不同严重程度阿尔茨海默病患者血清miR-128,miR-223表达水平变化与炎症反应及认知功能的相关性分析

目的 探讨不同严重程度阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)患者血清微小RNA(MicroRNA,miR)-128,miR-223表达水平变化与炎症反应及认知功能的相关性。方法 选择2018年6月-2020年1月本院收治的200例AD患者(AD组),根据临床痴呆评定量表(Clinical dementia rating scale,CDR)评分将AD患者分为轻度组(CDR评分1分,66例)、中度组(CDR评分2分,83例)、重度组(CDR评分3,51例)3个亚组,另选择207例体检健康志愿者为对照组; 采用简易智能精神状态检查量表(Mini-mental state examination,MMSE)评估AD患者认知功能; 检测所有受试者血清miR-128,miR-223表达水平; 检测AD患者血清白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白介素-1β(Interleukin-1,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-,TNF-α)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平; 分析血清miR-128,miR-223表达水平与TNF-α,IL-1β,IL-6,CRP水平、MMSE总分的相关性。结果 AD组血清miR-128表达水平高于对照组(P<0.05),miR-223表达水平低于对照组(P<0.05)。重度组血清miR-128表达水平、TNF-α,IL-1β,IL-6,CRP水平高于中度和轻度组(P<0.05),且中度组高于轻度组(P<0.05); 重度组血清miR-223表达水平、MMSE总分低于中度和轻度组(P<0.05),且中度组低于轻度组(P<0.05)。miR-128表达水平与TNF-α,IL-1β,IL-6,CRP呈正相关(r≥0.496,P<0.05),与MMSE总分呈负相关(r =-0.571,P<0.05); miR-223表达水平与TNF-α,IL-1β,IL-6,CRP呈负相关(r ≤-0.572,P<0.05),与MMSE总分呈正相关(r=0.531,P<0.05)。结论 AD患者血清miR-128表达水平上调,miR-223表达水平下调,两者异常变化可能诱导炎症反应,进而参与AD患者认知功能损伤过程。     

2,5-二叔丁基对苯二酚对阿尔茨海默病细胞模型的保护作用

目的 探讨2,5-二叔丁基对苯二酚(2,5-Di-tert-butylhydroquinone,DBHQ)对阿尔茨海默病细胞模型的保护作用及分子机制。方法 利用K18聚集体处理稳定转染Tau片段的HEK293细胞,制作Tau蛋白聚集的细胞模型; 利用DBHQ处理细胞,荧光显微镜检测DBHQ对Tau蛋白聚集的影响; 在HT22神经元中转导K18聚集体,光镜下观察DBHQ对HT22细胞形态的影响; 用DCFH-DA探针及DHE探针检测DBHQ对活性氧和超氧阴离子的影响; 在HT22细胞中转染mito-Dendra2质粒,共聚焦显微镜动态记录线粒体融合功能。结果 K18聚集体诱导细胞内Tau蛋白聚集,而DBHQ可以减轻K18聚集体诱导的Tau蛋白聚集; K18聚集体处理后HT22细胞发生形态改变,而DBHQ减轻K18诱导的细胞形态变化,并降低细胞内活性氧和超氧阴离子水平; 线粒体融合功能检测发现DBHQ增强线粒体功能。结论 本研究表明DBHQ可减少细胞内的Tau蛋白聚集,并保护线粒体、减轻氧化应激水平,对阿尔茨海默病细胞模型起到保护作用。     

壮筋续骨汤含药血清体外培养大鼠成骨细胞的增殖*☆

背景：壮筋续骨汤具有促进胫骨骨折愈合的作用。 目的：观察壮筋续骨汤含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响。 方法：大鼠灌胃给予壮筋续骨汤后制备含药血清。取第2代生长状况良好出生48 h内的SD大鼠成骨细胞,对照组和壮筋续骨汤组分别加入5%,10%,20%的正常SD大鼠血清和含药血清培养72 h。 结果与结论：MTT法检测发现壮筋续骨汤含药血清对成骨细胞的增殖有明显的促进作用,以10%壮筋续骨汤组作用最明显(P < 0.05)。流式细胞仪检测各组细胞DNA合成期(S期)的比例,发现壮筋续骨汤组处于S期的细胞比例明显大于对照组 (P < 0.05)。说明壮筋续骨汤含药血清能促进成骨细胞DNA的合成,使更多的细胞进入S期,促进体外培养的成骨细胞增殖。     

黄精含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖的效应及机制

背景：近年来,对传统单味中药有效成分、复方中药及含药血清调控骨髓间充质干细胞增殖与分化作用的研究已有报道,但鲜有涉及到机制的研究。 目的：观察黄精含药血清体外对骨髓间充质干细胞增殖的影响,并分析其作用途径与机制。 方法：雄性SD大鼠用于骨髓间充质干细胞的提取;雌性SD大鼠以中药水溶液灌胃后定时取血制备含药血清。全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,将传至P3代的细胞,制备成单细胞悬液接种于96孔培养板后,分别加入黄精含药血清及空白血清,各组血清浓度分别为培养液体积的5%,10%,15%,20%,25%及30%。MTT法检测黄精含药血清对骨髓间充质干细胞增殖的影响;RT-PCR检测各细胞因子mRNA表达;实时PCR检测粒细胞集落刺激因子mRNA表达。 结果与结论：与空白血清组相比,体积分数10%的黄精含药血清具有明显促进骨髓间充质干细胞增殖的作用(P < 0.05),并显著促进粒细胞集落刺激因子mRNA的表达(P < 0.05)。提示体积分数10%的黄精含药血清具有促进骨髓间充质干细胞增殖的作用,可能与其促进粒细胞集落刺激因子mRNA表达有关。     

高表达GPX_l对阿尔茨海默病细胞模型内P-CREB水平的影响

目的探讨细胞内高表达谷胱甘肽过氧化物酶(GPXl)能否提高阿尔茨海默病(AD)细胞模型中cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的磷酸化水平。方法采用MTT法确定G418的筛选浓度,采用目的质粒与绿色荧光蛋白质粒共转染的方式将GPXl重组质粒和pLNCX空载体质粒转染至PC12细胞,以G418筛选浓度筛选出成功转染进GPXl重组质粒和pLNCX空载体质粒的细胞;采用MTT法确定β淀粉样蛋白(Aβ25-35)的最佳诱导浓度,建立AD细胞模型;以最佳Aβ25-35浓度分别诱导转染GPXl重组质粒组和转染pLNCX空载体质粒组细胞48h,采用免疫细胞化学方法检测诱导前后各组细胞内P-CREB的水平。结果在最佳Aβ25-35浓度诱导转染GPXl重组质粒组和转染pLNCX空载体质粒组前,两组细胞内的P-CREB水平无统计学差异(P>0.05);诱导48h后,两组细胞内P-CREB水平均显著降低(P<0.01),但转染GPXl重组质粒组细胞内的P-CREB水平仍明显高于转染pLNCX空载体质粒组的水平(P<0.01)。结论 Aβ25-35可导致细胞内P-CREB水平降低,转染GPXl重组质粒可在一定程度上逆转Aβ25-35所致的P-CREB水平降低。     

依达拉奉对阿尔茨海默病模型大鼠认知损害的保护作用和脑内Bcl-2表达的影响

目的:观察依达拉奉对双侧脑室内注射链脲菌素(ICV-STZ)诱导的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠认识功能的影响,并探讨其作用机制。方法:48只成年雄性SD大鼠随机分为4组：假手术组(S)、依达拉奉+假手术组(E+S)、模型组(L)、依达拉奉+制模组(E+L)。Morris水迷宫测试各组大鼠认知功能;比色法检测各组大鼠海马和皮质的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;免疫组织化学法检测大鼠海马和皮质的Bcl-2表达。结果: Morris水迷宫测试中,与S组比较,L组大鼠目标象限停留时间显著减少(P＜0.05),潜伏期显著延长(P＜0.05);E+L组比L组目标象限停留时间显著增加(P＜0.05),潜伏期显著缩短(P＜0.05)。E+L组与L组比较,脑内SOD含量显著增加(P＜0.05),MDA含量显著减少(P＜0.05)。免疫组织化学染色显示,与L组比较,E+L组Bcl-2表达阳性率显著增高(P＜0.05)。结论:依达拉奉能够保护STZ诱导的AD模型大鼠的认知损害,其机制可能是改善大鼠脑内氧化应激和减少神经细胞凋亡。     

金乌骨通胶囊含药血清对成骨细胞骨保护素/核因子κB受体活化因子配体分泌的影响*

背景：金乌骨通胶囊对绝经后骨质疏松症具有明显的治疗作用,但其具体的作用机制尚不清楚。目的：观察金乌骨通胶囊含药血清对成骨细胞骨保护素、细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator nuclear factor kappa B ligand,RANKL)表达的影响。方法：切除雌性SD大鼠双侧卵巢制备去卵巢血清,灌胃给予去卵巢大鼠金乌骨通胶囊制备去卵巢含药血清。取第3代生长状况良好的出生24 h内的SD大鼠成骨细胞,正常血清组、去卵巢血清组、去卵巢含药血清组分别加入正常雌性SD大鼠血清、去卵巢血清和去卵巢含药血清培养72 h。采用酶联免疫吸附法检测成骨细胞骨保护素和RANKL的分泌水平。结果与结论：与正常血清组比较,去卵巢血清组成骨细胞骨保护素的表达明显降低(P < 0.01),而RANKL的表达明显升高(P < 0.05);与去卵巢血清组比较,去卵巢含药血清组成骨细胞骨保护素的表达明显升高(P < 0.05),RANKL 的表达明显降低(P < 0.05)。说明金乌骨通胶囊可通过增加成骨细胞骨保护素的表达,抑制RANKL的表达来实现治防治骨质疏松症的目的。     

胎鼠神经干细胞移植对阿尔茨海默病模型大鼠脑的保护作用

背景: 迄今为止阿尔茨海默病（AD）的发病机制尚不明了。没有任何药物可以阻止疾病的发展,这就需要人们发现新的方法来对其进行治疗。神经干细胞（NSCs）是具有自我再生能力的细胞。人们希望通过NSCs移植来治疗AD。我们的实验将对此进行研究。目标：通过实验对胎鼠NSCs移植对AD模型大鼠的保护效应进行研究。设计,时间及地点：体外培养、体内移植及蛋白质组学等实验均在吉林大学第一临床医院完成（时间2007.07-2009.03）。材料：细胞培养基及神经生长因子均来自sigma。方法：NSCs是从胎鼠海马中获得。通过切断双侧海马制备AD模型大鼠,此后2周,将NSCs移植入AD模型大鼠脑内进行试验。主要方法：通过蛋白质组学对不同实验组（正常组、移植组、模型组）海马的蛋白水平进行测定。同时应用原位杂交技术和免疫组织化学方法对实验鼠海马及额叶的胆碱乙酰转移酶（Chat）mRNA,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S100β进行测定。结果：蛋白质组学方法发现,通过不同实验组间对比GFAP、热休克蛋白90(Hsps90)、热休克蛋白70(Hsps70)、丝状肌动蛋白(F-actin)及肌动蛋白(actin)等均发生改变。所有结果显示,与AD模型组大鼠相比ChatmRNA、 Hsps、 F-actin和Actin的表达在NSCs移植组均升高;而在相同区域GFAP和S100β的阳性细胞表达在NSCs移植组却相对减少。结论：我们的试验结果显示NSCs对损伤的海马产生重要的影响。     

miR-381-3p通过靶向调控TP53表达对大鼠脊髓损伤后修复的作用及其机制研究

目的 探讨微小RNA-381-3p(MicroRNA-381-3p, miR-381-3p)对脊髓损伤(Spinal cord injury, SCI)大鼠继发性损伤的修复机制以及其对肿瘤抑制蛋白基因(Tumor protein p53,TP53)表达水平的调控机制。方法 双荧光素酶以及蛋白质免疫共沉淀检测miR-381-3p和TP53的作用;用改良Allen′s重物垂直撞击法复制大鼠SCI模型;实验动物分为假手术(Sham)组、SCI组、miR-381-3p-mimic(mimic)组、mimic+pc DNA3.1 TP53(mimic+pc)组,每组各10只;mimic组大鼠尾静脉注射miR-318-3p mimic; mimic+pc组大鼠尾静脉注射miR-318-3p mimic和pc DNA3.1 TP53;Sham组和SCI组大鼠尾静脉注射miR-318-3p mimic-NC和pc DNA3.1 TP53-NC;检测各组大鼠的运动功能评分(Basso beattie bresnahan, BBB)评分;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记试剂盒(Terminal-...     

血清miR-155及缺氧诱导因子1α的表达对急性脑梗死的诊断价值

目的探讨血清miR-155及其靶基因缺氧诱导因子1α(hypoxiainducible factor 1α,HIF1A)与急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACI)的相关性,探寻与ACI诊断及治疗有关的潜在血清生物标志物。方法实时荧光定量聚合酶链反应(real time-PCR)法检测ACI患者和健康对照组血清miR-23b、miR-106b、miR-130a、miR-155和miR-425的表达水平,使用miRBase和TargetScan数据库推测靶基因,并应用双荧光素酶报告和蛋白质印迹分析的办法验证,应用多变量Logistic回归分析等进行分析。结果与健康对照组相比,ACI患者血清miR-155水平显著上调(P0.05);经验证HIF1A是miR-155的靶基因;ACI患者血清HIF1A mRNA的表达水平显著下调(P0.05),与miR-155的表达呈显著负相关(P0.05);单独或联合存在的miR-155高表达和HIF1A mRNA低表达均与ACI患者的高总胆固醇(P0.05)、高LDL(P0.05)和低HDL(P0.05)有显著相关性;此外,高表达的miR-155(P0.05)、低表达的HIF1A mRNA(P0.05),或者高miR-155和低HIF1A mRNA的联合表达都可能是检测ACI的指标。结论血清miR-155上调及其靶基因HIF1A的下调与ACI具有相关性,可能对开发针对ACI的miRNA定向诊断有参考意义。     

炒麦芽含药血清对MMQ大鼠垂体瘤细胞NGF、PRL分泌的影响

目的了解炒麦芽含药血清对体外培养的MMQ大鼠垂体瘤细胞神经生长因子（NGF）、催乳素（PRL）分泌表达的影响。方法应用血清药理学的方法，以不同剂量、15％给药比例的家兔炒麦芽含药血清和阳性对照药物溴隐停含药血清及正常血清对体外培养的MMQ大鼠垂体瘤细胞进行干预，连续检测4d，以放射免疫法检测细胞培养液上清中NGF和PRL分泌量，并对实验结果进行统计分析。结果炒麦芽各剂量含药血清组、溴隐停组与空白对照组相比培养液中NGF和PRL含量具有显著性差异（P〈0．05），其中，正常血清组和空白对照组之间无统计学意义（P〉0．05）。随炒麦芽含药血清剂量的增加，MMQ垂体瘤细胞NGF分泌量逐渐升高，并伴随着PRL分泌量逐渐下降，炒麦芽剂量、NGF、PRL分泌量三者间呈显著相关（P〈0．05）；阳性对照药物溴隐停含药血清对NGF和PRL的分泌均具有抑制作用（P〈0．01）。结论低剂量炒麦芽促进PRL分泌和高剂量炒麦芽抑制PRL分泌的双向调控机制可能是通过影响NGF分泌实现的．溴隐停抑制PRL激素分泌的原因可能与NGF分泌无关。     

藻黄合剂含药血清体外培养人肾小球系膜细胞结缔组织生长因子的表达*

目的：观察藻黄合剂含药血清对肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响。 方法：血清药理学方法制备藻黄合剂低、中、高剂量,空白对照及海昆肾喜阳性对照大鼠含药血清,分别用体积分数10%各含药血清培养基孵育高糖作用下肾小球系膜细胞48 h,另设低糖组为对照。免疫细胞化学和RT-PCR方法检测各组系膜细胞结缔组织生长因子蛋白及mRNA的表达。 结果与结论：结缔组织生长因子蛋白及mRNA表达在高糖组较低糖组明显升高(P < 0.01);藻黄合剂各剂量组结缔组织生长因子蛋白及mRNA表达均低于高糖组,且具有剂量依赖性;藻黄合剂高剂量组与海昆肾喜组比较结缔组织生长因子蛋白及mRNA表达差异无显著性意义(P > 0.05)。提示高糖可诱导肾小球系膜细胞中结缔组织生长因子的表达,而藻黄合剂可抑制高糖条件下肾小球系膜细胞中结缔组织生长因子蛋白及mRNA的表达。     

NGF-PBCA-NP的制备与性能评价及其对体外AD细胞模型的保护作用

目的 制备神经生长因子-聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒(NGF-PBCA-NP)并评价其性能,检测其对Aβ1-40诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)增殖抑制和细胞凋亡的作用. 方法 采用乳化聚合法制备NGF-PBCA-NP,透射电镜观察形态,紫外分光光度法检测包封率和载药量.PC12细胞用10μg/mL的Aβ1-40处理,制备体外AD细胞模型后,用NGF (NGF对照组)和NGF-PBCA-NP(NGF-PBCA-NP组)分别作用于细胞,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率. 结果 NGF-PBCA-NP呈圆球形,包封率为80.87％,载药量为19.88％.与NGF对照组相比,NGF-PBCA-NP组细胞增殖抑制程度减轻,细胞凋亡率下降,差异有统计学意义(P＜0.05).其中50 μg/L NGF-PBCA-NP处理后细胞增殖比达峰值. 结论 乳化聚合法制备的NGF-PBCA-NP,形态一致,包封率和载药量较高,性能稳定,在体外具有一定的神经细胞保护和修复作用.     

平肝潜阳方含药血清中天麻素水平测定及其对血管平滑肌细胞活性的影响

背景：平肝潜阳方为中药复方制剂,化学成分复杂,直接测定血清中药物含量,比较困难。天麻是平肝潜阳方的君药之一,且其为成苷类衍生物,水平容易测定。 目的：通过检测血清中天麻素水平了解平肝潜阳方在体内的药物浓度,探讨制备含药血清的具体方法,并观察平肝潜阳方含药血清对血管平滑肌细胞活性的影响。 方法：大鼠予以平肝潜阳方浸膏2 g/d给药3 d或7 d,分别于3 d或7 d内于每天8:00和16:00各灌药1 g,与第4或第8天8:00灌药2 g,于最后给药前及给药后0.5,1,2,3,5 h心脏内采血。高效液相色谱测定大鼠体内天麻素水平;在血管平滑肌细胞的培养液中分别添加不同浓度灭活处理的含药血清,加药培养后24 h采用MTT法观察细胞活性的抑制率。 结果与结论：平肝潜阳方浸膏3 d与7 d给药大鼠,均在最后一次给药后1 h达到最高血药浓度,但3 d给药血药浓度迅速下降,而7 d给药可维持较长时间的血药浓度平台;天麻素在0.045~5.6 mg/L范围内呈线性,r=0.999 2,精密度RSD日内为1.86%,加样回收率为93.88%。不同浓度含药血清对血管平滑肌细胞的生长均有抑制作用,但以5%浓度含药血清对血管平滑肌细胞的生长抑制率最大(P < 0.01),其中7 d给药组的抑制率明显高于3 d给药组(P < 0.01)。因此,平肝潜阳方含药血清的制备应选取连续给药7 d后末次给药1 h后为最佳采血时间点,含药血清能够抑制血管平滑肌细胞的活性。     

丹黄通络胶囊对Aβ25-35致阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆的保护作用

阿尔茨海默病(Alzheime's disease,AD)是一种与年龄高度相关的、以进行性认知障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病.目前AD已经成为威胁人类晚年生活质量的主要疾病之一,其发病率呈逐年上升的趋势.由于AD的发病过程相当复杂,其病因和机制可能涉及到基因缺损、中枢神经递质障碍、自由基损伤、神经元凋亡以及慢性炎症等多方面因素[1-4],因而AD的临床治疗一直是一个十分棘手的问题.     

抗血小板药对急性脑梗死患者血小板膜糖蛋白CD62P CD63表达的调控作用

目的探讨抗血小板药对急性脑梗死患者血小板膜糖蛋白P选择素(CD62P)、溶酶体膜蛋白(CD63)表达的调控作用。方法选取2013-03—2015-04我院收治的急性脑梗死患者86例为研究对象,采用随机数表法分为观察组和对照组各43例,对照组采取阿司匹林单药治疗,观察组在此基础上联合应用氯吡格雷治疗,同时选取健康志愿者43例纳入正常组,比较3组血小板膜糖蛋白CD62P、CD63表达水平,分析观察组与对照组血小板聚集达标率、不良反应。结果治疗前观察组CD62P阳性率、CD63阳性率分别为(26.92±2.06)%、(22.15±4.19)%,对照组分别为(26.91±2.07)%、(22.15±2.18)%,2组比较无显著差异(P0.05),但均明显高于正常组(P0.05);治疗半年内观察组血小板聚集达标率93.0%明显高于对照组76.7%(P0.05);2组不良反应发生率(9.3%、4.7%)比较无显著差异(P0.05)。结论抗血小板药可有效抑制血小板活化,降低血小板膜糖蛋白表达,且不良反应轻,值得临床推广应用。     

miR-146a通过TLR4/NF-κB通路调节小胶质细胞/巨噬细胞极化对缺血性脑卒中的保护作用

目的 探讨微小RNA-146a(MicroRNA-146a, miR-146a)在缺血性脑卒中小胶质细胞/巨噬细胞极化中的作用及其潜在机制。方法 构建大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型,脑内注射阴性对照物(Negative control mimic, NC mimic)或miR-146a mimic;构建BV2小鼠小胶质细胞(BV2 mouse microglia, BV2)缺血缺氧(Oxygen glucose deprivation, OGD)模型,将NC mimic, miR-146a mimic转染至OGD处理的BV2细胞中,进行改良神经功能缺损评分(Modified neurological severity scores, mNSS)评估神经功能;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride, TTC)染色检测脑梗死体积;实时荧光定量聚合酶链反应(Real time quantification polymerase chain reaction, RT...     

L型Ca2+通道阻断剂通过抑制NLRP3炎症小体激活对MPP+诱导的小胶质细胞炎症模型发挥神经保护作用

目的 在MPP⁺诱导的帕金森(PD)细胞炎症模型中,使用L型Ca²⁺通道阻断剂伊拉地平对BV2小胶质细胞进行干预,观察其炎症反应的影响探讨L型Ca²⁺通道阻断剂伊拉地平是否可以调控NLRP3炎症小体通路。方法 使用PD造模药物MPP⁺在BV2小胶质细胞上制备PD炎症细胞模型,CCK8法分别检测不同浓度MPP⁺和伊拉地平处理后对BV2的小胶质细胞具体活性影响,选择合适的药物实验浓度。将BV2的小胶质细胞变为4组,分别为空白对照组、MPP⁺造模组、伊拉地平预处理组和MCC950预处理组(即阳性对照组),采用实时的荧光定量PCR检测BV2小胶质细胞中IL-1 β、NLRP3、CASPASE-1、GSDMD、NOX2基因mRNA表达水平;细胞免疫荧光检测BV2小胶质细胞中IL-1 β、NLRP3、CASPASE-1、GSDMD、NOX2蛋白表达水平;Western blot检测小胶质细胞IL-1 β、NLRP3、CASPASE1、GSDMD、NOX2蛋白表达水平。...