鼻咽癌细胞株γ射线照射后端粒酶活性及各组表？…

目的 探讨γ射线照射鼻咽癌细胞株ＨＮＥ１后,端粒酶活性改变情况以及与端粒酶各组分基因表达的关系。方法 ＨＮＥ１在γ射线照射前和照射后不同时间,利用ＲＴＰＣＲ方法检测端粒酶亚单位人端粒酶ＲＮＡ（ｈｕｍａｎ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ＲＮＡ,ｈＴＲ）、人端粒酶相关蛋白（ｈｕｍａｎ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ１,ＴＰ１）和人端粒酶逆转录酶（ｈｕｍａｎ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔ     

鼻咽癌HNE1细胞株端粒酶的表达

目的探讨鼻咽癌HNE1细胞株端粒酶的表达.方法采用TRAPPCRELISA法检测人HNE1、白血病HL60、肺癌TUL1、正常骨髓细胞2例、培养的外周血单个核细胞及人血管平滑肌细胞株中端粒酶的表达.结果人HNE1,HL60及TUL1细胞株中端粒酶均为阳性表达;其余3种正常对照组细胞全部为阴性.HNE1细胞株热灭活后的端粒酶活性均为阴性,而在102个HNE1细胞中亦能检测到端粒酶活性.结论端粒酶在鼻咽癌HNE1细株中具有高表达.端粒酶活性测定具有较高的特异性及灵敏度.     

放疗诱导鼻咽癌细胞株CNE1热休克蛋白高表达

目的鼻咽癌是一种以放射治疗为主的头颈肿瘤,但部分鼻咽癌对放疗耐受。为了解鼻咽癌放疗耐受机制,本实验拟初步探讨人高分化鼻咽癌细胞株CNE1放疗后的蛋白质改变。方法利用固相pH梯度二维凝胶电泳,建立CNE1放疗前后总蛋白质2DE图谱,利用MALDI TOF MS及数据库搜索初步分析和鉴定部分放疗前后差异蛋白质点。结果高分子量酸性蛋白质在CNE1放疗后20min高表达,其中大多为热休克蛋白质HSPs(heatshockproteins,HSPs)。结论放射能诱导CNE1的热休克蛋白高表达,它们可能与鼻咽癌放疗耐受有关。     

维甲酸抑制鼻咽癌端粒酶和hTR表达及诱导凋亡的研究

目的:探讨维甲酸(RA)诱导鼻咽癌端粒酶及hTR表达下降和凋亡改变。方法:10-5mol/L维甲酸处理HNE1细胞后,采用TRAP PCR ELISA、逆转录巢式PCR、凋亡指数及透射电镜检测端粒酶、hTR表达及凋亡改变。结果:加入维甲酸6 d后,HN E1细胞形态不规则,细胞悬浮,细胞数减少,端粒酶及hTR表达受抑制,间接定量显示端粒酶活性(0.68±0.14)U只及对照组(1.16±0.46)U的1/2,凋亡指数及细胞明显高于对照组(P<0.05)。结论:维甲酸能明显抑制鼻咽癌细胞中端粒酶及hTR表达,并诱导该类肿瘤细胞增殖受阻及发生凋亡改变。     

鼻咽癌细胞中增强型表达载体调控TK基因与端粒酶活性关系的研究

目的:探讨人端粒酶催化亚单位(hTERT)基因核心启动子和原核增强子CMV联合调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦系统对TK基因的活性改变及与鼻咽癌细胞中端粒酶活性的关系。方法:将改良构建后的增强型载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp-CMV enhancer及单启动子载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp(作为对照组)分别转染端粒酶阳性的人鼻咽癌5-8F细胞株及对照组细胞人乳腺癌MCF-7细胞(端粒酶阳性)及正常人血管内皮ECV细胞(端粒酶阴性),采用荧光显微镜下观察其TK基因绿色荧光蛋白表达,实时荧光定量PCR方法检测转染细胞中TK基因mRNA定量表达差异,TRAP银染法检测肿瘤细胞转染前后端粒酶活性改变并分析TK基因表达与端粒酶活性之间的关系。结果:①增强型表达载体转染鼻咽癌5-8F细胞及乳腺癌MCF-7细胞均有很强的荧光表达及TK基因的mRNA表达,比单启动子pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp及ECV细胞绿色荧光要强。实时荧光定量PCR显示,增强型载体组A值亦较对照组明显增高。②转染增强型载体(加GCV)后TRAP银染法检测鼻咽癌5-8F细胞端粒酶活...     

短发夹RNA抑制hTERT基因对鼻咽癌细胞端粒酶活性及PCNA和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:研究靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的短发夹RNA(shRNA)对鼻咽癌细胞系(CNE)端粒酶活性及PCNA、Caspase-3蛋白表达的影响.方法:构建表达靶向hTERT mRNA特异的shRNA的质粒pEGFP-shTERT.将pEGFP-shTERT转染CNE细胞,TRAP PCR-ELISA法检测端粒酶活性,MTT法测定细胞增殖活性,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测蛋白表达.结果:pEGFP-shTERT成功转染入CNE细胞后, 端粒酶活性显著下降;细胞增殖活性明显受抑制;大量细胞凋亡;处理后24及48 h,PCNA蛋白下调至64.41%、58.67%(P<0.05),Caspase-3上调到1.55、1.60倍(P<0.05).结论:shRNA靶向抑制hTERT基因在鼻咽癌CNE细胞系中的表达,能显著地抑制细胞的端粒酶活性,调节PCNA和Caspase-3蛋白表达,从而抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡.端粒酶、PCNA和Caspase-3共同参与了鼻咽癌的发生、发展过程.     

yCDglyTK融合自杀基因前药系统对鼻咽癌CNE-2细胞株放射增敏作用的研究

目的研究yCDglyTK融合自杀基因前药系统对人鼻咽癌细胞株CNE2细胞的放射增敏作用。方法pcDNA3.1(-)CMVe·Egr-1yCDglyTK质粒经电穿孔法转染CNE2细胞,给予不同剂量γ射线照射及不同剂量前药,通过免疫组化、高效液相色谱、细胞存活率测定(MTT法)及克隆增殖实验,观察不同剂量辐射对自杀基因阳性CNE-2细胞中自杀基因表达及功能的影响,并观察前药干预及γ射线对CNE-2细胞生长的影响。结果电离辐射可诱导增强自杀基因阳性细胞株中yCDglyTK基因的表达;电离辐射与前药的联合大大增强了对自杀基因阳性CNE-2细胞的杀伤作用,其杀伤作用大于单独自杀基因前药系统和单独放射。结论yCDglyTK融合自杀基因前药系统对CNE-2细胞有放射增敏作用,其与放射联合使用对CNE-2细胞有明显协同杀伤效应。     

17-AAG联合EGCG对人鼻咽癌细胞株增殖和凋亡的影响及机制研究

目的　研究17-烯丙胺-17-去甲氧基格尔德霉素（17-allyamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG）和表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）单药或联合使用对人鼻咽癌细胞CNE的凋亡诱导作用,寻找鼻咽癌治疗的新方向。方法　MTT法和荧光染色分别检测CNE增殖抑制率及细胞形态的变化;RT-PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达。结果　①17-AAG、EGCG单独作用于CNE细胞24、48、72 h,均有抑制作用,与时间和剂量相关（P＜0.01）;两者联合抑制作用显著增 加,且表现出时间、剂量依赖性（P＜0.01）。②RT-PCR检测联合用药时Caspase-3和Bax的mRNA表达明显高于单独用药组,Bcl-2 mRNA明显低于单独用药组。结论　17-AAG联合EGCG可显著抑制CNE细胞增殖,其可能与上调Bax和Caspase-3的表达发挥其抗鼻咽癌细胞的生长增殖作用。     

鼻咽癌组织中PI3K、mTOR的表达及临床意义

目的研究鼻咽癌组织中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的表达及其临床意义。方法采用免疫组化方法检测PI3K、mTOR在47例鼻咽癌和20例鼻息肉组织中的表达,回顾性研究表达与TNM分期、浸润、转移的关系。结果①鼻咽癌组及鼻息肉组中PI3K的阳性表达率分别为76.6%(36/47)、35.0%(7/20),mTOR分别为70.2%(33/47)、25.0%(5/20),差异均有统计学意义(χ2=12.36,χ2=11.6,P均<0.05);②鼻咽癌组织中,角化型鳞状细胞癌组与非角化型鳞状细胞癌组PI3K的阳性表达率分别为65.0%、85.1%,差异无统计学意义(χ2=2.61,P>0.05),mTOR分别为55.0%、81.5%,差异有统计学意义(χ2=3.85,P<0.05),I期+II期、III期+IV期组中PI3K的阳性表达率分别为80.0%、72.7%,mTOR为72.0%、68.2%,差异均无统计学意义(χ2=0.35,χ2=0.08,P均>0.05)。有无淋巴结转移组中PI3K的阳性表达率分别为70.0%、88.2%,mTOR为76.7%、58.8%,差异均无统计学意义(χ2=2.91,χ2=1.65,P均>0.05)。结论 PI3K及mTOR在鼻咽癌发生发展中起一定作用,mTOR与鼻咽癌的病理分型有相关性。     

丹酚酸B对人鼻咽癌细胞株CNE-2增殖、凋亡的影响及机制研究

目的 研究丹酚酸B对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测丹酚酸B对人鼻咽癌CNE-2细胞的半数抑制浓度(IC50);用IC50浓度的丹酚酸B处理人鼻咽癌CNE-2细胞后,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况;在荧光显微镜下应用Hoechst33258荧光...     

Survivin和MRP表达的相关性及与鼻咽癌耐药的关系研究

目的:探讨Survivin、多药耐药蛋白(MRP)表达相关性及与鼻咽癌耐药之间的关系。方法:本研究首先采用免疫组织化学法检测Survivin和MRP在45例鼻咽癌和24例正常鼻咽黏膜上皮组织中的表达,分析其表达与鼻咽癌临床病理特征之间的关系;其次,检测Survivin和MRP在31例鼻咽癌紫杉醇耐药患者与20例紫杉醇非耐药患者中的表达,分析它们的表达相关性及其与鼻咽癌耐药的关系;最后采用浓度递增法持续诱导建立鼻咽癌化疗耐药细胞株5-8F-PTX(+),Western blot检测Survivin和MRP在5-8F-PTX(+)和5-8F中的表达情况。结果:Survivin在鼻咽癌组织中的阳性率为71.1%(32/45),明显高于正常鼻咽黏膜组织8.33%(2/24)(P<0.05);Survivin表达与鼻咽癌的分化程度、淋巴结和远处转移以及临床分期有关,与年龄、性别无关;低分化鼻咽癌中Survivin表达阳性率为79.5%(31/39),明显高于中分化鼻咽癌的16.7%(1/6),二者比较差异有统计学意义(P<0.05);Survivin在鼻咽癌化疗耐药患者中表达阳性率为83.9%(26/31),明显高于非耐药患者45.0%(9/20),二者比较差异有统计学意义(P<0.05);MRP在鼻咽癌化疗耐药患者中表达阳性率为87.1%(27/31),明显高于非耐药患者40.0%(8/20),二者比较差异有统计学意义(P<0.05);31例鼻咽癌化疗耐药患者中Survivin和MRP的表达呈正相关;Survivin和MRP在5-8F-PTX(+)中表达水平明显高于非耐药的5-8F;5-8FPTX(+)耐药细胞株中,紫杉醇、顺铂、5-FU、长春新碱耐药的IC50值均明显高于亲本5-8F组。结论:Survivin表达与鼻咽癌的分化、转移和临床分期有关,可作为鼻咽癌发生、发展的分子标记物;Survivin和MRP高表达与鼻咽癌细胞的耐药性增加有关。     

鼻咽癌中环氧化酶-2和潜伏膜蛋白-1的表达和相互关系的初步研究

目的：探讨鼻咽癌组织中的环氧化酶2（COX-2）、潜伏膜蛋白-1（LMP1）的表达情况,同时分析了两者之间的关系。方法：53例鼻咽癌活检标本,8例鼻咽部慢性炎症常规石蜡切片标本作为对照组,用SP免疫组织化学法检测COX-2、LMP1的表达,采用sPsS12．0统计软件对实验数据进行统计。结果：在鼻咽癌组织中,COX-2阳性表达率为71．70％（38／5a）;LMPI阳性表达率为66．04％（35／53）。COX2、LMP1的表达在颈部淋巴结转移组中均明显高于无颈部淋巴结转移组（P％O．05）,但在年龄、性别、病理类型、临床分期的分组中均差异无统计学意义（均P〉0．05）。在鼻咽癌组织中,LMP1和COX-2的表达存在正相关（7—0．797,P〈0．01）。结论：COX-2、LMP1在鼻咽癌组织中均有表达。COX2、LMP1在鼻咽癌中的表达和鼻咽癌颈淋巴结转移存在显著相关性,但和年龄、性别、病理类型、临床分期无相关性。COX-2和LMP1在鼻咽癌组织中的表达呈正相关。LMP1可能通过多途径上调COX-2的表达,从而促进鼻咽癌颈部淋巴结转移。     

鼻咽癌患者血清sICAM-1、sCD4及sCD8的表达及其意义

目的:探讨鼻咽癌患者外周血清可溶性CD4(sCD4)、可溶性CD8(sCD8)和可溶性ICAM—1(sICAM—1)的表达及其意义。方法:采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测54例鼻咽癌患者治疗前、后血清sICAM一1、sCD4与sCD8水平。结果:鼻咽癌患者血清sICAM—1、sCD4及sCD8水平明显增高,与对照组比较,差异有极显著性意义(均P<0.01),血清sICAM—1浓度与TNM分期及淋巴结转移有关(均P<0.05),而sCD4、sCD8水平与淋巴结转移无关(均P>0.05);放疗终sCD4、sCD8与sICAM—1水平比放疗前明显降低(均P<0.01),但仍比对照组高(均P<0.01);放疗后6个月肿瘤全消组血清sICAM—1、sCD4与sCD8继续保持较低水平,与放疗前比较,差异有极显著性意义(均P<0.01);肿瘤残留组血清sICAM—1、sCD4与sCD8浓度出现不同程度回升,其中sICAM—1水平与肿瘤全消组比较,差异有极显著性意义(P<0.01),sCD4、sCD8浓度接近治疗前水平(均P>0.05),但比肿瘤全消组高(均P<0.05)。结论:鼻咽癌存在与sICAM—1表达相关的细胞免疫应答异常,血清sI—cAM—1、sCD4与sCD8的水平检测可作为鼻咽癌病情评估、疗效监测及随访的血清学指标。     

西安及深圳地区鼻咽癌组织中MMP-9和TIMP-1的表达及意义

目的:探讨鼻咽癌组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的表达在陕西西安与深圳地区之间是否存在地域差别及其意义。方法:应用免疫组织化学方法分别检测西安地区21例、深圳地区22例鼻咽癌组织中MMP-9和TIMP-1表达的情况。结果:西安与深圳地区鼻咽癌组织中MMP-9阳性表达率分别为61.90%和68.18%;TIMP-1阳性表达率两地区分别为28.57%和31.82%。两地区鼻咽癌组织中MMP-9与TIMP-1表达均有显著负相关性。西安地区MMP-9表达与淋巴结转移有显著关系,TIMP-1则与淋巴结转移无相关性。两地区之间MMP-9、TIMP-1的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:鼻咽癌组织中MMP-9、TIMP-1的表达在西安与深圳两地区之间无差别;MMP-9高表达在鼻咽癌浸润转移中有重要作用。     

鼻咽癌与IGF-2R及p27和p21表达的相关性研究

鼻咽癌是最常见的恶性肿瘤之一,因其病变部位特殊,与重要器官相邻,多为低分化鳞状细胞癌等原因导致手术不易彻底切除,术后易复发,且放疗的5年生存率仅45％左右。本研究以鼻咽低分化鳞状细胞癌为研究对象,鼻咽炎症组织作对照,观察候选抑癌基因（IGF-2R、p27）和原癌基因（p21）在鼻咽癌和鼻咽炎症中的表达,探讨三者与鼻咽癌的关系,为临床及研究提供参考。     

神经前体细胞表达发育下调蛋白9通过Rac1/Cdc42通路促进鼻咽癌细胞增殖和转移的机制研究

目的 探究神经前体细胞表达发育下调蛋白9(neural precursor cell expressed developmentally downregulated protein 9,NEDD9)通过Rac1/Cdc42通路促进鼻咽癌细胞增殖和转移的机制.方法 通过qPCR和Western blot检测人鼻咽上皮细胞...