姜黄素通过上调LncRNA NORAD/miR-543-3p对MPP+诱导的帕金森病细胞模型的影响

目的 探讨姜黄素对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP⁺)诱导的帕金森病细胞模型的影响及分子机制。方法 使用MPP⁺(5 mmol/L)处理MN9D细胞构建帕金森病细胞模型,记为MPP⁺组; 正常培养的细胞作为对照组; 细胞给予40 μmol/L姜黄素处理后再用MPP⁺处理记为MPP⁺+姜黄素组; 将NORAD siRNA转染至细胞后分别用40 μmol/L姜黄素和MPP⁺处理记为MPP⁺+姜黄素+si-NORAD组; 将NORAD siRNA和miR-543-3p inhibitor共转染细胞后分别用40 μmol/L姜黄素和MPP⁺处理记为MPP⁺+姜黄素+si-NORAD+anti-miR-543-3p组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA NORAD和miR-543-3p表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶实验检测lncRNA NORAD和miR-543-3p的靶向关系。结果 与对照组比较,MPP⁺组MN9D细胞中lncRNA NORAD表达下调,miR-543-3p表达上调,细胞凋亡率升高, MDA水平明显升高,SOD水平明显降低; 与MPP⁺组比较,MPP⁺+姜黄素组lncRNA NORAD表达上调,miR-543-3p表达下调,细胞凋亡率降低, MDA水平明显降低,SOD水平明显升高; lncRNA NORAD靶向负调控miR-543-3p的表达; 抑制lncRNA NORAD逆转了姜黄素对MN9D细胞凋亡和氧化应激的抑制作用; 抑制miR-543-3p逆转了lncRNA NORAD的作用。结论 姜黄素可抑制MPP⁺诱导的MN9D细胞凋亡和氧化应激,其机制可能与调控lncRNA NORAD/miR-543-3p通路有关。     

雌激素对MPP+诱导的PC12细胞损伤过程中细胞凋亡相关基因的研究

目的　探讨雌激素 (Estrogen ,E)在 1-甲基 - 4 -苯基吡啶离子 (MPP+ )对PC12细胞损伤过程中对神经细胞的作用机制 ,特别是雌激素与细胞凋亡的关系。方法　用半定量逆转录PCR(RT PCR)检测细胞凋亡过程中促进细胞增殖基因Bcl x和促进细胞死亡基因白细胞介素 1β转换酶 (interleukin 1βconverten zyme ,ICE)的有效蛋白mRNA的表达水平 ,比较各组的差异。 结果　雌激素组的Bcl x的有效蛋白mRNA的表达水平显著高于对照组、MPP+ 组及E +MPP+ 组 (P <0 .0 5 ) ;ICE的有效蛋白mRNA的表达水平显著低于对照组、MPP+ 组及E +MPP+ 组 (P <0 .0 5 )。E +MPP+ 组Bcl x的有效蛋白mRNA的表达水平显著高于MPP+ 组 ;ICE的有效蛋白mRNA的表达水平显著低于MPP+ 组 (P <0 .0 5 )。E +MPP+ 组和对照组相比无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　雌激素对于MPP+ 诱导的ICE增加和Bcl x降低可起一定的拮抗作用 ,从而在一定程度上抑制了凋亡的发生。     

美满霉素对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的在离体细胞培养中探讨美满霉素(Minocycline,MC)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP )诱导的帕金森病细胞凋亡模型的保护作用.方法将MC或MPP 加入培养的PC12细胞中,建立多巴胺神经元凋亡模型,四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞代谢活性,电泳法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果MPP 浓度为10μmol/L时建立多胺神经元凋亡模型;MC 100 μmol/L预处理可明显升高MPP 处理的PC12细胞活性;MC MPP 组细胞凋亡率显著低于MPP 组(P＜0.01),但仍明显高于阴性对照组(P＜0.05).结论MC对MPP 诱导的细胞凋亡有一定的保护作用.     

TAp63对MPP+处理的SH-SY5Y细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9和酪氨酸羟化酶表达的影响

目的探讨TAp63基因表达水平对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP⁺)诱导的帕金森病(PD)细胞模型细胞活性、酪氨酸羟化酶(TH)和凋亡因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的影响。方法将小鼠神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞系)依据不同处理方法分为6组：(1)对照组,无任何干预措施;(2)MPP⁺处理组,MPP⁺10μmol·L^-1处理24 h;(3)TAp63-NC组,用携带无义序列的慢病毒颗粒转染48 h;(4)TAp63-NC+MPP⁺组,用携带无义序列的慢病毒颗粒转染48 h后,加MPP⁺10μmol·L^-1处理24 h;(5)TAp63过表达组,用携带过表达TAp63基因的慢病毒颗粒转染48 h;(6)TAp63过表达+MPP⁺组,用携带过表达TAp63基因的慢病毒颗粒转染48 h,换液后予以MPP⁺10μmol·L^-1处理24 h。采用CC...     

促红细胞生成素对1-甲基-4-苯基吡啶损伤的PC12细胞的保护作用

目的探讨促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP^＋）诱导的PC12细胞,变性损伤的保护作用及机制。方法用MPP^＋处理PC12细胞制作帕金森病细胞模型,采用四甲基偶氮哗监泫检测暴露于不同浓度EPO后细胞的活性;流式细胞术与DNA断端原位标记法（terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling,TUNEL）检测各组的细胞凋亡率;免疫印迹法检测不同处理组PC12细胞Bcl-2和Bax的表达,并采用荧光法观察不同处理组PC12细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）与线粒体膜电位水平以及caspase-3活性的变化。结果MPP^＋可以使PC12细胞存活率下降,凋亡率增高;同时PC12细胞内ROS增多,线粒体膜电位下降。MPP^＋还可以明显地提高Bax／Bcl-2比值并激活caspase-3。而EPO可以抑制这些由MPP^＋引发的改变,并在1U／mL时发挥最大保护作用。结论EPO可抑制MPP^＋诱导的PC12绌胞死亡,其作用机制可能其自身抗氧化和抗凋亡的特性有关。     

促红细胞生成素对1-甲基-4-苯基吡啶损伤的PC12细胞的保护作用(英文)

目的探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞变性损伤的保护作用及机制。方法用MPP+处理PC12细胞制作帕金森病细胞模型,采用四甲基偶氮唑蓝法检测暴露于不同浓度EPO后细胞的活性;流式细胞术与DNA断端原位标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase dUTPnick end labeling, TUNEL)检测各组的细胞凋亡率;免疫印迹法检测不同处理组PC12细胞Bcl-2和Bax的表达,并采用荧光法观察不同处理组PC12细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)与线粒体膜电位水平以及caspase-3活性的变化。结果 MPP+可以使PC12细胞存活率下降,凋亡率增高;同时PC12细胞内ROS增多,线粒体膜电位下降。MPP+还可以明显地提高Bax/Bcl-2比值并激活caspase-3。而EPO可以抑制这些由MPP+引发的改变,并在1 U/mL时发挥最大保护作用。结论 EPO可抑制MPP+诱导的PC12细胞死亡,其作用机制可能与其自身抗氧化和抗凋亡的特性有关。     

活化素A对MPP^＋所诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的观察重组人活化素A(rhAcT)对MPP+所诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法将MMP+或活化素A,L-deprenyl加入体外培养的PC12细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力的变化;用免疫细胞化学法和RT-PCR评价细胞的酪氨酸羟化酶和bcl-2蛋白及mRNA含量的变化,用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡的变化,比较各组的差异.结果预先给予rhAcT和L-deprenyl的两组细胞活力明显高于MPP+损害组,酪氨酸羟化酶和bcl-2的蛋白及mRNA表达强于损害组,同时两组的凋亡细胞明显减少,rhAcT和L-deprenyl两组间无显著差异.结论rhAcT和L-deprenyl通过上调bcl-2的表达,抑制凋亡的发生,而对MMP+所诱导的PC12细胞的损伤具有保护作用.     

蛇床子素对MPP~＋损伤PC12细胞的保护作用研究

目的观察蛇床子素（osthole）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP＋）诱导PC12细胞损伤的神经保护作用。方法将MPP＋加入培养的PC12细胞中,建立多巴胺能神经元损伤模型,加入不同浓度的蛇床子素预处理细胞（0.01、0.05、0.1mmol/L）。处理24h后用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性;以乳酸脱氢酶（LDH）活性测定反映细胞的损伤程度;采用Westernblot法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达,分析Bax/Bcl-2比值变化,以及检测细胞色素C的改变。结果蛇床子素可以明显减少MPP＋诱导的PC12细胞活性的降低,LDH的释放,Bax/Bcl-2比值的增高以及细胞色素C的释放（P〈0.05）。结论蛇床子素对MPP＋诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。     

褪黑素通过上调泛醌―细胞色素C还原酶核心蛋白1抑制MPP+诱导的MN9D细胞凋亡和线粒体损伤

目的 探讨褪黑素（melatonin,MT）在1-甲基-4-苯基-吡啶离子（1-methyl-4-phenylpyridinium ion,MPP⁺）诱导的帕金森病体外模型中的作用及分子机制。方法 将MN9D细胞分为对照组、MPP⁺组、MT组、治疗组。采用细胞计数试剂盒8检测MT和MPP⁺对细胞活力的影响;采用线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）评价线粒体功能;Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡;通过免疫荧光蛋白质印迹法（Western blotting）检测凋亡相关蛋白［Cleaved-Caspase 3和细胞色素C（cytochrome C,CytC）］以及泛醌―细胞色素C还原酶核心蛋白1（ubiquinol-cytochrome C reductase core protein 1,UQCRC1）蛋白的表达;采用干扰RNA技术沉默MN9D细胞中UQCRC1的表达,然后采用Western blotting检测凋亡相关蛋白表达。结果 MT可以减轻MPP⁺诱导的细胞活力下降（P<0.05）;恢复MPP⁺造成的线粒体膜电位下降（P<0.05）;减少MPP⁺诱导的凋亡细胞数量（P<0.05）;抑制凋亡蛋白（CytC和Cleaved-Caspase3）的表达（P<0.05）;上调UQCRC1的表达（P<0.05）。沉默UQCRC1后,MT组和治疗组的UQCRC1表达均下降（P<0.05）;MT对MPP⁺诱导细胞凋亡的保护作用下降（P<0.05）;凋亡蛋白（CytC和Cleaved-Caspase3）的表达增加（P<0.05）。结论 MT对 MPP⁺诱导的多巴胺能神经元损伤具有保护作用,其机制可能是通过上调UQCRC1抑制神经元凋亡。 [国际神经病学神经外科学杂志, 2023, 50(3): 26-31]     

褪黑素通过抑制NLRP3减轻MPP+诱导的HT22细胞焦亡/炎性损害

目的 研究褪黑素(MT)预处理抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)水平,减轻神经细胞焦亡,改善帕金森病症状的作用及分子机制。方法 正常培养的HT22细胞记为空白对照组（Sham组）;细胞进行10 mmol/L 1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP⁺)处理24 h,制成帕金森病细胞模型后,记为MPP⁺组;先用5 μmmol/L MT预处理6 h后,再造模后,记为MPP⁺+MT组;各组细胞处理后经培养24 h后取材。采用CCK8检测细胞死亡变化;采用荧光免疫组化法和Western-blotting方法检测NLRP3分布和表达变化;使用标准ELISA试剂盒检测IL-1β和 IL-18表达变化。结果 与Sham组相比,MPP⁺组神经细胞大量死亡,NLRP3在存活细胞的胞膜和胞浆中高表达,相应的炎症因子IL-1β和IL-18也大量释放,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。相较于MPP⁺组,MPP⁺+MT组细胞存活率升高,细胞中NLRP3染色阳性率降低,表达量也降低,相应的IL-1β和IL-18表达量也降低,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MT可有效抑制NLRP3表达和炎症因子的释放,减轻神经细胞焦亡,从而减轻MPP⁺造成的HT22细胞损伤。     

花生四烯酰多巴胺对H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨花生四烯酰多巴胺(N-arachidonoyl dopamine,NADA)对H₂O₂诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用。方法 H₂O₂处理SH-SY5Y细胞制作细胞氧化损伤模型,通过CCK8法检测细胞活力,明确不同水平的NADA对细胞存活的影响,分析NADA对SH-SY5Y细胞的保护作用; 利用生化方法检测丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)的水平; 运用DCFH-DA荧光探针检测细胞内氧自由基(ROS)水平; Hoechst33342/PI双染法检测NADA对细胞氧化损伤的保护作用; 蛋白免疫印迹实验检测抗凋亡蛋白bcl-2的表达水平。结果 H₂O₂处理SH-SY5Y细胞可导致细胞活力降低,增加MDA水平和LDH活力,促进ROS的产生,降低抗凋亡蛋白bcl-2的表达,加剧细胞凋亡。NADA可剂量依赖性提高H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞的存活率、降低MDA水平和LDH活力以及ROS的产生,促进抗凋亡蛋白bcl-2的表达,降低细胞凋亡。结论 NADA对H₂O₂诱导的细胞氧化损伤模型具有保护作用,其机制可能是通过抑制胞内氧化应激,促进抗凋亡蛋白bcl-2的表达,从而减少神经细胞凋亡。     

木香烃内酯通过调控LncRNA LINC01116/miR-9-5p的表达来减轻过氧化氢诱导的大鼠脑微血管内皮细胞损伤

目的 探讨木香烃内酯(Cos)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的大鼠脑微血管内皮细胞的氧化应激、凋亡的影响及其对长链非编码RNA LINC01116(LncRNA LINC01116)/微小RNA-9-5p(miR-9-5p)的调控作用。方法 原代分离培养大鼠脑微血管内皮细胞,并随机分成Con组、H₂O₂组、Cos-L组、Cos-M组、Cos-H组、Cos-H+pcDNA组、Cos-H+pcDNA-LINC01116组; 采用化学比色法检测丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)的水平及超氧化物歧化酶(SOD)的活性; 流式细胞术检测细胞凋亡率; 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LINC01116、miR-9-5p的表达水平; 双荧光素酶报告实验验证LINC01116与miR-9-5p的靶向关系; 蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达水平。结果 H₂O₂处理后MDA的水平显著升高(P<0.05),GSH水平与SOD活性显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Bax蛋白水平显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),LINC01116的表达水平显著升高(P<0.05),miR-9-5p的表达水平显著降低(P<0.05); Cos处理后MDA的水平显著降低(P<0.05),GSH水平与SOD活性显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Bax蛋白水平显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),LINC01116的表达水平显著降低(P<0.05),miR-9-5p的表达水平显著升高(P<0.05),且Cos-L组、Cos-M组、Cos-H组上述指标的水平比较均有明显差异(P<0.05); 双荧光素酶报告实验证实LINC01116可靶向结合miR-9-5p; LINC01116过表达可减弱木香烃内酯对H₂O₂诱导的大鼠脑微血管内皮细胞凋亡及氧化应激的作用。结论 木香烃内酯可能通过抑制LINC01116的表达及促进miR-9-5p的表达来抑制H₂O₂诱导的大鼠脑微血管内皮细胞的氧化应激及细胞凋亡,从而减轻细胞损伤。     

CircTLK1通过miR-424-5p/FBXO3轴对氧糖剥夺/复氧诱导的神经细胞损伤的影响

目的 探讨环状RNA TLK1(CircRNA TLK1,CircTLK1)对氧糖剥夺/复氧(Oxygen glucose deprivation/Reoxygenation,OGD/R)诱导的神经元HT22损伤的影响以及对微小RNA(microRNA,miR)-424-5p/F-box蛋白3(F-box protein 3,FBXO3)的调控作用。方法 将HT22细胞分为对照组、OGD/R组、sh-NC组、沉默环状RNA TLK1(Silencing circular RNA tlk1,sh-circTLK1)组、sh-circTLK1+抑制剂NC组、sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂组、sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂+sh NC组、sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂+sh FBXO3组,除对照组外其余各组细胞均行OGD/R操作,细胞计数试剂盒8(Cell counting Kit 8,CCK-8)法测定HT22细胞活力; 脂连蛋白V-异硫氰酸荧光素(Adiponectin V-fluorescein isothiocyanate,Annexin V-FITC)细胞凋亡试剂盒测定HT22细胞凋亡; 测定HT22细胞乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)漏出率; 实时荧光定量聚合酶链反应(Real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qRCR)法测定HT22细胞miR-424-5p,FBXO3 mRNA水平; 蛋白免疫印记法(Western Blot)检测B淋巴细胞瘤-2关联基因X(B lymphoma-2 gene association X,Bax)、活化半胱天冬酶-3(Cleaved caspase-3)、FBXO3水平; 双荧光素酶测定CircTLK1与miR-424-5p以及miR-424-5p与FBXO3靶向关系,并使用RNA下拉实验验证CircTLK1与miR-424-5p关系。结果 与对照组比较,OGD/R组miR-424-5p,HT22细胞活力降低(P<0.05),circTLK1,FBXO3 mRNA水平,HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平、LDH漏出率升高(P<0.05); 与OGD/R组比较,sh-circTLK1组HT22细胞活力增加(P<0.05),HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平,LDH漏出率降低(P<0.05); 与sh-circTLK1组比较,sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂组细胞活力降低(P<0.05),HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平、LDH漏出率升高(P<0.05); 与sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂组比较,sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂+sh FBXO3组细胞活力升高(P<0.05),HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平、LDH漏出率降低(P<0.05); CircTLK1与miR-424-5p以及miR-424-5p与FBXO3均存在靶向关系。结论 CircTLK1沉默可能通过调控miR-424-5p/FBXO3对OGD/R诱导的HT22细胞损伤来发挥保护作用。     

黄连碱上调miR-146a-5p后通过PI3K/AKT通路减轻由MPP+诱导的帕金森病细胞模型损伤

目的探讨黄连碱对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)细胞损伤的影响及其机制。方法用0.3 mmol/L的MPP+处理SK-N-SH细胞作为PD细胞模型,记为MPP+组,以正常培养的细胞作为空白对照组。用浓度分别为10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L的黄连碱预处理4h后再用0.3 mmol/L的MPP+处理作为不同浓度黄连碱处理组。将miR-con、miR-146a-5p转染至SK-N-SH细胞后再用0.3 mmol/L的MPP+处理记为MPP++miR-con组、MPP++miR-146a-5p组;将anti-miR-con、anti-miR-146a-5p转染至SK-N-SH细胞后用20μmol/L的黄连碱预处理4h及0.3 mmol/L的MPP+处理记为MPP++Cop+anti-miR-con组、MPP++Cop+anti-miR-146a-5p组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;Western blotting实验检测活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-146a-5p表达水平。结果与空白对照组比较,MPP+处理后SK-N-SH细胞存活率显著降低,活化caspase-3表达水平显著升高,细胞凋亡率显著升高,CyclinD1、miR-146a-5p表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。黄连碱处理及miR-146a-5p过表达后MPP+诱导的SK-N-SH细胞中细胞存活率显著升高,活化caspase-3表达水平显著降低,细胞凋亡率显著降低,CyclinD1、miR-146a-5p表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。低表达miR-146a-5p逆转了黄连碱对SK-N-SH细胞增殖促进和凋亡抑制的作用。黄连碱处理后MPP+诱导的SK-N-SH细胞中p-AKT、p-PI3K表达水平显著升高,低表达miR-146a-5p逆转了黄连碱对p-AKT、p-PI3K表达水平的促进作用。结论黄连碱可促进细胞存活,抑制MPP+诱导的细胞凋亡,其机制可能与miR-146a-5p及PI3K/AKT信号通路有关。