非息肉性大肠癌发生的分子机理

分析非息肉性大肠癌发生的分子机理，为早期诊断和预测预后提供理论依据方法用ＰＣＲ－ＳＳＬＰ方法，引物Ｄ２Ｓ４４１，Ｄ２Ｓ１１９和Ｄ２Ｓ１２３检测３１例大肠癌患者的癌组织和癌旁组织的微卫星ＤＮＡ长度片段多态性，６％聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色结果３１例患者中，１号病例的癌组织中，三对引物扩增产物均出现微卫星ＤＮＡ长度多态变化。６号病例的癌组织的Ｄ２Ｓ４４１引物扩增产物出现杂合性丢失，Ｄ２Ｓ１１９和Ｄ２Ｓ１２３引物的扩增产物出现微卫星ＤＮＡ长度多态变化，其余２９例患者的癌组织的３对引物扩增产物均未出现异常变化。结论部分散发性非息肉性大肠癌的发生与微卫星ＤＮＡ的不稳定性和杂合性丢失有关。     

大肠癌中心灶,癌旁和淋巴结转移灶细胞DNA倍体的流式细胞计量…

用流式细胞仪对５１例大肠癌患者的癌中心灶、癌旁组织和淋巴结转移灶２６３份样品细胞进行ＤＮＡ含量测定。结果表明，各组均出现了ＤＮＡ异倍体病例，癌中心灶、癌旁组织和淋巴结检出率分别为７２．６％、２５．２％和２２．２％ 。在１４例二倍体肿瘤中有５例癌旁组织中出现了异倍体细胞。淋巴结转移灶ＤＩ值与癌中心灶有良好的一致性，而癌旁组织与癌中心灶的一致性较差。在癌中心灶不同倍体类型中，异倍体肿瘤的浸润及转移能力     

大肠癌中心灶、癌旁和淋巴结转移灶细胞DNA倍体的流式细胞计量术分析

用流式细胞仪对５１例大肠癌患者的癌中心灶、癌旁组织和淋巴结转移灶２６３份样品细胞进行ＤＮＡ含量测定。结果表明，各组均出现了ＤＮＡ异倍体病例，癌中心灶、癌旁组织和淋巴结检出率分别为７２．６％、２５．２％和２２．２％。在１４例二倍体肿瘤中有５例癌旁组织中出现了异倍体细胞。淋巴结转移灶ＤＩ值与癌中心灶有良好的一致性，而癌旁组织与癌中心灶的一致性较差。在癌中心灶不同倍体类型中，异倍体肿瘤的浸润及转移能力明显高于其它倍体肿瘤。     

子宫内膜癌微卫星不稳定性和p53表达的临床意义

目的：检测微卫星不稳定性（ＭＩ）在子宫内膜癌中的阳性率及其与ｐ５３蛋白表达的相关性和临床意义。方法：常规方法提取了３６份子宫内膜癌新鲜冰冻组织和相应外周血的ＤＮＡ，利用ＰＣＲ技术扩增，其分别位于５号、１０号、１２号、１７号和１８号染色体上的６个微卫星位点，包括５（Ｄ５Ｓ１０７）、１０（Ｄ１０Ｓ１９７）、１２（Ｄ１２Ｓ７９、Ｄ１２Ｓ９５）、１７（Ｄ１７Ｓ５１３）和１８（Ｄ１８Ｓ５８）。用免疫组织化学方法检测其石蜡包埋组织切片中的ｐ５３蛋白表达情况。结果：ＭＩ者发生率为２７．７％（１０／３６），其中３例乳头状浆液性子宫内膜癌均未表现ＭＩ。子宫内膜样癌的ＭＩ发生率为３０．３％。ＭＩ与ｐ５３蛋白表达呈负相关，与患者的年龄、临床分期、组织分化程度以及有无淋巴结转移无明显相关性。结论：ＭＩ是子宫内膜样癌较普遍的基因异常，与     

三对引物聚合酶链反应扩增检测肝细胞癌肝组织中乙型肝炎病毒…

用聚合酶链反应技术检测了１６例肝细胞癌患者癌灶和癌旁肝组织中乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸。所用三对引物Ｓ１／Ｓ２、Ｃ１／Ｃ２、Ｃ１／Ｃ２和Ｘ１／Ｘ２分别选自ＨＶＢＤＮＡ的Ｓ区，前Ｃ和Ｃ区，以及Ｘ区，以质粒提取ＨＢＶＤＮＡ作灵敏度测定，ＰＣＲ－ＥＢ可达１０＾－２ｐｇ，ＰＣＲ－ＳＢＨ可达１０＾６Ｐｇ，以Ｓ，Ｃ和Ｘ引物扩增，阳性率分别为４３．８％（１４／３２），７１．９％（２３／３２）和７１．９％（２３／３     

三对引物聚合酶链反应扩增检测肝细胞癌肝组织中乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１６例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者癌灶和癌旁肝组织中乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（ＨＢＶ　ＤＮＡ）。所用三对引物Ｓ１／Ｓ２、Ｃ１／Ｃ２和Ｘ１／Ｘ２分别选自ＨＢＶ　ＤＮＡ的Ｓ区、前Ｃ和Ｃ区，以及Ｘ区。以质粒提取ＨＢＶＤＮＡ作灵敏度测定，ＰＣＲ－ＥＢ可达１０－２ｐｇ，ＰＣＲ－ＳＢＨ可达１０－６ｐｇ。以Ｓ、Ｃ和Ｘ引物扩增，阳性率分别为４３．８％（１４／３２）　７１．９％（２３／３２）和７１．９％（２３／３２）；以Ｃ引物和Ｘ引物扩增，阳性率差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。Ｓ引物扩增，阳性率与Ｃ引物比较，差异有显著意义（Ｐ＜０．０５）；与Ｘ引物比较，差异颇大（０．１０＞Ｐ＞０．０５）。１６例肝中均检出ＨＢＶＤＮＡ片段。结果提示，防治ＨＢＶ感染为我国ＨＣＣ一级预防的重要方面。Ｘ基因整合导致细胞恶变，Ｃ基因表达受阻逃避宿主的免疫监视可能是临床肝癌发生的机制。     

大肠癌组织中抑癌基因APC突变的研究

为了解肿瘤抑制基因ＡＰＣ基因在大肠癌中突变的规律。方法应用聚合酶链反应┐单链构象多态性技术（ＰＣＲ┐ＳＳＣＰ）对３０例人大肠癌组织ＡＰＣ基因１５号外显子的三个区１５┐６、１５┐７、１５┐８进行了检测。检测步骤主要包括人基因组ＤＮＡ提取、ＰＣＲ反应扩增及ＰＣＲ产物的ＳＳＣＰ分析。结果检查结果显示在第１５┐６及１５┐７片段上共１０例发生了突变，突变率为３３．３％。突变的１０例中有８例发生于１５┐７外显子片段，占突变总数８０％（８／１０），２例发生于１５┐６片段，占突变总数的２０％（２／１０）。结论证明我国大肠癌患者中存在着ＡＰＣ基因的突变，且１５┐７片段是突变集中区。     

癌细胞线粒体DAN CoⅡ及ATPase6基因结构探讨

目的 探讨癌细胞ｍｔＤＮＡ基因编码区的结构特征。 方法 采用ＰＣＲ和ＰＣＲ产物ＨａｅⅢ限制性片段长度多态性分析方法，分析了６株人癌细胞系、８例癌患者及８例正常人白细胞线粒体ＣｏⅡ和ＡＴＰａｓｅ６基因的缺失和限制酶谱变化。 结果 在６个癌细胞系、８例癌患者和８例健康成人白细胞ｍｔＤＮＡ中，两个基因片段均未出现缺失现象；６个癌细胞系及８例癌患者白细胞ｍｔＤＮＡ Ｃｏ Ⅱ和ＡＴＰａｓｅ６基因ＰＣＲ扩增片     

癌灶,癌旁组织和淋巴转移灶DNA含量的对比分析

作者用流式细胞术对５１例大肠癌和８６例乳腺癌患者的癌灶、癌旁组织和淋巴结转移灶细胞进行了ＤＮＡ含量和增殖活性（ＳＰＦ）的对比研究。结果表明，癌旁组织是否出现ＤＮＡ异倍体细胞，与癌灶关系不大。这提示，癌旁异倍体细胞群的出现可能是致癌因子的直接作用。在癌灶、癌旁和淋巴结对比研究时剔除各组的二倍体标本后，其异倍体病例间比较时发现癌灶ＤＩ值与淋巴结的十分接近（大肠癌分别为１．５６和１．５２）；乳腺癌则分别     

口腔鳞癌中染色体9p、9q的杂合性丢失及p16表达的研究

检测９号染色体及ｐ１６基因在口腔鳞癌发生发展中的作用。方法：应用聚合酶链反应技术,检测经显微切割的口腔鳞癌组织中两个ＤＮＡ微卫星多态标记ＤｑＳ３１９（９ｐ２１）和ＤｑＳ２９９（９ｑ２２～３１）,分析染色体９ｐ、９ｑ的杂合性丢失情况。同时应用免疫组织化学方法观察其ｐ１６蛋白表达状况。结果：２９．４％出现ＤｑＳ３１９标记的ＬＯＨ,ＤｑＳ２９９标记发现较高频率ＬＯＨ（４３．８％）。ｐ１６蛋白免疫组化染色阳性率为８６．４％。其中３例未表达ｐ１６的标本中,有２例发现ＤｑＳ３１９的ＬＯＨ。结论：口腔鳞癌在染色体９ｐ２１区域频繁丢失可能与ｐ１６失活有关,而染色体９ｑ２２～３１区域在口腔鳞癌的较高频率丢失推测此区可能存在与肿瘤发生密切相关的抑癌基因。     

CD44V6蛋白在大肠癌中的表达及其意义

目的 研究大肠癌中ＣＤ４４Ｖ６蛋白的表达及其对大肠癌进展和转移的影响。方法 收集大肠癌新鲜组织标本５２例（其中包括无转移病例的原发灶２９例及有转移的淋巴结２３例）、腺瘤性息肉１６例及正常大肠粘膜组织１１例。应用ＬＳＡＢ免疫组织化学染色技术检测上述各种组织中ＣＤ４４Ｖ６的表达。结果 无转移大肠癌癌灶中的ＣＤ４４Ｖ６的阳性表达率为５１．７％（１５／２９）,转移灶中的ＣＤ４４Ｖ６表达率为８７．０％（２０     

癌灶、癌旁组织和淋巴结转移灶DNA含量的对比分析

作者用流式细胞术对５１例大肠癌和８６例乳腺癌患者的癌灶、癌旁组织和淋巴结转移灶细胞进行了ＤＮＡ含量和增殖活性（ＳＰＦ）的对比研究。结果表明，癌旁组织是否出现ＤＮＡ异倍体细胞，与癌灶关系不大。这提示，癌旁异倍体细胞群的出现可能是致癌因子的直接作用。在癌灶、癌旁和淋巴结对比研究时剔除各组的二倍体标本后，其异倍体病例间比较时发现癌灶ＤＩ值与淋巴结的十分接近（大肠癌分别为１．５６和１．５２）；乳腺癌则分别为１．７３和１．７０），癌旁组织则明显减低（分别为１．１９和１．５９）；其ＳＰＦ也显示了类似的变化规律。这表明，癌灶和淋巴结中癌细胞的生物学特性十分相似。这提示，淋巴结中的恶性细胞可能是直接从癌灶转移过来的，而癌旁组织的恶性细胞可能是新生的。     

乳腺癌组织染色体17p13的杂合性缺失分析

目的检测乳腺癌组织在染色体１７ｐ１３区各位点的杂合性缺失。用方法通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析ＶＮＴＲ探针ＹＮＺ２２的杂合性缺失。用ＰＣＲ扩增微卫星重复序列后，同位素标记、变性胶分离分析微卫星ｍａｒｋｅｒ的杂合性缺失。结果１１例乳腺癌组织中有３例在染色体１７ｐ１３．３区有杂合性缺失，占２７％。缺失的上限为紧邻端粒的Ｄ１７Ｓ１８６６位点，缺失至Ｄ１７Ｓ１８４０位点，缺失的下限尚待确定。位于染色体１７ｐ１３．１区的ＴＰ５３位点有１例变化产生新长度的微卫星重复序列，４例存在杂合性缺失，其中２例在１７ｐ１３．３区也有杂合性缺失。结论乳腺癌组织在染色体１７ｐ１３．３区有较高的杂合性缺失。预示该区可能存在有关的抑癌基因。１７ｐ１３．１区的ＴＰ５３位点也有变化，说明ｐ５３基因及产物在乳腺癌的癌变过程中也起着一定的作用     

大肠癌微卫星不稳定性及其临床意义

目的 了解大肠癌微卫星不稳定性（ＭＩ）情况。方法 用６个微卫星位点检测ＰＣＲ扩增所选位点ＰＣＲ产物用８％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染。结果 ６０例大肠癌中，２０例表现ＭＩ，其中１１例为复制错误（ＲＥＲ）阳性。ＲＥＲ阳性与ＲＥＲ阴性大肠癌患者相比，发病年龄较年轻，一级亲属有恶性肿瘤病史者明显高于ＲＥＲ阴性，倾向位于结肠，呈浸润性生长，Ⅲ￣Ⅳ期比例高。５例大肠癌伴大肠腺瘤病例中，４例腺瘤有ＭＩ。结论     

41例大肠癌组织APC基因突变检测

目的 探讨散发性大肠癌与ＡＰＣ基因突变的关系。方法 ４１例大肠癌组织标本,应用银染－单链构相多态性技术分析ＡＰＣ基因突变情况。结果 ４１例大肠癌患者组织标本中,ＡＰＣ基因突变率为４８．８％（２０／４１）。引物１、引物２组织标本扩增产物突变检出率分别为１５／４１（３６．６％）、７／１４（１７．１％）,两者同时检测到突变的有２例。结果还表明,ＡＰＣ基因的突变与ＣＥＡ水平、淋巴结转移、病理分化程度统计学     

荧光定量ＰＣＲ法检测ＭＤＭ２Ｔ３０９Ｇ位点多态性

目的　建立一种简便易行的ＭＤＭ２基因单核苷酸多态性（ＳＮＰ）３０９位点的检测方法。方法　用ＤＮＡ提取试剂盒提取外周血ＤＮＡ,建立ＭＤＭ２ＳＮＰ３０９位点荧光定量ＰＣＲ熔解曲线检测法。应用煮沸法处理血样取得粗制ＤＮＡ,行荧光定量ＰＣＲ检测,建立位点特异引物法检测ＭＤＭ２ＳＮＰ３０９位点基因型。比较静置不同时间、反复冻融等处理以及存在血液学指标异常的血样经煮沸法提取ＤＮＡ对荧光定量ＰＣＲ扩增反应的影响,通过观察ＰＣＲ扩增情况,评估不同处理方法对ＰＣＲ扩增反应的影响。结果　荧光定量建立ＭＤＭ２ＳＮＰ３０９位点ＰＣＲ检测方法。煮沸法提取的ＤＮＡ可用于普通ＰＣＲ、荧光定量ＰＣＲ扩增体系,且煮沸法处理血样具有较广的适用范围。结论　采用ＭＤＭ２基因ＳＮＰ３０９位点特异性引物行荧光定量ＰＣＲ检测法是一种简便易行的ＭＤＭ２基因ＳＮＰ３０９位点检测方法,该方法有较好的临床适用性。     

癌细胞线粒体DNA CoⅡ及ATPase6基因结构探讨

目的探讨癌细胞ｍｔＤＮＡ基因编码区的结构特征。方法采用ＰＣＲ和ＰＣＲ产物ＨａｅⅢ限制性片段长度多态性分析方法,分析了６株人癌细胞系、８例癌患者及８例正常人白细胞线粒体ＣｏⅡ和ＡＴＰａｓｅ６基因的缺失和限制酶谱变化。结果在６个癌细胞系、８例癌患者和８例健康成人白细胞ｍｔＤＮＡ中,两个基因片段均未出现缺失现象;６个癌细胞系及８例癌患者白细胞ｍｔＤＮＡＣｏⅡ和ＡＴＰａｓｅ６基因ＰＣＲ扩增片段ＨａｅⅢ的酶切位点一致,且与人ｍｔＤＮＡ剑桥序列相应区段ＨａｅⅢ酶切位点完全同源,与８例健康成人白细胞ｍｔＤＮＡ相应基因片段ＨａｅⅢ酶切位点比较,也具有非常高的同源性。结论癌细胞ｍｔＤＮＡ基因编码区结构非常稳定。     

酶免疫—醋酸纤维薄膜电泳法诊断大肠癌

以抗结肠癌及胰腺癌的单克隆抗体用酶免疫──醋酸纤维薄膜电泳法，检测大肠癌及非癌疾病患者粪便中的癌相关抗原。其中大肠癌６１例，慢性肠炎２０例，正常人１００例。结果表明，四株单克隆抗体ＣＬ－３、ＣＬ－４、ＰＳ－２、ＰＳ－９对应抗原在大肠癌患者粪便中的平均含量显著高于正常对照组及非癌肠道疾病组，其阳性率分别为７５．４％、５９．４％，７２．５％和５１．３％，如将三株单抗ＣＬ－３、ＣＬ－４、ＰＳ－２组合应用，则大肠癌组阳性率达８６．２％，正常组为１５．２％，肠炎组为１６．６％，６５例大肠癌中，５例早期诊断（ＤｕｋｅｓＡ期）患者均为阳性。本方法可能为早期诊断大肠癌提供简便省时，价廉，便于推广的新方法。     

大肠癌细胞DNA倍体分析及其临床意义

应用流式细胞术对５２例大肠癌行肝瘤、交界和残端组织ＤＮＡ倍体分析，以深讨倍体与大肠癌组织学类型、癌浸润深度、淋巴结转移以及临床分期的关系。结果：肿瘤组织均为异倍体，残端组织为二倍体，少数病例残端组织学阴性，而ＤＮＡ含量仍为异常值，Ｓ．Ｇ２、Ｍ（细胞周期）增高，细胞增殖活跃。     

显微切割鼻咽癌组织16号染色体杂合性缺失的研究

目的：研究鼻咽癌中１６号染色体的缺失情况。方法：采用显微切割的方法获取肿瘤组织,然后用ＰＣＲ的方法以１６号染色体上的８对引物对３８例鼻咽癌进行分析。结果：３８例鼻咽癌组织中所有标本至少有一个位点出现有杂合笥缺失,其中Ｄ１６Ｓ５３３出现杂合性缺失的频率最高,占８６．１％（３１／３３）,此外,杂合性缺失频率超过５０％的有引物Ｄ１６Ｓ３９８、Ｄ１６Ｓ３００和Ｄ１６Ｓ４２０。分别占７８．８％（２６／３３）