黄芩苷对Hela细胞凋亡的影响

目的探讨黄芩苷诱导Hela细胞的凋亡作用及对PI3K/AKT/mTOR通路的影响。方法培养Hela细胞后分为空白组、卡铂组(40μg/mL)及黄芩苷低、高剂量组(40、80μmol/L),处理24 h。MTT法检测细胞增殖,Annexinv-FITC/PI双染色和hoechst 33342染色检测细胞凋亡,Western blot法检测p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达。结果与空白组比较,黄芩苷(40、80μmol/L)能抑制细胞增殖(P<0.01),增加细胞凋亡率(P<0.01),抑制p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达(P<0.01),且细胞出现明显的染色质凝集、核萎缩、凋亡小体增多现象。结论黄芩苷可能通过下调PI3K/AKT/mTOR通路,从而具有抑制HeLa细胞增殖、促进凋亡的作用。     

续断总皂苷对膝骨关节炎大鼠软骨组织中PI3K/AKT/mTOR信号通路影响的实验研究

目的观察续断总皂苷对膝骨关节炎大鼠的软骨保护作用。通过检测软骨组织中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR表达水平,探讨续断总皂苷对膝骨关节炎大鼠软骨细胞自噬调控机制。方法 SPF级成年SD大鼠28只,采用随机数字法,将大鼠随机分为4组:假手术组(7只)、模型对照组(7只)、续断总皂苷组(7只)、阳性对照组(7只)。采用前交叉韧带及内侧副韧带离断术,对模型对照组、续断总皂苷组、阳性药物对照组大鼠进行KOA模型复制,模型复制成功后,分别给予相应干预因素进行干预,连续2周。末次给药后,观察各组大鼠一般状态。取术侧膝关节软骨组织,采用HE染色方法观察膝关节软骨病理变化;采用western-blot法检测膝关节软骨组织中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR的表达。结果各组间比较,各组大鼠膝软骨组织中PI3K、AKT、mTOR表达水平均变化不明显,差异无统计学意义(P0.05)。与假手术组比较,模型对照组大鼠一般状态较差,关节软骨病理变化较严重,镜下可见明显的炎性细胞浸润,软骨组织中p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达水平显著升高(P0.01),差异有统计学意义;与模型对照组比较,续断总皂苷组大鼠明显好转,软骨组织病理损伤减轻,仅个别大鼠软骨组织中偶见炎性细胞浸润,软骨组织中p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表达水平显著降低(P0.01)差异有统计学意义。结论续断总皂苷对膝骨关节炎模型大鼠膝软骨保护作用的机制可能是通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的过度活化,进而上调软骨细胞自噬水平而实现的。     

基于PI3K/AKT/mTOR通路研究杜仲总黄酮对多囊卵巢综合征大鼠性激素水平及卵巢组织自噬的影响

目的:探讨杜仲总黄酮基于磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠性激素水平及卵巢组织自噬的影响。方法:55只SD大鼠随机取10只作为正常对照组,其余建立PCOS大鼠模型,40只大鼠建模成功,随机分为模型对照组、PI3K抑制剂BKM120 40 mg/kg组、BKM120 40 mg/kg+杜仲总黄酮200 mg/kg组、杜仲总黄酮200 mg/kg组,各组灌胃生理盐水或相应药物,连续干预3 w。Elisa法检测血清促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、抗苗勒氏管激素(AMH)水平;HE染色观察卵巢病理学变化;流式细胞术检测卵巢组织颗粒细胞自噬率;Western blot检测卵巢组织中PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白及微管相关蛋白1轻链3 II(LC3 II)表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠AMH、LH、T含量显著升高,FSH含量显著降低P<0.01);大鼠卵巢组织颗粒细胞自噬率显著升高(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低,LC3 II/LC3 I比值显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,抑制剂组大鼠AMH、LH、T含量显著升高,FSH含量显著降低(P<0.01),卵巢组织颗粒细胞自噬率显著升高,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低,LC3 II/LC3 I比值显著升高(P<0.01);杜仲总黄酮+抑制剂组、杜仲总黄酮组大鼠AMH、LH、T含量明显降低,FSH含量明显升高(P<0.05或P<0.01),卵巢组织颗粒细胞自噬率显著降低(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著升高,LC3 II/LC3 I比值显著降低(P<0.01)。模型对照组卵巢表面苍白,黄体减少,出现多个囊状扩张卵泡;杜仲总黄酮+抑制剂组、杜仲总黄酮组卵巢体积减小,表面色泽较红,黄体有所增加,囊状扩张卵泡减少;抑制剂组卵巢体积更大、黄体更少,囊状扩张卵泡更多。结论:杜仲总黄酮可能通过激活PI3K/AKT/mTOR通路降低PCOS大鼠卵巢组织自噬水平,改善其性激素水平。     

麻防犀角地黄汤通过调控microRNA-491-5p影响PI3K/Akt/mTOR通路治疗银屑病的机制

目的 观察麻防犀角地黄汤对银屑病小鼠模型的影响,探讨麻防犀角地黄汤治疗银屑病的作用机制。方法 构建咪喹莫特银屑病小鼠模型,灌胃给药麻防犀角地黄汤,观察模型外观及组织病理学改变,Real time PCR检测皮损组织中microRNA-491-5p、PI3K、Akt、mTOR mRNA的表达,Western blot检测皮损组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白的表达。结果 麻防犀角地黄汤能改善小鼠皮损、PASI评分、耳廓外缘厚度、组织病理、体质量等指标,上调microRNA-491-5p mRNA的表达,下调PI3K、Akt、mTOR mRNA的表达量,抑制p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达,并表现出部分量效相关性。结论 麻防犀角地黄汤可能通过调控microRNA-491-5p影响PI3K/Akt/mTOR信号通路在银屑病的治疗中发挥作用。     

半枝莲总黄酮通过PI3K/AKT/mTOR通路诱导肿瘤细胞自噬的体内实验研究

该研究拟从体内角度研究半枝莲总黄酮(TF-SB)的抗肿瘤作用,并探讨TF-SB对肿瘤细胞自噬的影响及其对PI3K/AKT/mTOR通路的调控作用,为TF-SB的抗肿瘤作用提供实验依据。实验以黑色素瘤荷瘤小鼠模型为研究对象,分为空白对照组、雷帕霉素组(Rap,1.5 mg·kg~(-1))、TF-SB高、中、低剂量组(200,100,50 mg·kg~(-1)),每天给药1次,连续用药11 d,通过测量肿瘤的体积及抑瘤率,来观察TF-SB对黑色素瘤生长的抑制效果;通过TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况,来进一步验证TF-SB的抗肿瘤活性;通过Western blot法检测LC3-Ⅰ,LC3-Ⅱ的蛋白表达,计算LC3-Ⅱ对LC3-Ⅰ的相对表达量,探讨TF-SB对肿瘤细胞自噬的诱导作用;通过检测PI3K/AKT/mTOR通路标志蛋白的磷酸化水平,研究TF-SB诱导细胞自噬的分子机制。结果表明,TF-SB可有效抑制荷瘤小鼠体内黑色素瘤的生长,减小肿瘤体积、提高抑瘤率,并且可以显著增加肿瘤细胞凋亡指数,增加LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,抑制p-PI3K,p-AKT及p-mTOR的蛋白表达水平,与对照组比较有显著性差异(P0.05,P0.01或P0.001)。由此可见,半枝莲总黄酮具有抑制体内黑色素瘤生长的作用,其机制可能与通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路,诱导肿瘤细胞自噬及凋亡有关。     

温肾益气颗粒对慢性阻塞性肺病大鼠增殖细胞核抗原表达的影响及相关机制研究

目的:探讨温肾益气颗粒对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道PCNA的影响及相关机制。方法:40只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、温肾益气颗粒组、雾化组。以气道滴注LPS联合烟熏方法制备COPD大鼠模型。观察肺组织病理改变,免疫组化检测气道PCNA表达,Western Blot观察肺组织中PCNA,p-AKT,TAKT,p-mTOR,T-mTOR的表达。结果:与空白组相比,模型组大鼠出现COPD病理变化,肺组织PCNA表达增强,p-AKT及p-mTOR表达增加(P0.05);与模型组相比,温肾组及雾化组大鼠COPD病理变化改善,PCNA表达降低,p-AKT及p-mTOR表达下降(P0.05)。结论:温肾益气颗粒降低COPD大鼠气道PCNA表达,其机制可能通过调节PI3K/AKT/mTOR信号通路实现。     

不同蛋白提取方法对PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达量的影响

目的:探讨Ripa裂解液蛋白提取法和Invent离心管柱蛋白提取法对慢性应激模型大鼠海马组织PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达量的影响。方法:空白组和模型组大鼠各3只,取双侧海马组织,每个样品分别采用Ripa裂解液、Invent离心管柱蛋白提取法进行蛋白提取,分为空白+Invent组、空白+Ripa组、模型+Invent组、模型+Ripa组。采用Western Blot法检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达情况,析因设计方法分析各因素的效果。结果:大鼠海马PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR表达均受组别和提取方法的影响,组别和提取方法存在交互作用,运用Invent离心管柱蛋白提取法提取蛋白,模型组的PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR表达较空白组减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论:慢性应激抑制大鼠海马PI3K/Akt/mTOR信号通路, Invent离心管柱蛋白提取法操作便捷,蛋白提取率高,尤其对信号通路中磷酸化蛋白的提取具有明显的优势。     

加味柴胡疏肝汤调控miR-204对急性癫痫小鼠海马AKT/mTOR/P70S6K通路和脑电图的影响

目的探讨加味柴胡疏肝汤是否通过调节miR-204影响急性癫痫小鼠AKT/mTOR/P70S6K信号通路以及脑电图。方法将60只小鼠随机分为6组:生理盐水组、模型组、加味柴胡疏肝汤组、加味柴胡疏肝汤+miRNA-204 mimic组、加味柴胡疏肝汤+miRNA-204 inhibitor组、卡马西平组。采用匹罗卡品使小鼠致痫,分别予加味柴胡疏肝汤灌胃、抑制及过表达miR-204后观察每组的指标情况;采用脑电图仪检测每组小鼠脑电波;RT-PCR检测每组小鼠海马组织miR-204的表达;Western Blot检测每组小鼠通路蛋白p-AKT、p-mTOR、p-P70S6K表达情况。结果与生理盐水组相比,模型组小鼠脑电图痫性波明显增多,miR-204表达明显降低,通路相关蛋白p-AKT、p-mTOR、p-P70S6K表达明显下降;与模型组相比,使用加味柴胡疏肝汤后,小鼠脑电图痫性波减少,小鼠海马组织miR-204表达明显升高,通路相关蛋白p-AKT、p-mTOR、p-P70S6K表达升高;使miR-204过表达后,与单纯使用柴胡疏肝汤相比,上述指标变化趋势相同,变化幅度增大;抑制miR-204表达后,与单纯使用柴胡疏肝汤相比,上述指标变化趋势相同,变化幅度减少。结论加味柴胡疏肝汤通过升高miR-204的表达,激活AKT/mTOR/P70S6K通路,使其通路蛋白磷酸化,发挥神经保护的作用,减少痫性波,达到治疗癫痫的目的。     

人参皂苷Compound K通过调控AKT/mTOR通路诱导人肝癌细胞自噬作用的研究

目的探讨人参皂苷Compound K(人参皂苷CK)对人肝癌细胞BEL-7404自噬的作用及对AKT/mTOR通路的影响。方法采用MTT法检测人参皂苷CK对BEL-7404增殖的抑制作用;MDC染色、单荧光GFP-LC3质粒转染细胞和透射电子显微镜观察人参皂苷CK对BEL-7404自噬的影响;Western blot检测人参皂苷CK对细胞自噬相关蛋白和AKT/mTOR通路蛋白的作用。结果人参皂苷CK能够抑制人肝癌细胞BEL-7404增殖,诱导细胞自噬,促进Beclin-1、LC3Ⅱ的表达,下调AKT/mTOR通路相关蛋白AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR表达;加入AKT/mTOR通路抑制剂MK2206后,能够进一步抑制AKT、p-AKT、 mTOR、p-mTOR表达,上调Beclin-1、LC3Ⅱ的表达。结论人参皂苷CK可以通过调控AKT/mTOR通路诱导人肝癌细胞BEL-7404自噬。     

川陈皮素调控PI3K/AKT信号通路抑制心肌肥大的机制研究

目的 探讨川陈皮素（Nobiletin, NOB）通过调控PI3K/AKT信号通路抑制心肌肥大的分子机制。方法 在培养的H9C2心肌细胞中,建立PE诱导的心肌细胞肥大模型,给予NOB处理,采用qRT-PCR检测心肌肥大相关标记物ANF、BNP、β-MHC的mRNA表达水平,利用免疫荧光检测H9C2心肌细胞表面积,并用Western Blotting的方法检测PI3K、AKT蛋白的表达。结果 与对照组相比,PE处理过的H9C2心肌细胞肥大基因显著激活,心肌表面积增大;NOB处理后可抑制PE诱导的肥大基因激活和心肌表面积增大。此外,Western Blotting结果显示,PE处理过的H9C2心肌细胞p-PI3K、p-AKT表达水平下降(P <0.05),NOB治疗后的H9C2心肌细胞p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT水平明显升高(P <0.05)。结论 NOB可抑制PE诱导的心肌细胞肥大,其机制可能是通过调控PI3K/AKT信号通路实现的。     

新藤黄酸通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的研究

目的:探讨新藤黄酸诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的机制。方法:MTT试验检测新藤黄酸对B16细胞增殖抑制的作用;采用Hochest 33258荧光染色观察新藤黄酸对B16细胞的影响;透射电镜观察新藤黄酸对B16细胞的超微结构的改变;Western blot法检测PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt,p-mTOR,PTEN蛋白的变化以探讨新藤黄酸诱导B16细胞凋亡的分子机制。结果:新藤黄酸对黑色素瘤细胞B16生长和增殖有明显地抑制作用,并随着新藤黄酸浓度的增加和作用时间的延长细胞活力明显下降;Hochest 33258染色结果显示,新藤黄酸处理的细胞中呈现明显的凋亡特征;透射电镜观察发现新藤黄酸作用B16细胞后,细胞发生明显凋亡的形态学变化;Western blot检测表明p-PI3K蛋白表达呈时间依赖性下降;p-Akt蛋白表达呈时间依赖性下降,而PI3K,Akt蛋白表达量基本不变,p-mTOR蛋白的表达随着时间的延长有所下降,PTEN蛋白的表达呈时间依赖性增加。结论:新藤黄酸在一定的时间和浓度范围内能够抑制黑色素瘤B16细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

老鼠簕生物碱A对肝纤维化大鼠PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路的影响

目的观察老鼠簕生物碱A(HBOA)对四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路的影响,探讨HBOA抗肝纤维化的作用机制。方法大鼠随机分成对照组、模型组及HBOA高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)组和秋水仙碱(0.4 mg/kg)组。除对照组外,其余各组ig给予50%CCl4橄榄油溶液,每周2次,连续12周,诱导肝纤维化大鼠模型。于造模第9周起,给药组分别ig相应的受试药物,每天1次,给药4周。实验结束后,计算各组大鼠体质量变化、肝脏指数;检测各组大鼠肝匀浆中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性;蛋白免疫印迹法(Western blotting)法检测肝组织P-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K蛋白的表达。结果与模型组比较,各给药组大鼠体质量增加量显著升高,均能降低肝脏指数及肝组织中ALT、AST活性;此外,HBOA高、中剂量组均能显著抑制p-PI3K、p-Akt、p-m TOR、p-p70S6K蛋白的表达。结论 HBOA对肝纤维化大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路有关。     

乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响。方法将人结肠癌HT29细胞分为空白组、乙酰紫草素组(10μmol/L)、奥沙利铂组(1μmol/L)和联合给药组(10μmol/L乙酰紫草素+1μmol/L奥沙利铂),MTT法检测HT29细胞增殖抑制率,流式细胞术检测HT29细胞凋亡率、qRT-PCR法检测HT29细胞Ki-67、Bcl-2及Bax mRNA表达,Western blot法检测磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)蛋白表达。结果人结肠癌HT29细胞经乙酰紫草素、奥沙利铂和联合给药处理24、48、72 h后,细胞增殖抑制率均增加,其中联合给药组细胞增殖抑制率最高(P<0. 05)。药物处理HT29细胞48 h后,与空白组比较,乙酰紫草素组、奥沙利铂组和联合给药组凋亡率、Bax mRNA表达增加(P<0. 05),而Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达降低(P<0. 05);联合给药组的细胞凋亡率、Bax mRNA表达均高于乙酰紫草素组和奥沙利铂组,Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达低于乙酰紫草素组和奥沙利铂组。结论乙酰紫草素和奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞均具有抑制增殖及诱导凋亡作用,可能与调控PI3K/Akt信号通路有关,且两者联用时效果更好。     

化痰祛瘀方治疗痰浊瘀血型偏头痛52例临床观察

目的：观察化痰祛瘀方治疗痰浊瘀血型偏头痛的临床疗效。方法：治疗组采用化痰祛瘀方加减治疗,对照组用西比灵治疗。结果：两组临床疗效比较,治疗组总有效率为96.15%,对照组总有效率为88.46%,但两组间差异无统计学意义（P>0.05）;两组中医证候疗效比较,治疗组总有效率为96.15%,对照组总有效率为69.23%,差异有显著意义（P<0.01）。结论：化痰祛瘀方治疗偏头痛与西比灵临床疗效相当,但化痰祛瘀方对改善中医症候明显优于西比灵。     

益气扶正复方联合依维莫司对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞株裸鼠移植瘤的影响

目的研究益气扶正复方联合依维莫司对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞株裸鼠移植瘤的抑制作用及其作用机制。方法体外培养三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞株,将细胞悬液接种于雌性BALB/C裸鼠第二乳腺乳垫处,建立皮下移植瘤模型。将造模成功的裸鼠随机分为对照组、益气扶正复方(中药复方)组(40mg/kg)、依维莫司组(2mg/kg)和联合组,每组6只。各组灌胃给予相应药物干预,连续30d。比较各组移植瘤体积和质量的变化,计算各组肿瘤抑制率。采用Real-time PCR检测各组mTor、Akt、P70s6k、4Ebp-1 mRNA的表达水平,Western blot检测各组Akt、p-Akt、m-TOR、p-mTOR、PTEN及mTOR下游底物p-4EBP-1、p-P70S6K的蛋白表达水平。结果与中药复方组相比,联合组移植瘤体积和质量显著减小(P0.05,P0.01),肿瘤抑制率明显升高,且联合组mTor和P70s6k mRNA表达及p-mTOR和P70S6K蛋白表达水平明显低于中药复方组,而联合组PTEN蛋白表达高于中药复方组(P0.05)。结论益气扶正复方与依莫维司联用能抑制MDA-MB-468荷瘤裸鼠的肿瘤组织生长,与益气扶正复方单用相比效应更为显著,其作用机制可能与抑制p-mTOR、p-Akt、p-P70S6K活性,提高p-4EBP-1、PTEN表达有关。     

痰脂消汤调控PCOS-IR模型大鼠卵巢PI3K/Akt途径探讨

目的:观察痰脂消汤对来曲唑灌胃联合高脂膳食诱导的多囊卵巢综合征胰岛素抵抗(PCOS-IR)模型大鼠卵巢胰岛素信号转导途径的影响。方法:来曲唑灌胃联合高脂膳食喂养SD大鼠建立PCOS-IR模型,大鼠随机分为模型组、痰脂消汤组(35 g·kg~(-1)·d~(-1))、二甲双胍组(200 mg·kg~(-1)·d~(-1)),连续灌胃20 d;另设正常组。实验结束后,腹主动脉采血,测定血清空腹血糖(FPG)和空腹胰岛素(FINS)浓度,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测大鼠卵巢胰岛素受体(INSR),胰岛素受体底物(IRS)-1,酯酰肌醇-3激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt)mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织INSR,IRS-1,PI3K,Akt蛋白及其相应磷酸化水平表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠空腹胰岛素(FINS),HOMA-IR水平均显著升高(P0.01),FPG无明显升高;模型组大鼠卵巢INSR,IRS,PI3K,Akt mRNA表达水平明显降低(P0.05);INSR,p-INSR,IRS,p-IRS,PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt等蛋白表达水平明显降低(P0.05);INSR,IRS,PI3K及Akt磷酸化比例明显降低(P0.05)。与模型组比较,中药和二甲双胍治疗后大鼠FINS,HOMA-IR均显著降低(P0.01);大鼠卵巢INSR,IRS,PI3K,Akt mRNA表达水平均明显升高(P0.05);INSR,p-INSR,IRS,p-IRS,PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt等蛋白表达水平明显升高(P0.05);INSR,IRS,PI3K及Akt磷酸化比例明显升高(P0.05)。结论:PCOS大鼠存在IR,卵巢内PI3K/Akt信号途径转导存在异常。痰脂消汤能够显著改善大鼠胰岛素抵抗,可能与调控胰岛素信号转导通路中关键的蛋白表达有关。     

华蟾素口服液对胃癌裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用及机制研究

目的 研究华蟾素口服液对人胃癌细胞 SGC-7901裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用及其作用机制。方法 取雄性Balb/c 裸鼠,应用人胃癌SGC-7901细胞建立裸鼠皮下移植瘤,利用皮下移植瘤建立原位移植瘤模型,随机分为模型组,5-氟尿嘧啶组(阳性组),华蟾素口服液高、低(24、12 mL·kg^-1)组,每组6只。阳性组隔日腹腔注射给药2周,华蟾素口服液组连续灌胃给药3周,末次给药后取出瘤体,测量瘤体体积、瘤重及抑瘤率,HE染色观察瘤体组织病理改变,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定法[terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL]测定瘤体细胞凋亡,免疫组化及Western blot法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达,Western blot法检测Bax、Bcl-2、磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶/磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K/PI3K),p-Akt/Akt蛋白表达。结果 与模型组比较,华蟾素高、低剂量组可明显降低瘤体体积及重量;促进肿瘤细胞肿胀、变性及坏死,减少肿瘤间质内血管生成;促进肿瘤细胞凋亡;明显增加裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、Bax蛋白表达,降低Bcl-2、p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平。结论 华蟾素口服液对人胃癌裸鼠原位移植瘤有明显的抑制生长作用,其作用机制可能与其抑制PI3K/Akt信号通路从而促进肿瘤细胞凋亡有关。     

Suppressive effect of Aurantii Fructus Immaturus and Atractylodis Macrocephalae Rhizoma on glutamic acid-induced autophagy of interstitial cells of Cajal

ObjectiveTo investigate the effects of Aurantii Fructus Immaturus (Zhishi, ZS) and Atractylodis Macrocephalae Rhizoma (Baizhu, BZ)-containing serum on glutamate-induced autophagy in rat colonic interstitial cells of Cajal (ICCs) and to analyze the underlying mechanism.MethodsRat colonic ICCs cultured in vitro were identified by fluorescence and then stimulated with glutamic acid (5 mmol/L) for 24 h to establish a cell model of autophagy. The cells were then treated with different concentrations of ZSBZ-containing serum or rat serum. The viability of the ICCs was detected with cell counting kit-8 assays, and cell apoptosis rates were examined with flow cytometry. The ultrastructure and autophagosomes in the ICCs were observed using transmission electron microscopy. The effects of ZSBZ-containing serum on apoptosis-associated mediators were assessed by Western blotting and real-time quantitative polymerase chain reaction. In addition, microtubule-associated protein light chain 3 (LC3), p-phosphoinositide 3-kinase (p-PI3K), p-Akt and p-mammalian target of rapamycin (p-mTOR) expression was detected via Western blotting analysis.ResultsCompared to those in the model group, ICC viability and apoptosis rates were significantly increased by ZSBZ-containing serum (P < 0.05). In addition, the expression levels of Beclin-1, LC3, p-PI3K, p-Akt and p-mTOR were significantly lower (P < 0.05) and Bcl-2 expression was higher in the ZSBZ-containing serum treatment groups than in the model group (P < 0.05).ConclusionOur findings demonstrated that ZSBZ protects glutamic acid-stimulated ICCs, and this beneficial effect may be mediated by a reduction in autophagy via inhibition of the PI3K/Akt/mTOR pathway.     

蠲痛饮对子宫内膜异位症大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白的影响

目的:探讨蠲痛饮对子宫内膜异位症(EMS)大鼠磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶分子(mTOR)信号通路蛋白的影响。方法:采用自体子宫内膜移植法建立EMS大鼠模型,随机将48只大鼠分为正常组、模型组、蠲痛饮低、中、高剂量组、通路阻滞剂组(LY294002) 6组,分别给予蠲痛饮高、中、低剂量(42. 9,14. 3,4. 8 g·kg~(-1))灌胃,通路阻滞剂组予PI3K通路阻滞剂LY294002(0. 04 g·kg~(-1))腹腔注射,正常组及模型组每天按照10 mL·kg~(-1)给予生理盐水灌胃,各组持续用药28 d。应用透射电镜观察大鼠异位内膜组织超微结构,免疫组化法检测异位内膜组织PI3K,Akt,mTOR蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测核糖体蛋白S6激酶(p70S6K) mRNA相对含量。结果:与正常组比较,模型组异位内膜PI3K,Akt,mTOR蛋白和p70S6K mRNA的表达都明显升高(P 0. 05);与模型组比较,蠲痛饮中、高剂量、通路阻滞剂组干预后PI3K,Akt,mTOR蛋白和p70S6K mRNA的表达明显降低(P 0. 05)。透射电镜下可见蠲痛饮低、中、高剂量组和通路阻滞剂组均能促进腺上皮细胞萎缩或欠整齐,微绒毛减少或消失,胞核固缩,胞内线粒体肿胀或减少,间质细胞凋亡。结论:PI3K/Akt/mTOR信号通路参与子宫内膜异位症发生;蠲痛饮可能通过下调PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达及p70S6K mRNA表达,从而抑制上皮间质细胞活性,促进细胞凋亡,治疗子宫内膜异位症。     

更年汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞PI3K/Akt/m TOR通路的影响

目的研究更年汤对围绝经期模型大鼠颗粒细胞磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(m TOR)信号通路的影响。方法 10～14月龄雌性SD大鼠150只,筛选出围绝经期模型大鼠,随机分为模型组、替勃龙组(0.22 mg/kg)和更年汤低、中、高剂量(1.0、2.0、4.0 g/kg)组,连续ig给药15 d,1次/d,第15天后采血,制备大鼠含药血清;3～4月龄雌性SD大鼠120只,筛选出动情前期老鼠,剔出卵巢行体外颗粒细胞原代培养,分别用各组含药血清培养液培养颗粒细胞,72～120h后用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测颗粒细胞中PI3K、Akt、m TOR、生长分化因子9(GDF9)、翼状螺旋转录因子2(FOXL2)mRNA表达水平;Western blotting法检测PI3K、Akt、mTOR、GDF9、FOXL2蛋白表达。结果与模型组比较,替勃龙组和更年汤各剂量组卵巢颗粒细胞中PI3K、m TORm RNA和蛋白表达水平均显著升高(P0.05、0.01),Akt mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01),GDF9、FOXL2 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P0.01)。结论更年汤含药血清在临床剂量上可提高卵巢颗粒细胞PI3K、mTOR的表达,抑制Akt及其下游的GDF9、FOXL2表达,从而推测更年汤可调节卵泡的生长发育,抑制卵泡闭锁、改善卵巢功能。