人类红细胞MN血型中抗-M与GYPA基因表达的相关性简

目的 研究人类红细胞MN血型系统中抗-M的产生与相关基因GYPA表达的相关性,同时揭示M抗原的表达与抗-M产生之间的关系.方法 选择无偿献血者和临床中发现的血浆中含有IgG、IgM或两者共存的16例抗-M血液样本,以血清学及分子生物学方法对样本进行MN血型检测,应用自行设计的一对特异性引物检测MN血型相关基因GYPA第二外显子的碱基序列.结果 16例样本中12例表现型为NN型,2例为MN型,2例为MM型.基因测序结果与GenBank参比序列比对,未发现突变碱基,血型表现型的基因定型与血清学定型相一致,经过谱细胞鉴定,该16例患者的血浆中全部携带抗-M抗体.结论 人类红细胞MNS血型中抗-M的产生与M抗原是否存在没有必然关联,与相关基因GYPA的表达也无明显关联.     

MN血型GYPA基因测序方法的建立及应用于汉族人群检测

目的建立适合检测中国汉族人群MN血型GYPA基因的测序技术,用于中国汉族人群MN血型基因的分子遗传背景及遗传多态性的研究。方法根据GenBank的NG-007470基因参照序列,自行设计GYPA基因第1—7外显子共7对引物,以随机选取的55份中国汉族人群标本的DNA为检材,探索最佳反应体系与PCR扩增条件,同时扩增GYPA的第1—7外显子,含括了GYPA基因的全长外显子序列。使用PrismTM ABI3730XL DNA测序仪进行碱基序列分析,以Oligo分析软件分析碱基序列。检测结果的可靠性通过血型血清学、PCR-SSP基因分型方法进行验证。结果应用该方法可以在同一扩增条件下同时扩增GYPA基因的全部外显子,同步检测到GYPA基因共7个外显子的碱基序列,55份标本的基因测序结果与血清学、PCR-SSP基因分型结果完全一致。结论本研究的GYPA基因测序方法准确、可靠,适用于中国汉族人群的GYPA基因测序。     

高分辨率熔解曲线在ABO血型基因526位点单核苷酸多态性检测中的应用

目的建立高分辨率熔解(HRM)曲线检测ABO血型基因526位点单核苷酸多态性(SNP)的方法。方法随机提取35例待检血型标本的DNA,运用HRM曲线检测ABO血型基因526位点的SNP,通过PCR-DNA测序以及血型血清学试验验证HRM检测结果的准确性。结果 35例血型标本中,共检出526位点杂合子13例,纯合子22例。经测序分析和血清学试验验证13例G/C杂合中B型8例、AB型5例,22例CC纯合子中A型10例,O型12例。HRM法检测结果与测序结果及血清学结果相符。结论 HRM法是一种低成本、简便、准确的SNP检测技术,有望成为临床ABO血型基因分型的新方法。     

MN血型基因分型应用于河源地区临床输血检测

目的 应用基因分型技术鉴定产生抗-M抗体的患者样本MN血型,协助解决MN血型相关的临床输血问题。方法 在血清学鉴定的基础上,采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)基因定型方法对14例产生抗-M抗体样本的MN血型进行基因分型,并与血清学结果比较; 选取M抗原阴性的血液与之进行交叉配血。结果 14例样本基因分型结果与血清学分型结果相符,其中11例为NN型,2例为MN型,1例为MM型。选取M抗原阴性的供血者血液与该14例患者血液配血均相合,患者输血后无输血反应,24 h内血红蛋白上升。结论 MN血型基因分型技术可作为血清学方法的补充,有利于临床输血相关疑难样本的检测。     

浙江畲族MN血型基因频率的调查

MN血型系统(MNS，ISBT0002)具有重要的临床意义，M和N抗原位于红细胞膜血型糖蛋白A(GPA)上。分子生物学研究表明，编码M和N抗原的基因GYPA定位于4q28-q31，M和N抗原之间的不同在于GYPA基因上核苷酸的差异。关于MN血型基因频率的研究早期主要采用血清学方法，基因分型的方法报道较少。参照有关文献，本实验室建立了MN基因分型的PCR-SSP方法，并检测了部分浙江畲族人群的样本，现将结果报告如下。     

MNS杂交糖蛋白GP. Mur的高分辨率熔解曲线(HRM)基因分型

目的采用高分辨率熔解曲线(HRM)基因分型方法对MNS杂交糖蛋白GP.Mur做基因分型并验证HRM基因分型方法的可靠性。方法收集254例献血者全血标本(广州地区献血者104例,澳大利亚华裔献血者150例),利用DNA提取试剂盒抽提基因组DNA;以HRM基因分型方法对MNS杂交糖蛋白GP.Mur做基因分型;以多重连接依赖的探针扩增技术(MLPA)或血清学方法对GP.Mur阳性标本做确证试验,同时采用直接测序法对HRM检出的变异曲线标本确证。结果 HRM基因分型254例标本中杂合的GP.Mur有14例,其中11例GP.Mur阳性标本均来自广州献血者,经MLPA基因分型方法证实其基因型为GYP*Mur/GYPB,另外3例为澳大利亚华裔献血者标本,血清学试验证实红细胞表型为GP.Mur。此外,HRM方法还检出了4例变异曲线标本,测序结果显示这4例标本均在GYPB基因上携带有点突变。结论 HRM方法能准确地对GP.Mur糖蛋白做基因分型,该方法在突变扫描方面具有极大的优势。     

广州地区人群中RHD* 960A突变型等位基因的鉴定及血型血清学与分子生物学特征分析

目的分析广州地区人群中RHD*960A突变型等位基因个体的血型血清学与分子生物学特征。方法收集RhD变异型标本,采用2种不同的单克隆抗-D试剂鉴定RhD血型,抗球蛋白凝胶卡法进行直接抗球蛋白试验,并用RhD抗原表位检测试剂盒(D-Screen)检测RhD抗原表位;此外,采用Rh血型分型卡检测Rh CE抗原;采用多重连接酶依赖的探针扩增(MLPA)方法检测RHD及RHCE基因型;对MLPA方法无法给出检测结论的标本,进行RHD基因全部10个外显子的PCR扩增及产物直接测序。结果发现3例RhD变异型标本,直抗阴性,初步血清学结果显示RhD抗原弱阳性表达,RhD抗原表位检测结果显示其红细胞与RhD抗原epD6.6、epD8.2和epD9.1表位特异性单克隆抗体无凝集反应,与其余表位抗体呈弱阳性凝集反应;RHCE抗原分型1例为CCee,其余2例为Ccee;RHD基因的MLPA基因分型显示其基因型为正常的RHD/d(即未鉴定出其携带的突变型RHD等位基因),后续RHD基因外显子直接测序发现其第7外显子携带c.960GA(p.Leu302Leu)同义突变,RHCE基因MLPA基因分型结果与血清学表型一致。结论首次在广州地区人群中发现了RHD*960A突变型等位基因个体,并进行血清学抗原表位和基因型检测,其血清学表现为部分D。     

广西贵港地区人群 MN 血型等位基因多态性的调查研究

目的　探讨广西贵港地区人群 MN 血型等位基因的分布特点。方法　收集 2018 年 9 月～ 2019 年 6 月期间广西贵港地区随机人群 300 人份血样，采用血型血清学方法鉴定其 MN 表现型，同时提取血样中的 DNA，对 MN 血型相关基因 GYPA 的 exon-2 序列扩增后测序，分析广西贵港地区人群 MN 等位基因的多态性并与中国西安、新疆、贵州、广东等地区随机人群的 MN 血型基因频率作比较。结果　广西贵港地区人群的 MN 血型血清学定型与基因测序结果完全一致，300 例 MN 血型血清学鉴定中，MM 表型为 140 例，MN 表型为 121 例，NN 表型为 39 例；M 基因频率为 0.668，N 基因频率为 0.332。通过数据比较分析可知广西贵港地区人群基因各型的构成比与国内其他地区人群不同，MN 血型抗原在不同个体中存在明显的剂量效应。结论　广西贵港地区人群 MN 血型基因具有独特的多态性，了解这种多态性有助于广西贵港地区临床的安全输血，预防新生儿溶血性疾病，为广西贵港地区人类群体遗传学特征及分子生物学的研究奠定基础。     

ABO疑难血型的基因型鉴定与序列分析

目的 研究20例ABO疑难血型标本的基因型并鉴定其分子生物学特性。方法 应用标准血型血清学鉴定技术分析标本的血清学表型。应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增标本ABO基因7个外显子，对PCR产物进行直接测序，分析ABO疑难血型的基因分型和序列。结果 20例ABO疑难血型标本的血清学表型分别为：A抗原减弱5例、A抗原减弱合并抗-A15例、A抗原正常合并抗-A12例、B抗原减弱8例，基因型分别为：Ax02/O01 3例、Ael07/O01 2例、B313/O01 2例、A204/O02、A220/O01、Ael07/O02、Ael02/O01、Ael02/O02、Ax03/O01、Ax03/O02、B313/O02、B302/O01、B302/O02、Bw19/O02、A102/B313、A101/Bw37各1例。结论 ABO基因分型技术可精准鉴定疑难标本的血型，提供明确的血型遗传学信息，保障临床用血安全。     

PCR-高分辨熔解曲线法在Kidd血型基因分型中的应用

目的:探讨PCR-高分辨熔解曲线(HRM)法在Kidd血型基因分型中的应用。方法:采用简单随机抽样法,选择2019年10月至11月,于深圳市血液中心参加无偿献血的256例献血者为研究对象。本组献血者年龄为18～60岁;男性献血者为142例,女性为114例。采用血型血清学试验方法对本组献血者全血标本的红细胞抗原表型进行检...     

贵州地区布依族人群MNS血型基因GYPA和GYPB的群体遗传学研究

目的 研究贵州布依族人群MNS血型基因GYPA和GYPB的遗传多态性.方法 对随机抽取的138例贵州布依族献血者血样进行MNS血型血清学分型,并通过已建立的基因测序体系对GYPA的第二外显子和GYPB的第三外显子(B4)进行测序.结果 贵州布依族人群的M,N,S和s抗原的基因频率分别为53.26％,46.74％,2.54％和97.46％,同时获得了M,N,S和s相关基因GYPA和GYPB的碱基序列.该研究获得了贵州布依族MNS血型的遗传特点,并与中国汉族人群无明显差异.结论 该研究填补了贵州少数民族布依族MNS血型的血清学与分子生物学数据的空白,提示贵州少数民族和汉族人群间具有较为明显的民族融合特点,此研究还为临床输血、器官移植以及人类的遗传关系和种族迁移的研究打下了基础.     

罕见B(A)血型的鉴定

目的观察2例罕见B(A)血型的血清学特征并研究其分子机制。方法用血型血清学鉴定2例献血者标本ABO血型,用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)基因分型和直接测序确定其基因型。结果 2例献血者血型血清学检测结果均表现为B(A)亚型的特点。标本1基因分型为BO2,测序结果为第7外显子B基因发生640AG突变,符合B(A)04/O02的基因型特点;标本2基因分型为BO1,测序结果为第7外显子B基因发生700CG突变,符合B(A)02/O01的基因型特点。结论2例标本均为B(A)表现型,基因型分别为B(A)04/O02和B(A)02/O01。     

RhCE抗原基因分型和表型不一致与等位基因变异的相关性研究

目的 探讨变异RhCE抗原的分子背景及RHCE基因的遗传学特征与基因多态性.方法 采用单克隆抗-C、-c、-E和-e试剂检测10373例RhD阳性和635例RhD阴性献血者的RhCE表型;选择942例标本PCR-SSP技术做RHCE基因分型,对基因分型与血清学分型不一致标本采用PCR-SSP检测22个主要RHCE变异等位基因,部分RHCE等位基因采用测序技术鉴定.结果 共有54例标本(占94.27％)基因分型结果与血清学表型结果不一致,经PCR-SSP检测出22种与弱表达抗原相关的RHCE等位基因变异体,经血清学复检有36例标本RhCE抗原存在弱反应或极弱反应.结论 在血清学检测时表达弱反应的RhCcEe抗原标本中检出多种RHCE等位基因类型,变异的等位基因可以影响基因分型预测血型抗原的准确性:RhCE表型和基因型不一致的原因可能由变异的等位基因或未发现的等位基因引起.     

中国人群MN血型中M、N等位基因多态性的研究

目的:检测血型糖蛋白GPA相关基因GYPA中全部外显子与部分内含子碱基序列,探讨中国人群MN血型中M、N等位基因的多态性。方法:随机选取国籍为中国人的无偿献血者225人份的血液样本,以血型血清学方法鉴定M、N血型表现型;自行设计引物,直接测序相关样本GYPA基因的exon-1~7全长碱基序列以及intron-1~7中部分碱基序列,根据序列中碱基的变异分析M、N基因的多态性。结果:M、N血型的基因定型与血清学检测结果一致;根据intron-1中-9位,exon-2中1、22、34、35、56位,intron-2中23位,intron-3中55位,intron-4中63位,intron-5中1373、1374、1375位,intron-6中55、189、190位和exon-7中712位等的变异,可以把M、N基因细分为M101、M102、M103、M201、M202、N101、N102、N103、N104、N201;同时,本研究发现在G YPA基因的intron-2中42、54位突变与59、60位间插入碱基T的变异;intron-3中-28、-29、-65、-102位等基因位点存在新的变异。结论:MN血型中M、N基因具有多态性,中国人群GPA相关基因G YPA的各外显子、部分内含子的结构特点揭示了中国人群的M、N血型基因的多态性,为临床输血、人类群体遗传学及分子生物学的研究提供相关的基础。     

血型血清学ABO亚型95例的分子机制研究

目的研究95例中国人群血型血清学ABO亚型个体的分子机制。方法 2013年11月—2017年10月采用血型血清学方法对ABO正反定型不符标本进行检测;采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)及第6、7外显子基因测序方法进行基因分型,其中部分标本采用了第1—7外显子的测序。结果对血型血清学方法确认的95例(73例先证者,22例家系成员)ABO亚型标本。经PCR-SSP和基因测序检测,73例ABO亚型先证者中检出A亚型基因的个体13例(17.8%),检出B亚型基因的个体17例(23.3%),检出B(A)型基因的个体22例(30.1%),共52例(71.2%,52/73);22例家系成员中检出ABO亚型基因者18例。先证者中未检出ABO亚型基因者21例(28.8%,21/73),且21例中5例(6.8%,5/73)检出O基因但表达弱A或弱B抗原;22例家系成员中4例未检出ABO亚型基因,共25例(25/95)。结论 ABO亚型的基因型与表型不完全符合,且同1个血型血清学表型对应不同的基因型,同1个基因型又表现为不同的血型血清学结果。     

西安地区献血人群MNS血型基因多态性研究

目的了解西安地区人群MNS血型基因的多态性。方法随机选取陕西西安地区献血人群200(人)份血样,以血型血清学鉴定其MN和Ss表现型;同时提取全血中的DNA,对血型糖蛋白相关基因GYPA的内含子(intron)-2、3及外显子(exon)-2与GYPB的exon-3(B4)序列扩增后测序;分析本组人群MNS等位基因的多态性并与不同地区人群的M基因各型的构成比作比较。结果本组人群的MN、Ss血型血清学定型与基因测序分型结果完全一致,其中M、N、S、s基因频率分别为0.467、0.533、0.053和0.947,MG、MT基因频率分别为0.415和0.052;本组人群M基因各型的构成比与北京和深圳人群不同;GYPA intron-2的第59与60位碱基处插入T,发生率为20.5%(41/200)。结论西安地区献血人群MNS血型基因具有多态性,对这种多态性的了解有助于本地区临床科学、合理输血以及开展人类群体遗传学特征及分子生物学的研究。     

血型血清学结合PCR-SSP基因分型法在新生儿ABO血型鉴定中的应用

目的建立ABO血型基因的PCR检测方法,评价常规ABO血清学正定法用于新生儿ABO定型的可靠性,探讨血型血清学结合PCR-SSP基因分型法在新生儿ABO血型鉴定中的价值。方法采用血清学方法鉴定110例新生儿血型,结合PCR-SSP基因分型方法做检测,并对其中4例PCR-SSP方法未明确血型的通过测序确定ABO基因型。结果 110例新生儿ABO血型标本,血清学检测方法中,2例抗原强度较弱,无法诊断血型,通过PCR-SSP方法诊断为AB型;PCR-SSP检测方法中,106例确定基因型,PCR-SSP方法未明确血型的4例标本通过测序确定基因型,所有基因分型结果与血清学检测结果一致率为100%;新生儿ABO血型正反定型不符率为63%,A、B、O型正反定不符率比较,P>0.05。结论 ABO血型基因分型结合血清学分型可用于新生儿ABO血型鉴定,一定程度上可弥补血清学方法的不足。     

B(A)血型的血清学特点及基因分析—附1例报告

目的探讨1例B(A)血型的血清学特点,及采用基因测序技术对B(A)血型进行鉴定。方法采用血型血清学技术检测ABO血型表型,采用直接测序和克隆测序方法确定其ABO基因型。结果血清学结果正反定型不符,正定型为AB型,A抗原较弱,H抗原较正常B型明显增强;反定型血浆中有较弱的抗-A1;对ABO基因第6、7外显子进行基因测序,第6外显子有O_(02)等位基因,第7外显子存在640AG突变,证实为B(A)_(04)等位基因,基因型确定为B(A)_(04)/O_(02)。结论血型确定为B(A)血型,进一步基因型鉴定为罕见的B(A)_(04)/O_(02)。     

MALDI-TOF MS质谱技术在疑难血型标本鉴定中的应用

目的 探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术在临床疑难血型标本基因分型中的应用,为临床输血工作提供依据。方法 3例标本均为上海地区医院送检至上海市血液中心的疑难血型标本,其中1号标本包含先证者及其父母血样。利用血清学方法对标本进行血型鉴定、直抗试验、意外抗体筛查及鉴定试验。利用由本实验室建立的MALDI-TOF质谱检测体系对标本进行血型基因分型。利用Sanger测序验证标本基因突变位点,并利用血清学或流式方法验证部分标本表型。结果 血清学结果提示,1号先证者及其母亲、2号和3号标本均存在抗高频抗原抗体。MALDI-TOF MS质谱分型结果显示,1号标本先证者为Di(a+b+),其父为Di(a-b+),其母为Di(a+b-),2号标本为p, 3号标本为Jr(a-)。3例标本测序结果与质谱分型结果一致。血清学结果提示,2号标本为p表型。流式结果提示,3号标本为Jr(a-)表型。结论 首次将MALDI-TOF MS质谱技术应用于国内临床疑难标本血型基因分型。相较于PCR-SSP等分型手段,MALDI-TOF MS具备快速、高通量、高特异性等优势,有助于辅助开展疑...     

深圳献血人群Duffy血型基因多态性的研究

目的建立Duffy血型的分子生物学检测方法,研究深圳献血人群Duffy血型基因多态性。方法在2011年8～11月本中心900名无血源关系献血者标本中,用卡式微柱凝胶抗球蛋白方法鉴定Duffy血型表现型,建立Duffy血型的基因分型方法 PCR-SSP法及PCR产物直接测序法,对900例标本DNA进行PCR-SSP法检测,其中50例做Duffy血型基因编码区域序列测定。结果血清学结果为Fy(a+b-)855例,Fy(a+b+)43例,Fy(a-b+)2例,Fy(a-b-)0例。900例Duffy血型PCR-SSP法基因分型结果与血清学表现型完全一致。50例FY基因编码序列部分测序结果与血清学、PCR-SSP法吻合,表现型FY(a+b-)标本测序结果可见FY基因第2外显子第125位核苷酸碱基为纯合子G;表现型FY(a-b+)标本测序结果为第125位核苷酸碱基为纯合子A。结论 Duffy血型PCR-SSP基因分型方法及PCR产物直接测序法可以正确地鉴定Duffy基因型,适用于Duffy血型基因多态性的研究。深圳地区Fya的基因频率为0.973 9,Fyb的基因频率为0.026 1。