脑脊液14-3-3蛋白和神经元特异性烯醇化酶对Creutzfeldt-Jakob病的诊断价值

目的探讨脑脊液14-3-3蛋白和神经元特异性烯醇化酶(NSE)对Creutzfeldt-Jakob病(CJD)的诊断价值。方法采用capture assay方法及酶联免疫吸附法分别定量检测14例CJD患者(CJD组)、10例其他痴呆患者(OD组)及12例非痴呆患者(ND组)脑脊液14-3-3蛋白和NSE的含量,并进行特异性和敏感性分析。结果脑脊液中14-3-3蛋白含量CJD组为40.0ng/ml,OD组为2.65ng/ml,ND组为3.10ng/ml;NSE含量CJD组为(48.43±30.39)ng/ml,OD组为(14.00±11.52)ng/ml,ND组为(20.50±25.67)ng/ml;CJD组脑脊液中14-3-3蛋白及NSE含量明显高于OD组及ND组(均P<0.01)。以脑脊液14-3-3蛋白≥9ng/ml为分界值时,其对CJD诊断的敏感性为86.7%,特异性为86.4%;以NSE≥24ng/ml为分界值时,其敏感性为78.6%,特异性为77.3%;当以14-3-3>9ng/ml及NSE>24ng/ml为分界值,对CJD诊断的敏感性、特异性分别为90%、92.9%。结论脑脊液14-3-3蛋白对CJD的诊断价值高于NSE,两者联合将提高对CJD诊断的敏感性和特异性。     

14-3-3蛋白与吉兰-巴雷综合征早期诊断关系的研究

目的 观察吉兰-巴雷综合征(GBS)急性期脑脊液中是否存在14-3-3蛋白,探讨其与GBS早期诊断是否具有相关性. 方法 采用ELISA KiT方法检测40例GBS患者起病后3 d内、第7天、第14天脑脊液14-3-3蛋白浓度,对照组为10例同期骨科手术患者及25例同期住院的其它神经系统疾病患者;并同时用罗氏P.800全自动生化分析仪检测脑脊液蛋白;观察早期GBS患者脑脊液中14-3-3蛋白含量变化及其与脑脊液蛋白是否具有相关性.结果 GBS组在起病后3 d内、第7天、第14天脑脊液中测得的14-3-3蛋白含量分别为(6.237±2.627)ng/mL、(8.369±3.003)ng/mL、(13.431±6.461)ng/mL;脑脊液蛋白含量分别为(0.308±0.1 13)g/L、(0.378±0.135)g/L、(0.587±0.273)g/L;GBS组脑脊液14-3-3蛋白最早可于起病后20～48 h出现,其含量在起病后第7天、第14天明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);GBS组脑脊液蛋白含量在起病后第14天明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);脑脊液14-3-3蛋白含量与脑脊液蛋白含量存在正相关关系(P<0.05).结论 GBS早期脑脊液中存在14-3-3蛋白,其含量增高可使脑脊液蛋白量随之增高:用ELISA KiT方法检测脑脊液中14-3-3蛋白浓度可用于GBS的早期诊断.     

脑脊液神经蛋白质对临床拟诊Creutzfeldt-Jakob病的早期诊断价值

目的探讨和比较数种神经蛋白质对Creutzfeldt—Jakob病（CJD）的早期诊断价值。方法对14例发病2个月内CJD取脑脊液，采用蛋白捕捉法和酶联免疫试验对总tau蛋白（t-tau）、磷酸化tau蛋白（p-tau）、t-tau蛋白与p-tau蛋白比值（t-tau／p—tau）、S-100β蛋白、14-3—3蛋白及14—3—2蛋白进行定量检测，同时设非CJD痴呆（OD，11例）和无痴呆（ND，18例）的对照组。结果（1）t-tau蛋白：CJD组、OD组和ND组分别是8295、300、161pg／ml。p-tau／t—tau值分别是0．0092、0．2258、0．2471。（2）S-100β蛋白：CJD组、OD组、ND组分别是1．576、0．639、0．239ng／ml。（3）14-3-3蛋白：CJD组、OD组、ND组分别是40．00、2．65、3．10ng／ml。（4）14-3-2蛋白：CJD组、OD组与ND组分别是48．43、14．00、20．50ng／ml。（5）t—taul〉500pg／ml为阈值点，敏感度为84．6％，特异度87．5％，p-tau无诊断意义；（6）S-100β蛋白≥1．626ng／ml为阈值点，敏感度为92．3％，特异度为83．8％；（7）14-3-3蛋白以≥9ng／ml为阈值点，敏感度为86．7％，特异度为86．4％；（8）14—3—2蛋白以≥24ng／ml为阈值点，其敏感度为78．6％，特异度为77．3％。结论脑脊液神经蛋白质检测对散发性Creutzfeldt—Jakob病的早期诊断有一定价值。     

脑脊液14-3-3蛋白检测对隐球菌性脑膜炎的意义

目的评价脑脊液酪氨酸3-加单氧酶/色氨酸5-加单氧酶激活蛋白(14-3-3蛋白)含量的变化与隐球菌性脑膜炎(CM)患者病情及预后之间的联系。方法从16例隐球菌性脑膜炎患者和18例对照组中获取脑脊液标本,进行脑脊液细胞学检测,并用ELISA法检测脑脊液中14-3-3蛋白含量。结果隐球菌性脑膜炎患者脑脊液中14-3-3蛋白含量较对照组增高,P<0.05。在隐球菌性脑膜炎患者中,有7例患者经过抗真菌治疗症状好转,脑脊液中的隐球菌被清除,但14-3-3蛋白并没有随着治疗的好转及隐球菌的清除有显著下降。结论隐球菌性脑膜炎患者脑脊液中14-3-3蛋白含量较对照组明显增高,且不会在短期内随着治疗的进行和临床症状的改善而显著下降。     

Creutzfeldt-Jakob病脑脊液14-3-3蛋白变化特征及其影响因素分析

目的分析47例临床可能或很可能克雅氏病(CJD)患者的脑脊液(CSF)14-3-3蛋白特征,为CJD早期临床评估及诊断提供参考。方法收集2013年1月至2016年1月以"可疑CJD"诊断在首都医科大学宣武医院住院的患者,对其一般资料及CSF 14-3-3蛋白特征进行分析。比较CSF 14-3-3蛋白阳性组与阴性组年龄、病程、临床表现及脑电图(EEG)、磁共振(MRI)的特点,并采用Spearman法分析CJD患者CSF 14-3-3蛋白与年龄、病程、MRI、EEG及临床表现的相关性。结果 47例患者中有46例患者进行了腰椎穿刺并送检CSF 14-3-3蛋白,其中有5例既往CSF 14-3-3蛋白检查为阴性者在复查后结果转为阳性,由阴性转为阳性时间为1~3个月。最终CSF 14-3-3蛋白阳性的患者占58.70%(27/46),14-3-3蛋白阳性组锥体束(P=0.015)、小脑症状(P=0.012)和视力障碍(P=0.044)均高于阴性组,仅磁共振(MRI)阳性率阳性组低于阴性组(P=0.025),且Spearman法相关性分析显示CJD患者CSF 14-3-3蛋白与锥体束(P=0.029)、视力障碍(P=0.039)及MRI(P=0.006)相关。结论 1 CSF 14-3-3蛋白含量可能与锥体束、小脑症状等运动系统及视力损害有关系,可间接反应CJD患者大脑神经细胞的功能状态;2 CSF 14-3-3蛋白为CJD早期诊断提供参考依据之一,CSF14-3-3蛋白含量随病情进展发生变化,对于首次检查阴性的患者实际工作中要注意复查,以免漏诊。     

吉兰-巴雷综合征脑脊液14—3—3蛋白与脑脊液蛋白关系的研究

目的观察吉兰-巴雷综合征（GBS）脑脊液（CSF）中14—3—3蛋白与脑脊液蛋白在病程中的变化情况,探讨两者的相关性。方法采用酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测43例GBS患者发病后3d内、第1,2,4,12周的脑脊液14—3—3蛋白含量,并同时用罗氏P-800全自动生化分析仪检测脑脊液蛋白含量。观察脑脊液14—3—3蛋白与脑脊液蛋白是否具有相关性。结果GBS组在发病3d内、第1,2,4,12周脑脊液14—3—3蛋白含量分别为（6．339±2．356）、（8．569±3．454）、（14．561±6．621）、（9．563±3．486）、（6．262±2．643）ng／ml,脑脊液蛋白分剐为（O．336±0．126）、（O．368±0．102）、（0．653±0．246）、（0．446±0．178）、（0．364±0．158）g／L。GBS组脑脊液14—3—3蛋白第1、2、4周高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）,GBS组脑脊液蛋白第2、4周高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）,脑脊液14—3—3蛋白含量与脑脊液蛋白含量存在正相关关系（P〈0．05）。结论GBS脑脊液中14—3—3蛋白含量的变化可引起脑脊液蛋白含量发生相应变化。     

14-3-3蛋白过表达减轻MPP+对PC12细胞的毒性损伤

目的 探讨14-3-3蛋白过表达对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导PC12细胞损伤的保护作用和可能的机制.方法 构建pcDNA3.1(+)-14-3-3真核表达质粒,转染PC12细胞,建立稳定过表达14-3-3蛋白细胞株;通过四甲基偶氮唑盐法(MTT法)、流式细胞术和酶标仪分别检测14-3-3蛋白过表达对MPP+诱导的PC12细胞存活力、凋亡率和SOD及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的影响.结果 14-3-3蛋白过表达显著增加PC12细胞SOD活性[质粒转染组(9.13±0.41)U/mg,MPP+组(6.45±0.52)U/mg]和GSH-Px活性[质粒转染组(89.66±3.42)μmol/mg,MPP+组(82.73±4.15)μmol/mg]、增强细胞活力[吸光度(A570):质粒转染组0.78±0.06,MPP+组0.54±0.07]、抑制细胞的凋亡(质粒转染组11.87%±3.26%,MPP+组36.30%±2.39%).结论 14-3-3蛋白过表达对MPP+的毒性有保护作用,这是通过增加SOD和GSH-Px的活性,减少氧化应激实现的.     

阿尔茨海默病患者的脑脊液tau蛋白及Aβ1-42水平

目的 探讨脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中tau蛋白及β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)对诊断阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的早期诊断价值,寻找AD理想的生物学标志.方法 采用酶联免疫吸附法检测36例AD、24例血管性痴呆患者(vascular dementia,VD)和26名正常对照者(对照组)CSF中tau蛋白及Aβ1-42浓度的变化.结果 CSF中tau蛋白平均浓度:AD组(336±126)ng/L,VD组(183±96)ng/L,对照组(98±54)ng/L,AD组CSF中tau蛋白浓度明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);CSF中Aβ1-42平均浓度:AD组(341β113)ng/L,VD组(457±132)ng/L,对照组(502±167)ng/L,AD组CSF中Aβ1-42浓度明显低于对照组.差异有显著性意义(P<0.05).结论 脑脊液Aβ1-42、tau蛋白浓度的变化,不仅对诊断阿尔茨海默病具有较高的敏感性和特异性,而且亦可作为阿尔茨海默病与血管性痴呆鉴别诊断的生物学指标.     

14-3-3蛋白在人脑胶质瘤中的表达及生物学意义

目的检测14-3-3蛋白在人脑胶质瘤中的表达情况,探讨其在胶质瘤发生发展中的生物学意义。方法采用免疫组化亲和素-生物素过氧化物酶复合物(ABC)法检测5个胶质瘤细胞系(U251MG,U87MG,BT325,SHG44和C6)、121例人脑胶质瘤石蜡标本和10例正常脑组织中14-3-3蛋白的表达情况。分析14-3-3蛋白的表达在胶质瘤发生发展中的作用。结果在正常脑组织标本中,13-3-3蛋白主要表达于神经元的胞体和突起,仅在少数的胶质细胞中可见14-3-3蛋白的弱表达。然而,5个胶质瘤细胞系和绝大部分星形细胞瘤中可见14-3-3蛋白的阳性表达,其表达阳性率为:Ⅰ级78.6%(11/14),II级75%(18/24),III级76.2%(16/21),IV级80%(20/25)。不同恶性级别的星形细胞瘤中,14-3-3蛋白的阳性表达率无显著差别,但14-3-3蛋白的表达强度和范围有随肿瘤的恶性度增高而增加的趋势。其它类型的胶质瘤中也可见14-3-3蛋白的大量表达,其表达阳性率为:少突胶质细胞瘤66.7%(4/6),间变型少突胶质细胞瘤100%(4/4),室管膜瘤50%(2/4),间变型室管膜瘤66.7%(2/3),脉络从乳头状瘤100%(5/5),松果体细胞瘤100%(3/3),髓母细胞瘤66.7%(8/12)。结论14-3-3蛋白在人脑胶质瘤中有大量的表达。14-3-3蛋白表达上调可能是胶质瘤细胞对抗调亡的一种共同机制,以14-3-3蛋白为靶点有望成为一种有前景的新的胶质瘤生物学治疗方法。     

脑脊液14-3-3蛋白对不同类型Creutzfeldt-Jakob病的诊断价值

大多数Creutzfeldt-Jakob病(CJD)患者的脑组织内都能找到朊蛋白(PrPsc)沉积。当PrPc转变为PrPsc时具有相对不溶性和抗蛋白酶性,在脑内聚集形成淀粉样结构。不同类型CJD其脑脊液(CSF)中14-3-3蛋白的阳性有很大的不同。现将CSF14-3-3蛋白检测在不同类型CJD中的诊断价值作综述如下     

14-3-3蛋白在星形细胞瘤中的表达及意义

目的探讨14-3-3蛋白在星形细胞瘤中的表达与肿瘤病理分级和预后间的关系。方法采用免疫组化ABC法检测10例正常脑组织和67例确诊并有随访的人脑星形细胞瘤石蜡标本中14-3-3蛋白的表达情况。分析14-3-3蛋白的表达与肿瘤恶性程度及预后间的关系。结果在正常脑组织标本中，14-3-3蛋白主要表达于神经元胞体和突起，而在少数的胶质细胞中仅见其弱表达。绝大部分星形胶质细胞瘤中可见14-3-3蛋白阳性表达，其阳性表达率为：Ⅱ级76．5％（13／17），Ⅲ级76．2％（16／21），Ⅳ级79．3％（23／29）。不同恶性级别的星形细胞肿瘤中，14-3-3蛋白的阳性表达率无显著差别（P〉0．05），但14-3-3蛋白表达的强度和范围有随肿瘤的恶性度增高而增加的趋势（P〈0．05）。52例14-3-3蛋白阳性表达患者的生存期明显短于15例14-3-3蛋白表达阴性的患者（P〈0．01）。结论14-3-3蛋白在人脑星形细胞瘤中的表达上凋与肿瘤的恶性程度及预后相关。14-3-3蛋白有望成为星形细胞瘤基因治疗的新靶点。     

14-3-3β在人脑星形细胞瘤中的表达及意义

目的探讨14-3-3β在人脑星形细胞瘤中表达与肿瘤病理分级的关系。方法采用免疫组化法检测14-3-3β亚型在80例人脑星形细胞瘤和10例正常脑组织标本中的表达水平。结果在正常脑组织中，14-3-3蛋白6亚型只表达于神经元胞体和突起，在胶质细胞中未见表达。母亚型在人脑星形细胞瘤的表达阳性率及免疫反应评分（IRS）分别为60％、1．86±1．83。Ⅰ～Ⅳ级脑星形细胞瘤中β亚型表达阳性率分别为40％（8／20）、50％（10／20）、70％（14／20）和80％（16／20）。Ⅰ～Ⅳ级脑星形细胞瘤中β亚型IRS分别为0．88．4±0．27、1．15±0．28、2．19±0．37和3．23±0．47。不同恶性级别的脑星形细胞瘤中，14．3-3蛋白β亚型的阳性表达率无显著差异，但其IRS有显著差异（P〈0．05）。结论14-3-3β在人脑星形细胞瘤中高表达，且随着星形细胞瘤病理级别的增高而表达增强，14-3-3蛋白β亚型在脑星形细胞瘤的发生过程中具有重要作用。     

14-3-3 gamma and zeta protein expression in active microglia：Immune response mechanisms of Parkinson＇s disease

BACKGROUND： The progressive degeneration of dopaminergic neurons in Parkinson＇s disease is associated with an activated glial reaction, combined with an inflammatory process. These responses lead to the production of cytokines, such as interferon- γ, tumor necrosis factor- α （TNF- α ）, and interleukin-1 β. In addition, 14-3-3 protein is a component of Lewy bodies in Parkinson＇s disease.
OBJECTIVE： To observe the expression of 14-3-3 γ and ζ protein, as well as TNF-α, in mouse microglia, as well as changes after lipopolysaccharide （LPS） activation. To investigate possible mechanisms of dopaminergic neuronal injury due to activated microglia. To and clarify the immune response mechanisms of Parkinson＇s disease.
DESIGN： Randomized controlled observation, cell study.
SETTING： Laboratory of Department of Neurology, the Affiliated Union Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology.
MATERIALS： The BV-2 immortalized murine microglia cell line was purchased from China Unit cell center. LPS was provided by Sigma Company. Cell cultures were purchased from Gibco. Phospho-（Ser） 14-3-3 binding motif antibody was purchased from Santa Cruz Biotechnologies. FITC was provided by Linfei Biotechnology, Wuhan, China. TNF- α ELISA was provided by Jingmei Biotech Co, Wuhan, China. The flow cytometer was provided by Becton Dickinson, Canada.
METHODS： The present experiment was performed at the Laboratory of Department of Neurology, the Affiliated Union Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology from April to December 2006. The microglial cell line, BV-2, was cultured in vitro and stimulated with LPS for 2, 6, 12, and 24 hours. BV-2 cultures without LPS were used as controls. MAIN OUTCOME MEASURES： Expression of 14-3-3 γ protein was detected by flow cytometry. 14-3-3 ζ percentage expression and the mean fluorescence intensity was detected by immunofluorescence. TNF- α expression was detected by ELISA.
RESULTS?     

Enhanced expression of 14-3-3 proteins in reactive astrocytes in Creutzfeldt-Jakob disease brains

14-3-3 proteins have been reported to be detected specifically in the cerebrospinal fluid (CSF) from patients with Creutzfeldt-Jakob disease (CJD). To elucidate the role of 14-3-3 proteins in patients with CJD, we performed immunohistochemical studies on 14-3-3 proteins in autopsied brains from five patients with sporadic CJD (sCJD), three patients with Alzheimers disease (AD), and seven normal control subjects. Formalin-fixed, paraffin-embedded sections from all cases were immunostained with several types of specific anti-14-3-3 antibodies. In the normal control brains, 14-3-3 immunoreactivity was localized mainly in the neuronal somata and processes; in contrast, glial cells showed no or faint immunoreactivity. In the brains from the patients with AD, 14-3-3 immunoreactivity was observed in the surviving neurons as well as some neurofibrillary tangles. In the brains from the patients with sCJD, 14-3-3 immunoreactivity was well preserved in the remaining neurons. Furthermore, the glial cells, especially the reactive astrocytes, were intensely immunostained in the brains affected by sCJD. Our findings suggest that 14-3-3 proteins may be up-regulated in the glial cells, particularly in reactive astrocytes, and that the enhanced expression of 14-3-3 proteins in these glial elements may be associated with the pathogenesis of sCJD.     

脑脊液14-3-3蛋白分析在评价多发性硬化轴索损害中的临床价值

目的 评价脑脊液14-3-3蛋白与多发性硬化（MS）患者轴索损害之间的关系。方法 从47例MS患者及36例对照中获取脑脊液标本，用免疫印迹法分析脑脊液14-3-3蛋白条带。结果 MS患者脑脊液14-3-3蛋白阳性率为24．5％，急性期起病的患者12例中7例阳性；阳性的患者其扩展的残疾功能状况量表评分均≥2．0分，且〉4．5分的患者阳性率更高。结论 免疫印迹法分析脑脊液14-3-3蛋白对判断MS患者急性期是否出现轴索损害及遗留神经功能缺损有一定的参考价值。     

Creutzfeldt-Jakob病脑组织14-3-3蛋白表达及其意义

目的探讨Creutzfeldt—Jakob病（CJD）脑组织内14-3-3蛋白表达及其诊断意义。方法实验组为5例cJD额叶组织，对照组为4例非CJD额叶组织。采用14-3-3B和s抗体，通过链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶（S—P）免疫组织化学方法进行检测。并参照KB、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、PrP免疫组织化学染色和129基因型检测结果。结果实验组5例脑组织14—3-3蛋白有较多地表达，其中3例灰质与星形胶质细胞尤著。其表达程度与PrP沉积类型有关，而与PrP129基因型无关。对照组4例中除2例急性脑挫伤仅个别神经细胞有表达外，肾上腺脑白质营养不良与额颞叶痴呆灰质和白质均无表达。结论14-3．3蛋白在脑内较多地表达，有利于CJD的病理诊断。     

14-3-3蛋白在PC12细胞的分布及MPP+对其表达的影响

目的探讨14-3-3蛋白在PC12细胞中的分布及其与MPP 诱导PC12细胞死亡的关系。方法用免疫荧光染色检测14-3-3蛋白的分布,并分别用免疫印迹技术与MTT法检测MPP ,对14-3-3蛋白表达及细胞活力的影响。结果PC12细胞中β、γ、ε、ζ、η和θ亚型免疫反应阳性。14-3-3蛋白表达随着MPP 处理的时间延长呈下降趋势,在6h变化不明显,12h显著下降(P<0.05),到48h后14-3-3蛋白的减少极其显著(P<0.01)。PC12细胞的存活率也呈现同样的变化趋势。结论MPP 引起PC12细胞的死亡可能与细胞内14-3-3蛋白含量的下降有关。