促性腺激素释放激素类似物对人乳腺癌细胞的影响

目的:探讨促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)类似物曲普瑞林(triptorelin)对人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231细胞生长及细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)和磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路中重要信号分子ERK1/2和Akt活化的影响。方法:使用不同浓度、不同时间的曲普瑞林刺激人乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞株,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期的分布,Western blotting检测Akt和ERK1/2的磷酸化程度。结果:曲普瑞林(10-5mol/L)作用人乳腺癌MCF-7细胞192 h、曲普瑞林(10-4mol/L)作用人乳腺癌MCF-7细胞168 h、192 h或曲普瑞林(10-4mol/L)作用人乳腺癌MDA-MB-231细胞192 h可明显抑制细胞生长(P0.05);曲普瑞林(10-4mol/L)作用人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞192 h,ERK1/2的磷酸化程度均较正常对照组低,Akt的磷酸化程度较正常对照组高,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:GnRH类似物曲普瑞林对人乳腺癌细胞的抑制作用,不仅仅是通过对垂体激素的降调节机制,还可能产生直接抑制作用。但该抑制作用未涉及ERK/MAPK和PI3K/Akt信号通路。     

RNA干扰抑制MTA1基因对人乳腺癌细胞ERα表达及浸润能力的影响

目的 通过观察pGenesil-1肿瘤转移相关基因1(MTA1)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7细胞MTA1基因的沉默效应,了解其对ERα表达及浸润能力的影响.方法 设计合成并构建重组质粒pGenesil-1MTA1,将该质粒分别转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,荧光显微镜评估转染效率,RT-PCR检测MTA1和基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA表达,免疫细胞化学检测ERα和MMP-9表达,Western blot检测ERα蛋白表达,用Boyden小室体外侵袭实验检测转染前后两株细胞侵袭力的变化.结果 成功构建重组质粒pGenesil-1MTA1,并成功转染入MDA-MB-231和MCF-7细胞(平均转染效率分别为82.5%和78.2%).两株细胞MTA1 mRNA表达均受到不同程度的抑制(分别为80.2%和58.7%).经干扰MTA1基因后MDA-MB-231细胞ERα蛋白表达得到逆转,呈阳性表达;MMP-9 mRNA表达下降;细胞体外侵袭力减弱(侵袭指数为27.2%±2.1%),与干扰前(76.3%±2.4%)相比差异有统计学意义(P＜0.05).而MCF-7细胞转染重组质粒并干扰MTA1基因后,ERα蛋白、MMP-9 mRNA表达和体外侵袭能力变化均无统计学意义(P＞0.05).结论 重组质粒pGenesil-1MTA1能有效抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7细胞MTA1基因表达,ERa在MDA-MB-231细胞得到逆转,表达阳性,其高侵袭能力减弱,使干扰肿瘤转移靶基因成为可能.     

NGF对乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7增殖和存活的影响

目的:研究神经生长因子(NGF)对乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖与存活的影响。方法:运用免疫荧光方法检测NGF及其受体酪氨酸蛋白激酶A(TrkA)的表达;运用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测细胞的NGF自分泌情况;运用蛋白质印迹(Western blotting)方法检测TrkA蛋白的表达情况;运用NGF阻断剂Ro 08-2750对细胞进行NGF剥夺,通过单核细胞直接细胞毒性测定法(MTT)检测细胞增殖的情况;运用流式细胞仪检测细胞凋亡情况以及细胞周期分布的变化。结果:2株乳腺癌细胞系均表达NGF及其受体TrkA,NGF阻断剂Ro 08-2750能够明显抑制2种细胞的增殖,并具有剂量依赖性;流式细胞仪显示Ro 08-2750处理的MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞的S期细胞比例明显增加,G2/M期细胞比例明显降低,MDA-MB-231细胞出现凋亡峰。结论:NGF剥夺明显抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7的增殖,并引起MDA-MB-231细胞凋亡。     

不同乳腺癌细胞系中TLR5 和NLRC4 受体的表达和定位

目的:探究TLR5 和NLRC4 受体在不同乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7 和MDA-MB-435 中的表达和定位情况,并探讨重组鞭毛素蛋白对乳腺癌细胞TLR5 受体的激活情况。方法:利用Real-time PCR 法检测MDA-MB-231、MCF-7 和MDA-MB-435 细胞TLR5 和NLRC4 mRNA 表达水平,用流式细胞仪检测MDA-MB-231、MCF-7 细胞TLR5 受体的表达和定位。纯化重组鞭毛素蛋白即全长鞭毛素蛋白FliC(同时激活TLR5 和NLRC4 两条通路)、FliC驻90-97(不能激活TLR5 通路)、FliC-L3A(不能激活NLRC4 通路)、FliC驻90-97:L3A(两条通路都不激活)。用1 g/ ml 重组鞭毛素蛋白刺激MCF-7 细胞,12 h 后,ELISA 法检测IL-8 的分泌。结果:MCF-7 细胞TLR5 mRNA 表达水平最高,约是MDA-MB-435 细胞的1 700 倍,MDA-MB-231细胞TLR5 表达水平是MDA-MB-435 的约200 倍。TLR5 在MCF-7 细胞浆和胞膜上均有表达,而MDA-MB-231 细胞只在胞浆中表达。激活TLR5 通路的FliC 和FliC-L3A 能够刺激MCF-7 细胞分泌IL-8,而不激活TLR5 通路的FliC 90-97 和FliC 90-97:L3A 则不能。结论:不同乳腺癌细胞系都表达TLR5 和NLRC4,但是表达部位和表达水平不同。MCF-7 细胞TLR5 和NLRC4 表达高于其他乳腺癌细胞系。乳腺癌细胞系表面的TLR5 受体可以被鞭毛素蛋白激活,为进一步探讨TLR5 通路的激活在乳腺癌细胞增殖中的作用提供实验基础。     

MicroRNA-200a通过抑制上皮-间充质转化影响乳腺癌细胞的恶性生物学行为

目的:探讨微小RNA-200a(miR-200a)表达改变对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及其调节机制。方法:RT-qPCR法检测人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-468和MCF-7中miR-200a的表达水平与正常人乳腺上皮细胞株MCF-10A的差异。CCK-8法检测转染miR-200a mimic和miR-inhibitor后MDA-MB-231细胞活力的变化。采用流式细胞术及Transwell实验检测转染后MDA-MB-231细胞凋亡及侵袭能力的变化。采用RT-qPCR和Western blot检测上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、SIP1、Snail、Twist、ZEB1和ZEB2 mRNA及蛋白表达的变化。结果:与MCF-10A细胞相比,miR-200a在MDA-MB-231细胞中表达显著降低(P0.05)。过表达miR-200a使MDA-MB-231细胞活力降低(P0.05),凋亡率升高(P0.05),侵袭能力下降(P0.05), SIP1、N-cadherin、Snail、Twist、ZEB1和ZEB2的mRNA及蛋白表达显著下调(P0.05),而E-cadherin的mRNA及蛋白表达显著增加(P0.05);抑制miR-200a的表达使上述结果逆转(P0.05)。结论:上调miR-200a能够抑制MDA-MB-231细胞的活力和侵袭,促进MDA-MB-231细胞的凋亡。miR-200a可能通过抑制上皮-间充质转化调控乳腺癌的恶性生物学行为。     

乳腺癌细胞的容积敏感性氯电流

 目的: 探讨乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中的容积敏感性氯电流及其生理学和药理学特性。方法: 采用全细胞膜片钳记录模式,在等渗条件下记录MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞的背景氯电流;在细胞外灌流47%低渗灌流液使细胞肿胀或灌流47%高渗灌流液使细胞皱缩时,记录氯电流的变化;加入氯通道阻断剂NPPB(100 μmol/L)或Tamoxifen(20 μmol/L)记录容积敏感性氯电流的改变,分析该电流的特性。结果: (1)等渗条件下,记录到MCF-7细胞与MDA-MB-231细胞的背景氯电流有显著差异;(2)胞外低渗诱导细胞肿胀时,可以激活MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞容积敏感性氯电流;(3)胞外高渗诱导细胞皱缩时,抑制了低渗激活的容积敏感性氯电流;(4)低渗激活的容积敏感性氯电流能被氯通道阻断剂NPPB抑制;(5)雌激素受体(estrogen receptor,ER)调节剂,同时也是氯通道阻断剂的Tamoxifen也能抑制低渗激活的容积敏感性氯电流。结论: MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞均可以记录到容积敏感性氯电流,高渗状态及使用氯通道阻断剂可抑制该氯电流。     

黄芪多糖在体外巨噬细胞-乳腺癌细胞共培养体系中的作用

目的探索黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)对人源性巨噬细胞THP-1—乳腺癌细胞株共培养体系中乳腺癌细胞株细胞功能的影响以及对巨噬细胞的激活作用。方法 CCK-8比色法分别检测APS对THP-1、MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖能力的影响。建立THP-1—MDA-MB-231共培养体系,分为231组、231+APS组、231+ADM组、231+THP-1组和231+THP-1+APS组,处理24 h,收集231细胞,流式细胞仪检测各组231细胞周期和凋亡;显微镜下计数评价各组231细胞迁移和侵袭能力。单独培养THP-1细胞,Greiss法和ELISA法分别检测NO和细胞因子分泌情况。结果不同质量浓度的APS对MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖能力均无明显作用(P0.05),300μg/ml的APS可以显著促进THP-1细胞的增殖活性(P0.05);在231+THP-1+APS组中,相对于231组和231+THP-1组,231细胞的S期细胞明显减少,凋亡率明显增加,迁移和侵袭能力明显抑制(P0.05)。单独培养THP-1细胞,APS显著促进THP-1细胞NO、IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌(P0.05),而对IL-12无显著影响(P0.05)。结论在共培养体系中APS可以抑制MDA-MB-231细胞的生物学行为,其作用机制可能与活化巨噬细胞产生效应因子有关。     

Y14和Upf1在人乳腺癌细胞表达增强

目的 探讨Y14和Upf1在人乳腺癌细胞株和人乳腺癌组织表达情况及其意义。方法 应用免疫细胞化学、激光共聚焦方法测定Y14和Upf1在乳腺癌细胞株MCF-7、ZR-75-30、T47D、MDA-MB-435s、MDA-MB-453、MDA-MB-231与乳腺上皮细胞株HBL-100中的表达情况。结果 ⑴人乳腺癌细胞株中Y14和Upf1的表达均明显高于乳腺上皮细胞株（P＜0.05）。⑵在人乳腺癌细胞中,MDA-MB-231细胞株的Y14和Upf1表达明显高于MCF-7细胞（P＜0.05）。⑶Y14和Upf1在人乳腺癌组织表达增强（P＜0.05）。结论 Y14和Upf1在人乳腺癌细胞和人乳腺癌组织中的表达增强。     

mTOR激酶抑制剂CC-223抑制乳腺癌细胞增殖的实验研究

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)激酶抑制剂CC-223对乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其相关分子机制。方法:CCK-8法检测CC-223对人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231细胞活力的抑制作用;流式细胞术分析CC-223对乳腺癌细胞周期的影响;Western blot实验检测CC-223对细胞周期调控相关蛋白及细胞增殖相关蛋白c-Myc和存活蛋白(survivin)表达的影响。结果:CCK-8结果表明,CC-223能够显著抑制MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞活力(P<0.05);流式细胞术实验结果显示,CC-223能够诱导MCF-7细胞发生G 1期和G 2/M期阻滞(P<0.05);较低浓度的CC-223诱导MDA-MB-231细胞周期阻滞于G 2/M期(P<0.05),而处于G 1期的细胞数量无显著差异。CC-223处理乳腺癌细胞24 h后,细胞周期蛋白B1、细胞周期蛋白D1表达和细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)磷酸化水平显著降低(P<0.05)。Western blot结果表明,MCF-7和MDA-MB-231细胞经CC-223作用后,c-Myc和survivin的表达水平显著下调(P<0.05)。结论:CC-223能够抑制乳腺癌细胞活力,阻滞细胞周期进程,同时下调乳腺癌细胞中c-Myc与survivin的蛋白表达。     

锌转运体ZIP10过表达对乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的:将ZIP10基因真核表达载体转染乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7细胞,研究ZIP10过表达对乳腺癌细胞侵袭能力的影响.方法:经双酶切后凝胶电泳鉴定ZIP10基因表达载体pEGFP-N1-ZIP10,利用脂质体转染法将pEGFP-N1-ZIP10及其相应空载体分别转染乳腺癌细胞MDA-MB-231(ER-)及MCF-7(ER+).RT-PCR检测乳腺癌细胞中MMP-2、MMP-9的mRNA水平,Western blot技术检测细胞中ZIP10蛋白质的表达水平,MTT法观察转染pEGFP-N1-ZIP10前后乳腺癌细胞增殖活性,Transwell实验观察转染pEGFP-N1-ZIP10前后乳腺癌细胞侵袭能力的改变.结果:乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞瞬时转染成功后,MMP-2、MMP-9的mRNA 水平没有显著差异,MTT检测结果显示,pEGFP-N1-ZIP10转染乳腺癌细胞后对其增殖活性没有明显影响;Transwell肿瘤细胞侵袭实验显示,ZIP10过表达可显著增加乳腺癌细胞的侵袭能力.结论:ZIP10真核表达载体转染乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231使ZIP10过表达,对细胞增殖活性没有明显影响,但可明显增加肿瘤细胞的侵袭能力.     

促性腺激素释放激素类似物对乳腺癌细胞株化疗敏感性的影响

目的： 探讨促性腺激素释放激素类似物（GnRHa）对乳腺癌细胞株（MCF-7和MDA-MB-231）化疗敏感性的影响。方法：不同浓度的GnRHa（曲普瑞林,triptorelin）（10^－9 mol/L、10^－8 mol/L、10^－7 mol/L、10^－6 mol/L、10－5 mol/L）分别作用于MCF-7和MDA-MB-231细胞24 h、96 h和168 h后，用CCK-8方法检测细胞活性。用或不用GnRHa（10^－5 mol/L）处理96 h后，分别加入5-氟尿嘧啶（5-FU）或表阿霉素(EPI)作用24 h，用CCK-8法检测细胞抑制率。用RT-PCR检测GnRHa（10^－5 mol/L）作用168 h后GnRH受体、PCNA和MDR1 mRNA表达水平。结果：不同浓度GnRHa作用不同的时间后对乳腺癌细胞活性无影响。GnRHa（10^－5 mol/L）作用96 h后，5－FU和EPI对两种细胞的IC50不改变；GnRHa（10^－5 mol/L）不影响5－FU（MCF-7细胞0.5 g/L，MDA－MB－231细胞0.5 g/L）和EPI（MCF-7细胞1.2 mg/L,MDA－MB－231细胞0.8 mg/L）对两种细胞的抑制作用（P>0.05）。GnRHa（10^－5 mol/L）作用168 h后，MCF-7细胞的PCNA mRNA表达无改变。而在MDA-MB-231细胞，PCNA表达升高，差别有统计学意义（P<0.05）。在MCF-7对照组中，MDR1 mRNA有弱表达。GnRHa作用后，抑制了MDR1 mRNA表达。MDA-MB-231细胞GnRHa作用前后， MDR1 mRNA均无表达。结论：GnRHa不影响乳腺癌细胞株对5-FU和EPI的敏感性。GnRHa可能通过下调MDR1 mRNA表达水平，减弱MCF-7细胞的耐药性。     

Metronidazole affects breast cancer cell lines

PurposeThe aim of our study was to evaluate the impact of metronidazole (MTZ) on cytotoxicity and DNA synthesis in MCF-7 (estrogen receptor positive) and MDA-MB-231 (estrogen receptor negative) breast cancer cell lines.Material/MethodsToxicity of MTZ was determined by MTT test. MCF-7 and MDA-MB-231 cells were incubated with metronidazole used in different concentrations for 24, 48 and 72 hours. The effect of MTZ on DNA synthesis was measured as [3H]-thymidine incorporation.ResultsWe showed that MTZ in concentration 250 μg/ml significantly increases the growth of MCF-7 cell lines after 24 hours of incubation, but it reduces cell viability in concentrations 1 and 10 μg/ml 72 hours after the drug application. Significant increase of MDA-MB-231 cell viability was obtained in MTZ concentration of 250 μg/ml after 24 and 72 hours. The increase of [3H]-thymidine incorporation in MCF-7 cell line treated with MTZ in concentration 250 μg/ml was statistically significant after 24 hours. Great suppression of cell proliferation was obtained in MDA-MB-231 breast cell line after application of the following concentrations of MTZ: 0.1 μg/ml (after 24 hours) and 0.1, 10, 50, 250 μg/ml (after 72h).ConclusionsWe found that metronidazole exerts different dose- and time- dependent effects on human breast cancer cell lines characterized by presence or absence of estrogen receptors. We suggest that these discrepancies may be influenced by the estrogen signaling.     

HDAC1调控Wnt/β-catenin信号通路对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:研究组蛋白脱乙酰酶1(HDAC1)对乳腺癌细胞凋亡的影响及机制。方法:RT-qPCR和Western blot法分别测定正常乳腺上皮细胞系MCF-10A和乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平。在MDA-MB-231细胞中转染HDAC1 si RNA,RT-qPCR和Western blot测定HDAC1的表达水平,MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定凋亡,Western blot测定细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和cleaved caspase-3的蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理下调HDAC1表达后的乳腺癌细胞,测定细胞活力和凋亡。结果:乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平均明显高于正常乳腺上皮细胞系MCF-10A(P 0. 01),并且MDA-MB-231细胞中的HDAC1水平最高。HDAC1 si RNA可以降低乳腺癌细胞中HDAC1的m RNA和蛋白水平。敲减HDAC1表达后的MDA-MB-231细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞中cleaved caspase-3水平升高,β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白水平降低(P 0. 05)。Wnt/β-catenin信号通路激活剂可以逆转HDAC1下调诱导的MDA-MB-231细胞凋亡和细胞活力降低,减少cleaved caspase-3的水平(P 0. 05)。结论:敲减HDAC1的表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活诱导乳腺癌细胞凋亡。     

STIM1 对乳腺癌细胞存活与增殖的影响及初步机制分析

目的：探讨STIM1对乳腺癌细胞存活与增殖的影响及初步机制分析。方法：以正常乳腺上皮细胞MCF-10A作为对照,Western blot检测乳腺癌 MCF7、HCC1569、MDA-MB-231、BT549细胞中STIM1的蛋白表达;将STIM1的靶向siRNA序列（STIM1-siRNA组）转染MDA-MB-231细胞,并设置阴性对照组和空白对照组,转染48 h后检测各组细胞STIM1的蛋白表达;MTT法检测转染24、48和72 h的细胞活力;流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率;RT-PCR检测IL-6 和TNF-α 的mRNA表达;Western blot检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原（PCNA）、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）及STAT3和磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)的蛋白表达。结果：乳腺癌细胞中STIM1的蛋白表达均显著高于在MCF-10A细胞表达（P<0.05）;转染STIM1的siRNA后MDA-MB-231细胞中STIM1的蛋白表达显著低于空白对照组（P<0.05）;与空白对照组比较,STIM1-siRNA 组细胞在48 h和72 h的细胞活力显著降低,在48 h的细胞凋亡率显著升高,IL-6 和TNF-α 的mRNA表达显著降低,PCNA、Bcl-2和p-STAT3的蛋白表达显著降低,Bax和Caspase3蛋白表达显著升高。结论：STIM1基因在乳腺癌细胞高表达,通过RNA干扰抑制其表达可降低癌细胞活力,诱导细胞凋亡、提高免疫及下调STAT3信号。     

ER阳性和ER阴性人乳腺癌细胞株p53,mdm—2及p21^WAF1蛋白表达…

目的 研究ＥＲ阳性和ＥＲ阴性人乳腺癌细胞株ｐ５３、ｍｄｍ－２和ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白的表达及其与细胞生物学特性的关系。方法 应用细胞培养、基因转染和免疫组化染色ＬＳＡＢ法等技术，检测ＥＲ阳性、表达野生型ｐ５３（ｗｔｐ５３）蛋白的ＭＣＦ－７细胞和ＥＲ阴性、表达突变型ｐ５３（ｍｔｐ５３）和ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞以及ＥＲ转染阳性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞中ｐ５３、ｍｎｍ－２和ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白的表达水平