FK506促进异体神经匀浆激活的巨噬细胞凋亡的实验研究

目的 研究FK506促进外周血来源的异体神经匀浆激活的巨噬细胞的凋亡。方法 取1月龄SD幼鼠,腹腔抽取法培养异体神经匀浆激活的巨噬细胞。按不同浓度的FK506分组:A组空白对照组、B组0.25ng/ml、C组0.5ng/ml、D组1.0ng/ml。将4组处理因素分别加入长有巨噬细胞的96孔板中,用MTT法检测巨噬细胞的活力情况,用倒置显微镜和荧光显微镜及透射电镜对巨噬细胞的凋亡进行形态学上的观察与鉴定。流式细胞仪检测巨噬细胞凋亡情况。结果 B组和C组均可见异体神经匀浆激活的巨噬细胞的活性减弱及细胞凋亡发生,D组可见巨噬细胞发生坏死性改变。透射电镜和荧光显微镜可观察到巨噬细胞的凋亡前期和凋亡小体出现。流式细胞仪检测B和C组凋亡率为24.6%和26.5%,均高于对照组,D组发生坏死。结论 FK506可以在早期促进异体神经匀浆激活的巨噬细胞的凋亡,从而减少或抑制周围神经异体移植后巨噬细胞所介导的免疫排斥反应。     

他克莫司对5-氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡的影响及其机制的初步探讨

目的:观察他克莫司(FK506)对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨.方法:体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721;应用流式细胞仪检测5-FU及联合FK506对细胞凋亡和细胞周期的影响;TransAM NF-κB核转录因子活性检测试剂盒检测NF-κB p65活性;细胞免疫组织化学检测NF-κB p65激活后入核情况;免疫印迹分析Cyclin D1蛋白表达差异.结果:5-FU可诱导肝癌细胞凋亡,其作用随浓度的增加而增强(P<0.05);随着5-FU用药浓度的增加,S期细胞比例和细胞增殖指数(PI)也增加; 5-FU可激活NF-κB而入核,Cyclin D1蛋白的表达逐渐增强.FK506预处理增强了5-FU诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用,同时S期细胞比例和PI也减少; FK506预处理可抑制NF-κB入核,并可下调Cyclin D1基因的表达.结论:FK506能够协同5-FU诱导肝癌细胞株凋亡,增强肝癌细胞株对5-FU的敏感性,这种作用可能是通过抑制NF-κB活性进而下调Cyclin D1基因的表达,导致G0/G1期停滞而实现.     

钙调神经磷酸酶抑制剂对Aβ1－42所致阿尔茨海默病大鼠学习记忆及细胞凋亡的影响

目的：探讨钙调神经磷酸酶抑制剂对β-淀粉样蛋白（Aβ1－42）所致阿尔茨海默病（AD）大鼠学习记忆及海马区细胞凋亡的影响及可能作用机制。方法36只SD大鼠随机分为AD模型组、FK506组及对照组,每组12只。 AD模型组和FK506组采用Aβ1－42海马注射建立AD大鼠模型,FK506组以钙调神经磷酸酶抑制剂他克莫司（ FK506）干预。用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,原位末端凋亡法（TUNEL）检测凋亡细胞,实时定量PCR（RT-PCR）、免疫组化检测海马区促凋亡蛋白（Bad）、细胞凋亡蛋白酶-3（Caspase-3）的表达。结果与对照组相比,AD模型组大鼠学习记忆能力明显减退（P＜0．01）,海马CA1区神经元细胞凋亡率增高（ P＜0．05）,而FK506可改善AD大鼠的学习记忆能力,并能减少海马CA1区神经元细胞凋亡率（P＜0．05）;Bad基因转录及其蛋白表达在AD模型组与FK506组中无明显差异（P＞0．05）,而FK506可显著减少AD大鼠海马区Caspase-3的表达（P＜0．05）。结论抑制钙调神经磷酸酶激活可改善AD大鼠的学习记忆能力。 AD的发病机制可能为,活化的钙调神经磷酸酶可能通过介导Bad去磷酸化而激活Caspase-3,最终导致细胞凋亡。钙调神经磷酸酶抑制剂可通过阻断该途径来治疗AD。     

体外培育牛黄诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的研究体外培育牛黄诱导人肝母细胞瘤HepG2细胞凋亡的作用及机制。方法用单层培养法培养HepG2细胞，用不同剂量的体外培育牛黄作用于HepG2细胞不同时间，用荧光显微镜、透射电镜观察细胞形态的改变及细胞凋亡，用流式细胞仪检测HepG2细胞的亚G1峰细胞（凋亡）率的变化。结果体外培育牛黄100～800ug／ml作用于HepG2细胞48h后，HepG2细胞表现为细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形成等凋亡特征性形态学改变；流式细胞直方图上可见亚二倍体峰，不同浓度作用于HepG2细胞24、36、48、72h后的细胞凋亡率均显著高于空白对照组（P〈0．01），400ug／ml浓度组与阳性对照FT207（100ug／ml）组比较无明显差异。结论体外培育牛黄能诱导人肝母细胞瘤HepG2细胞凋亡。     

BMP2在SVZa神经干细胞向TH+神经元分化中的作用

目的 研究BMP2对室管膜前下区（anterior subventricular zone，SVZa）神经干细胞分化为TH^＋（酷氨酸羟化酶）神经元的作用。方法 体外培养SVZa神经干细胞，以0、0．1、1、10、20、100（ng／m1）浓度的BMP2分别诱导SVZa神经干细胞分化，通过免疫组化和流式细胞仪技术检测不同浓度下SVZa神经干细胞分化为TH^＋神经元的比例。结果0．1—100（ng／ml）组的TH^＋细胞比例均明显高于0ng／ml组，10ng／ml组达最高峰，各组间差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论 BMP2可以促进SVZa神经干细胞向TH^＋神经元分化，可以明显提高分化比例。     

大鼠输注经紫外线照射的供体脾细胞后神经移植中T淋巴细胞亚群的变化

目的：通过尾静脉预输注经紫外线照射的供体脾细胞后进行同种异体坐骨神经移植，观察免疫排斥过程中大鼠T淋巴细胞亚群的变化，探讨周围神经缺损修复的可行性。方法：实验分自体神经移植组（自体移植组、A组）、异体神经移植组（异体移植组、B组）、尾静脉预输注经紫外线照射的供体脾细胞后进行异体神经移植组（后行移植组、C组）。分别在移植术后第3d、第7d、第14d、第28d，用荧光标记CD4、CD8单抗作用后，流式细胞仪检测T淋巴细胞及其亚群百分数和CD4／CD8比值。结果：与A组比较，第7d，B组和C组小鼠外周血CD。阳性细胞百分率和CD4／CD8比值显著增高（P〈0．05，P〈0．01）；第14d，B组小鼠外周血CD4、CD8阳性细胞百分率和CD4／CD8比值明显增高（P〈0．05，P〈0.01），C组小鼠外周血CD4、CD8阳性细胞百分率明显增高，CD4／CD8比值明显下降（P〈0．05）；第28d，B组和C组小鼠外周血CD4、CD8阳性细胞百分率和CD4／CD8比值明显增高（P〈0．05，P〈0．01）。结论：紫外线照射供体特异性抗原可以有效地诱发机体产生免疫耐受，从而减轻免疫排斥反应。     

高迁移率族蛋白B1诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡

目的观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响。方法分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,经不同浓度的HMGB1(10、100、1000、10000ng/ml)作用24h,或以10000ng/ml的HMGB1作用不同时间(6、12、24、48h)后,以连接素Ⅴ/放线菌素D双染法,采用流式细胞术和激光扫描共聚焦显微镜检测巨噬细胞凋亡情况。结果经不同浓度的HMGB1刺激24h,其中10000ng/ml组HMGB1诱导巨噬细胞凋亡的作用最强,为(39.84±5.98)%,与对照组(4.49±1.72)%比较,差异具有显著性(P<0.01)。以10000ng/ml的HMGB1作用巨噬细胞不同时间,其中24h组凋亡率发生最高,为(38.30±6.95)%,显著高于对照组(P<0.01)。结论HMGB1可诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡。     

Thapsigargin对人晶状体上皮细胞系SRA01／04增殖抑制的作用机制

 【目的】研究thapsigargin（TG）对体外培养的人品状体上皮细胞系SRA01／04增殖的影响，并探讨其分子机制。【方法】不同浓度TG处理SRA01／04细胞72h，噻唑蓝比色法（MTT）检测细胞增殖；流式细胞仪（PI法）检测细胞周期改变；透射电镜观察细胞超微结构变化；TUNEL法检测细胞核中DNA的断裂情况；激光共焦显微镜和流式细胞仪检测Caspase3活性亚单位（17／19ku）的表达及阳性细胞表达率。【结果】MTT法测得TG为0．325～5μmol／L时，细胞增殖抑制率变化显著，IC50大约为0．8μmol／L；透射电镜显示TG处理SRA01／04细胞膜皱缩，染色体浓缩、边集、核膜裂解、凋亡小体形成；流式细胞仪（PI法）及TUNEL法检测TG浓度为0，0．1，0．5，1，10μmol／L分别处理SRA01／04细胞72h，细胞凋亡率随浓度的增加而增加，呈浓度依赖性；TG处理后细胞Caspase3阳性表达率也呈浓度依赖性增加，TG为10μmol／L时，几乎每个细胞浆内Caspase3都被激活。【结论】Thapsigargin可能通过激活Caspase3为诱导体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01／04细胞凋亡而抑制其增殖，TG为预防后发性白内障的药物研究提供了基础。     

Thapsigargin对人晶状体上皮细胞系SRA01／04增殖抑制的作用机制

【目的】研究thapsigargin（TG）对体外培养的人品状体上皮细胞系SRA01／04增殖的影响，并探讨其分子机制。【方法】不同浓度TG处理SRA01／04细胞72h，噻唑蓝比色法（MTT）检测细胞增殖；流式细胞仪（PI法）检测细胞周期改变；透射电镜观察细胞超微结构变化；TUNEL法检测细胞核中DNA的断裂情况；激光共焦显微镜和流式细胞仪检测Caspase3活性亚单位（17／19ku）的表达及阳性细胞表达率。【结果】MTT法测得TG为0．325～5μmol／L时，细胞增殖抑制率变化显著，IC50大约为0．8μmol／L；透射电镜显示TG处理SRA01／04细胞膜皱缩，染色体浓缩、边集、核膜裂解、凋亡小体形成；流式细胞仪（PI法）及TUNEL法检测TG浓度为0，0．1，0．5，1，10μmol／L分别处理SRA01／04细胞72h，细胞凋亡率随浓度的增加而增加，呈浓度依赖性；TG处理后细胞Caspase3阳性表达率也呈浓度依赖性增加，TG为10μmol／L时，几乎每个细胞浆内Caspase3都被激活。【结论】Thapsigargin可能通过激活Caspase3为诱导体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01／04细胞凋亡而抑制其增殖，TG为预防后发性白内障的药物研究提供了基础。     

安迪粉针剂诱导慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的细胞学研究

目的:探讨安迪注射剂(Andi injection,Adi)对慢性粒细胞白血病K562细胞株凋亡的影响。方法:流式细胞仪技术检测细胞凋亡变化;使用荧光显微镜和透射电镜观察细胞形态学改变;评价Adi对K562细胞株凋亡的影响。结果:流式细胞仪检测结果显示10、20μg/ml Adi处理组K562细胞的凋亡率分别为50%和39%,明显高于对照组的10%(P<0.05);荧光显微镜和电镜下可见K562细胞呈典型凋亡样改变。结论:Adi能明显抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡。     

利用神经再生室观察FK506促进神经再生的实验研究

目的探讨免疫抑制剂FK506促神经再生的作用及药物应用方法。方法将雄性SD大鼠60只随机分成3组,每组20只,切断双侧坐骨神经制成坐骨神经再生室模型。A组在再生室内注入生理盐水;B组在再生室内注入盐水,颈后皮下注射FK5061mg／kg,连续14d;C组在再生室内注入1μg／mlFK506。观察神经损伤局部的免疫反应、检测腓肠肌湿重、组织形态学及图像分析、电生理学。结果B、C组大鼠神经损伤局部淋巴细胞浸润程度较A组轻微。6周时大鼠腓肠肌湿重为：A组平均579mg,B组平均725mg,C组平均761mg,B、C组大鼠腓肠肌湿重明显优于A组;组织形态学观察与图像分析显示,有髓神经纤维总数为：A组平均720根,B组平均778根,C组平均772根,在有髓神经纤维密度、平均轴突直径、髓鞘厚度等指标中,B组结果明显优于A组。结论（1）大鼠全身应用FK506后具有神经保护和神经营养作用,可加快神经功能的恢复。（2）局部应用FK506对早期损伤神经有一定的保护作用。     

他克莫思对rhHGF刺激ECV304细胞株表达MMP-的抑制作用

目的探讨重组人类肝细胞增殖因子(rhHGF)刺激ECV304细胞株表达基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的作用及他克莫思(Tacrolimus,FK506)的抑制作用.方法绘制正常ECV304细胞株生长曲线,明确最适生长浓度及对数生长期;明确rhHGF及FK506的作用浓度;流式细胞仪(FCM)检测ECV304细胞株的MMP-9水平.结果①ECV304细胞的最适生长浓度为1.0E+4/ml,对数生长期为3～5 d;rhHGF的作用浓度为8 ng/ml,IC50为8.27 ng/ml;FK506的作用浓度为50 ng/ml,IC50为51.63 ng/ml.②对照组MMP-9的表达量为39.74%;培养基中加入rhHGF 8 ng/ml后,细胞存活率为1.388169±0.102033(P<0.01),MMP-9的表达量为40.32%;培养基中加入FK506 50 ng/ml后,细胞存活率为0.398764±0.092476(P<0.01),MMP-9的表达量为14.61%;培养基中加入FK506 50 ng/ml 15 min后加入rhHGF 8 ng/ml,细胞存活率为0.767203±0.02639(P<0.01),MMP-9的表达量为35.08%.结论rhHGF可刺激ECV304细胞增殖,使MMP-9的表达量增加;FK506可抑制ECV304细胞增殖,使MMP-9的表达量降低;FK506可拮抗rhHGF所引起的ECV304细胞增殖,从而使MMP-9的表达量降低.     

大鼠PDLLA/FK506复合神经套管模型脊髓背角c-fos的表达

目的：建立大鼠PDLLA/FK506（外消旋聚乳酸/FK506）复合套管坐骨神经再生模型,观察大鼠坐骨神经再生过程中行为学、痛阈以及脊髓背角c-fos表达的改变,研究大鼠PDLLA/FK506复合套管外周神经再生模型中神经病理痛的变化.方法：雄性Wistar大鼠40只,体质量180～200g,随机分成2组,每组20只,A组为坐骨神经损伤PDLLA/FK506套管修复组; B组为假手术组.术后27d起检测行为学、机械刺激阈值、热缩足反射时间及c-fos表达计数.结果：A组术后27d后机械痛阈和热缩足反射潜伏期与B组相差明显,有统计学意义（P〈0.05）.A组术侧L4～5脊髓背角与B组相比较,背角浅层c-fos计数增多,有统计学意义（P〈0.05）.A组组内c-fos、机械痛阈和热缩足反射潜伏期45d与27d比较均有统计学意义（P〈0.05）.结论：大鼠PDLLA/FK506复合套管外周神经再生模型中神经再生过程中诱发脊髓背角浅层c-fos表达,同时出现再生神经支配区域的神经病理痛和疼痛相关行为.     

治疗剂量他克莫司对大鼠肾脏病理及超微结构变化的影响

目的 探讨肾移植术后首剂治疗剂量他克莫司(FK506)对大鼠肾脏组织和肾脏细胞超微结构的影响,以及地尔硫革(Dil)对FK506肾毒性的防治作用.方法 按公式将肾移植术后FK506、环孢素A(CsA)和Dil的首剂治疗剂最换算成大鼠的治疗剂量.SD大鼠2,4只随机分成对照组、CsA组(25 mg·kg-1·d-1)、FK506组(0.8 mg·kg-1·d-1)和FK506+Dil组(0.8 mg·kg-1·d1及8 mg·kg-1·d-1),用药4周后建立起各组大鼠肾毒性模型.观察各组大鼠的肾功能指标、肾组织的病理改变(HE染色、PAS染色和MASSON染色)、电子显微镜下肾脏细胞内超微结构的改变.结果 CsA组与FKS06组出现明显的血肌酐上升(36.0±2.6)、(34.2±4.5)μmol/L,对照组为(29.2±3.4)μmol/L;肌酐清除率下降(0.63±0.45)、(0.58±0.39)ml·min-1·100 g-1,而对照组、FK506+Dil组为(1.55±0.91)、(1.02±0.62)ml·min-1·100 g-1.两组均可观察到明显的肾小管细胞浊肿及空泡变性,并且出现不同程度的肾内小动脉玻璃样变、肾小管间质纤维化、肾小球足细胞融合、肾小管上皮细胞线粒体肿胀空泡化等病变.FK506+Dil组上述各项指标的变化有所减轻或接近正常.结论 肾移植术后首剂治疗剂量FK506与CsA一样,均可引起大鼠肾脏组织和肾脏细胞超微结构出现病理改变.地尔硫革可以减轻FK506对肾脏组织和细胞的病理损害.     

神经生长因子在肝纤维化大鼠肝星状细胞凋亡中的作用

目的探讨神经生长因子(NGF)在肝纤维化大鼠肝星状细胞(HSC)增殖、凋亡中的作用。方法HSC株分别在实验组(分别以NGF 50、100和150ng／ml干预HSC)和对照组(单纯HSC培养)中体外培养24、48和72 h。应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖率;原位杂交凋亡检测(TUNEL)法观察HSC凋亡状况;流式细胞术检测细胞凋亡率;显微镜观察细胞形态学变化。结果①MTT法显示,不同浓度的NGF作用HSC 24 h,实验组HSC增殖率均低于对照组,差异有统计学意义(均P<0．05)。NGF浓度为100 ng／ml时,HSC增殖率低于对照组最显著(0．63±0．02 vs 0．77±0．03,P<0．05);②最适浓度的NGF(100 ng／ml)作用HSC 24、48和72 h,第72小时的HSC增殖率低于对照组最显著(0．48±0．03 vs 0．89±0．01,P<0．05),增殖率的降低呈时间依赖性;③最适浓度的NGF(100 ng／ml)作用HSC 24 h,TUNEL法显示HSC凋亡率显著高于对照组(10．2％±1．2％vs 1．6％±0．1％,P<0．05);同时,流式细胞术显示HSC凋亡率为6．2％±0．2％,而对照组无凋亡;④NGF对HSC形态没有明显影响。结论NGF可诱导体外活化的HSC凋亡。     

环孢素和他克莫司在体外对乙型肝炎病毒复制影响的对比研究

目的比较分析环孢素和他克莫司(FK506)在体外对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法采用HBV DNA永久转染人肝癌细胞系HepG2.2.15细胞为体外实验模型,经四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验确定环孢素及FK506对HepG2.2.15细胞生长无抑制作用的药物安全浓度后,将不同安全浓度的环孢素(0.6~20.0μg/ml)或FK506(5~100ng/ml)作用于该细胞系,每24小时换相应浓度新鲜含药培养基,药物作用4d后收集培养上清液和培养细胞待测。采用酶联免疫吸附试验检测上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平,采用狭缝印迹杂交法半定量分析细胞内HBV DNA水平,综合评价环孢素和FK506对HBV病毒复制的影响。结果MTT结果显示环孢素的药物作用安全浓度为0~40.0μg/ml,FK506的安全浓度为0~400ng/ml。在安全浓度范围内,随着环孢素作用浓度的增加,其对HBsAg和HBeAg的抑制率逐渐上升,细胞内HBV DNA复制水平下降;当1.3、2.5及5.0μg/ml环孢素作用4d时,对HBsAg的抑制率分别为16.5%±9.4%、21.5%±8.9%和33.1%±5.3%,对HBeAg的抑制率分别为7.8%±2.2%、11.0%±2.3%和20.8%±1.5%,HBV DNA的表达量仅为对照组的56.1%±16.5%、41.7%±10.9%和39.5%±9.5%。在安全浓度范围内,FK506对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的表达分泌,以及细胞内HBV DNA复制无明显抑制作用。结论环孢素在体外能呈剂量依赖性地抑制HBV复制;而FK506则无此作用。     

壳聚糖复合他克莫司缓释鞘管促进大鼠坐骨神经再生的实验研究

目的观察壳聚糖复合他克莫司(FK506)缓释鞘管结合3mm小间隙桥接神经对神经再生的影响。方法将45只雄性SD大鼠,随机分成3组,切断双侧坐骨神经制成坐骨神经再生室模型,并保留断端间隙为3mm。实验所用得桥接材料分别是:硅胶管、壳聚糖鞘管、壳聚糖复合FK506缓释鞘管。分别于术后6、8、12周观察桥接材料周围的瘢痕形成及吸收情况,并行神经电生理、组织学观察、图象分析、腓肠肌湿重检测比较各组大鼠坐骨神经的再生与功能恢复情况。结果术后大体标本观察显示:对照组再生室与周围组织粘连较重;壳聚糖鞘管组、壳聚糖复合FK506鞘管组神经桥接处较易与周围组织剥离,粘连轻微。6周时各组再生室均尚存;8周时壳聚糖鞘管组、壳聚糖复合FK506鞘管组桥接材料开始吸收;12周时壳聚糖鞘管组、壳聚糖复合FK506鞘管组桥接材料不完整或仅有碎片残留,神经连续性建立,且与周围组织无明显粘连。评估神经再生的运动神经传导速度、复合肌肉动作电位、潜伏期检测指标,壳聚糖复合FK506鞘管组(10.2m/s±0.8m/s、4.3mV±0.3mV、1.9ms±0.4ms)明显优于对照组(4.2ms±0.5ms、1.2mV±0.3mV、7.5ms±0.4mV)、壳聚糖鞘管组(9.5ms±0.3ms、2.7mV±0.3mV、3.1ms±0.4ms),P<0.05。壳聚糖鞘管组虽然各指标均数优于对照组,但之间差异无统计学意义。结论应用壳聚糖复合FK506缓释鞘管桥接大鼠坐骨神经,在体内稳定2个月以上开始降解,能够明显促进神经再生与功能恢复,且降解产物为多糖类,不影响神经再生微环境。     

他克莫司对全血细胞因子分泌的影响

目的研究免疫抑制剂他克莫司(Tacrolimus,FK506)在体外对全血细胞因子分泌的影响。方法健康志愿者全血加入不同浓度FK506,经佛波酯(PMA)和离子霉素(IONO)刺激后,用Bio-Plex悬浮蛋白芯片系统检测上清中细胞因子IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF以及G-CSF的水平。结果同对照组相比,高浓度组FK506(20ng/ml)能显著抑制IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF和G-SCF的分泌(P<0.05);中浓度组FK506(5ng/ml)能有效抑制GM-CSF的分泌,两组之间的差异有显著性(P<0.05)。结论FK506对全血细胞促炎症细胞因子IL-6,IFN-γ和TNF-α的分泌有较强的抑制作用,同时对IL-2,IL-12,IL-17以及集落刺激因子因子GM-CSF,G-CSF也有明显抑制作用。因此FK506发挥免疫抑制功能可能通过抑制免疫细胞分泌各类细胞因子来实现。同时,由于FK506与细胞因子的分泌有剂量依赖关系,有望可以通过FK506浓度水平与细胞因子的抑制水平的依赖关系来评估临床病人FK50...     

CaN抑制剂对H2O2诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响

目的：探讨过氧化氢（H₂O₂）诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡以及钙调神经磷酸酶（CaN）抑制剂他罗利姆（FK506）对细胞的保护作用,为心肌缺血/再灌注所致的心肌损伤及拮抗机制提供实验依据。方法：将大鼠H9c2心肌细胞株体外培养进行实验,实验分为正常对照组（n=6）和H₂O₂各处理组（n=6）。正常对照组采用生理盐水,实验各组分别用50、100、200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理1、 6和24 h后,用罗丹明（Rhodamme-123）荧光探针检测心肌细胞线粒体膜电位(Δψmt)变化,用Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;并采用100 μmol•L^-1 H₂O₂处理6 h建立大鼠心肌细胞凋亡的损伤模型,给予高、低剂量FK506（0.60和0.15 μmol•L^-1）干预,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率。结果：①100、200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理组1 h 时线粒体膜电位均较对照组显著升高（P<0.01）, 6和24 h时,200和400 μmol•L^-1组Δψmt值均低于100 μmol•L^-1 组（P<0.05）,且400 μmol•L^-1组低于200 μmol•L^-1组（P<0.05）;②200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理组1　h 时心肌细胞凋亡率和坏死率均较对照组显著增加（P<0.05）,24　h达高峰。③ 高、低剂量FK506干预组与单纯100 μmol•L^-1H₂O₂处理组比较,心肌细胞凋亡率均明显降低（P<0.01）,高、低剂量组比较差异无显著性（P>0.05）。结论：H₂O₂可损伤心肌细胞线粒体,引起线粒体膜电位下降,导致细胞凋亡。CaN抑制剂对H₂O₂诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡具有保护作用。