DNA末端标记法检测番荔枝内酯诱导人乳癌细胞凋亡

目的：用ＤＮＡ末端标记法（ＴＵＮＥＬ法）研究番荔枝内酯凋亡诱导作用，以及ＴＵＮＥＬ法用于凋亡检测和抗癌药所致凋亡的探讨。方法：用台盼蓝拒染法，ＴＵＮＥＬ法，ＤＮＡ凝胶电泳，电镜等技术，研究番荔枝内酯对具有多药抗药性的耐阿霉素的人乳癌ＭＣＦ７／ＡＤＲ细胞的生长抑制作用及凋亡诱导。结果：电镜下观察到细胞染色质浓缩，聚集核膜下，核碎裂等典型的凋亡细胞形态学改变。凝胶电泳可见明显的ＤＮＡ梯形条带。ＴＵＮＥＬ法检测的凋亡细胞明显多于形态学改变的凋亡细胞。结论：番荔枝内酯对人乳癌ＭＣＦ７／ＡＤＲ细胞具有明显生长抑制作用，半数抑制浓度（ＩＣ５０）为１０．５ｍｇ／Ｌ，并诱导其凋亡。ＴＵＮＥＬ法可配合其他方法用于检测抗癌药诱导的人癌细胞凋亡及抗癌药的评价。     

原位末端标记—TUNEL法检测脊髓凋亡细胞

原位ＤＮＡ末端标记ＴＵＮＥＬ法是目前检测细胞凋亡的一种常用方法 .其基本原理是利用细胞凋亡过程中ＤＮＡ断裂暴露的末端 ,用已标记荧光的碱基与之互补连接 ,而后直接用荧光显微镜观察或用相应荧光抗体与之结合 ,再通过快红等显色剂显色了解有无ＤＮＡ断裂从而了解细胞凋亡 .由于一个凋亡试剂盒所做切片有限 ,因而 ,凋亡试剂显得相对较为昂贵 .进而 ,摸索一些实验方法以增加实验的成功率成为了学者们关心的问题 .本文介绍用本室摸索总结的实验方法检测脊髓的凋亡细胞 .1　材料和方法用 5只成年雄性健康家猫脊髓的Ｌ3节段 ,常规脱水后 ,石…     

原位凋亡（Apoptosis）细胞末端标记测定TUNEL法

凋亡是单个细胞受其内在基因编程的调节，通过主动的生化过程而自杀死亡的现象。我们应用非放射性原位末端标记技术，进行凋亡细胞的原位检测。这一方法具有操作简单，结果特异性强、重复性好，特别对于低水平凋亡检测更敏感。     

电镜下人胎盘滋养细胞的凋亡形态及其DNA缺口末端标记的对比研究

目的：本文提出胎盘滋养细胞结是Ｋｅｅｒ描写的凋小体以外的另一种凋亡形态。方法：用电镜系统地观察：人胎盘滋养细胞生长、发育和衰老,并进一步用ＤＮＡ缺口标记做了对比观察。结果：合体细胞结终末超微结构符合细胞凋亡形态特征。讨论：胎盘滋养细胞凋亡从分子水平开始至超微结构及细胞形态变化是一个发展过程。     

肝内肝管细胞癌凋亡的原位末端标记研究

肝内胆管细胞癌(ICC)是肝内胆管上皮发生的癌,属于原发性肝癌的一种亚型,目前细胞凋亡及其调变因素在ICC发病中的作用和地位尚不清楚,ICC调亡的原位末端标记研究国内外尚未见报道.我们参照Wijsman[J Histochem Cytochem,1993;41(1):7]的原位末端标记法,检测了21例ICC的调亡状况,为进一步研究ICC的凋亡与凋变奠定了基础.     

凋亡细胞核DNA片段检测方法进展

当今生物学领域的研究一个热点之一是细胞凋亡,开展对细胞凋亡的研究,首先要解决是方法问题,作者从凋亡细胞的特性性核ＤＮＡ片段检测着手,阐述了多种凋亡细胞核ＤＮＡ片段检测方法以及近年来的一些新进展。     

原位末端标记检测肿瘤细胞凋亡与PCNA表达的国内研究概况

细胞凋亡（Apoptosis)或称为程序化细胞死亡（porgrammed cell death,PCD)是由内在基因调控的一种细胞死亡方式。自从kerr等病理学家于1972年首先描述后，PCD已成为生物学、医学领域研究的热点。但是Apoptosis与PCD在含义上有所差别，前者是形态上的概念，后者是机制上的概念，一般认为Apoptosis是PCD的一种形态表现。     

紫杉醇诱导的人乳癌细胞凋亡相关表达基因的克隆研究

应用mRNA差异显示法对紫杉醇诱导的人乳癌细胞（BCaP37）凋亡相关表达基因进行克隆研究。经Nor山ern杂交反应证实，12个克隆基因表达变化与紫杉醇诱导的细胞凋亡反应有关，其中克隆C3P3CDNA序列与人腺鲁基蛋氨酸合成酶同源性达99％，而且其转录水平与基因产物的酶活性水平变化呈现一致。提示这些表达的克隆基因可能参与紫杉醇诱导的细胞凋亡的调节作用，其详细机制有待进一步研究。     

菊花倍半萜烯内酯诱导人鼻咽癌细胞毒性和凋亡的研究

目的：评价菊花倍半萜烯内酯类化合物（SLs）对鼻咽癌的抗肿瘤作用。方法：采用SLs的活性成分parthenolide（PN）为受试物作用于人鼻咽癌高分化细胞株CNE1，检测细胞毒性和诱导性凋亡指标，进行时间－效应和剂量－效应作用观察、细胞计数减少、细胞增殖抑制率升高（P＜0．05）；细胞出现凋亡特征形态学改变，TUNEL阳性细胞、SubG1亚群细胞百分数增加，细胞失贴壁率明显增高（P＜0．05）；上述指标与PN剂量存在明显相关（P＜0．05）和时间循序变化。结论：PN可通过对人鼻咽癌细胞毒性作用和诱导细胞凋亡发挥其抗肿瘤作用，提示PN具有化学预防意义。     

原位DNA末端转移酶法检测细胞凋亡的影响因素

利用原位ＤＮＡ末端转移酶（ＩＳＴｄＴ）法检测肝硬变、肝癌组织标本及小鼠小肠粘膜上皮细胞凋亡。结果发现２５ｍｇ·Ｌ＾－１蛋白酶Ｋ消化１５ｍｉｎ，ＴｄＴ反应后采用中火档微波处理５ｍｉｎ可获最佳结果。对上述条件的最佳选择进行了探讨。     

毛酸浆内酯诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制研究

[目的] 探讨毛酸浆活性成分毛酸浆内酯（PPB）诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制。[方法] 采用噻唑蓝法（MTT法）检测PPB对MCF-7细胞及人外周血单核细胞（hPBMC）增殖的影响;克隆形成实验考察PPB对MCF-7细胞克隆形成的影响;MTT法考察泛半胱天冬氨酸蛋白酶（Caspase）抑制剂Z-VAD-fmk对PPB诱导MCF-7细胞死亡的作用;Western Blot法考察PPB处理后凋亡相关蛋白PARP、Caspase-7/8/9、Cytochrome c、Bax、Bcl-2、Fas及FADD的表达水平。[结果] PPB时间、剂量依赖性抑制MCF-7细胞生长,且对hPBMC无明显细胞毒性;PPB呈剂量依赖性地抑制MCF-7细胞克隆形成;PPB处理后,凋亡特征性蛋白PARP、原型Caspase-7蛋白表达量显著减少,而Cleaved PARP、Cleaved Caspase-7显著增加;同时内源性凋亡途径相关蛋白Bax、Cleaved Caspase-9、Cytochrome c表达量显著上调,而Bcl-2及Caspase-9原型形式显著下调。外源性凋亡相关蛋白Fas、Cleaved Caspase-8及FADD表达量上调,而Caspase-8原型形式显著下调;加入Z-VAD-fmk可显著逆转PPB诱导的MCF-7细胞死亡。[结论] 毛酸浆活性成分PPB可以诱导MCF-7细胞发生内源性和外源性凋亡。     

DNA断裂损伤在抗癌药物诱导肝癌细胞凋亡反应中的作用

探讨抗癌药物等对ＤＮＡ直接损伤因素所致的ＤＮＡ断裂损伤在凋亡反应中所起的作用。方法；采用定量原位缺口平移技术检测阿霉素等抗癌药物诱导的肝癌细胞凋亡反应中的单位细胞ＤＥＡ断裂损伤程度。结果：高浓度阿霉素在凋亡反应的早期无可检测的ＤＮＡ断裂，也无调讯细胞产生；较低浓度阿霉素在药物作用早期有可检测的ＤＮＡ断裂，同时也有凋亡细胞产生；     

小白菊内酯诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的实验研究

小白菊内酯属于倍半萜内酯,是墨西哥、印度药用植物的活性成分,也是欧洲小白菊这一常用草药的活性成分[1],主要用于治疗偏头痛、炎症和各种肿瘤。20世纪90年代末,中国学者从中国特有药用植物观光木树皮中分离得到这一抗肿瘤活性物质,并且经过体外抑瘤实验证实,小白菊内酯(10.0μg/mL)对人肝癌细胞的体外抑制率为67.17%,可见其对人肝癌细胞抑制作用比较明显[2]。近年来,随着医学技术和分子生物学技术的发展及各种检测手段的出现,发现小白菊内酯可抑制NF-κB的激活[3,4],诱导细胞凋亡[1],产生细胞毒作用[5,6]。但有关从分子生物学水平研究小…     

原位末端标记法检测凋零细胞

原位末端标记法检测凋零细胞王剑波李青马福成陈万录王伯云（第四军医大学病理学教研室西安７１００３３）关键词凋零原位末端标记尖锐湿疣中图号Ｒ７５２．５３原位末端标记（ｉｎｓｉｔｕｅｎｄ－ｌａｂｅｌｉｎｇ，ＩＳＥＬ）是一种对凋零细胞中的ＤＮＡ断裂片段进行标...     

小白菊内酯诱导人食管癌细胞凋亡的研究

目的 探讨小白菊内酯(Parthenolide,PN)对人食管癌细胞EC9706增殖和凋亡的影响及PN的作用机制.方法 MTT法检测PN(20、40和80μmoL/L)作用EC 970624、48和72 h细胞增殖活性的变化;流式细胞术和免疫细胞化学法分别检测PN处理的EC9706细胞凋亡和NF-K Bp65蛋白表达的变化.结果 ①PN抑制EC 9706的增殖活性,呈时间和剂量依赖性.②PN作用EC 970648 h后,NF-κ Bp65蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).③PN作用EC 970672h后,细胞早期和晚期凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 PN抑制EC9706细胞的增殖,诱导其凋亡,作用机制与抑制NF-κB有关.     

雄激素应答元件陷阱DNA诱导前列腺癌细胞LNCaP凋亡

目的：研究雄激素应答元件陷阱DNA(ARE decoy DNA)对前列腺癌细胞LNCaP生长活性和凋亡的影响。方法：人工合成双链硫代ARE decoy DNA并提取LNCaP细胞核蛋白．应用电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测ARE decoy DNA与雄激素受体的特异结合。2μg／ml ARE decoy DNA转染LNCaP细胞。48h后相差显微镜观察细胞超微结构变化：MTT比色法检测细胞生长活性;DNA Ladder检测细胞凋亡;流式细胞技术(FCM)测定细胞凋亡率。结果：EMSA显示．ARE decoy DNA能特异与核蛋白中雄激素受体结合。LNCaP细胞转染ARE decoy DNA后．镜下可见部分细胞出现凋亡形态学的改变,有凋亡小体形成,细胞体外生长受到抑制．DNA Ladder可见明显梯形条带。转染后48h的凋亡率为22．5％。结论：ARE decoy DNA能竞争结合雄激素受体(androgen receptor,AR)。阻断AR的作用而诱导LNCaP细胞凋亡。     

雷公藤内酯醇抑制胰腺癌细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的：探讨雷公藤内酯醇（TL）对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法：胰腺癌细胞SW1990与TL共同孵育,采用MTT法观察TL对胰腺癌细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪AnnexinⅤ/碘化丙啶（PI）双染法检测TL对SW1990细胞的凋亡的诱导作用和对细胞周期的干预作用。结果：TL抑制SW1990细胞增殖和促进细胞凋亡,呈现为浓度和时间依赖性,TL阻滞胰腺癌细胞周期于G0/G1期。结论：TL能抑制胰腺癌细胞增殖、诱导细胞凋亡及干预胰腺癌细胞周期,TL具有潜在的肿瘤治疗作用。     

原位细胞凋亡的荧光,酶免疫化学法检测实验研究

用荧光法和酶免疫化学法末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）实验分别对小鼠心肌组织、人慢性肝炎肝组织和内膜增生的小型猪血管组织进行了细胞凋亡检测。结果显示：①心肌无凋亡细胞发现，肝组织和血管内膜组织有散在的０～１２个细胞／２５倍物镜视野的细胞标记阳性（凋亡）。②酶免疫化学法ＴＵＮＥＬ实验的检测敏感度较荧光法ＴＵＮＥＬ实验的敏感度高。③过高的末端转移酶可导致假阳性的产生，对荧光法ＴＵＮＥＬ实验，末端转移酶／标记缓冲液比例应为１∶９～１９，而对酶免疫化学法则以１∶５９为好     

穿心莲内酯通过Caspase-3/PARP途径诱导人舌癌Tb细胞凋亡作用研究

研究穿心莲内酯对舌癌细胞(Tb细胞)凋亡的作用及其机制。用瑞士吉姆萨染色法、Hoechst 33258荧光染色法、原位Annexin V/PI双染和流式细胞术检测穿心莲内酯对Tb细胞凋亡的作用;Western blot检测穿心莲内酯诱导Tb细胞凋亡的机制。结果显示:穿心莲内酯处理Tb细胞后,与对照组相比,细胞凋亡数明显增加(P<0.05)。Western blot实验结果发现,穿心莲内酯处理组与对照组相比,聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(polyADP-ribosepolymerase,PARP)表达明显增强(P<0.05),表明穿心莲内酯可能通过活化PARP促进Tb细胞的凋亡。