补肾活血中药对激素性股骨头坏死家兔骨髓基质干细胞增殖的影响

目的探讨补肾活血中药对激素性股骨头坏死家兔的骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖的影响。方法对正常家兔及激素性股骨头坏死家兔骨髓基质干细胞分离、筛选、培养后,选择第3代家兔BMSCs,将5%、10%、20%体积分数补肾活血方含药血清对上述第3代家兔BMSCs进行干预,通过MTT法观察不同时间BMSCs增殖情况。结果 (1)经过含药血清的培养基培养的第3代细胞增殖速度明显的优于前者;(2)补肾活血方含药血清组A490值均高于同体积分数正常血清组(P<0.05),同时,补肾活血方含药血清组A490值随着含药血清体积分数增加而上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论补肾活血生骨法对激素性股骨头坏死家兔BMSCs增殖和分化有明显促进作用,其作用强度随浓度、时间而改变。     

TGF-β1对rhBMP-2促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖分化的影响

目的观察转化生长因子β1(TGF-β1)对重组骨形态蛋白2(rhBMP-2)促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖分化的影响。方法分离培养骨髓间充质干细胞,然后加入不同浓度的rhBMP-2,用MTT法检测细胞增殖情况,通过ELISA法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性评估其骨向分化能力。同时加入TGF-β1观察其对rhBMP-2协同促进能力。结果不同浓度rhBMP-2对骨髓间充质干细胞(MSCs)进行处理后检测出的吸光度值(D值)及ALP活性检测值均较阴性对照组明显升高(P<0.05),随着浓度增加,其促进作用有所提高。而TGF-β1+rhBMP-2组检测到的吸光度值及ALP活性升高更明显。结论 TGF-β1能够有效促进rhBMP-2对MSCs的增殖和成骨分化作用。     

补肾强督方对骨髓间充质干细胞成骨过程Wnt通路中因子表达的影响

目的:研究补肾强督方含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨过程Wnt/β-catenin通路中因子表达的影响。方法:BMSCs细胞分为空白对照组、西药对照组、补肾强督方低中高剂量组,分别进行成骨诱导分化,茜素红染色法检测各组成骨程度,实时荧光定量PCR检测GSK3β、wnt5a和SOST基因mRNA表达,Western blot检测Wnt/β-catenin通路关键因子GSK3β、wnt5a和SOST蛋白表达。结果:空白组BMSCs成骨分化培养后可见明显矿化结节形成,补肾强督方干预组未见明显矿化结节。与空白对照组比较,补肾强督方含药血清组BMSCs中SOST、GSK3β蛋白表达显著升高,Wnt5a蛋白的表达显著降低(P<0.05)。与空白对照组比较,补肾强督方含药血清组BMSCs中SOST、GSK3βmRNA的表达显著升高,Wnt5a mRNA的表达显著降低(P<0.05)。结论:补肾强督方含药血清具有抑制强直性脊柱炎骨化的作用,其机制可能与抑制BMSCs成骨过程中的Wnt/β-catenin信号通路相关。     

生脉成骨胶囊对激素性股骨头坏死髋周间充质细胞增殖的影响

目的观察生脉成骨胶囊对激素性股骨头缺血性坏死大鼠股骨和髂骨间充质干细胞增殖及成骨细胞矿化结节生成的作用。方法将60只SD雄性大鼠随机分为6组：空白对照组、模型组、生脉成骨预防组、阿仑磷酸钠治疗组、丹郁骨康治疗组、生脉成骨治疗组,通过测定骨髓间充质细胞的增殖能力、成骨细胞矿化结节数,观察生脉成骨胶囊对股骨和髂骨近端成骨能力的影响。结果生脉成骨胶囊组股骨、髂骨骨髓间充质干细胞向成骨细胞转化增殖的水平和股骨、髂骨成骨细胞矿化结节数明显高于模型组,且生脉成骨预防组髂骨上述指标显著高于其他治疗组。结论生脉成骨胶囊能促进股骨、髂骨骨髓间充质细胞向成骨细胞转化增殖及促进矿化结节形成,从而促进激素性股骨头缺血性坏死模型大鼠成骨。     

土鳖虫对激素诱导骨髓间充质干细胞PPARγ和aP2mRNA表达的影响

目的 探讨激素性股骨头缺血坏死的发病机理及土鳖虫防治该病的作用机制. 方法 通过大剂量激素诱导体外培养的骨髓间充质干细胞成脂分化,同时给予土鳖虫含药血清干预.检测干预6天后细胞内成脂标志物PPARymRNA和aP2mRNA的表达. 结果 土鳖虫含药血清可对抗激素诱导下的BMSCs PPARymRNA和aP2mRNA表达的增加. 结论 土鳖虫防治激素性股骨头缺血坏死的机理不仅是改善股骨头的微循环,同时还与其抑制激素诱导下的BMSCs成脂分化有关.     

补肾中药成分配伍调控RUNX2、OSX对大鼠BMSCs成骨分化的影响

目的观察补肾代表中药淫羊藿、补骨脂、女贞子、何首乌有效成分对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及向成骨细胞定向分化的影响。方法将65只SPF级SD雌性大鼠随机分为正常对照组、阳性转化液对照组、补肾中药配伍组(补肾中药1组、2组、3组、4组、5组、6组、7组、8组、9组)、非补肾中药对照组(黄芪甲苷组、川芎嗪组)。通过血清药理学方法,对实验大鼠连续灌胃给药3 d后,取材获得含药血清,使用各组大鼠含药血清培养骨髓间充质干细胞6 d、12 d、18 d;用茜素红染色对钙化结节进行成骨细胞鉴定;应用MTT法检测骨髓间充质干细胞的增殖率,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,用实时定量PCR法检测核心结合蛋白因子2(RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)的基因表达。结果补肾中药有效成分不同配伍含药血清作用于体外培养骨髓间充质干细胞72 h,可以促进骨髓间充质干细胞的增殖。ALP在12 d达到高峰值。Real-Time PCR结果显示补肾中药有效成分能上调RUNX2、OSX的基因表达。结论补肾中药有效成分配伍能提高骨髓间充质干细胞增殖率,促进骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞,其机制与补肾中药有效成分配伍能上调RUNX2、OSX的基因表达相关。     

桃红四物汤对激素性股骨头缺血坏死模鼠TGF-β_1 mRNA转录的影响

目的 观察桃红四物汤对激素性股骨头缺血性坏死大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA转录的影响,探讨其防治激素性股骨头坏死的作用机制.方法 模型组每周2次腹腔注射醋酸泼尼松龙24.5 mg/kg,经6周诱导出早期激素性股骨头缺血坏死的模型,随机分为治疗组16只和对照组16只,分别灌服桃红四物汤和生理盐水,在灌胃后第6、8周,检测股骨头局部TGF-β1mRNA的转录水平.结果 治疗组股骨头局部TGF-β1 mRNA的转录水平呈逐渐增强的趋势,而对照组股骨头局部TGF-β1 mRNA的转录水平则呈逐渐减弱的趋势,2组差异显著.结论 桃红四物汤可促进激素性股骨头缺血坏死模鼠股骨头局部TGF-β1 mRNA的转录水平,促进坏死股骨头的修复.     

右归饮诱导骨髓间充质干细胞修复兔激素型股骨头坏死的实验研究

目的观察补肾中药右归饮诱导兔自体骨髓间充质干细胞修复兔激素型股骨头坏死的疗效,并探究其病理生理机制。方法将24只新西兰白兔随机分为右归饮组、激素对照组、空白对照组3组,每组8只。右归饮组及激素对照组使用马血清联合地塞米松注射制作早期股骨头坏死模型,造模开始4周后(第5周起)右归饮组予右归饮汤剂,每日10 ml/kg灌胃,激素对照组、空白对照组均使用生理盐水,每日10 ml/kg灌胃。每2周留取血液样本测定各组甘油三酯、总胆固醇含量及甲状腺激素水平。各组兔自第1次注射马血清(空白对照组为生理盐水)起分别于第10、14、18周末以过量麻醉方法处死各2只,行HE染色对照观察股骨头软骨下骨各细胞形态及空骨陷窝数目,同时分离纯化各组兔股骨髓腔内间充质干细胞,行MTT、ALP定量对比各组间间充质干细胞增殖及向成骨方向分化的能力。结果与激素对照组相比,各时间段右归饮组甘油三酯及总胆固醇含量均明显降低(P 0. 05),甲状腺激素水平明显升高(P 0. 05),空骨陷窝数明显较对照组减少而骨小梁数目明显较多(P 0. 05),MTT法显示右归饮明显增强兔自体间充质干细胞增殖能力(P 0. 05),ALP定量显示右归饮组与激素对照组相比明显具有更强的促成骨反应(P 0. 05)。结论右归饮对兔激素性股骨头坏死股骨近端自体骨髓间充质干细胞的增殖和成骨活性具有较为明显的促进作用,且能显著降低该模型的血脂含量。     

TGF-β1 对骨髓间充质干细胞在无氧无血清条件下凋亡的影响

目的:探讨TGF-β1 对骨髓间充质干细胞(MSCs)在无氧无血清条件下凋亡的影响.方法:取大鼠骨髓,体外分离,扩增培养MSCs;TGF-β1腺病毒或对照GFP腺病毒转染MSCs.细胞分为TGF-β1-MSCs组、GFP-MSCs组,MSCs组.RT-PCR检测TGF-β1基因的表达;无氧无血清条件下分别诱导各组细胞 4,8,12 h, 流式细胞仪检测凋亡变化;RT-PCR检测 bcl-2 mRNA的表达.结果:TGF-β1转染的MSCs表达TGF-β1基因水平与GFP-MSCs组,MSCs组相比均增加(P＜0.05);细胞在无氧无血清条件下诱导4,8,12 h,后TGF-β1-MSCs组的凋亡率与GFP-MSCs组,MSCs组的凋亡率相比降低(P＜0.05),且随时间的推移呈升高的趋势(P＜0.05);bcl-2 mRNA在无氧无血清条件下诱导4 ,8,12 h后的表达水平TGF-β1-MSCs与GFP-MSCs、MSCs相比均增加(P＜0.05),且随时间的推移均呈降低趋势(P＜0.05).结论:TGF-β1修饰的MSCs可稳定高效表达TGF-β1基因;TGF-β1-MSCs通过上调bcl-2 mRNA水平抑制无氧无血清诱导的凋亡.     

从股骨近端骨髓分化为破骨细胞能力的改变探讨激素性股骨头的坏死机制

目的从股骨近端骨髓体外分化为破骨细胞能力的改变来探讨激素性股骨头坏死的发病机制。方法取激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓,建立人骨髓基质干细胞诱导分化为破骨细胞的培养体系,通过观察多核细胞的形态、抗酒石酸酸性磷酸酶染色以及进一步培养于牛薄骨片扫描电镜观察以检测骨髓形成破骨细胞的能力。结果与正常组相比,多核细胞的形态、抗酒石酸酸性磷酸酶染色（P〈0.01）以及进一步培养于牛薄骨片扫描电镜观察表明激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓体外分化为破骨细胞的能力及活性上升。结论激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓基质干细胞体外分化为破骨细胞的能力和活性上升。     

富血小板血浆诱导骨髓基质干细胞联合软骨支架治疗兔激素性股骨头坏死

目的 观察自体富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)诱导骨髓基质干细胞联合同种骨软骨支架治疗早期兔激素性股骨头坏死的疗效,探索早期股骨头坏死治疗的新方法.方法 采用含有抗凝剂的真空采血管从实验兔的耳中央动脉采取动脉血5 mL,再通过离心方法获取PRP,用16号骨髓穿刺针从实验兔自体股骨髓腔抽取骨髓5 mL,把抽取的骨髓进行密度梯度离心,获取兔骨髓基质干细胞,并进行细胞原代培养和成骨诱导.对已获取PRP和骨髓基质干细胞的实验兔进行激素性股骨头坏死造模,取同种股骨髁部骨软骨制作软骨支架,最后以制备的软骨支架为载体,将经过成骨诱导的骨髓基质干细胞移植到软骨支架上,形成细胞-支架复合物,用16号骨髓穿刺针对坏死的股骨头进行髓芯减压术,术中将细胞-支架复合物植入坏死的股骨头下.实验动物共分为4组,每组20只,A组为空白对照;B组仅进行髓芯减压;C组髓芯减压后植入经过成骨诱导培养的细胞;D组髓芯减压后植入细胞-支架复合物.实验后在第2、4、8周各组分别处死6、6、8只,每只实验兔的股骨头行大体标本及组织学检查.结果 D组治疗效果最显著,通过空骨陷窝计数发现D组与其他各组的差异有统计学意义(P<0.05).结论 骨髓基质干细胞通过PRP的诱导向成骨细胞分化;软骨支架材料为骨髓基质干细胞向成骨细胞分化提供良好的空间结构,有利于其向成骨细胞分化;PRP和软骨支架材料联合应用可促进早期兔激素性股骨头坏死的修复.     

补肾活血健骨方含药血清对人成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的 观察补肾活血健骨方含药血清对体外培养的人成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响,为其治疗骨质疏松症提供理论依据。方法 取骨质疏松症合并股骨颈骨折患者松质骨进行成骨细胞培养,构建成骨细胞分化模型;制备低、中、高3种浓度的补肾活血健骨方含药血清;采用MTT法、细胞上清液ALP测定和茜素红染色观察含药血清对成骨细胞的影响。结果 加入含药血清干预细胞生长48h后,MTT检测显示中、高剂量组出现不同程度的细胞增殖现象,并存在一定程度的剂量依赖;作用72h后,低、中、高3个剂量组ALP活性增高,高剂量组茜素红染色钙盐沉积明显增多。结论 补肾活血健骨方含药血清具有促进体外培养的人成骨细胞增殖、分化及矿化的作用。      

rhBMP2/TGF-β对β-磷酸三钙与骨髓基质细胞自体皮下成骨能力的影响

目的：观察rhBMP₂/TGF-β对β-磷酸三钙与骨髓基质细胞在自体皮下成骨能力的影响。方法：应用矿化条件培养液体外培养成年新西兰兔的骨髓基质细胞,收集细胞并以5×10⁶,·mL^-1浓度分成4组,A组加入rhBMP₂（15 μg）／TGF-β(30 ng) ,B组加入rhBMP₂（15 μg）,C组不加因子作为对照,然后将细胞接种在β-磷酸三钙上,体外培养3 d,D组细胞不接种材料上,继续体外培养。组织化学方法检测碱性磷酸酶。将复合物埋植于新西兰兔自体皮下。5周后常规HE染色、免疫组织化学染色并进行图像分析,观察Ⅰ型胶原、骨形成蛋白合成情况。结果：A、B组的碱性磷酸酶平均A值显著高于C、D组（P<0.01）;复合物植入皮下5周时HE染色见各组均有条索状骨基质形成, A、B组Ⅰ型胶原平均灰度值明显低于C组（P<0.01）,各组免疫组织化学检测及图像分析显示骨形成蛋白的表达差异无显著性（P>0.05）。结论：β-磷酸三钙与骨髓基质细胞在自体皮下能够形成骨组织,rhBMP₂/TGF -β较rhBMP₂有更强的促进骨形成作用。     

葛根素对激素诱导骨髓间充质干细胞PPARγmRNA和CEBPαmRNA表达的影响

目的探讨葛根素防治激素性股骨头缺血性坏死的作用机制。方法大剂量地塞米松诱导体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化,在诱导成脂的同时给予不同浓度的葛根素进行干预。干预6 d后检测细胞内成脂标志物PPARγmRNA和C/EBPαmRNA的表达。结果葛根素干预组PPARγmRNA和C/EBPαmRNA的表达较对照组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论葛根素防治激素性股骨头缺血坏死的机理不仅是改善股骨头局部的微循环,同时还与其抑制激素诱导下的BMSCs成脂分化有关。     

补肾活血方对膝骨性关节炎患者关节液中IL-1β、TGF-β1的影响

目的探讨补肾活血方对膝骨性关节炎(KOA)的临床疗效及作用机制。方法选择肾虚血瘀型KOA病人42例,共58个膝关节患者,口服补肾活血方进行治疗。分别于治疗前、治疗1个疗程及2个疗程后进行膝关节功能评分;采集患膝关节液,双抗体夹心ELISA法测定白细胞介素-1β(IL-1β)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的水平。结果治疗后患者膝关节功能评分明显提高,膝关节液中IL-1β水平逐渐下降,TGF-β1的水平逐渐升高,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论补肾活血方可降低KOA患者关节液中IL-1β水平,升高TGF-β1水平,改善KOA患者膝关节活动功能。     

成骨细胞及血管内皮细胞复合同种异体颗粒骨治疗大鼠股骨头坏死

目的 探讨骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)来源的大鼠同种异体成骨细胞(osteoblast,OB)及血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VEC)与同种异体颗粒骨复合后治疗大鼠创伤性股骨头坏死(osteonecrosis of th...     

补肾通督方对强直性脊柱炎患者血清TNF-α、TGF—β1及骨代谢的影响

目的：探讨补肾通督方治疗强直性脊柱炎（AS）骨代谢的作用机制。方法：65例AS患者随机分为治疗Ⅰ组（30例,用柳氮磺胺吡啶治疗）和治疗Ⅱ组（35例,用补肾通督方治疗）,并设正常组30例。采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组治疗前及治疗24周后血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、骨钙素（BGP）、Ⅰ-型胶原C末端肽（CTX）水平;同时采用双能X线（DEXA）骨密度仪测量治疗前后腰椎和股骨颈的骨密度（BMD）。结果：治疗前两组患者BMD降低,血清TNF—α、CTX水平升高,TGF-β1、BGP下降,与正常组比较有显著差异（P〈0．05,P〈0．01）;治疗后,治疗Ⅱ组各项指标均有不同程度改善（P〈0．05,P〈0．01）,且TNF—α、CTX和骨密度的改善明显优于治疗Ⅰ组（P〈0．05）。结论：补肾通督方可通过调节AS相关细胞因子网络平衡,抑制骨吸收、促进骨形成,有效治疗AS患者骨量丢失。     

地塞米松调节骨髓基质细胞成脂及成骨分化的组织化学研究

目的：观察地塞米松对骨髓基质细胞分化成脂肪细胞的影响,探讨激素性股骨头缺血性坏死的发病机制。 方法：骨髓基质细胞在含有不同浓度地塞米松的培养基中培养,苏丹Ⅲ染色作脂肪细胞计数。采用生化分析仪 测定细胞内甘油三酯含量及碱性磷酸酶活性。结果：脂肪细胞数随地塞米松浓度增大及作用时间延长而增多。 实验组甘油三酯含量明显高于对照组。碱性磷酸酶活性随地塞米松浓度增大而降低。结论：地塞米松能够直接 诱导骨髓基质细胞分化成脂肪细胞,减少其向成骨细胞分化,这可能与激素性骨坏死的发病机制有关。     

间隙连接蛋白-43调控骨组织细胞间平衡在激素性股骨头坏死中的研究进展

股骨头坏死是一种以股骨头内成骨细胞(osteoblast,OB)成骨活性降低,破骨细胞(osteoclast,OC)破骨活性增大,骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化降低、成脂分化增强,血管内皮细胞(endothelial cell,EC)受损、血供减少,致使股骨头内骨代谢处于负平衡状态的一种骨代谢疾病。股骨头坏死与骨组织细胞间信息传递异常密切相关。缝隙连接(gap junction,GJ)是相邻细胞间进行信息传递的一种膜通道结构,GJ在骨组织细胞间物质及信号传导通讯中起重要调控作用。通过GJ进行缝隙连接细胞通讯对上述骨代谢动态平衡具有重要作用;间隙连接蛋白-43(connexin 43,Cx43)是骨组织GJ中的重要组分。因此,GJ介导的细胞间信息传递与股骨头坏死等骨代谢疾病的发生密切相关。本文从GJ及Cx43在激素性股骨头坏死疾病中的研究进展作一综述。     

补肾化痰方对去卵巢大鼠骨组织中BMP-2和TGF-β1表达的影响

目的:观察补肾化痰方对去卵巢骨质疏松症大鼠骨组织中骨形态发生蛋白2(BMP-2)、转化生长因子β(1TGF-β1)表达的影响。方法:50只大鼠随机分为模型组、假手术组、西药组、中药低剂量组、中药高剂量组,除假手术组外,其他各组大鼠行双侧卵巢切除术,术后3个月治疗组开始灌胃给药,连续8 w;处死大鼠,免疫组化检测大鼠胫骨组织中BMP-2、TGF-β1的表达。结果:补肾化痰方低、高剂量组大鼠BMP-2、TGF-β1表达水平均明显高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾化痰方能改善骨代谢,对去卵巢大鼠骨质疏松症有较好的治疗作用。