滋肾润肺平喘汤治疗哮喘缓解期疗效及对儿童Th17/Treg影响研究

目的:观察儿童哮喘缓解期口服滋肾润肺平喘汤对辅助性T细胞17/调节T细胞(Th17/Treg)及临床疗效的影响。方法:选取86例哮喘患儿纳入此项研究,按随机法划分为西药组与联合组,西药组给予布地奈德福莫特罗粉吸入治疗,联合组在西药组治疗的同时联合给予滋肾润肺平喘汤口服; 1个治疗后,评估全部患儿疗效,观察疗程前后中医症候积分、肺功能、Th17计数、Treg计数、Th17/Treg及白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)水平的变化; 统计治疗期间不良反应发生情况; 随访6个月,比较患儿哮喘发作频率的变化。结果:1个治疗后,两组患儿主症:喉中哮鸣音、气喘、畏寒肢冷,次症:咳嗽、咳痰、发育迟缓、面色苍白积分均较本组治疗前降低(均P<0.05),联合组均低于西药组(均P<0.05); 两组患儿FEV₁、FEV₁/FVC、PEF均较本组治疗前提高(均P<0.05),联合组均高于西药组(均P<0.05); 两组患儿Th17计数均有下降(P<0.05)、Treg计数均有升高(P<0.05)、Th17/Treg均较本组治疗前降低(P<0.05),联合组Th17计数高于西药组(P<0.05)、Treg计数与Th17/Treg均高于西药组(P<0.05); 两组患儿血清IL-17、TGF-β水平均较本组治疗前改善(均P<0.05),联合组均优于西药组(均P<0.05); 两组治疗期间均未见严重不良反应; 随访6个月,两组患儿哮喘发作频率与每次发作时间均较本组治疗前减少,联合组均少于西药组(均P<0.05)。结论:儿童哮喘口服滋肾润肺平喘汤可通过改善患儿Th17、Treg相关血清因子表达水平,发挥辅助调节Th17/Treg平衡,降低哮喘发作频率的作用。     

左归丸加减对雌激素缺乏骨丢失小鼠Th17/Treg亚群的影响

目的观察左归丸加减对雌激素缺乏骨丢失模型小鼠脾脏辅助性T细胞亚群17（Th17）/调节性T细胞亚群（Treg）亚群平衡的影响,并探讨其作用机制。方法 50只BALB/c小鼠按随机数字表法随机分为假手术组、卵巢切除模型组、左归丸加减（简称中药）小、中、大剂量组,共5组,每组10只。中药组分别给予中药小、中、大剂量（7.25、14.50、29.00 g/kg）,1天1次,1次约0.5 m L,连续用药12周;同时假手术组及模型组给予等量的生理盐水。采用酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法检测各组血清雌二醇（E2）水平,双能X线骨密度仪检测股骨骨密度（bone mineral density,BMD）,流式细胞仪胞内外双染色法检测脾脏单个核细胞Th17/Treg亚群比例,RT-PCR法检测脾脏单个核细胞IL-17A、TGF-βmRNA表达。结果与假手术组比较,模型组E2、BMD均降低（P〈0.05）,Th17亚群比例、Th17/Treg比值均升高（P〈0.05）,Treg亚群比例明显降低（P〈0.05）,IL-17A mRNA表达明显升高（P〈0.05）,TGF-βmRNA表达明显降低（P〈0.05）;与模型组比较,中药中、大剂量组BMD值明显升高（P〈0.05）,Th17亚群比例、Th17/Treg比值降低（P〈0.05）、Treg亚群比例升高（P〈0.05）,IL-17A mRNA表达降低（P〈0.05）及TGF-βmRNA表达升高（P〈0.05）。相关性分析显示BMD与血清E2水平、Treg亚群比例呈明显正相关（P〈0.05）,与Th17亚群比例呈明显负相关（P〈0.05）;血清E2水平与Treg亚群比例呈明显正相关（P〈0.05）,与Th17亚群比例呈明显负相关（P〈0.05）。结论 Th17/Treg亚群平衡状态与雌激素缺乏骨丢失存在相关性,左归丸加减能降低雌激素缺乏骨丢失小鼠Th17亚群比例,升高雌激素缺乏骨丢失小鼠Treg亚群比例。左归丸加减可能通过调节雌激素缺乏骨丢失小鼠Th17/Treg亚群平衡达到治疗作用,且该方无明显雌激素样作用。     

中西医结合治疗对重症手足口病患儿外周血Treg/Th17平衡的调节作用研究

目的探讨中西医结合治疗对重症手足口患儿外周血中Th17与调节性T细胞(Treg细胞)及相关细胞因子水平的影响。方法将35例重症手足口患儿随机分为2组,西医组16例给予常规西医治疗,中西医结合组19例给予中西医结合治疗,采用流式细胞术检测2组患儿入院第1天及治疗第8天外周血中Th17(CD3^+CD8-IL-17^+)及Treg细胞(CD4^+CD25^+Foxp3^+)表达率,采用ELISA方法检测血清中白细胞介素-10(IL-10)、IL-17、IL-23、人转化生长因子-β1(TGF-β1)水平。结果治疗第8天,2组Th17细胞数和血清IL-17水平及中西医结合组血清IL-23水平均明显低于入院第1天(P均<0.05),Treg细胞数及血清IL-10、TGF-β1水平均明显高于入院第1天(P均<0.05),且中西医结合组血清IL-17、IL-23水平均明显低于西医组(P均<0.05)。结论中西医结合治疗重症手足口病可明显调节Treg/Th17平衡。     

散寒除湿法对寒湿痹阻型类风湿关节炎患者Th17/Treg 细胞平衡的影响

目的:观察基于散寒除湿法立方的穴位贴敷治疗类风湿关节炎(RA)寒湿痹阻证患者的临床疗效及对辅助性T细胞17 (Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响。方法:将102例RA患者随机分为对照组与治疗组。对照组采用甲氨蝶呤联合来氟米特治疗,治疗组在对照组基础上加用中药穴位贴敷治疗。比较2组治疗前后疾病活动度评价表(DAS28)评分及中医证候积分。采用流式细胞术检测患者外周血Th17、Treg细胞的表达比例,采用酶联免疫吸附法测定血清白细胞介素-10 (IL-10)、白细胞介素-17 (IL-17)水平。结果:治疗组总有效率为92.31%,高于对照组的76.00%(P0.05)。与同组治疗前比较,治疗后2组关节压痛数、关节肿胀数、视觉模拟评分(VAS)、红细胞沉降率(ESR)、DAS28评分、外周血Th17细胞比例、血清IL-17含量均降低(P0.05),Treg细胞比例、IL-10含量均升高(P0.05)。与对照组治疗后比较,治疗组关节肿胀数、ESR、DAS28评分、外周血Th17细胞比例、IL-17含量均较低(P0.05),Treg细胞比例、IL-10含量均较高(P0.05)。结论:基于散寒除湿法立方的穴位贴敷能有效改善活动期寒湿痹阻型RA患者的临床症状,纠正RA患者体内Th17/Treg细胞失衡状态。     

加味归脾合剂治疗慢性免疫性血小板减少症气虚证临床研究

目的:观察加味归脾合剂治疗慢性免疫性血小板减少症(ITP)的疗效,探讨中药复方制剂对ITP患者Treg/Th17免疫紊乱调控的有效干预机制。方法:将符合标准的60例慢性ITP患者随机分为中药组和激素组各30例,中药组予加味归脾合剂治疗,激素组予泼尼松治疗,记录治疗前后ITP患者血清中细胞因子Treg细胞、Th17细胞以及Treg/Th17比值,Foxp3mRNA、RORγt mRNA、Foxp3/RORγt比值检测结果及外周血血小板计数。结果 :(1)血小板计数:中药组和激素组治疗后均有所上升,与治疗前比较差异有统计学意义(P0.01),组间比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)Treg/Th17:中药组与激素组治疗前与正常对照组比较,Treg细胞、Th17细胞、Treg/Th17比值、Foxp3mRNA、RORγt mRNA表达、Foxp3/Ro Rγt比值差异均有统计学意义(P0.05);治疗后中药组Treg细胞表达与Treg/Th17比值、Foxp3mRNA表达、Foxp3/Ro Rγt比值检测均高于激素组,组间比较差异有统计学意义(P0.05);Th17和RORγtmRNA表达,组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:加味归脾合剂可有效提升血小板计数及Treg细胞、Treg/Th17比值、Foxp3mRNA、Foxp3/Ro RγT比值,其上调Treg细胞及Foxp3mRNA表达,从而改善Treg/Th17免疫功能紊乱,健脾益气统血是治疗ITP气虚证的主要机制之一。     

温阳化浊通络方对系统性硬化病患者外周血Th17/Treg细胞平衡的影响

目的观察温阳化浊通络方对系统性硬化病(systemic scierosis,SSc)阳气亏虚、浊邪阻络证患者外周血辅助性T细胞17(T helper 17 cells,Th17)/调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)及其细胞因子IL-17、IL-10水平的影响。方法将82例SSc患者按随机数字表分为西医组(对照组)和中西医结合组(治疗组),每组各41例。两组均予甲氨蝶呤片、泼尼松片口服治疗,治疗组加温阳化浊通络方口服,两组均连续治疗6个月。另选择70名健康志愿者作为健康对照组(健康组)。采用流式细胞术检测外周血Th17和Treg细胞数量,采取双抗体夹心E LISA法检测血清IL-17、IL-10、血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)、Ⅲ型前胶原氨基端原肽(aminoterminal propeptide of typeⅢprocollagen,PⅢNP)、Ⅰ型胶原羧基交联末肽(cross-linked carboxyterminal telopeptide of typeⅠcollagen,ⅠCTP)水平,采用Pearson相关分析观察Th17/Treg与vWF、PⅢNP、ⅠCTP水平及皮肤积分、疾病活动指数相关性。结果 SSc患者外周血Th17比例、Th17/Treg及血清IL-17含量高于健康组,而Treg比例及血清IL-10含量低于健康组,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。两组治疗后Th17比例、Th17/Treg、IL-17含量、vWF及PⅢNP水平均较治疗前降低(P0.05,P0.01),Treg比例、IL-10含量升高(P0.05,P0.01),治疗组ⅠCTP水平较治疗前升高(P0.05)。除Th17比例外,治疗组各指标水平改善优于对照组(P0.05,P0.01)。SSc患者治疗前后Th17/Treg与vWF、PⅢNP水平及皮肤积分、疾病活动指数呈正相关性(P0.01),与ⅠCTP水平无明显相关性(P0.05)。结论温阳化浊通络方能够通过调节SSc患者外周血Th17/Treg细胞失衡、降低vWF和PⅢNP水平、升高ⅠCTP水平而发挥治疗作用。     

电针对肥胖小鼠脾脏调节性T细胞/辅助性T细胞17平衡及血清炎性因子的影响

目的:以调节性T细胞(Treg)与辅助性T细胞17(Th17)平衡及血清相关炎性因子为切入点研究电针治疗肥胖的潜在机制。方法:雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、电针组，每组10只。采用高脂饮食建立小鼠肥胖模型，电针组选取“足三里”“丰隆”“中脘”“关元”给予电针治疗，20 min/次，每周3次，共干预8周。观察各组小鼠进食量、体质量并计算Lee’s指数；多重液相芯片定量技术检测各组小鼠血清中白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达；流式细胞术检测各组小鼠脾脏组织中Treg、Th17细胞水平；荧光定量PCR法检测各组小鼠脾脏组织中叉头框蛋白P3(Foxp3)、维甲酸相关孤儿受体(ROR-γt) mRNA的表达水平。结果:与正常组相比，模型组小鼠的进食量、体质量、Lee’s指数明显升高(P<0.01,P<0.001);血清中IL-2、IL-6、IL-17A、IFN-γ、TNF-α含量升高(P<0.01),IL-4、IL-10含量降低(P<0.001,P<0.0...     

鼠神经生长因子联合针灸治疗小儿面神经炎的疗效及对reg/Th17相关细胞因子表达的影响

目的观察鼠神经生长因子联合针灸治疗小儿面神经炎的疗效及对Treg/Th17相关细胞因子表达的影响。方法将90例面神经炎患儿随机分为观察组45例和对照组45例,对照组给予鼠神经生长因子治疗,观察组在对照组治疗基础上给予针灸治疗,治疗前后采用日本神经研究会提议的"40分法"对临床症状进行评分,采用House-Brachmann(HB)分级评估患儿治疗前后面神经麻痹分级情况;检测2组治疗前后神经肌电图、Treg/Th17相关细胞因子表达情况。结果 2组治疗后静止、轻闭眼、重闭眼、蹙额、动鼻翼、患侧闭眼、示齿、吹哨、鼓腮、口呈一字型评分均显著升高(P均<0.05),且观察组上述评分均高于对照组(P均<0.05);观察组治疗后H-B分级改善情况优于对照组(P<0.05);2组治疗后面神经传导速度、面神经运动传导诱发电位R1潜伏期与CAMP波幅均显著改善(P均<0.05),血清白细胞介素-17(IL-17)、IL-6水平降低(P均<0.05),而IL-10、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平均显著升高(P均<0.05),且观察组的改善情况优于对照组(P均<0.05)。2组治疗期间均未发现有严重不良反应。结论鼠神经生长因子联合针灸治疗面神经炎患儿能够显著改善临床症状,调节外周血Th17/Treg免疫平衡,促进面神经功能恢复,且安全性好。     

复方芩柏颗粒对溃疡性结肠炎大鼠Th1/Th2、Th17/Treg细胞稳态影响

目的 探讨复方芩柏颗粒对葡聚糖酸钠(dextran sulfate, DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)大鼠CD4⁺T细胞稳态的调节作用。方法 42只SPF级雄性SD大鼠,随机均分为正常组、模型组、美沙拉嗪组、复方芩柏颗粒组,DSS诱导UC模型。连续灌胃干预3周后观察大鼠一般情况;检测各组大鼠结肠组织病理改变;通过流式细胞仪检测各组大鼠辅助性T细胞(helper T cell, Th)1/Th2、Th17/调节性T细胞(regulatory T cells, Treg)细胞亚群比例;通过RT-PCR检测各组大鼠肠道组织中逆转录因子的mRNA表达;通过Western blot法测定逆转录因子的蛋白表达。结果 与正常组相比,模型组Th1、Th17细胞比例上升,Th2、Treg细胞比例下降(均P<0.05);与模型组相比,美沙拉嗪组及复方芩柏颗粒组中Th1、Th17细胞比例回调下降,Th2、Treg细胞比例回升(均P<0.05)。结论 复方芩柏颗粒能有效改善UC大鼠的一般症状及肠道黏膜情况,可能是通过调节相关细胞因子及...     

清益调免方通过调控细胞因子纠正自然流产模型小鼠母胎界面Th17/Treg失衡

目的 探讨清益调免方通过对关键细胞因子的调控来调节辅助性T细胞17(Helper T cells 17,Th17)/调节性T细胞（Regulatory T cell,Treg）平衡的作用机制。方法 采用随机对照试验设计,将CBA/J雌鼠分为3组：正常对照组（Normal control group,N）、模型组（Model group,M）、清益调免方治疗组（QYTMtreated group,Q）,每组8只。N组雌鼠和BALB/c雄鼠合笼,M组和Q组雌鼠与DBA/2雄鼠合笼,Q组给予清益调免方溶剂,N组和M组给予等体积的蒸馏水。妊娠第14.5天处死孕鼠取材,计算胚胎丢失率;苏木精-伊红（HE）染色观察蜕膜组织的形态变化;流式细胞术检测孕鼠脾脏中CD4+CD25+Foxp3+(Treg)细胞、CD4+IL-17A+(Th17)细胞占CD4+T细胞的比例;酶联免疫吸附测定胎盘中白介素10(IL-10)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素17A(IL-17A)、白介素6(IL-6)水平变化;实时荧光定量PCR检测胎盘组织中维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、叉头状螺旋转录因子3(...     

养阴方对HSP65攻击下ApoE~(-/-)小鼠Th17、Treg细胞失衡的作用研究

目的考察在热休克蛋白(HSP)65攻击下养阴方对载脂蛋白E敲除(ApoE~(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)的病变及辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)的影响及可能机制。方法将ApoE~(-/-)小鼠分别饲喂普通和高脂饲料,并分别sc无菌PBS或HSP65,以辛伐他汀为阳性药,研究养阴方对AS模型小鼠血脂、斑块、Th17细胞与Treg细胞比例(Th17/Treg)及相关炎症指标的影响。给药方式皆为ig给药,并以等体积生理盐水做对照。采用酯酶法检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)及高密度脂蛋白(HDL)水平;油红O染色法测定主动脉斑块面积;流式细胞术测定抗凝血中IL-17A~+CD4~+Th17及Foxp3~+CD25~+CD4~+Treg细胞数量;ELISA法测定血清白细胞介素-6(IL-6)、IL-17、IL-2、转化生长因子-β(TGF-β)、IL-10水平;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法测定脾脏中Stat3、Stat5a、Foxp3和主动脉中Stat3、Stat5a mRNA表达;Western blotting法测定脾脏中磷酸化STAT3(pSTAT3)、磷酸化STAT5(pSTAT5)、FOXP3和主动脉中pSTAT3蛋白表达。结果养阴方使小鼠血清TC、TG、LDL水平显著降低(P0.01),HDL显著升高(P0.05);主动脉斑块面积明显减小(P0.01);外周血IL-17A~+CD4~+Th17细胞显著减少(P0.05),Foxp3~+CD25~+CD4~+Treg显著增加(P0.05),Th17/Treg值大幅下降(P0.01);血清IL-6水平显著下降(P0.05),IL-2(P0.01)、TGF-β(P0.05)、IL-10(P0.05)水平显著升高;脾脏pSTAT3蛋白水平下降(P0.01),pSTAT5(P0.01)和FOXP3(P0.05)蛋白水平上升;主动脉Stat3 mRNA(P0.01)和pSTAT3蛋白(P0.05)水平下降。结论养阴方能够改善HSP65攻击下ApoE~(-/-)小鼠的高脂血症及AS,同时调节外周血中Th17/Treg的平衡和炎症因子的分泌从而改善炎症。养阴方对Th17、Treg的效应可能与减弱的IL-6/pSTAT3和增强的IL-2/pSTAT5信号有关。     

左归丸对肾虚仔鼠胸腺内CD4-CD8-T细胞分化的影响

目的:研究左归丸对肾虚仔鼠发育过程中CD4-CD8-T细胞在胸腺内分化的影响以及补肾填精法的应用价值,探索“肾为先天之本”的理论内涵。方法:采用大鼠2∶1进行雌雄配对,3种应激法复合构建肾虚模型,将孕鼠分为正常组,模型组,胸腺肽组(0.003 g·kg^-1),左归丸低、高剂量组(2,8 g·kg^-1)。正常组不造模给予生理盐水灌胃;模型组造模给予生理盐水灌胃,胸腺肽组造模给予胸腺肽胶囊溶液灌胃,左归丸低、高剂量组造模给予左归丸悬浊液灌胃,选取胚胎16,19 d及出生第1天(E16,E19,P1)3个时期,计算仔鼠胸腺指数,电镜观察仔鼠胸腺上皮细胞超微结构形态,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测仔鼠胸腺内胸腺肽β4(TMSβ4)和胸腺肽α1(Tα1)的含量,流式细胞学检测仔鼠胸腺细胞表面CD4,CD8,CD25,CD44表达以鉴定T细胞类型。结果:电镜下模型组胸腺上皮细胞形态不规则,细胞核变形,核染色质明显聚集增加,胸腺肽组和左归丸低、高剂量组胸腺上皮细胞变形不明显;ELISA法检测结果显示,与正常组比较,模型组不同时期的TMSβ4,Tα1含量明显降低(P<0.05);与模型组比较,胸腺肽组和左归丸低、高剂量组胸腺内TMSβ4和Tα1的含量明显升高(P<0.05);流式细胞检测显示,与正常组比较,模型组在E16,E19,P13个时期CD4^-CD8^-T细胞均明显增加(P<0.05),CD4^-CD8^-CD25^-CD44^-T(DN4)明显增加(P<0.05);与模型组比较,胸腺肽组和左归丸低、高剂量组在E16,E19,P1时期CD4-CD8^-T细胞均明显减少(P<0.05),同时DN4也明显减少(P<0.05)。结论:左归丸可以改善肾虚仔鼠胸腺上皮细胞的结构,并通过增加仔鼠胸腺内TMSβ4和Tα1的分泌诱导胚胎期胸腺内T细胞从DN4至DP阶段的分化,说明左归丸通过补肾填精,促进T细胞发育成熟,调节仔鼠肾虚免疫失调状态。     

狼疮方对体外扩增小鼠CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的影响

目的:狼疮方对体外扩增小鼠CD4+CD25+调节性T细胞数量的影响。方法:免疫磁珠法分离狼疮方治疗组与未治疗组小鼠CD4+CD2+5T细胞;通过流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞Foxp3表达情况;用抗CD3和抗CD28包被的微珠来进行刺激,体外扩增小鼠的CD4+CD25+调节性T细胞;用CFSE法检测CD4+CD25+调节性T细胞体外抑制CD4+CD2-5T细胞的增殖情况。结果:经抗CD3和抗CD28包被的微珠刺激后,在TGF-β1和IL-2存在的环境中CD4+CD25+T细胞数量明显升高,扩增后的CD4+CD25+T细胞高表达Foxp3。与此同时,经狼疮方处理后的小鼠CD4+CD25+T细胞扩增后数量增加133.3±18.9倍,未经狼疮方处理的对照细胞数量增加104.7±10.8倍,两者比较有显著性差异(P0.05)。狼疮方治疗组与未治疗组中分离的CD4+CD2+5T细胞和扩增的CD4+CD25+T细胞对CD4+CD2-5T细胞的增殖皆有明显抑制作用,荧光强度分别为32.1±4.8,33.1±4.9,30.1±3.8,32.9±4.2。结论:狼疮方有助于提高小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的扩增效率,扩增的CD4+CD25+调节性T细胞表达Foxp3,具有体外免疫抑制功能。     

雷公藤药材总生物碱含量及影响因素的研究

目的:考察雷公藤药材总生物碱的含量状况及其变化规律。方法:采用有机溶剂提取和氧化铝柱色谱分离进行样品前处理,紫外分光光度法在268 nm波长下测定吸收度。结果与结论:一般韧皮部含量是木质部含量的2~5倍,二者含量变化呈现一致性。从不同种和类型看,昆明山海棠含量较高,雷公藤F次之,东北雷公藤最低;但每一类型内,不同居群间差别较小。含量较高的居群均来自雷公藤F和昆明山海棠,它们是江西遂川、安徽黄山、浙江景宁和云南昆明。居群内个体间的差别在不同居群中程度有所不同,浙江景宁、福建泰宁、云南昆明等居群内多样性丰富,有利于优良种质的选择。在同一植株内,药材粗细对总生物碱的含量影响不大。木质部总生物碱的含量呈现随季节变化的规律,3月含量最高,然后降低,12月降为最低。韧皮部的总生物碱含量变化规律不明显。     

芪灵汤联合高效抗逆转录病毒疗法对HIV／AIDS患者Thl7和Treg细胞表达水平的影响

目的探讨芪灵汤联合高效抗逆转录疗法（HAART）对HIV／AIDS患者外周血Thl7和Treg细胞表达水平的影响。方法将55例HIV／AIDS患者随机分成HAART治疗组28例和联合治疗组27例,并选取21例HlV阴性患者为健康对照组。HAART治疗组给予HAART治疗,联合治疗组给予芪灵汤联合HAART治疗,观察24周。同时根据治疗前外周血CD4＋T细胞计数水平,将HIV／AIDS患者分为3层,第一层：1～100个／μL;第二层：101～200个/μL;第三层：201～350个/μL,运用流式细胞术（FCM）检测HIV,AIDS患者治疗前基线、治疗4、12、24周时间点、健康对照组外周血Thl7、Treg细胞的表达水平及CD4＋T细胞数目。结果与健康对照组比较,HlV／AIDS患者外周血中Thl7细胞基线表达水平及CD4＋T细胞数显著降低,Treg细胞基线表达水平则升高,差异有统计学意义（P〈0．01）;与同组治疗前比较,HAART治疗组与联合治疗组治疗4、12和24周时CD4＋T细胞计数均升高,差异有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）。不同CD4＋T细胞水平,两组患者有效率差异无统计学意义（P〉0．05）。各时间点上,HAART治疗组与联合治疗组Thl7细胞、Treg细胞表达水平无统计学意义（均P〉0．05）。与HAART治疗组比较,治疗24周后,联合治疗组Thl7／Treg比例显著升高,差异有统计学意义（U=2．135,P=0．038）。结论芪灵汤能够改善Thl7/Treg细胞免疫平衡,这可能是芪灵汤提高HlV／AIDS患者免疫功能的机制之一。     

雷公藤属3种植物不同群体和个体中雷公藤甲素的研究

目的测定雷公藤属3种植物(雷公藤、昆明山海棠和黑蔓)不同群体和个体中雷公藤甲素(tripto lide),为评价雷公藤药材质量和寻找雷公藤的优质种质奠定基础。方法建立雷公藤甲素HPLC测定方法,并测定了全国主要分布区25个群体91个个体的木质部和韧皮部中的雷公藤甲素。结果黑蔓的雷公藤甲素质量分数很低;雷公藤和昆明山海棠种间的雷公藤甲素差异不明显,个体质量分数木质部为1.0×10-6~5.83×10-5;韧皮部为2.3×10-6~1.030×1-0 4。结论雷公藤和昆明山海棠不同个体雷公藤甲素质量分数最高值与最低值相差约50倍,不同居群雷公藤甲素质量分数最高值与最低值相差10多倍,不同来源的药材质量差异极大,严重影响用药的安全性;雷公藤甲素质量分数高的居群位于浙江西南部和中部、湖南新宁、贵州雷山和安徽黄山;湖南新宁、贵州雷山和浙江江山居群中有雷公藤甲素质量分数极高的个体,值得进一步研究,以寻找质量分数高的优良单株。     

牡荆苷对急性脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用及对其Th1/Th2漂移的影响

目的探讨牡荆苷(VT)对急性脑缺血(ACI)再灌注大鼠的神经保护作用及对辅助性T细胞1(Th1)/Th2漂移的影响。方法制备ACI再灌注大鼠模型,分为模型组,VT低、中、高剂量(0.94、1.88、3.76 mg/kg)组和假手术组,缺血再灌注1 h后,VT各剂量组大鼠ip不同浓度VT,假手术组和模型组大鼠ip等量生理盐水,连续3 d。观察大鼠一般状态,评估给药前后Longa神经功能评分、给药后脑组织神经元细胞形态学变化;对比各组大鼠脑组织DNA单链、双链断裂损伤率;检测大鼠脑组织中Th1、Th2标记物γ干扰素(INF-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平,计算INF-γ/IL-4。结果 ACI再灌注建模成功率为88.89%,建模大鼠均出现精神状态不佳现象,给药后VT各剂量组大鼠状态均有所好转。与模型组比较,VT各剂量组大鼠给药1、3d后神经功能评分均显著降低(P0.05),且呈剂量依赖性。HE结果显示,模型组大鼠神经元细胞体积缩小、细胞核固缩,VT各剂量组大鼠给药后神经元细胞损伤均有所减轻,其中高剂量组减轻最为明显。与假手术组比较,模型组大鼠DNA单链、双链断裂损伤率,INF-γ水平及INF-γ/IL-4较显著升高(P0.05),IL-4水平显著降低(P0.05);与模型组比较,VT各剂量组大鼠DNA单链、双链断裂损伤率,INF-γ水平及INF-γ/IL-4均显著降低(P0.05),IL-4水平显著升高(P0.05),且呈剂量依赖性。结论 VT对ACI再灌注大鼠神经功能具有保护作用,其中VT 3.76 mg/kg保护作用最佳,可能与调节Th1/Th2细胞平衡向Th2漂移、减轻脑细胞DNA损伤有关。     

中药天花粉蛋白增强诱导CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数量和功能的初探＊

目的 探讨中药天花粉蛋白（Trichosanthin，Tk）增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）数量和功能的作用。方法 研磨6-8周C57BL/6小鼠脾脏，裂解红细胞后得到单个脾脏淋巴细胞悬液，按5×10⁵/mL细胞密度均匀接种在圆底96孔板，设空白组、对照组（增殖体系：1 μg·mL^-1 anti-CD3/28 mAb）、三个不同诱导方案组，培养7天后收集细胞运用流式细胞术检测CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例以此确定最佳诱导方案；将低浓度Tk（0.25、0.5、1 μg·mL^-1）作用于诱导体系，7天后采用流式检测Tk对CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例的影响；Annexin V-PI染色法检测细胞凋亡情况；Western blotting法测定各组中Treg细胞特异性转录因子Foxp3蛋白表达情况；实时荧光定量 PCR法检测转录因子Foxp3和细胞因子TGF-β、IL-10、IL-6、IFN-γ基因水平的表达；酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组细胞培养上清中分泌IFN-γ和IL-10的浓度。结果 与对照组相比，添加TGF-β（5ng·mL^-1）诱导小鼠脾脏淋巴细胞生成Treg的数量和比例最高，此诱导方案最佳（P < 0.01）；与诱导组相比，低浓度中药天花粉蛋白可显著增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞数量和比例，呈剂量依赖性（P < 0.01），且Tk需在诱导体系下发挥作用，单加不能诱导生成Treg细胞，此浓度Tk无细胞毒性；与对照组相比，诱导组和低浓度Tk组Treg特异性转录因子Foxp3蛋白和基因表达水平均显著上调（P < 0.01），II型辅助性T细胞（Th2）分泌的炎症抑制因子IL-10、TGF-β基因表达不同程度上调，反之，I型辅助性T细胞（Th1）分泌的促炎因子IFN-γ、IL-6基因表达呈相反趋势下调（P < 0.01）；与对照组相比，诱导组和低浓度Tk组细胞上清中分泌的IL-10浓度显著增加，IFN-γ浓度明显降低（P < 0.01）。结论 低浓度中药天花粉蛋白可显著增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞，上调Foxp3和Th2型炎症抑制因子IL-10、TGF-β的表达，下调Th1型促炎因子IFN-γ、IL-6的表达，从而发挥免疫抑制功能。     

芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖和细胞[Ca2+]i变化的影响

目的研究芦荟大黄素对植物血凝素(PHA)引起的大鼠T淋巴细胞增殖和细胞内Ca2 浓度([Ca2 ]i)变化的影响,探讨芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖的作用和机制。方法采用MTT法检测细胞增殖,用单细胞钙成像系统记录细胞胞浆[Ca2 ]i。结果芦荟大黄素对PHA引起的细胞增殖有显著抑制作用,且其抑制作用与剂量有关;加入PHA引起细胞[Ca2 ]i迅速升高,并持续维持高[Ca2 ]i水平,芦荟大黄素对PHA引起的[Ca2 ]i升高有显著抑制作用,其作用途径包括阻断胞内Ca2 释放和抑制胞外Ca2 内流。结论芦荟大黄素可抑制T淋巴细胞增殖,其作用机制可能与抑制淋巴细胞内[Ca2 ]i升高相关。     

Ti和Ri质粒对栝楼双转化的研究

目的 :建立栝楼双转化毛状根培养系统。方法 :①利用根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌株C58感染栝楼Trichosanthes kirilowii.无菌苗诱导冠瘿瘤 ,然后用发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes菌株 15834感染其再生植株 ,诱导出毛状根 ;②用纸电泳检测Ti和Ri质粒是否转化成功 ;③运用分光光度计和SDS PAGE检测栝楼组织中所含蛋白。结果 :Ti和Ri质粒转化成功并建立了栝楼双转化毛状根培养系统。结论 :双转化毛状根与一般毛状根相比 ,具有生长更迅速等特点而蛋白含量基本一样 ;因此 ,利用它来生产天花粉蛋白更具有开发潜力。