Smad4 and ERK2 stimulated by transforming growth factor beta1 in rhabdomyosarcoma

Background Transforming growth factor beta （TGF-beta） plays an essential role in the regulation of normal physiologic processes of cells. TGF-beta has been shown to regulate several mitogen-activated protein kinases （MAPK） pathways in several epithelial cells. However, the effects of TGF-beta on soft tissue sarcoma are seldom reported. Our previous studies suggested that there should be some other signal transduction pathways besides Smads, which are important to regulate the growth of human embryonal rhabdomyosarcoma （RMS） cells. In the present study, we examined the expression and functional relations of extracellular signal-regulated kinase 2 （ERK2） and Smad4 in human RMS tissue and a RMS cell line, RD. Methods RD cells and normal human primary skeletal myoblasts （Mb） were treated with TGF-betal to establish the expression profile of ERK2 at the mRNA and protein levels detected by RT-PCR and immunofluorescence. Immunohistochemistry was used to detect the expression of ERK2 and Smad4 in 50 tissue specimens of human RMS and 23 specimens of normal skeletal muscles. Follow-up of specimens was performed 6 months to 70 months later. Results RD cells and human RMS tissues showed the higher expression of ERK2 and Smad4 than the normal control, either the protein level or the mRNA level. And, exogenous TGF-betal stimulation can lead to higher expression of ERK2 and its nuclear translocation, so TGF-betal can also activatedMAPK （ERK2） pathway, resulting in a sustained activation of ERK2 for at least 2 hours. Immunohistochemistry analysis, however, showed that there was no correlation between ERK2 and Smad4 protein. The overexpression of ERK2 and Smad4 had no indicative effects on histological subtypes, histological grading, gender, age, and prognosis. Conclusions In RMS, signaling of TGF-betal from cell surface to nucleus can also be directed through the MAPK （ERK2） pathway besides the TGF-betal/Smads pathway. The activation of ERK2 by TGF-betal may be Smad4 independent. Moreover, there may be some other tanglesome relationships between the TGF-betal/Smads pathway and the MAPK pathway which takes part in the development, invasion and metastasis of tumor cells.     

子宫内膜样腺癌间质细胞和癌细胞TGFβR/Smads的表达

目的探讨子宫内膜间质细胞转化生长因子β受体（TGFβR）、Smad蛋白（Sma-and Mad-related protein )信号通路的状态和癌细胞TGFβR/Smads信号通路的关系,及其这一信号通路可能对子宫内膜癌发生发展的影响。方法采用SP免疫组化方法检测12例子宫肌瘤、18例子宫内膜样腺癌中TGFβRⅠ、TGFβRⅡ、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7的表达。结果在正常子宫内膜细胞中均有TGFβRⅠ、TGFβRⅡ、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7的表达,正常子宫内膜腺体上皮细胞和间质细胞中TGFβR蛋白与Smads蛋白的表达一致,两者成正相关（r=0.86, r=0.78）;子宫内膜癌癌细胞和间质细胞中TGFβR/Smads蛋白的表达不一,子宫内膜癌本身的间质细胞TGFβR/Smads蛋白表达缺陷。结论正常子宫增生期／分泌期内膜细胞存在TGFβR/Smads信号表达,子宫内膜癌本身的间质细胞存在TGFβR/Smads信号缺陷;探讨内膜间质细胞TGFβR/Smads信号通路作用,为内膜癌的基因治疗提供了新的靶点。     

TGF-β1及其信号蛋白在大鼠腹膜纤维化模型腹膜组织中的表达及可能作用

目的了解TGFβ1/Smads信号蛋白在高浓度葡萄糖透析液及炎症所致大鼠腹膜纤维化模型腹膜组织中的表达及在腹膜纤维化发生中的可能作用。方法24只SD雄性大鼠(180～200g)随机分为4组,每组6只。正常对照组,大鼠不做任何处理;LPS组,LPS用生理盐水稀释为0.6mg/100ml,在第1、3、5、7日按0.6mg/kg体重腹腔注射;4.25%透析液组,大鼠给予每日腹腔注射100ml/kg体重高糖透析液;LPS+4.25%透析液组,除每日腹腔注射100ml/kg体重高糖透析液外,LPS用4.25%透析液稀释为0.6mg/100ml,在第1、3、5、7日按0.6mg/kg体重腹腔注射;于实验第28天杀检动物,取壁层和脏层腹膜组织行光镜及电镜检查。用RTPCR及间接免疫荧光、Western杂交的方法检测αSMA、TGFβ1、Smad3、Smad7、pSmad2/3、ColⅠmRNA和蛋白的表达水平。结果Masson染色显示,与正常对照组比较,4W时各组壁层腹膜组织明显增厚,有大量胶原沉积,其中LPS+4.25%透析液组厚度最为显著(vsLPS组:42μm±3μmvs35μm±4μm,P=0.007,vs4.25%透析液组,42μm±3μmvs20μm±4μm,P=0.000);与正常对照组比较,三组αSMA、ColⅠ和TGFβ1、Smad3、pSmad2/3在脏层腹膜组织中的表达水平显著上调,上述变化以LPS+4.25%透析液组改变最为显著,TGFβ1mRNA为正常对照组的2倍,Smad3mRNA为正常对照组的1.8倍;与正常对照组比较,抑制性信号蛋白Smad7mRNA和蛋白表达水平在其他三组也有不同程度的上调,但Western杂交结果显示,pSmad/Smad7蛋白比值仍明显升高;电镜结果显示,除正常对照组外,各组间皮细胞均有损伤,LPS+4.25%透析液组的间皮细胞损伤最为明显,而且胞浆中出现明显的肌丝和密体。结论TGFβ1/Smads信号蛋白的活化是高浓度葡萄糖透析液和LPS导致大鼠腹膜发生纤维化的共同作用途径。高浓度葡萄糖透析液和LPS可能协同作用通过TGFβ1/Smads通路刺激腹膜间皮细胞转分化,介导腹膜纤维化的发生。     

TGF-β1/Smads信号通路介导支气管上皮细胞分泌型白细胞蛋白酶抑制因子下调

目的 探讨支气管上皮细胞分泌型白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)表达下调与TGF-β1/Smads信号通路的关系.方法 将人正常支气管上皮HBE细胞分为正常对照组、转化生长因子β1(TGF-β1)刺激组(刺激组)、Smad4小分子干扰RNA(siRNA)预处理后再行TGF-β1刺激组(干扰组)、阴性对照siRNA预处理后再行TGF-β1刺激组(干扰对照组),采用免疫细胞化学及蛋白质印迹法检测各组细胞中Smad4、SLPI的表达,反转录聚合酶链反应法检测各组细胞中Smad4 mRNA及SLPI mRNA的表达.每次试验每组各取1孔细胞,每项检测各重复4次.结果 刺激组HBE细胞中Smad4蛋白及mRNA表达水平(分别为1.18±0.17、1.33±0.16)明显高于而SLPI蛋白及mRNA表达水平(分别为0.17±0.10、0.11±0.05)明显低于正常对照组(分别为0.29±0.06、0.31±0.07、1.29±0.21、0.83±0.13,均P<0.01)和干扰组(分别为0.27±0.08、0.34±0.09、1.22±0.18、0.81±0.11,均P<0.01),干扰对照组Smad4和SLPI表达水平与刺激组比较差异无统计学意义.结论 TGF-β1可促使支气管上皮细胞SLPI表达下调,其作用可能是通过TGF-β1/Smads信号通路介导的.     

三氧化二砷对肠癌HCT116细胞Smads表达的影响

目的 研究三氧化二砷对肠癌细胞HCT116中TGF-β/Smads信号通路的Smads相关基因表达变化,阐述Smads相关基因在肠癌HCT116细胞中的变化规律,探讨肠癌发生的病理机制,和分析As2O3作用新靶点。方法 实验分空白对照组,低剂量As2O3组,中剂量As2O3组,高剂量As2O3组,在体外培养72 h后取出细胞用于实验。采用免疫荧光化学术和Westernblotting检测Smad3、Smad7蛋白的表达变化。结果 三氧化二砷为0.5~2.5μmol/L时,Smad3分别为（19.94±1.57）,（34.17±1.28）,（39.64±1.63）,Smad7分别为（31.53±0.67）,（21.69±0.94）,（20.04±0.31）,与对照组Smad3（16.61±0.64）,Smad7 3（8.61±0.64）比较,各组差异有统计学意义（P〈0.05）;westernblotting显示三氧化二砷能同时下调Smad7蛋白的表达,上调Smad3蛋白的表达而对肿瘤细胞的生长进行调控。结论 TGF-β/Smads信号通路的Smad3,7在肠癌发生发展起重要的调控作用,三氧化二砷可通过改变Smad3,7表达,而对肠癌细胞HCT116生长进行抑制。     

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1在C反应蛋白诱导人脐静脉内皮细胞组织因子表达中的作用

目的研究凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(lectin-type oxidized LDL receptor1,LOX-1)在C-反应蛋白(c-reactive protein,CRP)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)组织因子(tissue factor,TF)表达中的作用。方法用人重组质粒pTracer CMV2-CRP转染HUVECs细胞,分正常对照组、空质粒GFP组和CRP-GFP组(n=3),RT-PCR、Western blot检测TF、LOX-1 mRNA和蛋白表达。Western blot检测各组P-ERK1/2、T-ERK1/2、P-JNK、T-JNK蛋白表达。CRP-GFP组分别加LOX-1阻断剂、ERK1/2阻断剂(U0126)、JNK阻断剂(SP600125),Westernblot检测TF蛋白。结果用表达人CRP的质粒转染HUVECs显著增加LOX-1 mRNA和蛋白表达[(0.70±0.03)vs(0.24±0.01),(0.661 6±0.020 0)vs(0.255 8±0.040 0),P<0.05]、TF的mRNA和蛋白表达[(0.442±0.040)vs(0.146 0±0.030 0),(0.727 4±0.020 0)vs(0.217 4±0.020 0),P<0.05]。CRP启动了ERK1/2 MAPK,未启动JNKMAPK。CRP上调TF表达被ERK1/2阻断剂而非JNK阻断剂阻断.抗LOX-1的中和抗体显著减少CRP诱导的TF mRNA和蛋白表达[(0.264 0±0.030 0)vs(0.442 0±0.040 0),(0.324 4±0.040 0)vs(0.727 4±0.020 0),P<0.05]。结论CRP诱导HUVECs细胞LOX-1表达上调,并通过LOX-1受体这一新途径上调TF表达,且CRP通过ERK1/2 MAPK信号途径非JNK MAPK途径上调了HUVEC细胞TF的表达。     

转化生长因子β1通过Smad2途径调节足细胞结缔组织生长因子表达

目的　研究肾脏足细胞是否表达结缔组织生长因子 (CTGF)以及TGFβ1对CTGF表达调控的信号途径。方法　以肾小球足细胞为对象 ,应用Western印迹分析技术 ,观察了 3种促进肾脏纤维化的蛋白因子 ,转化生长因子 β1(TGFβ1)、血小板源生长因子 (PDGF)和血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对体外培养的足细胞CTGF蛋白表达的影响 ,以及ERK、Smad两条信号途径在TGFβ1调节CTGF蛋白表达中的影响 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测CTGFmRNA的变化。结果　体外培养的足细胞表达基础水平CTGF蛋白 ,2 0ng/mlPDGF和 10 -6mol/LAngII刺激 2 4小时后细胞内CTGF蛋白水平与对照相比差异无显著意义 (P >0 0 5 ) ,而 1ng/mlTGFβ1刺激 2 4h足细胞CTGF蛋白水平显著高于对照 (P <0 0 5 ) ,且增加呈TGFβ1剂量依赖趋势 ;1ng/mlTGFβ1刺激 12h可以使细胞CTGFmRNA表达增加。1ng/mlTGFβ1使足细胞Smad2 和细胞外信号调节激酶 (ERK1/ 2 )磷酸化 ,在刺激 30min达高峰 ;应用丝 /苏氨酸激酶抑制剂Staurosporine抑制Smad2 磷酸化可以消减TGFβ1刺激的CTGF蛋白增加 ,但ERK1/ 2 活化抑制剂PD 980 5 9阻断ERK1/ 2 磷酸化不能减弱TGFβ1刺激CTGF蛋白表达的效应。结论　在足细胞上 ,TGFβ1刺激CTGF表达依赖于Smad2 信号通路的活化 ,而不依赖于ERK1/     

低氧激活ERK／JNK通路促进Smad2／3蛋白磷酸化诱导小鼠心脏成纤维细胞表型转换的实验研究

目的研究体外低氧诱导小鼠心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）向心脏肌成纤维细胞（cardiac myofibroblasts,CMFs）表型转换过程中,促分裂素原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPK）信号通路与Smad2／3蛋白磷酸化的关系。方法新生小鼠第1代CFs低氧（37℃、3％O2）无血清培养48h,免疫荧光检测α-SMA蛋白;新生小鼠CFs给予3种MAPK（ERK、JNK和p38）特异性抑制剂常氧培养1h,进行低氧培养30min,免疫印迹检测ERK、JNK、p38和Smad2／3蛋白磷酸化水平。结果①低氧显著上调新生小鼠CFs中α-SMA蛋白的表达;②低氧能显著地促进ERK、JNK和P38蛋白磷酸化,PD98059（ERK特异性抑制剂）、SP600125（JNK特异性抑制剂）和SB203580（P38特异性抑制剂）能抑制低氧诱导的ERK、JNK和P38蛋白的磷酸化;③PD98059（ERK特异性抑制剂）和SP600125（JNK特异性抑制剂）能抑制低氧诱导的Smad2／3蛋白的磷酸化,SB203580（P38特异性抑制剂）无此作用。结论①低氧可诱导小鼠CFs细胞发生表型转化为CMFs;②ERK和JNK信号通路能调控Smad2／3蛋白的磷酸化表达;③MAPK和Smad信号通路可能参与低氧诱导的小鼠CFs细胞的表型转化。     

Smad2,3,4,7蛋白在慢性移植性肾病的定位和表达变化

【目的】探讨Smad2,3,4,7蛋白在慢性移植性肾病（chronic allograft nephropathy,CAN）的定位和表达变化。【方法】收集13例经组织病理学明确诊断为CAN并行移植肾切除的肾标本作为实验组;取10例正常肾组织作为对照组。用免疫组化法检测Smad2、Smad3、Smad4、Smad7和TGF-β1蛋白的定位和表达;图像半定量分析肾小球和肾小管间质中Smads蛋白和TGF-β1的含量变化。【结果】Smad2、Smad3和Smad4主要在正常肾组织的肾小管上皮细胞内表达,肾小球偶见;而Smad7主要在肾小球表达。与对照组相比,Smad2、Smad3和Smad4蛋白在CAN中肾小球和肾小管上皮细胞的表达均明显增加（P〈0.01）,与TGF-β1上调成正相关;而Smad7蛋白在肾小球中的表达却明显下降（P〈0.01）,与TGF-β1上调成负相关。并且随着CAN的加重Smad2,3,4蛋白的表达逐渐增加,而Smad7蛋白的表达逐渐减少（P〈0.01）。【结论】TGF-β/Smad信号通路参与了CAN的纤维化进程,Smad2,3,4蛋白过度表达和Smad7负调控不足是导致CAN的纤维化的主要原因。     

TGF-β1刺激对人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路的影响

目的：探讨人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路在TGF-β1致腹膜纤维化过程中是否发挥作用。方法：取健康成年人大网膜进行人腹膜间皮细胞原代培养，经鉴定95%以上为人腹膜间皮细胞。用5 ng/ml TGF-β1刺激第三代培养细胞，采用免疫组织化学染色、Western blotting，ELISA以及RT-PCR等方法，分别观察人腹膜间皮细胞内磷酸化Smad2/3（p-Smad2/3）的蛋白表达以及在细胞内的迁移；细胞内Smad7的蛋白和mRNA表达；细胞外纤维连接蛋白（FN）的蛋白、细胞内FN的mRNA以及细胞内I型胶原（COL1）的蛋白和mRNA表达。结果：人腹膜间皮细胞内p-Smad2/3的蛋白表达在TGF-β1刺激后15 min即开始显著增加，此时p-Smad2/3的阳性细胞率为29%，细胞着色主要分散在细胞质中，30 min阳性细胞率81%至1 h阳性细胞率84%增加最明显，细胞着色加深且集中在细胞核及周边，2 h蛋白表达明显回落，此时阳性细胞率为37%，细胞着色转淡并又分散至细胞质中；细胞内Smad7的蛋白表达在TGF-β1刺激后24 h明显增加，48 h时达高峰，mRNA表达呈时间依从性增强；细胞外FN的蛋白、细胞内FN的mRNA以及细胞内COL1的蛋白和mRNA表达从TGF-β1刺激后24 h起均明显增加，且均显示一定的时间依从性。结论：人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路能被TGF-β1特异性激活，并在TGF-β1致腹膜纤维化过程中发挥效应；经TGF-β1刺激后，在该通路中主要起抑制作用的Smad7蛋白和mRNA表达均反馈性增加。     

肝纤维化中丹参素对TGFβ1/Smads/ERK信号通路的影响及其相互关系

目的探讨肝纤维化过程中转化生长因子β1(transforming growth factorβ,TGFβ1)/Smads/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路的相互作用。方法体外分离培养大鼠肝星状细胞(hepatic stellatecell,HSC),MTT法筛选丹参素最适浓度;以最适浓度丹参素及ERK阻断剂(PD98059)作用于经TGFβ1处理的HSC,CCK-8法检测各组HSC增殖;免疫细胞化学染色法检测各组HSC内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle sctin,α-SMA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达;RT-PCR检测各组HSC的Smad2、Smad3、Smad7 mRNA表达量;Western blot法检测各组Smad2/3、ERK1/2蛋白磷酸化及Smad7蛋白水平。结果 0.062 5～0.25 mmol/L的丹参素可有效抑制HSC增殖,作为最适处理浓度;PD98059(100μmol/L)可抑制TGFβ1诱导的HSC增殖,丹参素剂量依赖性抑制TGFβ1诱导的HSC增殖(P<0.01);TGFβ1促进细胞内α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,PD98059及丹参素降低TGFβ1诱导的α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原水平;PD98059可拮抗TGFβ1诱导的Smad2、Smad3、Smad7 mRNA的表达(P<0.05,P<0.01),丹参素下调Smad2、Smad3 mRNA水平,但上调Smad7 mRNA水平(P<0.01);PD98059及丹参素抑制TGFβ1诱导的Smad2/3、ERK1/2蛋白磷酸化(P<0.01),但对TGFβ1诱导的Smad7蛋白表达上调有不同效应(P<0.01)。结论 TGFβ1上调Smad2、Smad3 mRNA表达及蛋白磷酸化,进而诱导HSC增殖、活化及胶原合成,ERK通路可能参与HSC中TGFβ1诱导Smad基因表达及蛋白磷酸化过程。丹参素对TGFβ1/Smad/ERK信号通路具有抑制效应。     

TGF-β_1/Smads信号通路与糖尿病心肌纤维化

转化生长因子β1(TGF-β1)是细胞外基质最重要的调节因子,也是目前已知的与组织纤维化关系最密切的细胞因子,它通过Smad信号途径、蛋白激酶C途径、分裂原活化蛋白激酶途径发挥生物学作用。近年研究发现,TGF-β1/Smads信号通路与心肌纤维化的发生和发展密切相关,深入研究有助于为糖尿病心肌病的治疗提供新的思路。现就TGF-β1/Smads信号转导通路与糖尿病心肌纤维化的关系进行综述。     

氯沙坦对5/6肾切除大鼠残余肾组织中TGF-β1，p-Smad2/3及Smad7的作用

目的:观察氯沙坦对5/6肾切除大鼠肾组织中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的影响,探讨氯沙坦抗肾小球硬化的作用机制.方法:雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和氯沙坦治疗组,用两步法建立5/6肾切除模型,于术后12周处死各组大鼠.处死前留取24 h尿检测尿蛋白,心脏取血检测血清肌酐、尿素氮,行HE和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变,用免疫组织化学的方法检测肾组织中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的表达.结果:模型组大鼠24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮和肾组织胶原相对面积明显较假手术组增多(P＜0.01),氯沙坦治疗后上述指标均得到不同程度的改善.肾组织TGF-β1和p-Smad2/3在假手术组低表达,模型组呈强阳性表达,而氯沙坦治疗组TGF-β1和p-Smad2/3表达较模型组明显减弱(P＜0.01).假手术组肾组织可见较多的Smad7表达,模型组其表达明显减弱(P＜0.01),而氯沙坦治疗后Smad7表达较模型组增强(P＜0.01).结论:氯沙坦可以通过影响5/6肾切除大鼠肾组织中TGF-β/Smads信号通路中TGF-β1,p-Smad2/3和Smad7的表达而起到抗肾小球硬化的作用.     

傣药雅盼对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1/Smads信号转导通路的影响

目的 观察傣药雅盼对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠转化生长因子(TGF)-β1/Smads信号转导通路的影响,从而探讨该药对肾间质纤维化抑制作用的可能机制.方法 120只雄性大鼠行单侧输尿管结扎建立UUO大鼠模型,生理盐水灌胃或给药28 d后收集血清检测尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),处死大鼠,取其肾组织行HE染色和Masson染色,免疫组织化学法检测TGF-β1、Smad2、Smad7在肾组织的表达;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA的表达;Western blot检测蛋白表达.结果 傣药雅盼各剂量组能降低大鼠BUN、Scr水平,并减轻肾小管-间质炎性细胞及肾间质纤维化程度,同时使TGF-β1、Smad2 mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05),而Smad7 mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05).结论 傣药雅盼备浓度组均可以在一定程度抑制Smad2 mRNA的表达,上调Smad7 mRNA的表达,通过干预TGF-β1/Smads信号转导通路抑制了TGF-β1在肾组织的表达从而对UUO大鼠肾间质纤维化.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对大鼠肾成纤维细胞转化生长因子β1/Smad信号途径的作用研究

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂阻断转化生长因子（TGF）β1致肾间质纤维化作用的机制，探讨其抗肾间质纤维化的潜在作用。方法体外培养大鼠肾成纤维细胞株（NRK／49F），观察PPARγ配体15d-PGJ2及其激动剂曲格列酮和齐格列酮对TGFβ1诱导的纤维连接蛋白（FN）mRNA表达的影响。利用Western印迹技术观察PPARγ激动剂对TGFβ1诱导的FN和Smad蛋白表达的影响。结果（1）与1ng／ml TGFβ1组比较，5ng／ml TGFβ1组FN mRNA表达量增加了3．6倍（P〈0．01），5ng／ml TGFβ1刺激24h时较刺激前增加了2．4倍（P〈0．01），TGFβ1诱导FN mRNA表达呈一定范围内的剂量（0—5ne／ml）和时间（0—24h）依赖效应。（2）与5ng／ml TGFβ1组比较，10μmol 15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组FN mRNA表达量分别降低37．3％、41．5％和22．7％，FN蛋白表达量分别降低20．6％、38．1％和28．6％。（3）5ng／ml TGFβ1以时间（0．2h）依赖方式诱导p-Smad2／3蛋白表达量增加，作用1h时达到高峰；5ng／ml TGFβ1组p-Smad2／3蛋白表达量较对照组和2ng／ml TGFβ1组分别增加3．42倍和0．97倍。（4）15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组p-Smad2／3蛋白表达量与5ng／ml TGFβ1组比较分别降低61．2％、53．0％和59．S％。3种药物干预组之间p-Smad2／3蛋白表达量比较差异无统计学意义，各组Smad2和Smad3蛋白表达量无显著变化。结论PPART激动剂可以抑制TGFβ1诱导的肾间质成纤维细胞细胞外基质合成，其机制可能与阻断TGF-β1／Smad信号途径有关，提示PPARγ激动剂具有抗肾间质纤维化的潜在作用，可能成为延缓终末期肾功能衰竭的治疗新手段之一。     

MAPK抑制因子对HSC中Smad2/3磷酸化及Smad4核转位的影响

目的 探究3种丝裂原活化蛋白激酶( MAPK)抑制因子对转化生长因子-β( TGF-β)活化的大鼠肝星状细胞( HSC)中Smad2/3磷酸化及Smad4 核转位的影响. 方法采用Ⅳ型胶原酶和链酶蛋白酶原位肝灌流法分离正常大鼠HSC并传代培养,分别用细胞外信号调节激酶( ERK)、c-Jun氨基末端激酶( JNK )、p38 抑制因子( PD98059、SP600125、SB203580 )与HSC共同培养,再加入TGF-β1活化细胞,采用免疫沉淀和 Western blot 法检测 pSmad2C、pSmad2L、pS-mad3L蛋白表达;采用细胞免疫荧光法检测Smad4 蛋白表达及细胞内定位情况. 结果 Western blot显示静息状态下HSC几乎不表达 pSmad2C 而低表达 pSmad2L、pSmad3L, TGF-β1刺激后显著上调上述磷酸化蛋白表达, p38 抑制因子(1、3 μmol/L)、ERK 抑制因子(1 μmol/L)对 Smad2C、Smad2L、Smad3L 磷酸化无显著影响;p38 抑制因子( 10μmol/L)降低了 pSmad3L 蛋白表达;ERK 抑制因子( 3、10μmol/L)降低了pSmad2C蛋白表达;JNK抑制因子(1、3、10μmol/L)减少了 pSmad2C、pSmad2L、pSmad3L 蛋白表达.TGF-β1刺激可明显诱导Smad4核转位,而3种MAPK抑制因子不同程度地抑制TGF-β1 诱导的Smad4 转位入核. 结论 在 HSC 细胞中 TGF-β1 可能通过活化 JNK 通路促进Smad2/3磷酸化,活化ERK、JNK、p38 通路促进Smad4 核转位.     

EGCG对PLA-802细胞中TGF-β1和Smad4的抑制作用

目的观察表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3gallste,EGCG)对人横纹肌肉瘤细胞株PLA-802细胞内TGF-β1/Smad4mRNA和蛋白水平的表达的影响,探索EGCG抑制横纹肌肉瘤细胞生长的机制。方法体外培养人横纹肌肉瘤细胞株PLA-802,并用不同浓度的EGCG作用不同的时间,用RT-PCR和Westernblot分别检测细胞内TGF-β1和Smad4的mRNA和蛋白水平的表达。结果 TGF-β1和其下游因子Smad4的mRNA和蛋白水平的表达明显受到EGCG的抑制,且这种抑制作用呈浓度-时间依赖性(P<0.05)。结论 EGCG可能通过抑制TGF-β1信号通路,发挥其抑制PLA-802细胞生长的作用,这或许将为临床治疗横纹肌肉瘤提供新的思路。