Ⅱ型胶原预防和治疗骨关节炎的动物实验

目的：采用Hulth法对新西兰兔建立膝骨关节炎动物模型,以透明质酸钠及注射用生理盐水为对照,观察Ⅱ型胶原注射治疗兔膝关节炎的愈合效果.方法：实验于2002-02/2003-07在暨南大学医学院附属第四医院完成.取36只新西兰兔制备Hulth膝骨关节炎动物模型,随机等分为3组：实验组术前及术后每两周关节内注射1 mL 1%Ⅱ型胶原至12周.关节内注射透明质酸钠组和关节内注射生理盐水组分别于术前及术后每两周关节内注射1%透明质酸钠1 mL,生理盐水1 mL,以上各组于术后4,8,12周各处死动物4只,作标本手术显微镜观察和组织学检测.结果：①实验组与透明质酸钠组骨关节炎改变较生理盐水对照组明显减轻.②术后4周时,实验组软骨膜光滑,软骨细胞排列整齐,可见双核软骨细胞;关节内注射透明质酸钠组软骨膜也光滑,软骨细胞排列整齐;关节内注射生理盐水组软骨膜细胞增生,有裂隙,软骨层变薄,细胞排列不规则.术后8周时,实验组软骨膜细胞增生,有裂隙,软骨细胞层次减少,但排列尚规则;关节内注射透明质酸钠组的光镜改变基本与实验组相似;关节内注射生理盐水组出现软骨表面缺损及纤维化,软骨细胞层薄排列不规则.术后12周时,实验组、关节内注射透明质酸钠组的光镜改变与实验组术后8周时相似;关节内注射生理盐水组在其术后8周时光镜改变基础上有更广泛的软骨缺损,部分切片可见软骨下骨质暴露.结论：①Ⅱ型胶原与透明质酸钠匀能有效抑制骨关节炎.②外源性Ⅱ型胶原可以替代透明质酸钠应用于骨关节炎的防治.     

Ⅱ型胶原预防和治疗骨关节炎的动物实验

目的:采用H ulth法对新西兰兔建立膝骨关节炎动物模型,以透明质酸钠及注射用生理盐水为对照,观察Ⅱ型胶原注射治疗兔膝关节炎的愈合效果。方法:实验于2002-02/2003-07在暨南大学医学院附属第四医院完成。取36只新西兰兔制备Hulth膝骨关节炎动物模型,随机等分为3组:实验组术前及术后每两周关节内注射1m L1%Ⅱ型胶原至12周。关节内注射透明质酸钠组和关节内注射生理盐水组分别于术前及术后每两周关节内注射1%透明质酸钠1m L,生理盐水1m L,以上各组于术后4,8,12周各处死动物4只,作标本手术显微镜观察和组织学检测。结果:①实验组与透明质酸钠组骨关节炎改变较生理盐水对照组明显减轻。②术后4周时,实验组软骨膜光滑,软骨细胞排列整齐,可见双核软骨细胞;关节内注射透明质酸钠组软骨膜也光滑,软骨细胞排列整齐;关节内注射生理盐水组软骨膜细胞增生,有裂隙,软骨层变薄,细胞排列不规则。术后8周时,实验组软骨膜细胞增生,有裂隙,软骨细胞层次减少,但排列尚规则;关节内注射透明质酸钠组的光镜改变基本与实验组相似;关节内注射生理盐水组出现软骨表面缺损及纤维化,软骨细胞层薄排列不规则。术后12周时,实验组、关节内注射透明质酸钠组的光镜改变与实验组术后8周时相似;关节内注射生理盐水组在其术后8周时光镜改变基础上有更广泛的软骨缺损,部分切片可见软骨下骨质暴露。结论:①Ⅱ型胶原与透明质酸钠匀能有效抑制骨关节炎。②外源性Ⅱ型胶原可以替代透明质酸钠应用于骨关节炎的防治。     

透明质酸钠预防骨关节炎时Ⅱ型胶原抗体水平的动态变化

背景：研究表明透明质酸钠可作用于机体免疫系统，调节免疫细胞分泌细胞因子变化，从而抑制炎症，对治疗早期骨关节炎具有一定疗效。目的：观察关节腔内注射透明质酸钠预防膝骨关节炎过程中对Ⅱ型胶原抗体水平的影响及其动态变化。设计：随机对照观察。单位：广州市红十字会医院创伤外科研究所。材料：实验于2002-03／08在广州市创伤外科研究所动物及免疫室完成。选用成年新西兰大白兔12只。方法：取12只成年新西兰免制备Hulth膝骨关节炎动物模型，随机等分为两组，透明质酸钠组和生理盐水对照组。透明质酸钠组术后当时及每2周关节内注射10gL透明质酸钠lmL至12周；对照组注射生理盐水lmL为对照。各组术前及术后每隔2周收集血清，建立间接夹心酶联免疫吸附法，检测Ⅱ型胶原抗体水平。主要观察指标：对比分析不同时期实验组与生理盐水对照组预防兔膝骨关节炎血清Ⅱ型胶原抗体水平的动态变化及两组组内各时期Ⅱ型胶原水平与术前的比较。结果：所有实验数据均来自12只新西兰大白兔实验结果统计数据。透明质酸钠组术后第6，10，12周Ⅱ型胶原抗体水平与术前比较均显著提高（P〈0。05）；生理盐水对照组Ⅱ型胶原抗体水平第10周显著高于术前（P〈0．05）；透明质酸钠组与生理盐水对照组同期比较Ⅱ型胶原抗体水平均无显著差异。结论：骨关节炎使机体产生自身免疫，引起自身Ⅱ型胶原抗体水平增加。透明质酸钠能促进体液免疫应答，导致抗体水平进一步升高。提示注射透明质酸钠治疗膝骨关节炎时，应考虑其免疫调节作用。但值得一提的是，透明质酸钠为糖胺多糖本身不具备产生特异性Ⅱ型胶原抗体的免疫原性，它究竟通过何种途径调节体液免疫应答有待于进一步深入观察。     

透明质酸钠预防骨关节炎时Ⅱ型胶原抗体水平的动态变化

背景研究表明透明质酸钠可作用于机体免疫系统,调节免疫细胞分泌细胞因子变化,从而抑制炎症,对治疗早期骨关节炎具有一定疗效.目的观察关节腔内注射透明质酸钠预防膝骨关节炎过程中对Ⅱ型胶原抗体水平的影响及其动态变化.设计随机对照观察.单位广州市红十字会医院创伤外科研究所.材料实验于2002-03/08在广州市创伤外科研究所动物及免疫室完成.选用成年新西兰大白兔12只.方法取12只成年新西兰兔制备Hulth膝骨关节炎动物模型,随机等分为两组,透明质酸钠组和生理盐水对照组.透明质酸钠组术后当时及每2周关节内注射10g/L透明质酸钠1 mL至12周;对照组注射生理盐水1 mL为对照.各组术前及术后每隔2周收集血清,建立间接夹心酶联免疫吸附法,检测Ⅱ型胶原抗体水平.主要观察指标对比分析不同时期实验组与生理盐水对照组预防兔膝骨关节炎血清Ⅱ型胶原抗体水平的动态变化及两组组内各时期Ⅱ型胶原水平与术前的比较.结果所有实验数据均来自12只新西兰大白兔实验结果统计数据.透明质酸钠组术后第6,10,12周Ⅱ型胶原抗体水平与术前比较均显著提高(P＜0.05);生理盐水对照组Ⅱ型胶原抗体水平第10周显著高于术前(P＜0.05);透明质酸钠组与生理盐水对照组同期比较Ⅱ型胶原抗体水平均无显著差异.结论骨关节炎使机体产生自身免疫,引起自身Ⅱ型胶原抗体水平增加.透明质酸钠能促进体液免疫应答,导致抗体水平进一步升高.提示注射透明质酸钠治疗膝骨关节炎时,应考虑其免疫调节作用.但值得一提的是,透明质酸钠为糖胺多糖本身不具备产生特异性Ⅱ型胶原抗体的免疫原性,它究竟通过何种途径调节体液免疫应答有待于进一步深入观察.     

射频热疗对兔膝骨关节炎形成过程中Ⅱ型胶原表达的影响

目的 探讨射频热疗对兔膝骨关节炎形成过程中Ⅱ型胶原表达的影响。 方法 选取雄性家兔54只,采用改良Hulth造模法将其右后肢制成实验性膝关节骨关节炎模型。待造模成功后,将上述实验兔随机分为模型组、鹿瓜多肽组及射频热疗组。鹿瓜多肽组于制模后给予鹿瓜多肽肌肉注射,射频热疗组于制模后给予射频热疗治疗,模型组制模后未给予特殊处理。于治疗7d、13d及19d时每组分别取6只实验兔处死,取右侧股骨内侧髁软骨,采用改良Mankins评分对其进行形态学评分;同时采用实时定量PCR技术检测各组实验兔右侧股骨内侧髁软骨组织Ⅱ型胶原含量。 结果 经相同天数治疗后,发现模型组、鹿瓜多肽组及射频热疗组右侧股骨内侧髁软骨Mankins评分依次降低,软骨组织Ⅱ型胶原含量依次增高,组间差异均具有统计学意义（P<0.05）。射频热疗组随着治疗时间延长,其Mankins评分逐渐降低,软骨组织中Ⅱ型胶原含量逐渐增高,各时间点间差异均具有统计学意义（P<0.05）。 结论 射频热疗治疗兔膝骨关节炎的疗效明显优于鹿瓜多肽,其治疗机制可能与显著增加软骨中Ⅱ型胶原含量有关。     

X型胶原在膝骨关节炎软骨中的表达

目的观察膝骨关节炎患者关节软骨中X型胶原的表达特征,探讨X型胶原在骨关节炎疾病进展中的作用。方法取18例膝骨关节炎患者和13例正常对照者的关节软骨。以Northern杂交、RT-PCR和Western杂交,分别检测各组样品X型胶原mRNA和蛋白水平的表达情况。结果 Northern杂交与RT-PCR的结果均显示膝骨关节炎的X型胶原表达有显著升高。Western杂交发现膝骨关节炎患者软骨基质中X型胶原的含量上升(P<0.01)。但分析mRNA和蛋白水平的变化趋势,未能发现它们之间存在明确的相关性(P>0.05)。结论膝骨关节炎患者的X型胶原表达明显增加,这可能促使基质组分发生改变,从而加速了骨关节炎的进展。     

基质细胞衍生因子1对骨关节炎软骨Ⅱ型胶原及分泌基质金属蛋白酶的影响

背景:基质细胞衍生因子1/趋化因子受体4信号通路在骨关节炎的发病中起关键作用。目的:观察外源性基质细胞衍生因子1对骨关节炎软骨Ⅱ型胶原及分泌基质金属蛋白酶的影响。方法:分别取因骨关节炎行膝关节置换患者软骨组织块40块,作为实验组;取因创伤性截肢患者膝关节的正常软骨块40块,作为对照组;置入DMEM培养液中,加入79,392μg/L外源性基质细胞衍生因子1,分别培养48h和96h。结果与结论:实验组与对照组培养48,96h后,各时间段Ⅱ型胶原免疫组织化学染色皆呈阳性,但高浓度基质细胞衍生因子1培养液条件下时间越长Ⅱ型胶原降解越严重;实验组与对照组同一时间段同浓度基质细胞衍生因子1培养液条件下基质细胞衍生因子1水平无明显差异(P>0.05);高浓度基质细胞衍生因子1培养液条件下同一时间段实验组比对照组中促使软骨释放基质金属蛋白酶多(P<0.05)。提示基质细胞衍生因子1可通过基质细胞衍生因子1/趋化因子受体4信号通路调节骨关节炎软骨基质金属蛋白酶表达并致软骨Ⅱ型胶原降解。     

类风湿性关节炎患者血清Ⅱ型胶原抗体检测

用本室提取纯化的Ⅱ型胶原（ＣⅡ）作为包被抗原，建立了ＥＬＩＳＡ试验最佳条件。采用ＥＬＩＳＡ法对３６例类风湿性关节炎（ＲＡ）、３９例其他关节痛患者及４０例正常人进行了血清ＣⅡ抗全检测。结果表明：ＲＡ患者有较高的ＣⅡ抗体检出率，阳性率为３３．３３％；其他关节痛患者及正常大ＣⅡ抗体检测结果均为阴性。结果提示，ＣⅡ在ＲＡ发病中具有重要作用，ＣⅡ抗体检测可以作为观察ＲＡ对ＣⅡ产生自身免疫及研究相关病理机制的     

甲状腺癌分子标记物的研究进展

近年来,大量甲状腺癌相关的分子标志物相继被发现。这些标志物也许可用来作为诊断的工具,或是预测患者的预后,甚至作为潜在的治疗靶点。比如在对甲状腺进行细针穿刺细胞学检查后,某些分子标志物可以协助诊断,为肿瘤的危险程度分级,进而优化甲状腺癌患者的手术方式以及术后的管理。     

Ⅱ型胶原免疫调节功能的初步研究

本文在佐剂性关节炎大鼠体内及正常小鼠体外研究了Ⅱ型胶原对脾淋巴细胞增殖反应的作用及对白介素－１（ＩＬ－１）产生的影响。结果表明：Ⅱ型胶原对ＡＡ大鼠脾淋巴细胞增殖反应及腹腔巨细胞（Ｍφ）产生ＩＬ－１水平具有双向调节作用,对小鼠体外脾淋巴细胞增殖反应及ＩＬ－１的产生均具有明显的抑制作用,提示Ⅱ型胶原具有免疫调节功能。     

口服鸡Ⅱ型胶原诱导实验性关节炎大鼠产生免疫耐受

用本室制备纯化的鸡Ⅱ型胶原诱导胶原性关节炎及佐剂性关节炎大鼠产生了明显的口服免疫耐受。实验表明；大鼠在致炎前经灌胃给予ＣＣⅡ，可明显推迟ＣＩＡ和ＡＡ的发闰时间，降低ＣＩＡ和ＡＡ的发病率，并使关节炎表现明显减轻，ＣＩＡ组ＣＣⅡ的剂量以０．０３，０．３０及３．００ｍｇ／ｋｇ作用显著，ＡＡ组的剂量则以０．０１和０．０３ｍｇ／ｋｇ作用显著。     

流体剪切力影响人关节软骨细胞合成Ⅱ型胶原的研究

目的检测体外培养的人关节软骨细胞在不同大小的间断剪切力作用下合成Ⅱ型胶原的能力。 方法选取培养的软骨组织,按摇床作用的转速分为：空白对照组和低、中等、高转速组（转速分别为20、40、60转/min）;通过免疫组化法检测关节软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白的表达,RT-PCR法检测Ⅱ型胶原mRNA表达。 结果中等转速组和高转速组Ⅱ型胶原免疫组化平均光密度（OD）值分别为(0.3061±0.0530)和(0.3777±0.0397),均高于低转速组平均OD值(0.2184±0.0135)和空白对照组平均OD值(0.1846±0.0363),差异均有统计学意义（P<0.05）;低、中等、高转速组Ⅱ型胶原mRNA OD比值分别为(0.120±0.003)、(0.150±0.005)、(0.210±0.006),均高于空白对照组OD比值(0.080±0.006),差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论一定强度间断剪切力能够影响人软骨细胞的代谢、增殖活动,使其合成Ⅱ型胶原增多。     

猪软骨Ⅱ型胶原的生物相容性研究

目的对所提取的猪软骨II型胶原进行生物相容性的研究,评价其作为医用生物材料的安全性。方法通过急性毒性试验、刺激性试验、过敏性试验、溶血性试验及体外软骨细胞相容性等试验进行检测。结果急性毒性试验、刺激性试验、过敏性试验和溶血性试验的结果均呈阴性。体外软骨细胞相容性试验:软骨细胞能增殖及传代,且前6代的细胞基本都能呈原代的形态特点,随着培养时间的延长和代数的增加,成纤维状细胞才出现并逐渐增多。而且原代培养的软骨细胞有大量糖胺多糖合成,传代的代数越多,软骨细胞合成糖胺多糖的能力也愈弱。结论猪软骨Ⅱ型胶原具有良好的生物相容性,是可以安全使用的医用生物材料。     

Ⅱ型胶原C端肽单克隆抗体制备及鉴定

目的 制备Ⅱ型胶原C端肽中EKGPDP多肽片段(谷氨酸-赖氨酸-甘氨酸-脯氨酸-天冬氨酸-脯氨酸)的单克隆抗体(McAb),并进行抗体的纯化、鉴定及初步临床验证.方法 采用戊二醛法制备EKGPDP-钥孔嘁血蓝素(key hole limpet hemocyanin,KLH)抗原载体复合物.腹腔及静脉攻击法免疫BALB/c小鼠8只.按常规方法将小鼠骨髓瘤细胞和免疫小鼠脾细胞融合.筛选阳性克隆株,以有限稀释法克隆3次.对杂交瘤细胞株的染色体、亲和力、类型和稳定性进行鉴定,取其中亲和力较高的6株制备腹腔积液,用盐析及蛋白G琼脂糖凝胶珠层析法纯化抗体.对McAb的纯度、特异性、交叉反应性及免疫活性进行鉴定.用免疫组化法对骨性关节炎膝关节软骨和椎间盘软骨样品进行分析.结果 本研究获得13株能高效分泌特异性McAb的杂交瘤细胞株;经5个月传代35代和反复冻存复苏6次,培养上清稳定性良好.6株McAb腹腔积液效价分别为2.8×104(EKG7)、5.1×105(EKG14)、5.1×105(EKG16)、5.1×105(EKG18)、5.1×105(EKG25)、3.2×104(EKG28).电泳结果证明,盐析法纯化腹腔积液得到的单克隆抗体回收量、活性、存放1周后活性分别为8.07 mg、3.35(A450)、3.10(A450),蛋白G亲和层析法得到的单克隆抗体回收量、活性、存放1周后活性分别为0.32mg、1.83(A450)、0.66(A450),盐析法优于蛋白G亲和层析法(t=25.26,P＜0.01).抗体的最佳应用浓度为(50～150)μg/L.临床初步鉴定发现,6株EKGPDP单克隆抗体在骨性关节炎及突出椎间盘软骨标本中出现了不同程度的阳性结果.结论 本研究成功获得抗Ⅱ型胶原C端肽片段McAb,为Ⅱ型胶原降解产物的测定提供了研究工具.     

猪软骨Ⅱ型胶原的生物相容性研究

目的：对所提取的猪软骨Ⅱ型胶原进行生物相容性的研究，评价其作为医用生物材料的安全性，方法：通过急性毒性试验，刺激性试验，过敏性试验，溶血性试验及体外软骨细胞相容性等试验进行检测。结果：急性毒性试验，刺激性试验，过敏性试验和溶血性试验的结果均呈阴性，体外软骨细胞相容性试验。软骨细胞能增殖及传代，且前6代的细胞基因都能呈原代的形态特点，随着培养时间的延长和代数的增加，成纤维状细胞才出现并逐渐增多，而且原代培养的软骨细胞有大量糖胺多糖合成，传代的代数越多，软骨细胞合成糖胺多糖的能力也愈弱。结论：猪软骨Ⅱ型胶原具有良好的生物相容性，是可以安全使用的医用生物材料。     

Ⅱ型胶原对关节炎大鼠免疫功能的影响

目的体外实验研究Ⅱ型胶原（CⅡ）对关节炎大鼠和正常大鼠免疫功能的影响,探讨CⅡ的免疫调节作用。方法建立大鼠胶原型关节炎模型,体外实验研究CⅡ对关节炎大鼠和正常大鼠淋巴细胞增殖反应、自然杀伤细胞（NK细胞）杀伤活性以及淋巴细胞亚群的影响。结果CⅡ在体外实验中表现为低浓度促进而高浓度抑制大鼠淋巴细胞增殖的作用,对NK细胞杀伤活性、淋巴细胞亚群无影响。结论CⅡ对关节炎大鼠有一定的免疫调节作用。     

骨关节炎治疗的分子靶点研究进展

骨关节炎(osteoarthritis, OA)是中、老年人群中的常见病与多发病,发病率随年龄增长而大幅升高。如何更好地防治OA正越来越成为全社会关注的卫生保健问题。但目前骨关节炎的发病机制的不明确,不能有效阻止OA的进展。针对此问题,本文就骨关节炎的治疗靶点及相关的信号通路做一概述。

     

甲状腺滤泡型肿瘤分子标记物的研究进展

本文对甲状腺滤泡型肿瘤分子标记物的研究进展进行综述,分别从端粒酶与端粒酶逆转录酶、特殊蛋白质、癌基因与抑癌基因突变等三个方面进行整理与归纳,为临床诊断与鉴别提供依据。     

138例类风湿关节炎患者血清抗天然Ⅱ型胶原抗体的检测

类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是常见的自身免疫病。我们用ELISA法检测了138例RA患者血清中的抗天然Ⅱ型胶原抗体（以下略为抗NatⅡ抗体），同时与类风湿因子（RF）、C反应蛋白（CRP）做了对比检测，现将结果报告如下。     

Ⅱ型胶原海绵修复关节软骨缺损的动物实验

目的 探讨Ⅱ型胶原海绵修复关节软骨缺损的效果。方法 采用成年纯种新西兰兔24只，48侧膝关节，在股骨滑车面钻孔为直径5mm、深3mm的全层关节软骨缺损，左侧为A组，在缺损区内完全填充Ⅱ型胶原海绵，右侧为B组，缺损区空白对照。术后12周内，每双数周对缺损修复情况行大体形态和组织学观察。结果 Ⅱ型胶原对关节软骨缺损的修复有明显的促进作用，修复结果接近正常软骨。结论 自行研制的高纯度Ⅱ型胶原海绵组织相容性好，无明显毒副作用，对关节软骨缺损具有亟好的修复作用。