产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的基因型分型及耐药分析

[目的]了解大连市中心医院临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌耐药基因型及耐药情况。[方法]收集该院2005年11月-2006年2月连续不重复产ESBLs大肠埃希菌40株,采用美国国家临床实验室标准化委员会推荐的表型确认方法进行筛选。在此基础上,分别用针对TEM、SHV、CTX-M-Ⅰ、CTX-M-Ⅱ、CTX-M-Ⅲ、CTX-M-Ⅳ型β-内酰胺酶基因的六对特异性引物对每株细菌进行聚合酶链反应（PCR）,毛细管电泳方法检测所有产ESBLs大肠埃希菌的TEM、SHV、CTX-M基因。应用K-B纸片扩散法检测产ESBLs大肠埃希菌对临床常用抗生素的耐药性。[结果]毛细管电泳结果显示,40株产ESBLs大肠埃希菌中,仅携带一种基因型的分别为SHV型1株（2.50%）,CTX-M-Ⅰ型7株（17.50%）,CTX-M-Ⅱ型7株（17.50%）,CTX-M-Ⅲ型2株（5.00%）,CTX-M-Ⅳ型4株（10.00%）。有18株（46.15%）同时携带两种或两种以上基因型,且多为CTX-M型与TEM型或SHV型共同存在;药物敏感试验结果显示,产ESBLs大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素均表现出较高的耐药性,对碳青霉烯类药物（亚胺培南和美洛培南）的耐药率最低。[结论]该院产ESBLs大肠埃希菌近期流行的主要基因型别为CTX-M型,而且多基因携带情况常见;碳青霉烯类抗生素是目前治疗产ESBLs大肠埃希菌最有效的药物。     

肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分布

目的阐明广州地区肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分布。方法用药敏纸片法对67株耐三代头孢菌素类抗生素的肺炎克雷伯菌进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型筛选,采用PCR检测β-内酰胺酶耐药基因,对部分ESBLs菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)。结果 67株菌中有58株菌ESBLs表型阳性,β-内酰胺酶基因检测显示,44株产CTX-M、43株产SHV(其中10株产超广谱的SHV)、14株产OXA-1群、38株产TEM,7株菌产AmpC。产CTX-M的菌株有20株产CTX-M-1群(包括15株产CTX-M-15)和24株产CTX-M-9群(包括14株产CTXM-14)。PFGE结果显示产ESBLs菌株同源性低。结论广州地区耐三代头孢肺炎克雷伯菌以产CTX-M-1群和CTX-M-9群ESBLs为主。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性及基因型分析

目的:了解某医院分离产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的耐药性和基因型,为临床合理用药提供依据。方法:收集大肠埃希菌544株,其中161株为产ESBLs菌株。采用VITEK 2 Compact分析仪进行药敏检测,双纸片协同试验确证产ESBLs菌株,PCR法扩增耐药基因。结果:产ESBLs菌株对多数抗菌药物的耐药率高于不产ESBLs菌株（P<0.05~P<0.01）。161株产EBSLs菌株携带CTX-M-9型基因98株、TEM型84株、CTX-M-1型62株、OXA-2型15株、OXA-10型7株、SHV型5株。CTX-M-1型和TEM+CTX-M-1型菌株对头孢他啶的耐药率分别为43.5%、59.1%明显高于CTX-M-9型和TEM+CTX-M-9型菌株15%、11.8%的耐药率（P<0.05和P<0.01）。结论:该院产ESBLs大肠埃希菌的基因型主要为CTX-M与TEM型,产ESBLs菌株对多数抗菌药物的耐药性高于不产ESBLs菌株。     

同时产ESBLs和AmpC酶革兰氏阴性杆菌基因型和耐药性分析

目的研究同时产ESBLs和AmpC酶革兰阴性杆菌的耐药基因型及对常用抗菌药物的耐药特征,指导临床合理使用抗生素。方法采用德国西门子全自动细菌鉴定系统Walk away-40 plus鉴定细菌,双纸片确证试验检测ESBLs,硼酸双纸片增效试验检测AmpC酶,K-B法测定药敏结果,PCR技术分析基因型。结果 26珠同时产ESBLs和AmpC酶革兰阴性杆珠菌扩增出ESBLs基因型为TEM、CTX-M-1、CTX-M-9、SHV,未扩增出CTX-M-2;AmpC酶基因型为DHA-1;除亚胺培南全部敏感外,对常用抗生素均呈现高度耐药。结论同时产ESBLs和AmpC酶革兰阴性杆菌在不同地区存在不同耐药基因亚型,产酶珠对常用抗生素耐药率较高。     

基于MALDI-TOFMS鉴别产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的应用研究

目的探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）快速区分不同基因型产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株的可行性。方法收集2019年1至12月浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院各类无污染体液标本中分离的肠杆菌目菌株共368株。采用MALDI-TOFMS进行菌种鉴定,通过VITEKIICompact进行常规药敏试验及ESBLs筛查试验,筛选产ESBLs以及产碳青霉烯酶的肠杆菌目细菌（CRE）。采用PCR检测CTX-M-1、CTX-M-9、TEM、SHV基因,同时利用ClinProTools3.0软件对各基因型菌株的质谱峰图进行分析。结果368株肠杆菌目细菌中共有169株产ESBLs,其中CTX-M型130株,以CTX-M-1型的CTX-M-55亚型（39株,占30.0%）、CTX-M-15亚型（34株,占26.2%）和CTX-M-9型的CTX-M-14亚型（38株,占29.2%）为主。共检出大肠埃希菌255株,其中产ESBLs大肠埃希菌152株,以CTX-M-1型（75株,占49.3%）和CTX-M-9型（58株,占38.2%）为主。通过ClinProTools3.0软件分析发现产CTX-M-9型大肠埃希菌在质荷比为6415m/z和13664m/z处具有特征性蛋白峰。结论产ESBLs菌株主要为大肠埃希菌,基因型主要为CTX-M-1型与CTX-M-9型。MALDI-TOFMS可以快速鉴别CTX-M-9型大肠埃希菌,对尽早指导临床用药具有一定意义。     

革兰阴性杆菌β-内酰胺酶表型和基因型研究

目的了解铜陵地区临床分离的革兰阴性杆菌产生超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、头孢菌素酶(AmpC酶)和金属β-内酰胺酶(MBL)的分布情况,并检测产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs基因型鉴定。方法采用三维试验检测革兰阴性杆菌产ESBLs和AmpC酶,纸片协同法检测MBL,用聚合酶链反应(PCR)对ESBLs表型阳性的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行TEM型、SHV型、CTX-M型三种耐药基因检测并克隆测序。结果356株革兰阴性杆菌检出产酶株90株,检出率25.3%。单产ESBLs革兰阴性杆菌57株,检出率16.0%,以肺炎克雷伯(31.6%)、大肠埃希菌(31.0%)检出率高;单产AmpC酶4株,检出率1.1%,其中阴沟肠杆菌3株;同时产ESBLs和AmpC酶16株,检出率4.5%,以鲍曼不动杆菌(12.5%)检出率最高;产MBL细菌13株,均为非发酵菌,以嗜麦芽窄食单胞菌检出率最高,为71.4%。17株ESBLs表型阳性的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌有16株检出ESBLs耐药基因,其中CTX-M型15株(88.2%),TME型13株(76.1%),SHV型2株(11.8%),有11株细菌同时带有两种ESBLs基因,1株带有3种ESBLs基因。结论革兰阴性杆菌产生ESBLs、AmpC酶和MBL多种β内酰胺酶,铜陵地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs基因型以CTX-M型为主。     

下呼吸道标本肺炎克雷伯菌的耐药性分析及产ESBLs和AmpC酶的检测

目的探讨下呼吸道标本肺炎克雷伯菌的耐药性分析及产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC酶）的检测。方法采用双纸片协同扩散法检测ESBLs和改良三维试验检测AmpC酶,并采用纸片扩散（K-B）法检测180株肺炎克雷伯菌对18种常用抗生素的耐药率。结果180株分离的肺炎克雷伯菌中检出单产ESBEs70株（38．9％）,单产AmpC酶22株（12．2％）,同时产AmpC酶和ESBLs即超超广谱-内酰胺酶（SSBLs）12株（6．7％）。单产AmpC酶、ESBLs及SSBLs对18种常用抗生素的耐药率均高于不产酶菌株（除哌拉西林／他巴唑）。结论下呼吸道感染肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生ESBLs和AmpC酶,临床经验用药可选择β-内酰胺类／β-内酰胺酶抑制剂和头霉素类抗生素,对重症感染首选碳青霉烯类抗生素。     

南京地区产超广谱β-内酰胺酶菌的流行病学调查

目的:了解南京地区产ESBLs菌基因型的流行情况。方法:用TEM型、SHV型、CTX-M型、OXA型ESBLs的特定引物进行扩增并对扩增产物进行测序分析确定基因型。结果:30株产ESBLs大肠埃希菌和30株产ESBLs肺炎克雷伯菌未发现TEM型、SHV型、OXA型ESBLs,51株产CTX-M型ESBLs,主要为CTX-M-3、CTX-M-14。9株未扩增到ESBLs基因型。结论:南京地区产ESBLs菌基因型主要以CTX-M型为主。     

苏州地区临床产超广谱 β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的耐药特征和耐药基因分型

目的分析苏州地区临床产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌的耐药特征和耐药基因型分布情况。方法收集苏州地区5家医院2006年至2009年间自临床标本中分离的肺炎克雷伯菌512株,按CLSI规定的ESBLs初筛和确证试验检测ESBLs,以K-B琼脂扩散法进行药物敏感试验,用PCR方法对分离的产ESBLs菌株进行TEM、SHV和CTX-M基因型检测。结果产ESBLs肺炎克雷伯菌检出率为35.7%（183株）,其中62.8%（115株）携带TEM型基因,36.1%（66株）携带SHV型基因,78.7%（144株）携带CTX-M基因。另外,有41.5%（76株）同时携带两种以上的基因。产酶株的耐药率均明显高于非产酶株（均P〈0.05）。产酶株除对第4代头孢菌素和对加克拉维酸或他唑巴坦等第3代头孢菌素耐药率相对较低外,对其他抗生素均有相当高的耐药率。但无论是产酶株还是非产酶株对亚胺培南的耐药率均为0。结论苏州地区临床产ESBLs肺炎克雷伯菌已达到了较高的比例,并具有多重耐药的特点,其中CTX-M型是最主要的流行基因型。临床上严格控制和合理使用第3代头孢菌素已刻不容缓。     

第三代头孢耐药大肠埃希菌表型及基因型研究

目的 检测3代头孢耐药的大肠埃希菌的表型及基因型,了解产ESBLs大肠埃希菌的最佳检测底物及耐药机制,以利于耐药性的控制与指导临床用药。方法 收集广东省中医院来自各种标本对3代头孢耐药的大肠埃希菌242株,用双纸片确诊法检测ESBLs;标准纸片扩散法(Kirby-Bauer test)检测耐药性;聚合酶链反应（PCR）对ESBLs阳性菌进行耐药基因检测并测序。结果 检测ESBLs的最佳底物是头孢噻肟。242株大肠埃希菌中,产ESBLs 146株,占60.3％ ,产酶株对头孢噻肟等16种抗生素的耐药率比不产酶株都有不同程度增加,但亚胺培南对所有产酶株都敏感。146株产ESBLs细菌中,120株产CTX-M型β-内酰胺酶,52株产TEM型β-内酰胺酶,12株产OXA型β-内酰胺酶,除66株为CTX-M单独存在外,其余均与TEM、OXA共存。结论 临床资料及药敏资料证明产ESBLs大肠埃希菌是重要的医院内感染细菌,且呈多重耐药,治疗中碳青霉烯类药物是最可靠的;含β-内酰胺酶抑制剂的复合制剂耐药程度也较高,应适当增加剂量,并可与阿米卡星联合应用。表型为产ESBLs的菌株中,主要基因型为CTX-M型β-内酰胺酶,其次为TEM型。     

血液中大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶耐药基因型研究

目的 了解本地区血液标本中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的分离率、耐药性和基因型.方法 收集临床血液标本分离的产ESBLs的大肠埃希菌26株,应用PCR基因扩增技术分别检测SHV、TEM、CTX-M、PER、CTX-M-2、Ampc、GES基因,DNA测序确定CTX-M、TEM基因型.结果 在26株菌株中15株为CTX-M型,占57.69%,11株为TEM型,占42.31%.结论 本地区临床血液标本分离的产ESBLs大肠埃希菌流行的主要基因型是CTX-M型和TEM型.     

120例肺炎克雷伯菌ESBLs和AmpC酶检测及耐药分析

目的探讨本院儿科病区下呼吸道标本中分离的肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC酶）的情况及耐药分析。方法采用改良的酶提取物三维试验法检测ESBLs和AmpC酶,采用纸片扩散（K-B）法检测肺炎克雷伯菌对13种抗生素的耐药率。结果从120株下呼吸道标本中分离的肺炎克雷伯菌中单产ESBLS,单产AmpC酶和同时产AmpC酶＋ESBLs的阳性率分别为20.8％（25／120）,10.0％（12／120）和4.2％（5／120）。单产AmpC酶、单产ESBLs及同时产AmpC酶＋ESBLs对13种抗生素的耐药率大部分均高于不产酶菌株。结论本院儿科病区下呼吸道标本中分离的肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs,对产酶菌株临床经验用药首选碳青霉烯类抗生素,其次是β-内酰酶类抗生素和酶抑制剂、头霉类抗生素及其他敏感抗生素。     

深圳市大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的基因分型

目的分析深圳市大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的主要基因型。方法对50株产ESBLs大肠埃希菌分别用TEM、SHV、CTX-M和OXA-1群基因引物进行PCR扩增,并对PCR产物进行序列分析。结果 92%菌株检出CTX-M型ESBLs,测序结果显示,以CTX-M-14型ESBLs为主,其次为CTX-M-55型。结论 CTX-M-14型和CTX-M-55型是深圳地区大肠埃希菌ESBLs的主要基因型。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的：分析临床大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶的基因型分布以及产ESBLs细菌中头孢菌素酶的存在情况。方法：质粒接合实验分析耐药性转移，根据超广谱β-内酰胺酶和头孢菌素酶各种已知基因序列设计引物，进行聚合酶链反应分析，确定超广谱β-内酰胺酶的基因型分布以及头孢菌素酶基因。结果：80.4％的菌株质粒接合实验成功，66％的菌株为TEM基因型，14％的菌株为SHV基因型，10％的菌株为CTX-M型。2株菌同时存在AmpC酶。TEM阳性的大肠埃希菌RAPD带型呈多样性。结论：临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性可以发生转移，ESBLs以TEM基因型为主，部分菌株为SHV、CTX-M型。同一菌株内可以产生2种不同基因型的超广谱β-内酰胺酶。产ESBL菌株不是以细菌克隆播散为主。     

124株肺炎克雷伯菌耐药性分析和产ESBLs株耐药基因分型研究

目的 探讨肺炎克雷伯菌耐药性以及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型的流行状况.方法 用K-B法检测肺炎克雷伯菌对24种常用抗生素的耐药情况;用PCR扩增所有产酶株的TEM、SHV及CTX-M基因片段,分析ESBLs各基因型的流行状况.结果 肺炎克雷伯菌除对碳青霉烯类药物敏感外,对其他抗生素耐药严重;产ESBLs肺炎克雷伯菌检出50株,检出率40.32％.ESBLs基因分型结果显示,多株同时携带2种或2种以上基因型,且多为CTX-M型与TEM型或SHV型基因共同存在.结论 常用抗菌药物耐药严重、呈多重耐药.ESBLs检出率较高,产ESBLs肺炎克雷伯菌的基因型以CTX-M为主.     

儿童临床产ESBLs菌基因型分布及其耐药特征的研究

目的:对本地区2002～2004年儿童临床分离的产超广谱β-内酰胺酶(Extended-Spectrum β-Lactamases,ESBLs)细菌的流行特点和基因型别进行分析,了解产ESBLs细菌的耐药基因的型别分布和耐药特征变化情况.方法:用microscan walkaway-4.0细菌鉴定仪对4022株革兰氏阴性菌鉴定到种并做药敏分析,K-B法确认产ESBLs菌株,并用PCR法扩增,筛选其中108株ESBLs阳性菌株进行初步基因分型.结果:产ESBLs菌1468株,大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌的分别为52.5%和65.8%;总产酶率为58.0%;2002～2004年产酶率分别为:68.2%、56.9%、50.8%.PCR初步分型结果表明:108株ESBLs菌检测到TEM、SHV及CTX三种基因型;大肠埃希氏菌59株,主要为TEM型(56/59);肺炎克雷伯菌29株,主要为SHV型(28/29);阴沟肠杆菌13株,以TEM型为主(12/13);铜绿假单孢菌7株,以TEM型为主(6/7).2002年以TEM型为主(75%),2003年主要为TEM型(40%)和SHV型(57.1%),2004年主要为TEM型(90.9%),CTX为少见基因型(3.7%).产ESBLs菌对青霉素类、氨曲南及头孢菌素类抗生素耐药率为56.2%～100%,具有多重耐药特点.结论:产ESBLs菌发生率在逐年下降,产ESBLs菌主要携带TEM和SHV型β-内酰胺酶基因,其中绝大部分产TEM型β-内酰胺酶;但耐药情况不容乐观;提示临床应加强细菌耐药性与基因型变化的了解,合理用药,减少耐药菌的产生,更好的控制院内感染.     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmPC酶和ESBLs的检测及耐药性

目的了解急性阑尾炎患者阑尾残端脓液分离出大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶和ESBLs的情况及耐药性。方法采用纸片扩散确证法检测ESBLs，酶提取物三维试验方法检测AmpC酶。结果180株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中检出单产ESBLs43株、单产AmpC酶17株、同时产AmpC酶和ESBLs 10株，检出率分别为23．9％、9．4％和5．6％；产酶菌株对15种抗生素的耐药率大部分均高于不产酶菌株。结论阑尾残端脓液分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs，对产酶菌株临床经验用药首选碳青霉烯类抗生素。     

郑州地区大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶基因型分布

目的:研究郑州地区大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型分布.方法:收集郑州大学第一附属医院、第三附属医院检验科细菌室2007年至2008年分离的产ESBLs大肠埃希菌138株,采用PCR技术进行ESBLs型别检测.结果:138株大肠埃希菌中共检出TEM(102株)、SHV(87珠)、CTX.M-1(42株)、CTX-M-14(66株)、CTX-M-25(9株)、CTX-M-38(6株)、OXA-1(12株)和OXA-20(3株)8种型别,其中以TEM型最为多见(74.9%).同一菌株可携带1-5种ESBLs基因型别,1种基因型别中TEM为多见(13.0%),2种基因型别中以SHV+CTX-M-14为多见(10.9%),3种基因型别中以SHV+TEM+CTX-M-1为多见(10.9%),4种基因型别中以SHV+TEM+CTX-M-1+CTX-M-14为多见(8.7%),5种基因型别为SHV+TEM+CTX-M-14+CTX-M-25+CTX-M-1(2.2%).结论:郑州地区ESBk基因型别以TEM型为主,同一菌株可携带多种型别ESBLs.     

136析革兰阴性杆菌ESBLs和AmpC酶的检测

随着抗生素的广泛使用,细菌的耐药性已成为人们关心的热点问题。已发现越来越多的革兰阴性杆菌对B-内酰胺类抗生素产生耐药性。细菌产超广谱B-内酰胺酶(ESBLs)和1-型β-内酰胺酶(AmpC酶)是革兰阴性杆菌对β-内酰胺类抗生素产生耐药性的机制之一。其中AmpC酶对β-内酰胺酶抑制剂不敏感,使高产AmpC酶的菌株引起的感染更加难治。此外,出现AmpC酶由原来局限于染色体编码向质粒转移的趋势,大大提高了AmpC酶的横向传播能力[1]。为调查革兰阴性杆菌的产酶情况,我们对136株革兰阴性杆菌进行ESBLs和AmpC酶检测,并对检测结果进行分析。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌blaCTX-M基因型及耐药性检测

目的 了解我院产超广谱13，内酰胺酶（extended-spectrumβ-lactamascs，ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中CTX-M型耐药基因的分布及其耐药情况。方法 用针对SHV、TEM、CTX-M基因的特异性引物进行PCR扩增确定超广谱β--内酰胺酶基因型，对扩增到的CTX-M基因进行DNA序列分析；采用三维实验检测菌株产AmpC酶；采用K—B琼脂扩散法进行菌株的药物敏感性测定。结果34株产CTX-M酶菌中有28株同时产2种或2种以上的B．内酰胺酶，并且其中有一株同时产两种CTX-M酶。序列分析证实35份CTX-M的扩增产物中有17份为CTX-M-14，占48．6％；11份为CTX-M-3，占31．4％；4份为CTX-M-9，占11．4％；2份为CTX—M．19，占5．7％；1份为CTX-M-13，占2．9％。产CTX-M酶菌株对氨苄西林、头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢呋辛钠、哌拉西林、环丙沙星、头孢吡肟、头孢哌酮，舒巴坦、头孢他啶、头孢西丁、庆大霉素、哌拉西林，他唑巴坦、氨曲南、亚胺培南和美洛培南的耐药率分别是100％、100％、100％、100％、100％、100％、97．1％、52．5％、53．1％、32．4％、38．2％、75．8％、23．5％、63．6％、0、0。产其它亚型ESBLs的菌株对上述药物的耐药率分别是100％、92．9％。78．6％、71．4％、92．9％、92_3％、57．1％、21．4％、7．1％、78．6％、64．3％、64-3％、38．5％、78．6％、0、0。结论 产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中CTX-M型耐药基因主要是CTX-M-14、CTX-M-3、CTX-M-9、CTX-M-19和CTX—M．13；产CTX-M酶菌株绝大多数同时产其它多种β-内酰胺酶，其对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢呋辛钠、哌拉西林、环丙沙星、头孢吡肟、头孢哌酮，舒巴坦的耐药水平高于不产CTX-M型ESBLs株（P〈0．05）；耐药表型呈多样性，亚胺培南或美洛培南是临床治疗产CTX-M酶菌株感染的首选药物。