Survivin-siRNA抑制肺癌A549细胞的增殖并增强其对顺铂的敏感性

目的：构建靶向存活素（survivin）的干扰RNA（siRNA）质粒,观察其对A549细胞增殖、凋亡以及顺铂敏感性的影响。方法：应用pSilencerU6质粒构建survivinsiRNA干扰质粒,RTPCR和Western blotting检测survivin mRNA和蛋白的表达,DAPI染色法检测细胞的凋亡,MTT法检测细胞的增殖。结果：成功构建了survivinsiRNA干扰质粒。SurvivinsiRNA质粒转染可明显下调A549细胞中survivin mRNA和蛋白的表达、抑制A549细胞的增殖、促进细胞的凋亡、增强A549细胞对顺铂的敏感性。结论：SurvivinsiRNA沉默survivin在肺癌细胞中的表达能够抑制肿瘤细胞的增殖、促进细胞凋亡,并能增强肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性,survivin 可作为肺癌治疗的潜在靶点。     

降调ACSS2对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响

背景与目的：代谢水平的改变是肿瘤细胞生长的主要特征之一,有研究证实,乙酰辅酶A合成酶2(cytosolic acetyl-CoA synthetase 2,ACSS2)在肿瘤细胞的代谢中起着至关重要的作用。本研究拟通过RNA干扰技术抑制非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞中ACSS2的表达,探讨ACSS2对A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法：设计并合成针对ACSS2的特异性干扰片段ACSS2-siRNA及与ACSS2没有同源性的阴性对照,瞬时转染NSCLC A549细胞,通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quan-titative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测ACSS2 mRNA的表达情况,四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验检测转染组与对照组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果：通过转染体外合成的干扰片段ACSS2-siRNA,NSCLC A549细胞中ACSS2 mRNA呈显著低表达。ACSS2-siRNA干扰组的细胞较对照组增殖活性明显减弱,凋亡增加,迁移能力减弱。结论：降调ACSS2表达能显著抑制A549细胞增殖、迁移能力,促进凋亡尤其是早期凋亡明显增加。     

Stathmin siRNA表达载体的构建及对LM8细胞生物学行为的影响

背景与目的:Stathmin在多种恶性肿瘤细胞中都有高水平表达,通过抑制其表达可以干扰恶性肿瘤细胞的分裂,影响肿瘤细胞的增殖与凋亡。本研究构建并观察stathmin基因RNA干扰表达载体转染LM8细胞系后对stathmin表达及细胞生物学行为的影响。方法:构建靶向stathmin干扰质粒pGenesil-1-Stathmin和通用对照质粒pGenesil-1-HK,以脂质体法将2个重组质粒分别转染骨肉瘤LM8细胞系。实时荧光定量PCR和Western印迹技术检测各组LM8细胞系stathmin在mRNA和蛋白水平的表达,MTT(噻唑蓝)法比色分析检测细胞体外生长抑制率,软琼脂集落形成实验观察单个细胞体外增殖活力,细胞HE染色观察细胞形态学的变化,Hoechst染色观察细胞凋亡特征并计算凋亡率,流式细胞术定量分析细胞周期变化,C3H小鼠移植瘤实验显示肿瘤细胞成瘤能力。结果:DNA测序证实成功构建pGenesil-1-Stathmin重组质粒。转染LM8细胞后,明显抑制stathmin基因表达;细胞体外生长抑制率显著增加;单个细胞体外增殖活力显著下降;细胞HE染色部分细胞呈典型的凋亡细胞形态学改变;Hoechst染色显示细胞凋亡特征,细胞凋亡率明显高于对照组;流式细胞术检测显示细胞周期阻滞于G2/M期,明显高于对照组;C3H小鼠移植瘤实验显示特异转染组致瘤率下降,肿瘤生长减缓。结论:成功构建的靶向干扰质粒pGenesil-1-Stathmin能有效抑制stathmin基因在骨肉瘤LM8细胞的表达并影响其相关生物学行为,其抑制骨肉瘤细胞的增殖与生长,为stathmin基因应用于骨肉瘤的基因治疗研究奠定了理论基础。     

氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53基因对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨氧化铁磁性纳米颗粒介导野生型p53基因（wild type p53,wt-p53）对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP增殖抑制和凋亡诱导的作用。方法：氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53转染肺腺癌细胞A549/DDP作为实验组,以纳米颗粒介导空载体pcDNA3转染作为阴性对照组,脂质体介导wt-p53转染作阳性对照组。MTT法和绘制生长曲线观察基因转染对A549/DDP细胞增殖抑制作用,荧光显微镜、流式细胞术观察其对A549/DDP细胞诱导凋亡作用,RT-PCR检测其对A549/DDP细胞Bax mRNA表达的影响。结果：氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53对人肺腺癌细胞A549/DDP增殖有持续的抑制作用,而以脂质体介导wt-p53对增殖抑制作用持续时间短暂;纳米颗粒介导wt-p53对人肺腺癌细胞A549/DDP诱导凋亡作用明显强于以脂质体载体;同时介导wt-p53上调Bax mRNA表达水平的作用也明显强于以脂质体载体。结论：氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53转染对人肺腺癌细胞A549/DDP有持续的增殖抑制和诱导凋亡的作用。     

pVAX-iNOS真核表达载体的构建及其抗肺癌作用研究

背景与目的 iNOS与NO介导的抗肿瘤效应有关.本研究旨在构建pVAX-iNOS载体并转染A549肺癌细胞,检测其基因的表达并初步探讨iNOS基因表达增高后对A549肺癌细胞的抗肿瘤作用.方法 应用RT-PCR方法扩增人iNOS编码序列的CDS片段,构建pVAX-iNOS载体后转染肺癌A549细胞,通过RT-PCR和Western blot方法检测目的基因的表达;采用MTT法、Hoechst 3235染色和划痕实验分别检测iNOS高表达在体外对肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移作用的影响.结果 真核表达质粒载体pVAX-iNOS构建成功,iNOS蛋白在转染后的A549细胞中表达升高.pVAX-iNOS转染A549肺癌细胞后能明显诱导细胞发生凋亡并抑制肿瘤细胞的生长和迁移.结论 本研究成功构建pVAX-iNOS真核表达质粒,高表达iNOS能明显抑制A549细胞的增殖、迁移并促进细胞发生凋亡.本研究有望为临床治疗肺癌提供一个新的有效策略.     

布鲁生抑制非小细胞肺癌细胞环氧化酶2表达的研究

背景与目的:布鲁生是中药马钱子有效成分之一,具有镇痛、抗炎和抑制血小板聚集等多种药理活性.鉴于该药物的细胞毒性,研究表明其具有明显的抑制肿瘤细胞生长的作用.本研究旨在观察布鲁生对人非小细胞肿痛细胞A549增殖与凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:MTT法检测布鲁生对A549细胞存活的影响;流式细胞仪、荧光显微镜法研究布鲁生对A549细胞凋亡的影响;酶联吸附法检测布鲁生对A549细胞释放PGE2的影响;RT-PCR法检测布鲁生对A549细胞COX-2 mRNA的影响;Western印迹法检测布鲁生对环氧化酶COX-2蛋白表达的影响:荧光素酶报告基因法检测布鲁生对COX-2转录活性的影响.结果:布鲁生能明显抑制A549细胞增殖,并旱剂量依赖性诱导A549细胞凋亡;能抑制A549细胞中环氧化酶COX-2的表达与PGE2的释放.过度表达COX-2能抑制布鲁生诱导的细胞凋亡;COX-2 SiRNA处理细胞后能明显增强布鲁生诱导的A549细胞凋亡作用.布鲁生能显著性抑制COX-2的转录激活.结论:COX-2是布鲁生诱导细胞凋亡重要的靶蛋白.     

靶向EGFR的RNA干扰诱导非小细胞肺癌细胞A549凋亡的研究

目的:探讨短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)介导的靶向EGFR基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549的凋亡诱导作用。方法:构建靶向人EGFR基因的表达shRNA的质粒(pShEGFR),转染A549细胞,应用RT-PCR分析EGFR mRNA的表达情况,采用MTT法检测A549细胞的生长状况,通过流式细胞仪以及PI染色法进行细胞凋亡的定量检测和形态学分析。结果:pShEGFR转染组A549细胞中EGFR mRNA的表达水平,较转染同一载体连接无关序列的对照组(pShNEG组)、单纯脂质体组及PBS阴性对照组A549细胞均明显降低,F=425.640,P=0.000,其中较PBS阴性对照组细胞降低了74.5%。转染pShEGFR的A549细胞与3种不同对照组细胞相比,生长受到明显抑制,F=107.428,P=0.000,生长抑制率达54.9%,而转染pShNEG组和单纯脂质体组的A549细胞生长抑制率则分别为20%和3.1%。流式细胞仪检测结果显示,pShEGFR组细胞存在32.8%的凋亡率,PI荧光染色可见pShEGFR组细胞呈现出典型的凋亡形态学变化。结论:质粒介导的靶向人EGFR基因的pShEGFR能够有效地干扰NSCLC细胞系A549中EGFR基因的表达,进而抑制肿瘤细胞的生长,诱导肿瘤细胞的凋亡。     

人Id3基因在肺腺癌A549细胞中的表达及其对细胞生长的抑制

目的：研究外源性分化抑制因子3（Inhibitor of differentiation3，Id3）基因表达对人肺腺癌细胞系A549细胞生长的抑制作用。方法：构建磁，和EGFP的融合基因表达载体pEGFP／Id3，采用脂质体转染技术将pEGFP／Id3导入A549细胞。FCM分析转染细胞EGFP表达效率，荧光显微镜观察EGFP表达情况；半定量RT—PCR、免疫细胞化学分析转染后A549细胞Id3mRNA和蛋白的表达。MTT法检测转染后A549细胞生长抑制情况，FCM分析A549细胞周期进程，AnnexinV／7-AAD和Hoechst33258染色检测转染后细胞的凋亡情况。结果：成功构建入肚，与EGFP融合基因表达载体pEGFP／Id3；荧光显微镜和FCM观察到EGFP的有效表达，转染48—72h时EGFP表达率最高；Id3mRNA及蛋白在转染后的A549细胞中能有效表达。转染后48h和72h，pEGFP／Id3转染组A549细胞生长受到明显抑制（P〈0．01）；细胞周期分析表明，pEGFP／Id3转染组G0／G1期细胞显著高于对照组（P〈0．05）；AnnexinV／7-AAD双染结果显示，pEGFP／Id3转染组细胞的早期凋亡率[（10．67±2．60）％]显著高于pEGFP组[（3．39±2．21）％]和未转染组[（2．35±0．95）％]（P〈0．05）；Hoechst33258染色结果也证实pEGFP／Id3组A549细胞出现明显凋亡形态特征。结论：外源性加基因在肺腺癌A549细胞中的表达能抑制细胞增殖，并诱导细胞凋亡。     

藤黄酸调节肺腺癌A549细胞甾体类受体共激活因子3表达的意义

目的 观察藤黄酸对人肺腺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响,及其对甾体类受体共激活因子3(SRC-3)表达的调控作用.方法 以不同浓度的藤黄酸处理人肺腺癌A549细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性,Hoechst 33258染色法分析细胞凋亡的改变,共聚焦显微镜观察A549细胞中SRC-3蛋白的分布情况,Western blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测藤黄酸对A549细胞中SRC-3 mRNA和蛋白表达的影响.结果 藤黄酸能明显抑制A549细胞的增殖,其抑制作用呈时间和浓度依赖性,24和48 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为(3.17.4±0.13)μmol/L和(1.85±0.08)gmol/L.藤黄酸能使A549细胞出现典型的细胞凋亡形态改变.空白对照组的A549细胞中,SRC-3 mRNA和蛋白均呈高表达,且主要分布于细胞核;经藤黄酸处理后,A549细胞中SRC-3 mRNA和蛋白的表达水平均明显下降.结论 藤黄酸能明显抑制人肺腺癌细胞3.549的增殖,并可能通过下调SRC-3 mRNA和蛋白的表达量而诱导A549细胞产生凋亡.藤黄酸有望成为治疗肺癌的新型靶点药物.     

靶向转录因子STAT3的Decoy核苷酸对膀胱癌细胞体外增殖的抑制作用

目的： 〖HT5"SS〗研究核转录因子STAT3的诱骗寡核苷酸(decoy ODNs)对人膀胱癌细胞系增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。〖HT5W〗方法： 〖HT5”SS〗采用阳离子聚合物Sofast为转染试剂将STAT3 decoy ODNs转染入膀胱癌T24及5637细胞;用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测ODNs的转染效率;荧光显微镜检测ODNs入核情况;RTPCR及Western blot检测转染ODNs前后bclxl、cyclinD1和cmyc表达水平的变化。〖HT5W〗结果：〖HT5"SS〗ODNs可有效地转染至细胞内,部分可进入核内,转染效率呈剂量依赖关系;STAT3 decoy ODNs可抑制膀胱癌细胞的增殖,100 nmol/L组抑制率最明显,达40%～48%;100 nmol/L decoy ODNs明显抑制bclxl、cyclinD1和cmyc mRNA及蛋白的表达水平。〖HT5W〗结论：〖HT5"SS〗STAT3 decoy ODNs可显著抑制膀胱癌细胞的增殖,其作用机制可能是通过下调癌基因cmyc、细胞周期基因cyclinD1及凋亡相关基因bclxl的基因转录及蛋白表达而实现的。     

Sp1 decoy transfected to carcinoma cells suppresses the expression of vascular endothelial growth factor, transforming growth factor beta1, and tissue factor and also cell growth and invasion activities

Vasculature development is thought to be an important aspect in the growth and metastasis of solid tumors. Among the angiogenic factors produced by tumor cells, vascular endothelial growth factor is considered to be the most potent and pathologically important. The synthesis of this growth factor has been shown to be modulated through Sp1 function following stimulation by tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha). Oligodeoxynucleotides (ODNs) were synthesized with either the consensus sequence for Sp1 binding (Sp1 decoy ODNs) or a mutated form of this sequence (mt-Sp1 decoy ODNs). Using the hemagglutinating virus of Japan (HVJ)-liposome method, we transferred these ODNs into cultured cancer cells (A549 and U251 cells). The TNF-alpha-mediated expression of both VEGF and transforming growth factor beta1 and tissue factor (TF) by the cancer cells could be simultaneously suppressed to less than 30% by transfection of Sp1 decoy ODNs but not by mt-Sp1 decoy ODNs. In addition, in vitro invasiveness, synthesis of mRNA for urokinase-type plasminogen activator, and cell proliferation of both cell lines were also inhibited to 40% by the transfection of only Sp1 decoy ODNs. These results suggested that the Sp1 decoy strategy would be effective for regulating tumor growth by simultaneously reducing cancer cell (a) angiogenic growth factor expression, (b) proliferation, and (c) invasiveness.     

黄连素对肺腺癌A549细胞增殖、迁移与黏附的影响

背景与目的：研究表明,黄连素在清热解毒、抗菌消炎的同时,还具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,但最近的研究认为黄连素还能抑制肿瘤细胞的转移和扩散。为了进一步探讨黄连素对肿瘤细胞转移的作用及机制,本研究对黄连素作用后的肺腺癌A549细胞的增殖、迁移及黏附能力进行了检测。方法：应用MTT法检测不同浓度黄连素作用后细胞增殖情况;通过划痕试验和黏附试验测定黄连素作用前后细胞迁移和黏附能力;半定量RT-PCR法检测MMP2、MMP9的mRNA表达;明胶酶谱法测定MMP2、MMP9的活性。结果：黄连素能显著抑制A549增殖,并呈现一定的量效和时效关系（P〈0.05）;细胞的迁移率和黏附率明显降低,并且呈现剂量依赖性（P〈0.05）;经黄连素作用后的A549细胞,MMP2和MMP9的mRNA的表达明显降低,MMP2和MMP9降解明胶的能力下降,尤以100μg/mL的作用最为明显（P〈0.05）。结论：黄连素能够抑制A549细胞的迁移和黏附能力,其机制可能与下调MMP2和MMP9的mRNA表达,从而降低其活性有关。     

HnRNP E2诱骗RNA对白血病K562细胞增殖的影响及其可能机制

背景与目的:BCR/ABL诱导多聚胞嘧啶结合蛋白E2[poly(rC)-bindingproteinE2,hnRNPE2]的异常表达在慢性粒细胞白血病(chronicmyeloidleukemia,CML)急变中起着重要作用。本研究探讨hnRNPE2诱骗RNA(decoyRNA)对人白血病细胞K562增殖的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法:构建能转录出hnRNPE2诱骗RNA的质粒载体,将其经阳离子脂质体介导转染K562细胞,用G418筛选出稳定表达的细胞,台盼蓝法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,并用RT-PCR和Westernblot方法检测下游CCAAT增强子结合蛋白!(CCAAT/enhancer-bindingprotein!,C/EBPα)和c-myc的表达。结果:稳定表达诱骗RNA的K562细胞增殖受抑,增殖抑制率为(62.73±12.92)%;细胞周期阻滞于S期[稳定表达诱骗RNA细胞组(55.59±4.67)%,对照组(44.70±4.21)%,P<0.05];C/EBPαmRNA无改变,但在蛋白水平42ku-C/EBPα表达升高了(49.72±5.58)%;c-mycmRNA下降了(58.27±7.23)%,蛋白水平降低了(57.26±6.52)%。结论:hnRNPE2诱骗RNA能抑制K562细胞的增殖,其机制可能与诱骗RNA阻断hnRNPE2和C/EBPαmRNA的结合后,引起42ku-C/EBPα表达升高有关。     

TSPAN8对肺癌A549细胞体外增殖的影响及机制

目的：研究TSPAN8基因对A549肺癌细胞增殖的促进作用及其机制。方法：选取A549为研究对象,MTT法检测转染TSPAN8质粒对细胞增殖的作用;采用流式细胞仪技术检测转染TSPAN8质粒对细胞周期的影响;Real－time PCR和免疫印迹法检测TSPAN8基因对Rb1、E2F1、C－myc、CDK4、Cyclin D1以及ERK信号分子蛋白活性的影响。结果：TSPAN8基因能明显促进A549肺癌细胞的体外增殖能力;Real－time PCR和Western blot显示,转染TSPAN8基因后,E2F1、C－myc、CDK4、Cyclin D1的mRNA和蛋白表达上调,而Rb1的表达明显下调,而且p－ERK磷酸化水平亦明显上升。结论：TSPAN8基因能促进A549肺癌细胞的增殖,其作用可能与调控E2F1、C－myc、CDK4、Cyclin D1基因的表达,以及活化ERK相关信号通路相关。     

紫龙金对人非小细胞肺癌A549细胞生长及VEGF表达的影响

观察紫龙金和顺铂对人非小细胞肺癌A549细胞增殖及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,探讨中药紫龙金抗癌机制。方法:体外培养A549细胞,采用MTT法检测紫龙金和顺铂对细胞生长的影响,RT-PCR定量检测细胞VEGF的表达,ELISA法检测细胞上清液中VEGF含量变化。结果:紫龙金和顺铂均可抑制A549细胞的增殖,细胞存活率随药物浓度的升高而下降（F紫龙金=4 996.216,P紫龙金<0.001;F顺铂=6 834.121,P顺铂<0.001）。同一药物浓度,细胞存活率随处理天数的增加而下降（F紫龙金=13.366,P紫龙金<0.001;F顺铂=1 471.067,P顺铂<0.001）。紫龙金作用24 h和72 h,A549细胞VEGF mRNA的表达随药物浓度提高而下降（F=216.826,P<0.001）;而顺铂作用24 h,VEGF表达反而随浓度升高而上升。顺铂与紫龙金配伍后,随药物浓度的提高对VEGF表达均表现出抑制作用（F=4.318,P<0.05）。结论:紫龙金能抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖,下调细胞VEGF表达,体现出多靶点抗癌作用;顺铂通过抑制细胞周期抑制A549细胞增殖,未见抑制VEGF转录水平的表达。      

转染外源CC10对肺腺癌细胞系A549的CyclinD1蛋白及mRNA的影响(英文)

目的研究转染外源性CC10基因对肺腺癌A549细胞株的细胞周期及周期蛋白CyclinD1蛋白和mRNA表达影响。方法用脂质体法分别将外源性抑癌基因CC10转染到人肺腺癌细胞株A549中,8h、16h、24h、36h、48h后,分别用Western blot法检测转染CC10基因的A549细胞CC10蛋白表达,用流式细胞仪观察细胞周期的变化,用免疫细胞化学及RT-PCR检测转染CC10基因对周期蛋白CyclinD1蛋白、mRNA的影响。结果转染外源CC10基因对A549细胞生长具有抑制作用,细胞生长阻止于G0／G1,细胞周期S期+G2／M期比例下降。转染外源 CC10基因的A549细胞CC10蛋白表达增高,而CyclinD1的蛋白及mRNA表达明显降低。结论转染外源CC10基因对肺癌细胞G0／G1周期的抑制作用可能与CyclinD1基因表达下调有关。