延胡索酸酯对体外培养的树突状细胞分化的影响

目的：研究延胡索酸酯（FAE）对树突状细胞（DC）的作用，以探讨FAE治疗银屑病的机制。方法：在体外将人外周血单细胞分化成树突状细胞；分别采用流式细胞术检测细胞表面CD1a,CD14,CD40,CD80,CD86和HLA-DR的表达，来评价FAE中各种成分对单细胞衍生的树突状细胞（MoDC)分化的作用，并用混合淋巴细胞反应分析FAE对MoDC刺激下细胞功能的影响。结果：0.01-100mg/L二甲基延胡索酸和甲基氢化延胡索酸钙盐抑制MoDC的分化，并降低MoDC刺激淋巴细胞增殖的能力。结论：FAE对树突状细胞分化的抑制作用可能是该药治疗银屑病有效的一个重要机制。     

大鼠骨髓树突状细胞的体外分离培养及生物学特性研究

目的 探讨体外分离培养大鼠骨髓来源树突状细胞(DC)的方法并对其生物学特性进行研究.方法 应用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4诱导培养从大鼠管状骨中提取的骨髓细胞5 d后,将细胞分成脂多糖(LPS)刺激组和未刺激组(对照组),48 h后进行形态学观察,用流式细胞仪检测组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)和CD80的表达,用ELISA法测定培养上清中IL-6和IL-12的含量.结果 培养的大鼠骨髓细胞具有树突状突起,具有DC的典型形态.培养7 d后,对照组MHC-Ⅱ、CD80表型表达阳性率分别为5713%和29.1%,LPS刺激组MHC-Ⅱ、CD80表型表达阳性率分别为70.9%和73.5%;LPS刺激组IL-6和IL-12含量高于未刺激组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功建立了大鼠DC体外分离培养和诱导成熟的方法;在分化成熟过程中,DC在表型和细胞因子分泌功能上均发生了变化.     

IL-4,GM-CSF体外诱导猪单核来源树突状细胞和功能鉴定

目的探讨体外大量培养扩增猪外周血单核细胞来源DC（monocyte—derived DC,MoDC）,对细胞表型,免疫学功能及生物学活性进行鉴定。方法提取猪外周血单核细胞（PBMC）,经GM—CSF和IL-4诱导,体外培养5-8d,得到悬浮的MoDC,培养第5天加入浓度为1μg/ml的LPS诱导成熟。通过倒置相差显微镜下观察MoDC细胞形态,流式细胞术检测表面CD80／86,SLA-II,CD172a等分子表达,BrdU法测定混合淋巴细胞培养MoDC对同种异体T细胞的刺激能力,ELISA法检测MLR上清液中IFN—γL-4水平。结果IL-4／GM—CSF刺激猪PBMC,可以获得MoDC,其表型为CD1^＋CD14^＋CD172a^＋CD80／86^＋SLA—II^＋,经LPS刺激后CD80,CD86,SLA—II表达升高。结论应用细胞因子诱导猪PBMC成功获得了MoDC,为今后进一步研究移植耐受诱导和应用于异种移植打下基础。     

不同来源人树突状细胞的培养诱导及鉴定

目的通过对不同来源的人树突状细胞的体外培养与诱导,建立树突状细胞的稳定体系,为更进一步实验打好基础。方法分离人外周血单个核细胞(PBMC),用不同树突状细胞亚群的特异性表面标记抗体磁珠分离树突状细胞前体,通过加入不同的刺激分子,分别诱导未成熟、成熟及活化等不同阶段的树突状细胞。结果与未成熟树突状细胞相比,成熟活化型树突状细胞表达HLA-DR、CD86以及CD40等共刺激分子明显升高,其中MoDC对成熟标记物CD83的表达水平亦较高。此外,两者在形态上也有明显的差异。结论通过对不同亚群树突状细胞的体外诱导、培养和鉴定,建立了较为成熟的研究树突状细胞的平台,为深入开展工作打下基础。     

舒芬太尼对人脐血树突状细胞免疫功能的影响

目的探讨舒芬太尼对人脐血树突状细胞(DC)免疫功能的影响。方法无菌条件下采集脐带血70 ml,经密度梯度离心法获得脐血单个核细胞,然后分3组进行培养。阴性对照组(N组):只加rhGM-CSF 50 ng/ml和rhIL-4 10 ng/ml培养10 d;阳性对照组(P组):在加入rhGM-CSF、rhIL-4培养的同时加入rhTNF-α50 ng/ml培养10 d诱导成熟树突状细胞;药物组(S组):加入rhGM-CSF、rhIL-4的同时加入舒芬太尼其浓度分别为(0.2、0.5、1.0)ng/ml(S_(0.2)、S_(0.5)、S_(1.0)培养10 d。培养过程中在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态学变化;以流式细胞仪分析各组细胞免疫表型CD80、CD86、CD83、HLA-DR分子的表达;ELISA法测定其分泌IL-12的水平;MTT法检测DCs刺激混合淋巴细胞的增殖能力。结果与N组比较,S组和P组细胞具有典型的树突状细胞形态学特征,CD80、CD86、CD83和HLA-DR分子的表达增加(P<0.05),促进同种异体混合淋巴细胞增殖的能力较强(P<0.05),IL-12表达增加(P<0.05);与P组比较,S组细胞随舒芬太尼药物浓度增加树突状伪足逐渐不明显,CD80、CD86、CD83和HLA-DR分子表达以及促进混合淋巴细胞增殖能力呈不典型的剂量依赖性下降趋势(P<0.05),IL-12表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论脐血来源的单个核细胞可在舒芬太尼的刺激下诱导为成熟的树突状细胞,但舒芬太尼对树突状细胞成熟和免疫功能的影响具有剂量依赖性下降趋势。     

白细胞介素-10对人树突状细胞表型及致炎细胞因子分泌的影响

目的观察白细胞介素(IL)-10对体外培养人树突状细胞(DC)表型和致炎细胞因子IL-12分泌的影响,探讨IL-10对DC炎性成熟过程中的负调节作用.方法通过SCF、GM-CSF、TGF-β1、Flt-3和TNF-α体外培养体系,从脐血CD34+造血干细胞中诱导扩增获得DC,并于细胞成熟中用重组人IL-10进行干预.流式细胞仪分析细胞表型CD1a、CD11c、CD83、CD80、CD86和HLA-DR;RT-PCR检测IL-12 p35、p40mRNA表达;ELISA法测定IL-12p70分泌的含量.结果IL-10可下调成熟中DC表面CD11c、CD83、CD80和CD86的表达,同时可抑制DC内IL-12p35、p40mRNA的转录和IL-12p70的分泌.结论IL-10可抑制DC黏附共刺激分子表达和致炎细胞因子的合成,提示其不仅可调抑DC的递呈抗原功能,且参与了炎症局部微环境的调节.     

白细胞介素-10对人树突状细胞表型及致炎细胞因子分泌的影响

目的 观察白细胞介素(IL)-10对体外培养人树突状细胞(DC)表型和致炎细胞因子IL-12分泌的影响，探讨IL-10对DC炎性成熟过程中的负调节作用。方法 通过SCF、GM-CSF、TGF-β、Flt-3和TNF-α体外培养体系，从脐血CD34造血干细胞中诱导扩增获得DC，并于细胞成熟中用重组人IL-10进行干预。流式细胞仪分析细胞表型CD1a、CD11c、CD83、CD80、CD86和HLA-DR；RT-PCR检测IL-12 p35、p40mRNA表达；ELISA法测定IL-12 p70分泌的含量。结果 IL-10可下调成熟中DC表面CD11c、CD83、CD80和CD86的表达，同时可抑制DC内IL．12p35、p40mRNA的转录和IL-12p70的分泌。结论 IL-10可抑制DC黏附共刺激分子表达和致炎细胞因子的合成，提示其不仅可调抑DC的递呈抗原功能，且参与了炎症局部微环境的调节。     

多西环素对树突状细胞功能的影响

目的探讨多西环素对树突状细胞的免疫表型和功能的影响。方法采集健康人的外周血,密度梯度离心法获得外周血单个核细胞,用rhIL-4和rhGM—CSF诱导分化为树突状细胞,通过LPS诱导树突状细胞成熟。树突状细胞诱导成熟过程中向培养基中分别加入0μg／mL、100μg／mL和300μg／mL的多西环素,通过流式细胞术检测树突状细胞表面HLA—DR、CD83和CD80的表达,用ELISA检测树突状细胞分泌TNF—α、IL-6、IL-12和IL-10,与T细胞共培养检测刺激同种异型T细胞的增值能力。结果与对照组相比,100ng／mL和300ng／mL多西环素处理组诱导树突状细胞表达HLA—DR表达下调。多西环素可下调树突状细胞分泌IL-1B、IL-12、TNF-α和IL-6,也可抑制树突状细胞刺激同种异型T细胞增殖,并呈剂量依赖性。结论多西环素作用于树突状细胞成熟过程,导致树突状细胞下调HLA-DR的表达,抑制树突状细胞分泌IL-1B、IL-6、IL-12和TNF—α,下调其刺激同种异型T细胞的增值能力。     

STAT3信号通路在IL-6抑制人单核细胞来源树突状细胞CCR7表达中的作用

目的 探讨STAT3信号通路在IL-6抑制人单核细胞来源树突状细胞(human monocytederived dendritic cells,moDCs)趋化因子受体7(C-C chemokine receptor type 7,CCR7)表达中的作用.方法 采用CD14+磁珠分离法从外周血中分离得到单核细胞,加入rhGM-CSF和rhIL-4在体外诱导培养树突状细胞.LPS用于刺激moDCs表达CCR7,RT-PCR检测不同浓度IL-6处理后再用LPS刺激后的moDCs CCR7 mRNA表达.Western blot检测IL-6处理moDCs和IL-6预处理后再加入STAT3磷酸化特各异性抑制剂JSI-124的moDCs STAT3、p-STAT3表达.IL-6预处理并抑制STAT3磷酸化后,LPS刺激48 h,RT-PCR检测moDCs CCR7 mRNA的表达,流式细胞仪检测moDCs CCR7蛋白表达,细胞迁移实验检测moDCs细胞迁移功能.结果 与单独LPS刺激组比较,IL-6明显抑制LPS刺激的moDCs CCR7mRNA的表达(P＜0.05).Western blot结果显示,与单独LPS刺激组比较,IL-6导致moDCs细胞内STAT3高度活化;而抑制STAT3信号高度活化后,与IL-6+LPS处理组比较,moDCs CCR7 mRNA表达、蛋白分子表达、细胞迁移能力明显升高(P＜0.05),与LPS刺激组无差异(P＞0.05).结论 IL-6通过高度活化STAT3信号通路抑制人单核细胞来源树突状细胞CCR7表达,导致树突状细胞的迁移能力受损,而靶向干预STAT3通路可能成为纠正树突状细胞迁移障碍的潜在手段.     

二十二碳六烯酸对人外周血树突状细胞成熟的影响

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)在体外对人外周血来源树突状细胞(DCs)成熟状态及免疫学功能的影响。方法经淋巴细胞分离液(Ficoll)密度梯度离心法分离出单个核细胞,用含rhGM-CSF和rhIL-4培养液诱导5d,获得未成熟DCs,并分为4组:未成熟组、成熟组、DHA组和饱和脂肪酸(SA)组。经DHA孵育24h,内毒素脂多糖(LPS)作用48h,于第8天,Wright-Giemsa染色观察各组DCs形态;流式细胞仪检测表型,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测DCs共刺激分子CD80、CD86及HLA-DR mRNA的表达;ELISA检测各组细胞上清液中IL-12及TNF-α的含量。结果 DHA组细胞上清液IL-12和TNF-α的含量比成熟组低(P<0.01),而SA组与成熟组比较差异无统计学意义(P>0.05)。DHA干预下平均荧光强度呈明显下调。成熟组CD80、CD86及HLA-DR mRNA相对表达量比未成熟组高(P<0.01);DHA组比成熟组低(P<0.01);而SA组与成熟组相比无差异(P>0.05)。结论 DHA可下调DCs共刺激分子CD80、CD86及HLA-DR的表达,降低IL-12及TNF-α的释放,减弱DCs的抗原提呈能力,且可抑制DCs体外成熟。     

系统性红斑狼疮患者血清中IL-10抑制抗原递呈细胞表面HLA-DR和CD80的表达

目的:研究系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)患者血清中的IL-10对正常单核细胞分化形成的树突状细胞(dendriticcells,DCs)及其前体单核细胞抗原递呈相关膜表面分子表达的影响。方法:分离正常人外周血单个核细胞(PBMC),并采用GM-CSF IL-4方案诱导分化形成DCs,在此过程中加入不同IL-10水平的SLE患者血清或混有IL-10中和抗体的SLE患者血清,联合培养7天后收集细胞,经形态学鉴定,以流式细胞术检测HLA-DR、CD80、CD86的表达。结果:在SLE血清的作用下,DCs的HLA-DR、CD80的表达下调,CD86表达不受影响;中和SLE血清中的IL-10后,HLA-DR、CD80表达能够恢复。其前体细胞单核细胞的HLA-DR、CD80的表达也可被SLE血清下调,用中和抗体中和IL-10后,其表达可部分恢复。结论:高IL-10水平的SLE血清能够抑制DCs及其前体单核细胞表面分子HLA-DR、CD80的表达,对抗原递呈细胞的功能可能产生影响。     

降钙素基因相关肽诱导人单核细胞合成趋化因子白细胞介素8的研究

目的　探讨神经肽对免疫细胞的神经免疫调节作用。方法　以人单核细胞株为体外实验模型 ,将降钙素基因相关肽 (CGRP)作用于脂多糖活化的单核细胞 ,用ELISA测定其分泌趋化因子白细胞介素 8(IL 8) ,采用逆转录多聚酶联链反应 (RT PCR)检测IL 8mRNA的表达 ,利用 4 8孔微型趋化小室分析单核细胞对中性粒细胞和淋巴细胞的趋化活性 ,并通过受体拮抗剂CGRP8 37了解CGRP对人单核细胞趋化功能的调节作用。结果　CGRP诱导活化的单核细胞分泌表达IL 8蛋白(112 0pg/ml± 15pg/ml)和IL 8mRNA增加 (IL 8/肌动蛋白比值为 1 84 5± 0 5 87) ,用受体拮抗剂CGRP8 37后IL 8减少 (6 70pg/ml± 15pg/ml) ,IL 8/肌动蛋白比值为 1 339± 0 4 34。CGRP增加活化的单核细胞对中性粒细胞和淋巴细胞的趋化活性 ,其趋化指数分别是CI =3 78± 0 0 8和CI =3 4± 0 2 7;受体拮抗剂CGRP8 37则使趋化作用减弱。结论　外周感觉神经末梢的神经肽CGRP通过受体介导 ,作用于单核细胞 ,在一定条件下诱导其合成和分泌趋化因子IL 8,促进中性粒细胞和淋巴细胞在局部炎症区域的定向迁移和集聚     

Human monocyte-derived dendritic cells expressing both chemotactic cytokines IL-8, MCP-1, RANTES and their receptors, and their selective migration to these chemokines

Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓ(ＤＣｓ)ａｒｅｔｈｅｍｏｓｔｐｏｔｅｎｔａｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌｓａｎｄｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｉｎｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｒｅｓｔｉｎｇＴｃｅｌｌｓａｎｄｉｎｉｔｉａｔｉｎｇＴｃｅｌｌｄｅｐｅｎｄｅｎｔｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓ1ＤＣｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓｏｒｉｇｉｎａｔｅｉｎｔｈｅｂｏｎｅｍａｒｒｏｗａｎｄｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙｍｉｇｒａｔｅｉｎｔｏｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｔｉｓｓｕｅｓａｎｄｐｒｉｍａｒｙｌｙｍｐｈｏｉｄｏｒｇａｎｓｗｈｅｒｅｔｈｅｙ…     

小鼠可溶性CD83-Ig对树突状细胞产生IL-12的影响

目的:探讨小鼠可溶性CD83-Ig对树突状细胞(DC)产生白细胞介素-12(IL-12)的影响。方法:将表达小鼠CD83胞外功能区与人IgG1αFc融合蛋白(CD83-Ig)的真核表达载体pmCD83-Ig转染COS-7细胞,表达可溶性CD83-Ig融合蛋白,并将该载体转染DC细胞系(DC2.4),筛选稳定表达CD83-Ig的细胞系。采用LPS刺激DC2.4,借助RT-PCR和ELISA法分别检测DC2.4IL-12mRNA的表达和细胞培养上清中IL-12的水平,观察CD83-Ig对DC2.4表达IL-12的影响。结果:可溶性CD83-Ig处理DC细胞组和CD83-Ig基因转染DC细胞组IL-12mRNA的表达和上清液中IL-12水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:CD83-Ig可抑制LPS刺激DC产生IL-12,可能是CD83-Ig负调节DC活性的重要机制。     

系统性红斑狼疮血清对树突状细胞诱导作用的时间相关性

目的：研究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLF)血清诱导正常单核细胞(Monoeyte，Mo)向树突状细胞(Dendritic cells，DC)分化的时间相关性。方法：分离正常人单核细胞，分别以GM—CSF／IL-4系统和正常人血清(Normal serum)系统以及SLE患者血清(SLE serum)系统诱导培养，在培养的第3、5和第7天收集细胞。流式细胞术检测HLA—DR和CD80，混合淋巴细胞反应检测其功能。结果：诱导培养的第3天SLE血清组可见大量细胞集落，电镜下观察呈典型树突状形态；GM—CSF／IL-4组第4天亦可见大量集落；正常血清组始终无集落形成。HIA—DR在GM—CSF／IL-4系统中始终高表达，CD80随LPS的刺激而升高。正常血清中HLA—DR和CD80始终低表达。SLE患者血清中HLA—DR中等程度表达，CD80在第5天升高达中等程度表达并维持至第7天。MLR显示SLE患者血清组的SI在第5天升高，然而第7天明显下降。结论：SLE血清可以诱导正常单核细胞分化为DC，其功能状态与培养时间呈一定的相关性。     

脂多糖刺激脐带间充质干细胞上调 IL-1Ra分泌的研究?

目的：探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活 Toll 样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)对脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)分泌白介素1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)的影响。方法采用组织块法从脐带华通胶组织中分离培养 UC-MSCs;流式细胞术检测UC-MSCs表面标志物 CD14、CD34、CD29和 CD105的表达;TLR4配体 LPS 以不同剂量和时间刺激 UC-MSCs,采用 qPCR 法和 ELISA 法检测 IL-1Ra 的 mRNA 和蛋白质表达水平。结果原代组织培养7~10 d,组织周边有贴壁细胞爬出,呈长梭形;UC-MSCs 表面标志物 CD29和 CD105呈阳性表达,而 CD14和 CD34呈阴性表达;LPS 刺激 UC-MSCs 后,IL-1Ra 在基因及蛋白质水平的表达均显著增加,差异有统计学意义(P <0.05),并呈剂量与时间依赖性。结论LPS 刺激 UC-MSCs 可上调 IL-1Ra 的分泌。     

人外周血树突状细胞的诱导与鉴定

目的：体外诱导、培养人外周血单核细胞获得不同成熟阶段的树突状细胞（DCs）。方法：用贴壁法从健康人外周血浓缩白细胞获取单核细胞,第一阶段在GM-CSF+IL-4存在的条件下培养7 d,获得未成熟DCs;第二阶段在GM-CSF+TNF-α联合诱导下培养至14 d,获得成熟的DCs。对DCs的形态进行显微镜下观察,用流式细胞仪检测其表型,用MTT的方法对DCs的功能进行检测。结果：获得的未成熟DCs中度表达CD1a、共刺激分子,高表达HLA-DR分子,在DCs的成熟期共刺激分子、HLA-DR及CD83、CD25分子均高度表达,刺激同种异型T淋巴细胞增殖的能力强。结论：成功地建立了诱导人外周血单核细胞获得不同发育阶段DCs的方法,并获得了大量纯度较高的DCs。