糖核蛋白E1(heterogeneous nuclear ribonucleoprote E1, hnRNP-E1)的表达变化及其对胶原代谢的影响.方法 建立大鼠急性肺栓塞模型,分别在急性肺栓塞后1、2、7和21 d开胸取出肺组织,然后提取肺组织的总RNA和总蛋白,以正常大鼠为对照组,采取半定量RT-PCR的方法研究hnRNP-E1在mRNA水平表达的变化;采用Western blot方法进一步验证hnRNP-E1在蛋白水平表达的变化.采用Northern blot法分析大鼠肺组织中Collagen α1(Ⅰ)(COL1A1)和Collagen α1(Ⅲ)(COL3A1)在肺栓塞后mRNA水平的表达变化;采用羟脯氨酸(HYP)和Masson染色观察急性肺栓塞3周后肺组织内的胶原沉积状况.结果 在大鼠急性肺栓塞后的不同时间点,hnRNP-E1的mRNA水平和蛋白水平的表达均有显著升高.大鼠急性肺栓塞后肺组织中COL1A1的mRNA表达水平有明显升高,但是COL3A1的mRNA表达水平无显著变化.HYP分析和Masson染色均显示急性肺栓塞3周后肺组织内的胶原沉积明显增加.结论 大鼠急性肺栓塞后肺组织内hnRNP-E1的表达升高,可能促进了COL1A1的蛋白表达和胶原在肺部的沉积.     

肺表面活性物质对哮喘大鼠ET-1及ET-1 mRNA表达的影响

目的:观察吸入肺表面活性物质(PS)对哮喘大鼠模型哮喘发作、内皮素-1(ET-1)及支气管肺组织ET-1 mRNA表达的影响,探讨PS 防治哮喘的机制.方法:建立哮喘大鼠模型,氧气驱动雾化吸入PS,观察哮喘发作情况及肺组织病理变化;采用放射免疫法测定其血浆及支气管肺泡灌洗液(BALF)中ET-1含量 ,以分子原位杂交技术检测支气管肺组织内ET-1 mRNA的表达.结果:哮喘组血浆、BALF中ET-1含量及支气管肺组织ET-1 mRNA表达明显增加;治疗组哮喘发作及病理改变减轻,ET-1含量、支气管肺组织内ET-1 mRNA的表达较哮喘组明显减少.结论:ET-1在哮喘发病机制中可能发挥重要作用,外源性PS能减轻哮喘发作,可能与抑制ET-1 合成及释放有关.     

砒石对哮喘小鼠5-脂氧合酶激活蛋白基因表达及白三烯C4的影响

目的　探讨 5 脂氧合酶激活蛋白 (FLAP)基因表达、小鼠白三烯C4(LTC4)水平在小鼠哮喘发病中的作用 ,以及砒石对哮喘的治疗作用与FLAP基因表达及LTC4水平的关系。方法　建立小鼠卵蛋白哮喘模型 ,灌胃给予砒石等药 ,用逆转录聚合酶链反应方法检测肺组织中FLAPmRNA表达的变化 ;用ELISA方法检测支气管肺泡灌洗液 (BALF)中LTC4含量。结果　哮喘小鼠肺组织FLAP基因表达水平、BALF中LTC4水平均较正常对照组显著升高。 1 2 5、2 5 0及 5 0 0mg/kg剂量的砒石可下调哮喘小鼠FLAPmRNA表达的量 ,抑制哮喘小鼠BALF中LTC4的水平。结论　气道中FLAP基因表达上调和LTC4水平增高在OVA致敏小鼠哮喘发病中起着重要作用。砒石可显著抑制哮喘小鼠肺组织中FLAP基因的表达 ,降低哮喘小鼠BALF中LTC4水平 ,具有抗哮喘活性。     

益气化痰方对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺泡灌洗液中AQP5、TNF-α和MUC5AC的影响

【目的】观察益气化痰方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺泡灌洗液(BALF)水通道蛋白5(AQP5)及其上游信号通道调节因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和下游信号通道调节因子黏蛋白5AC(MUC5AC)的调节作用。【方法】选用SD大鼠,随机分为空白组,模型组,益气化痰方低、中、高剂量组(剂量分别为7.398、36.99、73.98 g·kg-1·g-1)。除空白组外,其他组均采用香烟熏结合脂多糖气管滴入法复制COPD大鼠模型。采用益气化痰中药煎剂治疗COPD大鼠30 d后取材,观察肺组织苏木精—伊红(HE)染色,采用免疫组织化学法观察AQP5、TNF-α、MUC5AC的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠肺泡灌洗液(BALF)中AQP5、TNF-α和MUC5AC的含量。【结果】益气化痰汤各剂量组均可改善COPD大鼠的肺组织病理损害,减弱肺组织MUC5AC、TNF-α表达,增强AQP5表达。与空白组比较,模型组肺组织BALF中AQP5浓度显著下降(P0.01),TNF-α和MUC5AC浓度显著升高(P0.01)。与模型组比较,益气化痰方低、中、高剂量组肺组织BALF中AQP5浓度显著升高(P0.01),TNF-α和MUC5AC浓度显著下降(P0.01)。与低、中剂量组比较,益气化痰汤高剂量组作用显著(P0.01)。【结论】益气化痰方对COPD的疗效可能与水通道转运密切相关。     

脓毒症大鼠肺组织细胞间黏附分子-1表达的变化

目的:探讨脓毒症大鼠肺组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达变化及其与急性肺损伤的关系.方法:采用盲肠结扎穿孔术复制脓毒症动物模型,将大鼠分为假手术组,脓毒症 4、8、12、24 h组共5组,每组8只,所有大鼠于相应时点活杀,检测支气管肺泡灌洗液白细胞计数、肺湿/干重比和观察肺组织的病理变化,采用免疫组织化学方法和免疫印迹法检测肺组织ICAM-1蛋白的表达.结果:与假手术组比较,脓毒症4 h后大鼠肺组织中ICAM-1的表达水平升高(P<0.01),并持续升高至24 h,同时伴有支气管肺泡灌洗液白细胞计数、肺湿/干重比的增加和肺组织病理损害的加重.免疫印迹法测定ICAM-1的表达与支气管肺泡灌洗液白细胞计数、肺湿/干重比呈正相关,相关系数分别为0.79、0.86(P<0.01).结论:脓毒症大鼠肺组织中ICAM-1呈过度表达,参与脓毒症肺损伤过程.     

非受体酪氨酸蛋白激酶Lck与IL-17在急性肺损伤大鼠模型中的表达及意义

目的 研究非受体酪氨酸蛋白激酶Lck与IL-17在急性肺损伤(ALI)炎症反应中的表达及意义。方法 气管内滴入盐酸法复制大鼠ALI模型,用免疫组织化学方法(IHC)检测肺组织中Lck和IL-17蛋白表达水平;Western印迹法检测肺组织匀浆中Lck蛋白的表达;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织匀浆和肺泡灌洗液(BALF)中IL-17的含量。结果 正常大鼠肺组织中Lck与IL-17低水平表达,ALI模型建立后6h,其表达显著增高,肺间质中阳性着色的单核细胞明显增多。与对照组比较,ALI组大鼠肺组织匀浆和肺泡灌洗液(BALF)中IL-17含量均显著升高[(102.04±14.23)pg/mg pro vs. (25.16±9.08)pg/mg pro, P＜0.01;(66.46±13.12)pg/mg pro vs. (8.19±2.54)pg/mg pro, P＜0.01]。结论 ALI大鼠肺组织、肺泡灌洗液、匀浆中Lck与IL-17的表达均上调,两者参与了ALI的炎症反应过程。     

+Gz重复暴露后大鼠TNF-α和IL-1β水平及肺组织中mRNA表达变化

目的:研究不同水平正加速度( Gz)重复暴露后,大鼠血清和肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α和IL-1β含量及其在肺组织的mRNA表达水平的变化,探讨这两种致炎因子在 Gz重复暴露肺损伤中的可能作用。方法:雄性Wistar大鼠20只,随机分为对照组( 1Gz)、 5Gz组、 10Gz组和 15Gz组。采用梯形加速度曲线,在动物离心机上离心, 1Gz、 5Gz和 10Gz各暴露90s, 15Gz暴露30s,均间隔30min重复3次。于暴露后4h取大鼠腹腔静脉血、BALF及肺组织,用放免法测定血清和BALF中IL-1β和TNF-α含量;用RT-PCR方法检测大鼠肺组织中TNF-α和IL-1βmRNA表达水平。结果: Gz暴露后大鼠血清和BALF中TNF-α和IL-1β含量及其在肺组织中mRNA表达水平明显高于对照组,并随着 Gz强度的升高而升高。结论:炎症介质TNF-α和IL-1β在 Gz暴露导致大鼠肺组织的生物性损伤中可能起着重要的作用。     

大鼠急性肺血栓栓塞后VEGF、HIF-1的表达变化及相关性

目的研究大鼠急性肺栓塞模型肺组织中血管内皮生长因子（VEGF）、缺氧诱导因子1（HIF-1α）的表达变化,以了解阿E与VEGF、HIF-1α相关性。方法建立大鼠急性肺栓塞模型,分别在急性肺栓塞后1、6、12、24h开胸取肺组织。常规提取肺组织的总蛋白,以正常组为对照,免疫组织化学法测定VEGF、HIF-1α表达水平的变化。结果在大鼠急性肺栓塞后,HIF-1和VEGF蛋白水平均逐渐升高,在6h升高最为明显。结论HIF-1α在大鼠PTE肺组织中呈高表达,并调节其下游基因VEGF的表达增强,可对肺组织产生保护作用。     

糖皮质激素对急性肺栓塞后肺组织内硫氰酸生成酶表达的影响

目的研究糖皮质激素对大鼠急性肺栓塞后肺组织内硫氰酸生成酶（rhodanase，Rho）表达的影响。方法建立大鼠急性肺栓塞模型，分别在急性肺栓塞后1、8、24和48h开胸取出肺组织。常规提取肺组织的总RNA和总蛋白，以正常组为对照，采取半定量RT—PCR和westem blot方法研究Rho在mRNA水平和蛋白水平的表达变化；采用免疫组织化学的方法检测大鼠肺组织中Rho在肺栓塞前后表达的变化及其组织分布情况。在大鼠急性肺栓塞后48h，采用RT-PCR和western blot方法观察地塞米松（dexamethasone，DEX）对Rho蛋白表达的影响。分离培养原代大鼠气道上皮细胞，在培养液中加入50ng／mL的共刺激因子IL-1β，TNF—α和IFN—γ，采用半定量RT-PCR，western blot和免疫荧光染色的方法观察1μM的DEX对上皮细胞Rho表达的影响，采用ELISA方法检测上皮细胞IL-8和GM-CSF的表达。结果大鼠急性肺栓塞后，Rho的mRNA水平和蛋白水平均逐渐下降，免疫组化研究表明Rho主要分布在支气管粘膜上皮细胞，在急性肺栓塞后表达显著下降。DEX可显著提高Rho的肺内表达。大鼠气道上皮细胞在共刺激因子的作用下IL-8和GM—CSF的表达显著升高，DEX可明显抑制IL-8和GM—CSF的表达，但是Rho的表达显著升高。结论大鼠急性肺栓塞后肺组织内Rho的表达明显下降，糖皮质激素可升高Rho的表达。离体实验证明糖皮质激素是通过抑制上皮细胞的炎症反应来提高Rho的表达。     

肺癌患者肺泡巨噬细胞抗肿瘤免疫功能研究

用镀铜镉还原法、放射免疫法、比色法、酶标双抗体夹心法及逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）研究肺癌患者肺泡巨噬细胞（ＡＭ）抗肿瘤免疫功能状态。结果显示肺癌患者荷瘤侧肺ＢＡＬＦ中ＮＯ，ＡＭ培养上清中ＮＯ和ＴＮＦα活性低于非荷瘤侧肺与对照组，ｓＩＬ－２Ｒ活性高于对照组；经ＧＭ－ＣＳＦ刺激后ＡＭ培养上清中ＮＯ，ＴＮＦα及ＳＯＤ活性增强，ｓＩＬ－２Ｒ水平降低；两组ＡＭ ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ表达强度明显弱于     

肺癌患者肺泡巨噬细胞一氧化氮活性研究

用镀铜镉还原－Ｃｒｉｅｓｓ法检测肺癌患者ＢＡＬＦ及肺泡巨噬细胞（ＡＭ）培养上清液中ＮＯ水平；ＲＴ－ＰＣＲ检测ＡＭ ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ表达。结果显示，肺癌组ＢＡＬＦ及ＡＭ培养上清液中ＮＯ水平均明显低于对照组。两组ＡＭ ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ表达阳性率分别为６９％和９１％（Ｐ〉０．０５），但表达强度肺癌组明显弱于对照组（Ｐ〈０．０１）。经ＧＭ－ＣＳＦ刺激后，ＡＭ ｉＮＯＳ表达强度及培养上清液中ＮＯ水平均显     

自噬在大蒜素减轻脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用

目的：探讨自噬在大蒜素减轻脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用及机制。方法：将152只20~25 g的8周龄雄 性Balb/c小鼠随机分为4组：假手术组(S组)、脓毒症组(CLP组)、大蒜素治疗组(Allicin组)及自噬抑制组(3-MA组)。脓 毒症模型采用盲肠结扎穿孔法;Allicin组于术后6和12 h用大蒜素(30 mg/kg,腹膜内注射)干预;3-MA组在大蒜素干预 之后0.5 h加用3-MA(15 mg/kg,腹膜内注射);S组和CLP组于同时间点给予等量生理盐水。每组随机取20只小鼠,观 察术后7 d生存率。每组各取12只小鼠,于术后24 h时收集肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fl uid,BALF)(n=6)及肺组织 (n=6),采用ELISA法测定BALF中TNF-α和IL-6水平;HE染色观察肺部病理变化,免疫组织化学法测定肺组织自噬蛋 白微管相关蛋白1轻链3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3B)和Beclin-1的表达;采用比色法检测肺组织 MDA含量及SOD活性。结果：与S组比较,CLP组7 d生存率降低(P<0.05),BALF中TNF-α及IL-6水平升高(P<0.05),肺 损伤评分增加(P<0.05),肺组织MDA含量增加、SOD活性下降(P<0.05),肺组织LC3B及Beclin-1表达升高(P<0.05);与 CLP组比较,Allicin组7 d生存率升高(P<0.05),BALF中TNF-α和IL-6水平降低(P<0.05),肺损伤评分下降(P<0.05),肺组 织MDA含量下降,SOD活性增加(P<0.05),肺组织LC3B和Beclin-1表达升高(P<0.05);与Allicin组比较,3-MA组小鼠7 d 生存率降低(P<0.05),BALF中TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05),肺损伤评分增加(P<0.05),肺组织MDA含量增加、SOD 活性下降(P<0.05),肺组织LC3B和Beclin-1表达降低(P<0.05)。结论：大蒜素可能通过增强自噬水平减轻脓毒症小鼠急 性肺损伤。     

非对称二甲基精氨酸在大鼠脑缺血再灌注损伤诱导的急性肺损伤发病过程中的作用(英文)

目的研究非对称二甲基精氨酸(ADMA)在大鼠脑缺血再灌注(I/R)诱导的急性肺损伤发病过程中的作用。方法成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(S)、模型组(I/R)、ADMA处理组(ADMA+I/R)和DDAH处理组(DDAH+I/R)。通过大鼠脑缺血2 h后恢复血流灌注诱导急性肺损伤。在恢复血流灌注24 h后,采用比色法检测各组大鼠肺组织一氧化氮合酶(NOS)活性和NO含量。采用RT-PCR和Western blotting分别检测肺组织蛋白激酶(PKC)和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)mRNA和蛋白表达水平;ELISA法检测支气管肺泡灌洗液及入肺血和出肺血血浆中的ADMA水平。结果脑I/R损伤大鼠支气管肺泡灌洗液和入肺血血浆中ADMA水平明显升高,肺组织中NO含量和NOS活性明显降低(P<0.05),同时MLCK和PKC mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05)。预先给予外源性DDAH后,脑缺血/再灌注损伤大鼠支气管肺泡灌洗液和入肺血血浆中ADMA水平明显降低,肺组织NO含量和NOS活性明显升高,MLCK和PKC mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论 ADMA通过上调肺组织MLCK和PKC的表达参与了脑I/R损伤后急性肺损伤的发病过程。ADMA可能是脑缺血/再灌注损伤诱导急性肺损伤的一个新的生物标志物和治疗靶点。     

急性肺损伤中炎症因子 IL-8与 RhoA 的相关性研究

目的：探讨油酸型急性肺损伤模型中IL‐8与RhoA的相关性。方法建立大鼠油酸急性肺损伤模型,检测各组大鼠肺湿／干重比及肺泡灌洗液（BALF）中中性粒细胞比例,比较肺组织病理学改变;采用聚合酶链反应检测肺组织匀浆RhoA表达,酶联免疫吸附法（ELISA ）测定大鼠IL‐8的变化。结果肺W／D损伤组在2、6、12、24 h均较正常组明显升高,并且损伤组2 h比值最高;损伤组各时间点BALF中中性粒细胞计数比例明显高于正常组,24 h中性粒细胞细胞比例达峰值;损伤组个时间点血浆及BALF中IL‐8较正常组明显升高,两者具有相关性;损伤组各时间点RhoA的表达明显高于正常组。结论油酸型急性肺损伤大鼠中存在RhoA的高表达,RhoA表达增加可致IL‐8的表达增加,进而引起炎症细胞浸润。     

犬烟雾吸入伤早期肺洗出液对大鼠肺损伤作用的研究

目的 研究犬烟雾吸入伤早期肺洗出液是否具有生物学活性及其活性强度的持续时间。方法 建立大急性重度烟雾吸入伤模型,伤后1h对伤肺进行生理盐水大容量灌洗,将一定量之洗出液经气管注入正常大鼠气道,观察自主呼吸24h间大鼠呼吸频率、血气及离体肺含水量和肺泡稳定性等变化。结果 与正常大鼠、等容量生理盐水或正常犬肺洗出液气道灌注大鼠相比,用烟雾吸入伤犬早期肺洗出液灌注大鼠气道24h内死亡率高;存活者RR波动大,PaO2显著下降;肺水含量高,静态总肺顺应性和肺扩张指数低提示肺泡稳定性差;肺组织氧化能力显著升高,总抗氧化能力显著下降。结论 犬烟雾吸入伤早期肺洗出液灌注大鼠气道可引起明确的损害反应,并表现出一定的小气道机械阻塞作用。洗出液具有肯定的生物学活性,引起的肺损害作用在灌注后24h已大部消除。     

IL-8和ET-1在慢性阻塞性肺疾病急性加重合并肺栓塞的表达及临床意义

目的探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重（AECOPD）合并肺栓塞（PE）患者血清中白细胞介素-8（IL-8）和内皮素-1（ET-1）含量的变化及临床意义。方法收集AECOPD患者62例,其中单纯AECOPD患者38例,AECOPD＋PE患者24例,另取同期健康体检者40例作为对照组,采用酶联免疫吸附试验测定3组血清中的IL-8和ET-1含量。结果①AECOPD组和AECOPD＋PE组患者血清IL-8和ET-1水平明显高于对照组（P〈0.05）;②AECOPD＋PE组血清IL-8和ET-1水平明显高于AECOPD组（P〈0.05）;③AECOPD组和AECOPD＋PE组患者血清中IL-8和ET-1与呈正相关;④AECOPD组和AECOPD＋PE组Fbg、t-PA含量均较对照组有显著升高,PT、APTT指标较对照组均显著缩短,TT显著延长（P〈0.05）。结论 IL-8和ET-1的异常表达在AECOPD合并肺栓塞的发生发展中起一定的作用,联合检测IL-8和ET-1有助于AECOPD患者病情严重程度的判断。