低氧诱导大鼠外周血单核细胞表达TNF-α与PKC膜易位及活性变化关系的研究

目的研究低氧诱导大鼠外周血单核细胞（peripheral blood monouclear cells,PBMCs）膜内PKC膜易位及活性变化对肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达的作用,探讨缺氧与全身炎症反应综合征（system inflammation response syndrome,SIRS）的关系。方法采用明胶法分离大鼠外周血单核细胞,于低氧条件下（3％O2,5％CO2,92％N2）培养0、1、3、6、9、12、24h后,收集细胞,分别采用免疫沉淀法、SDS-PAGE、PKC活性检测试剂盒及逆转录PCR（RTPCR）检测PKC膜易位、PKC活性及TNF-α表达量,采用SPSS10．0分析以上指标变化的相关性。结果低氧1～9h,大鼠外周血单核细胞膜PKCα含量及活性明显增高（P〈0．01）。低氧1～24h,大鼠外周血单核细胞膜PKCε含量及活性无明显变化。缺氧1～9h,大鼠外周血单核细胞TNF-α mRNA表达明显增高（P〈0．01）。低氧1～24h,PKCα膜蛋白含量及活性变化与TNF-α mRNA表达水平间呈显著正相关（P〈0．01～0．05）。结论低氧可诱导PKCα向膜易位并被激活,活化的PKCα可增强促炎症因子TNF-α的表达。这些变化可能与急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory dysfunction,ARDS）时血浆中大量促炎症因子持续存在密切相关。     

脑外伤小鼠海马TNF-α表达的变化

  目的 探讨脑外伤小鼠海马肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达的变化。方法 60只Balb/c小鼠随机分为2组,假手术组（30只）和脑外伤组（30只）。每组依据手术后不同时间点再分6 h、1 d、3 d 3组,每组10只。免疫组化和Western blot检测各组小鼠海马TNF-α蛋白的表达。RT-PCR方法检测各组小鼠海马TNF-α mRNA的表达。结果 免疫组化和Western blot结果发现,脑外伤组小鼠海马TNF-α蛋白表达量明显高于假手术组（P<0.05）;RT-PCR结果也显示脑外伤组小鼠海马TNF-α mRNA表达量明显高于假手术组（P<0.05）。结论 脑外伤小鼠海马TNF-α表达明显升高。     

TNF-α与实验性糖尿病大鼠骨骼肌病变的关系

目的探讨TNF-α与糖尿病骨骼肌病变的关系。方法实验组(STZ糖尿病成模组n=32),正常对照组(n=32)。在光镜和透射电镜下观察骨骼肌形态学变化,以免疫组化法测定肌组织中TNF-α的表达。结果实验组大鼠血清、肌组织TNF-α水平均较正常对照组升高(P<0.01),与糖尿病骨骼肌病变相关。提示TNF-α参与了糖尿病骨骼肌病变发生、发展。结论TNF-α水平异常是糖尿病骨骼肌产生病变的重要相关因素之一。     

TNF-α与实验性糖尿病大鼠骨骼肌病变的关系

目的 探讨TNF-α与糖尿病骨骼肌病变的关系.方法 实验组(STZ糖尿病成模组n=32),正常对照组(n=32).在光镜和透射电镜下观察骨骼肌形态学变化,以免疫组化法测定肌组织中TNF-α的表达.结果 实验组大鼠血清、肌组织TNF-α水平均较正常对照组升高(P＜0.01),与糖尿病骨骼肌病变相关.提示TNF-α参与了糖尿病骨骼肌病变发生、发展.结论 TNF-α水平异常是糖尿病骨骼肌产生病变的重要相关因素之一.     

氟伐他汀对TNF-α诱导的组织因子活性与表达的影响

目的 研究不同浓度氟伐他汀(fluvastatin,Flu)对由肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)产生组织因子(tissue factor,TF)含量、活性及TF mRNA表达、TF蛋白水平的影响,探讨他汀类药物在抗血栓形成方面的作用.方法 将同一簇HUVECs进行培养传代,分设空白组、TNF-α组、Flu组及干预组(TNF-α+ Flu组),其中TNF-α+ Flu组中分别以不同浓度Flu干预,采用ELISA方法测定TF含量,用发色底物法测定TF活性,用RT-PCR方法测定TF mRNA表达水平,用Western-blot方法测定TF蛋白表达.结果 TNF-α组TF含量、TF活性、TF RNA表达和TF蛋白水平均较空白组增高(P<0.05);与TNF-α组比较,不同浓度Flu干预组TF含量与活性以及TF mRNA表达和TF蛋白水平均明显降低,差异有显著性(P<0.05);Flu的抑制作用在1 μmol/L以内时呈浓度依赖性,可显著抑制由TNF-α诱导的TF水平及活性(P<0.05),当Flu浓度>1 μmol/L,作用差异无显著性(P>0.05).结论 Flu可有效抑制由TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞TF含量、活性,TF mRNA、蛋白表达水平,提示Flu具有潜在的降脂之外的抗动脉血栓作用.     

脓毒症大鼠DAO与TNF-α变化研究

目的研究TNF-α在脓毒症大鼠肠道损伤中的作用。方法 60只SD大鼠随机分成假手术组(n=30),脓毒症组(n=30)。假手术组仅行盲肠探查术,脓毒症组采用CLP制作大鼠脓毒症模型。各组均于术后3、6、12、24与48 h时相点,经腹主动脉采血检测血清DAO、TNF-α水平。结果血清DAO水平逐渐升高,于48 h时达到最高值,高于假手术组(P0.05);血清TNF-α水平在CLP术后即明显高于假手术组(P0.05),在24 h达峰值,随后虽有下降,但仍显著高于假手术组(P0.05)。TNF-α与DAO具有正相关(r=0.897,P0.05)。结论 TNF-α的异常升高,可能在脓毒症大鼠肠道损伤中具重要作用。     

重症胰腺炎大鼠血清TNF-α浓度的变化及与肺损伤的关系

目的:测定实验性重症胰腺炎大鼠血清TNFα浓度,并探讨其与肺损伤的关系.方法:SD大鼠55只,随机分为SAP组(再分为0.5、3、6、12、24h组,各组n=8)和对照组(n=15).采用逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠复制重症胰腺炎模型,取肺组织行病理观察,ELISA法测血清TNF-α浓度.结果:SAP各组血清淀粉酶水平与对照组比较,P＜0.05;血清TNF-α浓度除0.5h组外,其余各组与对照组比较,均有显著性差异(P＜0.05),至12h达高峰,随后下降.结论:血清TNF-α浓度在急性胰腺炎早期即显著升高并可能与肺损伤密切相关.     

高温复合脂多糖应激大鼠肾组织TNF-α表达变化

目的 探讨高温与脂多糖(LPS)复合应激大鼠肾组织TNF-α的表达特点.方法 雄性SPF级Wistar大鼠随机分为常温+生理盐水组(C组)、高温+生理盐水组(H组)、常温+LPS组(L组)、高温+LPS组(HL组).置动物于模拟气候舱,HL组、H组暴露环境干球温度(dry bulb temperature,Tdb)为(35.0±0.5)℃,L组和C组Tdb为(26+0.5)℃;HL组和L组动物经尾静脉iv LPS 10 mg/kg,H组和C组动物经尾静脉iv 9g/LNaCl 10 ml/kg.应激120 min时,免疫组织化学SABC染色法检测动物肾组织TNF-α的表达特点,并做常规病理学检查.结果 高温与LPS复合应激组肾组织TNF-α的表达显著增强,肾损伤程度加重.结论 高温与LPS复合应激造成的肾毒性与肾TNF-α表达密切相关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of co-exposure of LPS and heat on TNF-α expression in rat kidneys. Methods Male pathogen-free Wistar rats were randomly assigned in saline-injected normothermic control (C group), saline-injected heat exposure (H group), LPS-injected normothermic control (L group), and LPS-injected heat exposure (HL group). The rats in H and HL groups were exposed in a chamber at an ambient dry bulb temperature (Tdb) of 35.0±0.5 degrees, and those in C and L groups were exposed to a Tdb of 26±0.5 degrees. The rats in L and HL groups were given an intravenous injection of LPS (10 mg/kg) via the tail vein to induce endotoxemia, and equivalent normal saline was injected in C and H groups. TNF-α expression in the kidney was detected by immunohistochemical SABC method, and the renal damage was evaluated histologically at 120 min after the treatment. Results Co-exposure of the rats with LPS and heat caused significantly enhanced TNF-α expression and histopathological damage in the kidneys. Conclusion LPS combined with heat exposure causes renal toxicity, while is closely associated with the expression of TNF-α in the kidneys.     

TNF-α诱导血管内皮细胞凋亡的研究

血管内皮细胞对维持心血管系统的正常功能有着重要的作用,它的凋亡引起的血管萎缩衰退,不仅在临床上造成很多人类疾病而且会促进感染性休克的发生、发展。肿瘤坏死因子α有着强大的细胞毒性,可以造成血管内皮细胞凋亡。本文对肿瘤坏死因子α造成血管内皮细胞凋亡的机制进行综述。     

缺氧条件下大鼠单核细胞NF-κB活性及TNF-α、IL-1β表达变化规律的研究

目的研究缺氧培养的大鼠外周血单核细胞核转录因子κB(NF-κB)结合活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)表达的变化规律,探讨缺氧与全身炎症反应综合征的关系,为进一步研究老年多器官功能障碍综合征的肺启动机制奠定基础.方法采用明胶法分离大鼠外周血单核细胞,于低氧条件下(3%O2, 5%CO2, 92%N2)培养0、1、3、6、9、12、24 h后,收集细胞及培养液上清,分别采用电泳迁移分析法(EMSA)、逆转录PCR(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其NF-κB活性及TNF-α、IL-1β表达量.结果缺氧1～12 h,NF-κB结合活性及TNF-α、IL-1β表达量均显著高于正常(P<0.01),其峰值见于缺氧6 h.缺氧24 h,上述指标与正常无显著差异(P＞0.05).NF-κB结合活性与TNF-α、IL-1β mRNA和蛋白表达水平显著相关(P<0.01,P<0.05).结论缺氧可显著增强大鼠外周血单核细胞的NF-κB结合活性,并可诱导其产生大量的促炎症因子TNF-α、IL-1β,这些变化可能与急性呼吸窘迫综合征时血浆中大量促炎症因子持续存在密切相关.     

糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性和血管内皮细胞生长因子的关系

目的 研究糖尿病大鼠肾小球中蛋白激酶C（PKC）活性变化和血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的动态变化。探讨两者之间相互关系以及它们与糖尿病肾病（DN）发生发展之间的关系。方法 用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠实验模型，将大鼠随机分为正常对照组（N）、糖尿病2周组（DM2）和糖尿病4周组（DM4）。断头处死，分离肾小球，提取纯化胞浆及胞膜蛋白，利用（1—32P）ATP底物磷酸化的方法检测胞浆及胞膜PKC活性。用免疫组化和400倍光镜检测VEGF在各组大鼠肾脏的表达。结果糖尿病大鼠肾小球细胞内总的PKC活性与对照组差异无显著性，胞浆PKC活性略有下降，相差不显著；肾小球细胞膜PKC活性明显高于正常对照组，膜结合PKC百分比显著增加，且细胞膜PKC活性与肾脏肥大指数及Ccr呈正相关。糖尿病组VEGF的表达多于正常对照组。肾小球细胞膜PKC活性与肾组织VEGF的表达正相关。结论高血糖慢性刺激可引起肾小球PKC活性增高，并诱导VEGF的高表达。PKC的激活在DN的发生发展中发挥着重要的调控作用。     

帕罗西汀对应激抑郁模型大鼠脑区蛋白激酶PKA、PKC和CaMKII活力的影响

目的 探讨帕罗西汀对应激抑郁模型大鼠脑区蛋白激酶PKA、PKC和CaMKII活力的影响.方法 将成年雄性SD大鼠随机分为6组:对照组(Ⅰ)、抑郁模型组(Ⅱ)、抑郁模型 给药1次组(Ⅲ)、抑郁模型 给药1周组(Ⅳ)、抑郁模型 给药2周组(Ⅴ)和抑郁模型 给药4周组(Ⅵ).抑郁模型为强迫大鼠游泳4周.采用同位素法检测蛋白激酶PKA、PKC和CaMKII的活力.结果 (1)在海马,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、及Ⅴ组大鼠PKA[分别为(3.92±0,23)×10-2,(3.68±0.092)×10-2,(3.56±0.1)×10-2,和(3.52±0.18)×10-2]和CaMKII[分别为(12.89±0.31)×10-2,(15.08±2.07)×10-2,(16.32±2.87)×10-2,和(17.00±1.52)×10-2]活力明显低于Ⅰ组[PKA(5.63±0.41)×10-2;CaMKII(48.91±1.86)×10-2]和Ⅵ组[PKA(4.92±0.36)×10-2;CaMKII(46.74±1.34)×10-2(P<0.01或P<0.05);Ⅱ组大鼠PKC的活力[(0.55±0.017)×10-2]明显低于对照组[(1.48±0.27)×10-2](P<0.01),各用药组大鼠海马PKC活力与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)(2)在前额叶皮质,Ⅱ、Ⅲ,Ⅳ组大鼠PKA活力[分别为(0.9±0.027)×10-2,(0.92±0.081)×10-2,(0.92±0.028)×10-2]与对照组[(0.99±0.072)×10-2]比较差异无统计学意义(P>0.05);而V[(1.14±0.045)×10-2和Ⅵ[(1.27±0.040)×10-2组的PKA活性则显著高于其它四组(P<0.01);Ⅱ和Ⅲ组的PKC活性[分别为(0.15±0.013)×10-2,(0.14±0.007)×10-2)]均显著高于对照组[(0.099±0.0007)×10-2]和其它用药组(P<0.01),Ⅳ组PKC活性[(0.1±0.0006)x10-2]与Ⅰ组比较差异无统计学意义(P>0.05),Ⅴ和Ⅵ组PKC活性[分别为(0.077±0.0005)×10-2,(0.03±0.00017)×10-2]显著低于Ⅰ组(P<0.01);模型组[(6.84±0.22)×10-2]和各用药组[分别为(6.68±0.23)×10-2,(6.89±0.15)×10-2,(6.55±0.14)×10-2,(6.53±0.13)×10-2]的CaMKII活性显著低于埘照组[(16.57±0.19)×10-2](P<0.01).结论 帕罗西汀长期用药逆转慢性应激所致大鼠海鸟PKA、PKC和CaMKII活力降低,而对前额叶皮质PKA、PKC和CaMKII活力改变的作用复杂.     

缺氧时肺动脉平滑肌细胞膜电位、细胞质及线粒体Ca2+的动态变化

目的 研究缺氧时肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)膜电位、细胞质游离Ca2 及线粒体游离Ca2 的动态变化,探讨缺氧性肺血管收缩 (hypoxic pulmonary vasocontriction,HPV)的可能机制.方法 分离成年Wistar大鼠PASMCs进行体外培养,将PASMCs分为3组:分别负载荧光指示剂Di-8-ANEPPS (2 μmol/L)、Fluo-4/AM (4 μmol/L)和Rhod-5F (5 μmol/L).利用Na2S2O4 (2 mmol/L)的强还原特性,对细胞进行化学缺氧干预,在共聚焦显微镜下观察缺氧环境下细胞膜电位、细胞质Ca2 和线粒体Ca2 的动态变化.结果 用Na2S2O4对PASMCs施加缺氧刺激后,PASMCs细胞膜电位荧光强度迅速大幅度降低,继而迅速回升,于100 s时升至峰值且高于初始水平,随后逐渐下降低于初始水平;缺氧刺激后PASMCs细胞质Ca2 荧光强度缓慢增高,并呈持续增高趋势;PASMCs线粒体Ca2 荧光强度在缺氧刺激后迅速增高,持续约30 s后回降至低于起始值,随后开始回升,达到并逐渐高于起始值.结论 缺氧刺激PASMCs,导致膜电位、细胞质Ca2 和线粒体Ca2 呈特定模式的升高和降低的动态变化,除了细胞质Ca2 稳态失衡之外,线粒体Ca2 变化可能在HPV发生中也起着重要的作用.     

短暂脑缺血诱导大鼠海马PKC-ε膜转位及HSP70表达

目的 探讨蛋白激酶C-ε(protein kinase C, PKC-ε)和热休克蛋白 70(heat shock protein, HSP70)在脑缺血耐受形成过程中的作用.方法 将80只大鼠分为短暂脑缺血组和假手术组(n=40),每大组根据取材时间又分为缺血后1 h、6 h、1 d、2 d、4 d 5个亚组(n=8).应用大脑中动脉阻闭(middle cerebral artery occlusion, MCAO)方法和免疫印迹(western blot)技术观察大鼠短暂脑缺血20 min后海马神经细胞不同时间点PKC-ε膜转位及HSP70表达的变化.结果 假手术组各时间点的PKC-ε与HSP70无明显变化.在短暂脑缺血组,缺血后1 h海马神经细胞胞质PKC-ε的含量开始下降,至1天达最低点,持续到4天;而胞膜PKC-ε的变化趋势相反,含量于6 h显著增高,1天达到高峰,持续到4天;短暂缺血1 h后HSP70的表达无明显增加,6 h增多明显,1天达最高,持续至4天均处于较高水平.结论 短暂脑缺血诱导海马神经细胞PKC-ε膜转位和HSP70表达增加,可能是短暂脑缺血诱导缺血耐受的机制.     

模拟高原缺氧大鼠脑线粒体UCP活性与含量的变化及其对线粒体能量合成的影响

目的 观察模拟高原暴露大鼠脑线粒体UCP活性和含量的改变,探讨其对线粒体能量合成功能的影响.方法 健康成年SD大鼠置于模拟海拔5 000 m低压舱中,23 h/d,连续3 d.差速离心法分离大鼠脑组织线粒体,Clark氧电极法测定线粒体的呼吸活性,罗丹明123法测定线粒体膜电位,高压液相色谱法测定腺苷酸的含量,用[3H]-GTP结合法测定线粒体UCP活性及含量.结果 高原缺氧导致大鼠脑线粒体解偶联蛋白与[3H]-GTP结合的解离常数Kd下降37%,结合[3H]-GTP的最大量Bmax增加2.9倍(P＜0.01);线粒体的呼吸ST3氧耗减为对照组的83.1%,而ST4则升高28%,RCR降为对照的66.67%(P＜0.01);相关分析显示,ST4与反映UCP活性的Kd呈显著负相关,而与UCP含量Bmax呈显著正相关(P＜0.01);同时线粒体内ATP含量仅为对照组的58.4%(P＜0.01),线粒体膜电位显著下降(P＜0.01).结论 模拟高原缺氧暴露可增加脑线粒体解偶联蛋白活性和含量,揭示缺氧时线粒体的呼吸氧耗及能量的生成的改变与关系.     

Temporal Expression of Notch in Preterm Rat Lungs Exposed to Hyperoxia

Notch signaling is essential in tissue and organdevelopment. Signals transmitted through theNotch receptor, in combination with other factorsinfluence cell differentiation, proliferation and ap optotic events at all stages of development and re habilitation or remolding of tissues[1]. Previous re searches revealed that Notch receptor/ligand per sistently exists over the whole period of fetal lungdevelopment[2], but it is still unknown how theywork during the chronic lun…     

低氧对大鼠心肌细胞蛋白激酶A活性与SCN5A基因表达的影响

目的 研究低氧对培养大鼠心肌细胞蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)与SCN5A基因表达的影响.方法 将原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞随机分为5组:对照组、低氧(5%CO2+2%O2+93%N2)培养1h组、6h组、12h组和24h组,利用非放射性方法测定各组细胞内PKA活性,利用RT-PCR和Western blot等方法检测各组SCN5A基因表达情况.结果 各组PKA活性:低氧1h组和低氧6 h组高于正常组(P<0.01),低氧12 h组和24 h组低于正常组(P<0.01).SCN5A mRNA相对表达量与蛋白质表达量:低氧1h组和低氧6h组显著高于对照组;低氧12 h组和低氧24 h组显著低于对照组.结论 低氧对培养细胞内PKA活性与SCN5A基因的表达有一定调节作用,且对PKA的作用早于对SCN5A基因表达的作用,PKA可能参与影响大鼠心肌细胞缺氧后SCN5A基因的表达.     

低压缺氧大鼠脑线粒体内腺苷酸含量及能荷的变化

目的　对比研究急性和慢性缺氧暴露后脑线粒体内的能量储备和ATP生成能力 ,探讨急性缺氧致脑功能障碍和慢性缺氧适应的能量代谢机制。方法　Wistar大鼠分为对照组、急性缺氧组和慢性缺氧组。后两组分别于模拟海拔40 0 0m高原低压舱内连续缺氧暴露 3d和 3 0d ,每天 2 3 5h。缺氧组和对照组动物分别在模拟高原条件和平原条件断头处死 ,取脑组织分离线粒体。高压液相色谱分离并测量线粒体内腺苷酸库 (pool)含量 ,并计算能荷 ;以琥珀酸为氧化底物检测线粒体的ATP生成速率。结果　急性和慢性低压缺氧暴露后大鼠脑线粒体内的总腺苷酸库变化不明显 (P >0 0 5 ) ,但慢性缺氧组高于急性组 (P <0 0 5 ) ;线粒体内的ATP含量在急性和慢性缺氧时分别降低 65 1%和 3 3 5 %,慢性缺氧可部分恢复 ,但仍低于对照组 (P <0 0 5 ) ;ATP在总腺苷酸库中所占比例在急、慢性缺氧时分别是对照的 41 5 %和 42 5 %;急、慢性缺氧对线粒体内能荷均无显著影响 (P >0 0 5 ) ;急性缺氧可使以琥珀酸为底物的线粒体ATP生成速率降低 41 8%,而慢性缺氧则与对照组无显著差异 (P >0 0 5 )。结论　急性缺氧暴露可显著降低脑线粒体内的能量储备 ,而线粒体ATP生成能力降低是其原因之一 ;慢性缺氧暴露则可使其能量储备部分恢复 ,提示“线粒     

Gene expression changes in the pituitary gland of rats exposed to electromagnetic pulses

Objective We examined alterations in the expression of tumorigenesis‐related genes in the pituitary gland of rats exposed to electromagnetic pulses (EMP).Methods The global gene expression profiles of the pituitary gland in EMP‐exposed and control groups were detected by cDNA microarray analysis.We then validated and further investigated the reduced expression of two tumorigenesis‐related genes,Pten,and Jund,by assessing their mRNA and protein expression by quantitative real‐time‐PCR,western blotting,and im...