Notch1在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育中的表达

目的探讨Notch1在小鼠下颌第一磨牙胚胎发育过程中的组织学分布。方法制作ICR小鼠下颌第一磨牙不同发育阶段的冰冻组织切片,对小鼠下颌第一磨牙自牙胚发育起始期至出生后2天不同发育阶段组织的Notch1分布情况进行免疫组织化学染色。结果 Notch1在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育起始期和蕾状期牙板上皮上方或其包绕的口腔上皮中表达,在牙板上皮中没有表达。自帽状期至钟状期,Notch1在牙胚的中间层表达,而在内釉上皮中无表达。至牙釉质和牙本质分泌期,Notch1仍在颈环部位的中间层表达。此外,Notch1还在牙胚发育不同时期的间充质、牙乳头和早期牙髓中表达。结论 Notch1可能在小鼠下颌第一磨牙发育过程中的牙上皮特别是内釉上皮的细胞分化,以及牙囊和牙乳头细胞分化及分化完成后的牙髓干细胞的稳定性方面有重要作用。     

跨膜蛋白Syndecan-1在不同发育时期小鼠磨牙组织中的表达

目的以小鼠磨牙为发育模型,研究其不同发育时期跨膜蛋白Syndecan- 1的表达特点,进而分析Syndecan-1在牙齿发育中的作用。方法取不同胎龄的胎鼠,制作其下颌第一磨牙的切片,进行免疫荧光染色,并在荧光显微镜下观察Syndecan- 1的表达情况。结果Syndecan- 1的表达随牙胚发育的时期不同而变化：蕾状期时在牙源性上皮和间充质中有弱的阳性分布,帽状期时成釉器上皮阳性表达减弱,而牙乳头及周围的间充质的阳性反应明显增强,钟状期时成釉器上皮又呈阳性表达,并以在中间细胞层的反应更为强烈,而牙乳头间充质的染色则很弱,同时前成釉细胞以及下方的成牙本质细胞的顶端也呈Syndecan- 1的阳性表达。结论Syndecan- 1参与了成釉器和牙乳头的发育和分化过程的调节,并与牙胚细胞的增殖以及成釉细胞和成牙本质细胞的分化相关。     

Notch1蛋白在小鼠下颌切牙发育中的表达

目的探讨Notch1在小鼠下颌切牙牙胚发育过程中的组织学分布。方法制作ICR小鼠下颌切牙不同发育阶段的冰冻组织切片,对小鼠下颌切牙牙胚自牙胚发育起始期至钟状晚期不同发育阶段组织Notch1的分布情况进行免疫组织化学染色。结果 Notch1在小鼠下颌切牙发育蕾状期牙胚的口腔侧上皮中表达,而在和间充质相邻的牙胚上皮中没有表达。从帽状期至钟状期,Notch1在牙胚的中间层表达,而在内釉上皮中没有表达。钟状期的唇侧颈环部位星网状层和部分牙上皮细胞也表达Notch1。此外,Notch1还在牙胚发育不同时期的间充质、牙乳头和早期牙髓中表达。结论 Notch1可能在小鼠下颌切牙发育过程中的牙上皮,特别是内釉上皮的细胞分化,以及牙囊和牙乳头细胞分化及分化完成后的牙髓干细胞的稳定性方面有重要作用。     

Shh、Ptch1及Ptch2基因在小鼠磨牙发育过程中的表达

目的通过原位杂交的方法研究Sonic Hedgehog（Shh）、Patched1（Ptch1）及Patched2（Ptch2）在小鼠下颌磨牙发育过程中的表达，以探讨该信号通路在牙胚发育中的作用。方法制备小鼠下颌第一磨牙发育各期标本，原位杂交检测Shh、Ptch1及Ptch2的表达部位及强度。结果Shh在帽状期表达于釉结，钟状早期表达于内釉上皮，钟状晚期表达于成釉细胞；Ptch1在帽状期表达于牙囊、外釉上皮及星网状层，钟状早期表达于牙囊、外釉上皮及牙乳头，钟状晚期表达于成牙本质细胞及牙乳头；Ptch2在帽状期表达于釉结，钟状早期表达于内釉上皮，钟状晚期无表达。结论Shh信号系统在牙胚发育各期有各自的表达特点，提示可能在牙胚形态的调控，成釉细胞、成牙本质细胞分化的诱导中起重要作用。     

小鼠牙齿发育中Pax-9的表达及意义

目的 通过观察PAX-9在牙发育中的分布及变化规律，探索牙齿发生的机制。方法 标本为妊娠10．5～18．5天昆明小鼠分别取胎鼠，分别作HE染色和免疫组化染色，图像分析仪分析。结果 Pax-9表达于胞浆中。蕾状期，牙蕾上皮及间充质细胞不表达Pax-9；帽状期牙乳头细胞表达较强；钟状期早期成牙本质细胞或前成牙本质细胞表达强阳性，内釉上皮细胞、星网状层细胞及牙乳头细胞有微弱表达；钟状期晚期成牙本质细胞、成釉细胞、及釉牙本质界处集中表达，新形成的釉质和前期牙本质染色较强。结论 PAX-9促进牙胚从蕾状期向帽状期转变，调节钟状期成牙本质细胞及成釉细胞的分化及基质分泌，并参与生物矿化过程。     

同源盒基因Msx-1、Msx-2和Dlx-2在小鼠下颌第一磨牙发育阶段的表达

目的 观察同源盒基因Msx—1、Msx-2和Dlx-2 mRNA在小鼠下颌第一磨牙发育阶段的表达。方法 取胎龄E11～E18和新生P1～P3小鼠的头或下颌，制备5μm连续冠状切片。体外转录合成地高辛标记的Msx—1、Msx-2和Dlx-2 RNA探针。原位杂交后观察Msx—1、Msx—2和Dlx—2在小鼠下颌第一磨牙中的表达。结果 在牙胚发育过程中，Msx—1转录信号始终只在间质细胞中观察到，在上皮细胞中呈阴性。Msx-2和Dlx-2在牙源性上皮和间质中均表达，在磨牙发育起始期二者表达相似，但在随后的牙胚发育过程中，它们出现不同的表达特征。结论 牙胚发育过程中，Msx—1、Msx-2和Dlx-2有不同的表达特征，可能共同参与调控上皮和间质问的相互作用。     

牙本质涎磷蛋白、Ⅰ型胶原蛋白在vps4b基因敲除鼠磨牙牙胚发育中的时空表达

目的 研究vps4b基因突变对牙齿发育相关蛋白——牙本质涎磷蛋白（DSPP）和Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ）表达的影响。方法 取胚胎E13.5 d、E14.5 d、E16.5 d的胎鼠头部及出生后P2.5 d、P7 d的幼鼠下颌骨组织,石蜡包埋后获取第一磨牙牙胚组织切片,采用免疫组织化学染色法检测野生型小鼠和vps4b基因敲除小鼠牙胚中DSPP、COL-Ⅰ的表达。结果 野生鼠蕾状期和帽状期DSPP、COL-Ⅰ均未表达;钟状期DSPP在内釉上皮和牙乳头中有表达,COL-Ⅰ表达于牙乳头和牙囊;分泌期和矿化期DSPP、COL-Ⅰ在成釉细胞、成牙本质细胞、牙囊内均有表达,COL-Ⅰ在牙乳头内亦可见表达。小鼠vps4b基因敲除后,DSPP在钟状期牙乳头和分泌期牙乳头及牙囊内未见表达,COL-Ⅰ在钟状期及矿化期表达部位与野生型小鼠一致,分泌期在牙乳头的表达发生改变。结论 vps4b基因在牙胚发育中发挥重要作用;DSPP、COL-Ⅰ的表达可能受vps4b基因的调控,并与vps4b共同调节牙齿牙本质的发育。     

牙本质涎磷蛋白、Ⅰ型胶原蛋白在vps4b基因 敲除鼠磨牙牙胚发育中的时空表达

目的 研究vps4b基因突变对牙齿发育相关蛋白——牙本质涎磷蛋白（DSPP）和Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ）表达的影响。方法 取胚胎E13.5 d、E14.5 d、E16.5 d的胎鼠头部及出生后P2.5 d、P7 d的幼鼠下颌骨组织,石蜡包埋后获取第一磨牙牙胚组织切片,采用免疫组织化学染色法检测野生型小鼠和vps4b基因敲除小鼠牙胚中DSPP、COL-Ⅰ的表达。结果 野生鼠蕾状期和帽状期DSPP、COL-Ⅰ均未表达;钟状期DSPP在内釉上皮和牙乳头中有表达,COL-Ⅰ表达于牙乳头和牙囊;分泌期和矿化期DSPP、COL-Ⅰ在成釉细胞、成牙本质细胞、牙囊内均有表达,COL-Ⅰ在牙乳头内亦可见表达。小鼠vps4b基因敲除后,DSPP在钟状期牙乳头和分泌期牙乳头及牙囊内未见表达,COL-Ⅰ在钟状期及矿化期表达部位与野生型小鼠一致,分泌期在牙乳头的表达发生改变。结论 vps4b基因在牙胚发育中发挥重要作用;DSPP、COL-Ⅰ的表达可能受vps4b基因的调控,并与vps4b共同调节牙齿牙本质的发育。     

ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空表达

目的:研究ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空分布。方法:采用免疫组织化学方法和图像分析技术观察ADAM28在小鼠牙胚发育各期的表达分布及差异。结果:ADAM28在牙胚发育各时期均有不同程度的表达。帽状期开始即在口腔上皮及成釉器星网层细胞、基底膜、牙乳头细胞和牙囊细胞表达强阳性,到钟状晚期,成釉细胞、釉基质、上皮根鞘和牙乳头细胞阳性表达;至冠根硬组织发育期,成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘、成牙骨质细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞阳性表达。结论:ADAM28作为上皮和间充质间重要的信号分子,参与了从蕾状期到钟状晚期、从基质分泌到硬组织形成的牙冠、牙根形态发生过程,它可能在牙源性间充质细胞的早期形成、增殖与分化启动中发挥重要作用。     

组蛋白去甲基化酶JMJD3在小鼠牙发育中的表达

目的 研究组蛋白去甲基化酶JMJD3在牙发育过程中的表达.方法 采用免疫组织化学方法观察小鼠胚胎E14~18天及出生后P1~P3磨牙牙胚中组蛋白去甲基化酶JMJD3的表达.结果 JMJD3表达于细胞核内,包括上皮性细胞和间充质细胞.在小鼠磨牙牙胚发育的蕾状期(E14)和帽状期(E16),JMJD3在牙蕾上皮,成釉器内釉细胞、外釉细胞、星网状细胞中弱表达.在小鼠磨牙牙胚发育的钟状期(E18),JMJD3在成釉器的外釉细胞层,内釉细胞层,中间层、星网状层及邻近间充质细胞内呈强阳性表达.在小鼠磨牙牙胚发育钟状晚期(P3), JMJD3在成釉细胞、成牙本质细胞及邻近间充质细胞呈强阳性表达.结论 JMJD3在小鼠牙发育过程中呈时空特异性表达,提示JMJD3参与小鼠磨牙的发育.     

The separation and culture of cell populations from bovine molar tooth germs

Separated components of the maxillary molar tooth germs were cultured. The typical epithelial characteristics of enamel organ cells were retained. The cultured cells of the reduced enamel epithelium, outer enamel epithelium and stratum intermedium became polygonal with numerous microvilli, in contrast with the lack of microvilli and elongated profile of stellate reticulum and dental papilla cells. A plexiform organization of cytoskeletal microfila-ments was noted in cells which became polygonal, whereas in elongated cells, microfilaments were arranged in parallel bundles beneath the cell surface. In the cultured epithelial cells, but not dental papilla cells, cytoskeletal tonofilaments as well as cell surface specializations at contact sites between cells were common.     

Differential expression of LAR tyrosine phosphatase in the rat developing molar tooth germ

OBJECTIVE: This study examined the molecules implicated in the cytodifferentiation of dental hard tissue cells. METHODS: Rat pups at postnatal days 4, 7 and 10 were used. Differential display-polymerase chain reaction (DD-PCR), Western blot and immunofluorescent localisation were performed to search differentially expressed genes in tooth development. RESULTS: Leukocyte-common antigen-related tyrosine phosphatase (lar-tp) was differentially detected between the rat maxillary 2nd and 3rd molar germs on postnatal day 10, which were at the dental hard tissue formation and cap/early bell developmental stages, respectively. Both the mRNA and protein expression levels of lar-tp were higher in the 3rd molar germs than in the 2nd. In addition, the levels in the 2nd molar germs at postnatal days 4, 7 and 10, which corresponded to the early/late bell, crown and root stages, respectively, decreased in a time dependent manner. The immunoreactivity against intracellular P-subunit of lar-tp was detected in the ameloblasts and odontoblasts as well as in the undifferentiated inner enamel epithelia and dental papilla cells. However, strong immunoreactivity against extracellular E-subunit was observed only in the undifferentiated inner enamel epithelia and dental papilla cells in the 3rd molar germs and in the stratum intermedium in the 2nd molar germs. CONCLUSION: This is the first identification of lar-tp in the molar tooth development and suggests that this molecule may be involved in the cytodifferentiation of dental hard tissue cells.     

Pik3cb在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同阶段的表达研究

目的:检测Pik3cb在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同阶段的表达分布及变化规律,进一步揭示Pik3cb对牙形态发生的影响。方法:制备原位杂交探针,及小鼠牙胚发育标志时间点的牙胚冰冻切片,通过原位杂交方法进一步显示Pik3cb在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同时期的表达情况。结果:蕾状期Pik3cb明显表达于牙板上皮,帽状期开始大量表达于釉上皮与牙乳头,进入钟状期表达部位趋于集中,尤以内釉上皮及后续新形成硬组织周围的高柱状成釉细胞处最为明显。结论:Pik3cb在牙源性上皮及成釉细胞表达,并可能通过PI3K/PTEN/AKT/mTOR信号通路与成釉细胞瘤行为相关。     

Shh及其受体Ptc1、Ptc2在鼠帽状期磨牙的基因表达

目的 观察信号分子Sonic Hedgehog(Shh)及其受体Ptcl、Ptc2在小鼠下颌第一磨牙帽状期的基因表达，以探讨Shh信号路径在牙胚形态发育早期的作用。方法 制备昆明小鼠磨牙形态发育早期标本(E10．5～E15．5)，常规HE染色观察组织形态。免疫组化SP法对增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)进行定位研究。原位杂交法分析Shh、Ptcl、Ptc2 mRNA在牙胚中的表达与分布。结果 E14．5，内、外釉上皮，星网状层及牙乳头细胞PCNA阳性，大部分釉结细胞PCNA阴性，少量釉结细胞PCNA阳性。Shh、Ptcl、Ptc2 mRNA在内、外釉上皮、星网状层及釉结中均有表达。结论 在帽状期，信号分子Shh可能经自分泌或旁分泌途径作用于釉结以外的上皮和间充质，促进其增殖。     

核心结合因子a1在小鼠牙齿发育过程中的表达

目的：观察Cbfal蛋白在小鼠牙胚发育过程中的表达情况。方法：用自制的Cbfal多克隆抗体，采用免疫组化染色观察其时空表达特性。结果：Cbfal蛋白在帽状期牙胚中表达较广泛，在钟状早、中期牙胚表达于内釉细胞、成釉细胞以及紧靠成牙本质细胞层的牙乳头细胞，而在钟状晚期，Cbfal在牙乳头表达为阴性，成牙本质细胞层弱阳性，成釉细胞为阳性或强阳性。结论：Cbfal可能在小鼠牙胚发育，尤其是在成牙本质细胞和成釉细胞分化过程中具有重要作用。     

肝细胞生长因子受体在大鼠牙胚发育中的表达及其意义

目的：研究肝细胞生长因子受体(c—Met)在大鼠牙胚发育过程中的时空表达模式。方法：用免疫组织化学方法，检测c—Met在大鼠牙胚发育不同阶段表达的位置。结果：c—Met在牙胚发育的不同阶段表达于牙胚中特定的部位：帽状期(胚胎15d)，内釉上皮阳性表达，中间层及部分星网状层细胞弱阳性表达；钟状期(胚胎19d)，内、外釉上皮阳性表达，但内釉上皮较外釉上皮表达弱，中间层及星网状层细胞弱阳性表达；矿化期(生后7d)，成牙本质细胞阳性表达。结论：c—Met在大鼠牙胚发育过程中的表达具有时空特异性，在牙齿形态发生的过程中具有重要的作用，还可能与牙齿的矿化有关。     

透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达

目的:检测透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达,探讨其在小鼠牙胚发育过程中的作用。方法:取不同胎龄的ICR胎鼠,制备小鼠下颌第一磨牙不同发育时期切片,用免疫组织化学实验方法检测透明质酸在下颌第一磨牙牙胚组织中的表达情况。结果:透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚的不同发育阶段表达各异。在小鼠磨牙开始发生时,透明质酸即在增厚的牙板上皮中表达,随后在蕾状期牙蕾中央的上皮细胞间可见透明质酸的表达,而在深层的牙源性间充质表达则不明显。自帽状期至钟状晚期,透明质酸在牙胚星网状层细胞间以及牙源性间充质细胞的表达逐渐增强,而在基底膜、内外釉上皮细胞、成釉细胞以及成牙本质细胞所在区域不表达。结论:透明质酸在牙胚发育过程中呈现时间-空间特异性表达。特别是其在星网状层细胞以及牙乳头间充质细胞中的表达随着牙胚的发育逐渐增强提示其可能与牙胚的形态发生密切相关。     

碱性成纤维细胞生长因子在人牙胚生长发育中的作用

目的 :研究碱性成纤维细胞生长因子在人牙胚生长发育中的作用。方法 :选择胎龄分别为 7、8、10、14周自愿终止妊娠的新鲜人胚胎各 4例 ,制作牙胚切片 ,将蕾状期、帽状期和钟状期牙胚切片 ,做免疫组化检测。结果 :bFGF在蕾状期上皮细胞强染 ,外胚间充质细胞少量弱染色 ;帽状期 ,bFGF在上皮细胞呈整体弱染色 ,牙乳头细胞染色更弱 ;钟状期 ,bFGF在内釉细胞呈强染色 ,牙乳头近切缘的外层细胞亦呈阳性染色 ,星网状层少量细胞弱染色。结论 :bFGF对人牙胚上皮细胞的增殖和分化起着促进作用 ;在人牙胚的钟状期 ,bFGF在促进内釉上皮细胞向成釉细胞转化以及牙乳头细胞向成牙本质细胞转化中起重要作用 ,促进牙胚发育成熟     

Dental epithelial histo-morphogenesis in the mouse: positional information versus cell history

Reciprocal epithelial-mesenchymal interactions control odontogenesis and the cap stage tooth germ mesenchyme specifies crown morphogenesis. The aim of this work was to determine whether this mesenchyme could also control epithelial histogenesis. Dental mesenchyme and enamel organ were dissociated from mouse first lower molars at E14. At this early cap stage, the enamel organ consists of four cell types forming the inner dental epithelium (IDE), primary enamel knot (PEK), outer dental epithelium (ODE) and the stellate reticulum (SR). Pelleted trypsin-dissociated single dental epithelial cells, which had lost all positional information, were reassociated to either dental mesenchyme or dissociated mesenchymal cells and cultured in vitro. Although with different timings, teeth developed in both types of experiments showing a characteristic dental epithelial histogenesis, cusp formation, and the differentiation of functional odontoblasts and ameloblasts. The rapid progression of the initial steps of histogenesis suggested that the cell history was not memorized. The dental mesenchyme, as well as dissociated mesenchymal cells, induced the formation of a PEK indicating that no specific organisation in the mesenchyme is required for this step. However, the proportion of well-formed multicusped teeth was much higher when intact mesenchyme was used instead of dissociated mesenchymal cells. The mesenchymal cell dissociation had consequences for the functionality of the newly-formed PEK.     

Cav1.2在大鼠磨牙牙胚发育中的时空表达

目的观察L型钙离子通道Cav1.2亚型在大鼠磨牙牙胚发育过程中的时空表达特征,探讨其在牙齿发育中的作用。方法制作大鼠不同时期牙胚发育标本,采用免疫组织化学方法,观察Cav1.2在大鼠牙胚发育的不同时期的表达。结果 Cav1.2在大鼠磨牙发育的蕾状期、帽状期,牙蕾上皮和内釉上皮层呈弱阳性表达;钟状期时,Cav1.2在内釉上皮层和成牙本质细胞层呈阳性表达,并随着牙本质的矿化阳性表达增强。结论 Cav1.2在大鼠牙胚发育过程中具有时空表达特异性,推测其在牙胚的发育和细胞分化中发挥重要作用。