产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的耐药基因序列分析

目的研究沈阳地区产超广谱β-内酰胺酶（extended—spectrumβ-lactamases,ESBLs）肺炎克雷伯菌的基因型分布。方法采用聚合酶链反应（PCR）扩增分离31株产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌株的TEM型、SHV型及CTX—M-1型ESBLS基因,1％琼脂糖凝胶电泳,回收DNA片段,测序分析各基因型在耐药的产超光谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌株中的分布。结果TEM-1、SHV-1、CTX—M-1基因扩增阳性率分别为58．0％、90．3％、16．1％。结论分离的ESBLs阳性的肺炎克雷伯菌存在多个耐药基因。     

革兰阴性杆菌TEM型β-内酰胺酶耐药基因研究

目的 了解中南大学3所附属医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰阴性杆菌TEM型耐药基因的检出及流行情况.方法 收集254株多重耐药革兰阴性杆菌,采用双纸片协同法(DDS)进行ESBLs表型确证,多重PCR.法扩增blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因,TEM特异性引物对其整个开放阅读框进行扩增并对PCIL产物测序,通过BLAST分析确定基因型;并对携带有TEM基因的革兰阴性菌株用随机扩增多态DNA(RAPD)方法进行菌株的同源性分析.结果 经多重PCR扩增,105株肠杆菌获得阳性结果,其中85株菌携带TEM基因,26株菌携带SHV基因,10株菌携带OXA-1基因;6株非发酵菌获得阳性结果,均携带TEM基因,且全部为TEM-1型广谱β-内酰胺酶.携带blaTEM耐药基因的菌株所含RAPD类型:大肠埃希菌12种,肺炎克雷伯菌6种,阴沟肠杆菌7种.结论 TEM-1型β-内酰胺酶是湖南地区主要流行的TEM型酶;大肠埃希菌产TEM酶情况尤为突出;在同一医院以及同一病区存在TEM-1型β-内酰胺酶的克隆传播.     

肺炎克雷伯菌TEM-1编码基因的克隆测序及基因定位

目的 以我院临床分离的一株肺炎克雷伯菌99—799株为研究对象，对其所产β-内酰胺酶编码基因的序列、亚型及基因定位进行研究。方法 采用聚合酶链反应(PCR)，用β-内酰胺酶通用引物、blaTEM扩增获得β-内酰胺酶编码基因的片段，克隆入pUCm—T载体，以双脱氧链终止法测定核苷酸序列，再通过GenBank进行同源性检测确定其亚型和基因所在位置。结果 肺炎克雷伯菌99—799株所含β-内酰胺酶基因型为TEM型，与TEM-1编码基因序列完全相同，且同时位于细菌150 bp和80bp的大、小质粒上。结论 重庆地区临床分离肺炎克雷伯菌有TEM—1-β内酰胺酶基因亚型的存在.     

多重耐药肺炎克雷伯菌Kp1503的ESBLs基因型分析

目的:了解广东汕头临床分离的产ESBLs肺炎克雷伯菌Kp1503株的耐药表型与基因亚型。方法:以琼脂稀释法测定Kp1503株对12种抗菌药物的MIC;设计TEM、SHV和CTX-M型全编码基因特异性引物,用聚合酶链反应(PCR)扩增获得其β-内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型。结果:Kp1503株为多重耐药株,除对亚胺培南和环丙沙星敏感外,对庆大霉素、阿米卡星、四环素、头孢唑林、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟、氨曲南、哌拉西林/三唑巴坦均耐药;其所携带的三种β-内酰胺酶基因序列分别与GenBank中TEM-1、SHV-12及CTX-M-3型编码基因序列的同源性为100%。结论:汕头地区存在同时产SHV-12、CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶及TEM-1型广谱β-内酰胺酶的多重耐药肺炎克雷伯菌。     

产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药型与基因分型

目的 分析肺炎克雷伯菌的耐药现状,探讨其耐药型与基因组型间的关系,检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)各基因型的流行状况.方法 用纸片扩散法检测117株肺炎克雷伯菌对20种抗生素的耐药情况.用PFGE实验探讨耐药表型与基因组型间的关系.用PCR扩增所有产酶株的TEM、SHV及CTX-M基因片段,分析ESBL各基因型的流行状况.结果 肺炎克雷伯菌耐药情况严重,产ESBL肺炎克雷伯菌检出率达到43.59%.PFGE将117株肺炎克雷伯菌分为3群,群间相似度为37.30%,没有发现特异的ESBL条带.PCR扩增检出SHV型15株,占29.40%;TEM型39株,占76.50%;CTX-M型9株,占17.60%.同时携带SHV、CTX-M基因者有19株,占37.30%.结论 该院肺炎克雷伯菌的耐药现象严重、多重耐药现象突出,ESBL检出率高.该次实验未发现由同一菌株所致的医院感染,肺炎克雷伯菌的耐药表型与PFGE基因分型结果 可以表现一致,也可以表现为不同.产ESBL肺炎克雷伯菌的基因型以TEM和SHV为主,同一菌株携带多个基因的现象较为普遍.     

浙江省嘉兴地区多重耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶编码基因分子生物学研究

目的：确定浙江省嘉兴地区临床分离的多重耐药肺炎克雷伯菌E3株所产β－内酰胺酶编码基因序列及亚型。方法：肺炎克雷伯菌E3株经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为ESBLs细菌，PCR扩增其β－内酰胺酶编码基因片段，克隆后双脱氧链终止法测定苷酸序列并确定亚型，重组细菌表型鉴定。结果：E3株同时产SHV和TEM型两种β－内酰胺酶，其中SHV基因片段含812个核苷酸，编码266个氨基酸，为SHV－11型β－内酰胺酶；TEM基因片段含973个核苷酸，编码288个氨基酸，为TEM－1型β－内酰胺酶。含TEM－1和SHV－11编码基因的重组细菌经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为阴性。结论：E3株肺炎克雷伯菌同时产生SHV－11和TEM－1两种广谱β－内酰胺酶，广谱β－内酰胺酶的种类和数量可影响ESBLs的表型检测结果。     

产ESBLs大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的基因分型研究

目的了解广东省中医院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的流行、耐药基因型分布。方法对广东省中医院2001年7月至2003年8月间临床分离保存的208株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,用Vitek-32细菌鉴定仪进行细菌鉴定,用双纸片法进行ESBLs初筛,用NCCLS 1999年推荐的确证方法进行ESBLs确证。并采用PCR扩增和PCR产物测序方法对产ESBLs菌株进行基因分型。结果分离到产ESBLs细菌76株,总检出率为36．5％,其中肺炎克雷伯菌阳性率为41．9％（39／93）、大肠埃希菌阳性率为32．2％（37／115）,PCR初步分型结果表明：TEM型42株（55．3％）,均为TEM-1型、CTX-M型27株（35．5％）,SHV型33株（43．4％）。结论CTX-M型和SHV型是我院产ESBL大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中流行的基因型。     

血液来源肺炎克雷伯菌耐药表型及基因型分析

目的 了解临床血液来源的肺炎克雷伯菌的耐药表型和基因型分布情况.方法 收集2014年10月至2015年10月四川省人民医院检验科临床分离的37株肺炎克雷伯菌进行耐药分析,采用双纸片扩散法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),PCR扩增CTX-M、TEM和SHV耐药基因,PCR产物测序确定其基因型.结果 37株肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株的阳性率为27.03％(10/37).与不产ESBLs的菌株相比,产ESBLs的肺炎克雷伯菌对氨苄西林/舒巴坦、氨曲南、头孢曲松、头孢他啶、环丙沙星、庆大霉素、左氧氟沙星、头孢哌酮/他唑巴坦、妥布霉素和复方新诺明的敏感性明显下降,但对亚胺培南、厄他培南、阿米卡星、头孢吡肟和哌拉西林/他唑巴坦保持较好的敏感性;大部分产ESBLs的菌株表现出对青霉素类、头孢类和氨基糖甙类等药物的多重耐药.产ESBLs的菌株CTX-M基因阳性率为60.00％(6/10),3株为CTX-M-14型;TEM基因阳性率为80.00％(8/10),均为TEM-1型;SHV基因阳性率为90.00％(9/10),5株为SHV-11型.结论 临床血液来源的肺炎克雷伯菌产ESBLs的阳性率较高,耐药性明显高于非产ESBLs菌株,其基因型以TEM-1型和SHV-11型为主.     

新生儿科病房产ESBLs分离株耐药基因初步分型

目的 :了解新生儿科病房产超广谱β-内酰胺酶 (ESBL s)分离株基因型分布情况。方法 :用美国国家临床实验室标准化委员会 (NCCL S)推荐的表型确证方法 ,对我院新生儿科病房分离的非重复的 34株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行 ESBL s确证。分别用 TEM、SHV和 CTX- M通用引物对 ESBL s阳性株进行聚合酶链反应 (PCR) ,PCR扩增产物经 1%琼脂糖凝胶电泳 ,溴化乙锭染色 ,用凝胶成像系统观察结果进行初步分型。结果 :34株细菌中 ,检出ESBL s阳性菌 17株 ,检出率为 5 0 %。 17株 ESBL s菌中 TEM基因阳性 2株 ,SHV基因阳性 15株 ,CTX- M基因阳性9株 ;其中 ,8株单 SHV基因阳性 ,2株 TEM、CTX- M基因同时阳性 ,7株 SHV、CTX- M基因同时阳性。结论 :SHV型ESBL s是新生儿科病房最常见的 ESBL s,其中产 ESBL s肺炎克雷伯菌 SHV基因的携带率为 10 0 % ,CTX- M型也较为常见。     

肺炎克雷伯杆菌40株超广谱β内酰胺酶基因的分型

目的：分析肺炎克雷伯杆菌临床分离株中超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的主要基因型。方法：用表型确证试验检出产ESBL。的肺炎克雷伯杆菌40株，分别用TEM、SHV和CTX-M通用引物对这些耐药株进行聚合酶链反应(PCR)扩增。结果：PCR扩增结果显示，TEM、SHV和CTX-M的阳性率分别为30％、60％和45％。结论：SHV和CTX．M型是南京医科大学第一附属医院产ESBLs菌株的主要基因型。     

Studies on the nucleotides sequences of extended-spectrum-beta-lactamases encoding genes of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae and the related molecular evolution]

OBJECTIVE: To identify TEM-type and SHV-type ESBLs encoding genes of ESBLs-producing Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli isolated from clinical species in West China Hospital of Sichuan University and study the molecular evolution of the ESBLs. METHODS: The nucleotide sequences of TEM-type and SHV-type ESBLs encoding genes amplified by PCR were detected by automatic sequencer, and the subtypes of the encoding genes were determined by Blastx searching. The molecular evolution of ESBLs was studied by means of bioinformatics. RESULTS: In this study, the subtypes of ESBLs were SHV-2 and TEM-19, the distribution of silent mutation in ten bla(SHV-2) was identical, and that of two bla(TEM-19) was the same; the distribution of silent mutation of bla(TEM-19) was the same as that of bla(TEM-1). The distribution of silent mutation of bla(SHV-2) observed here was different from that observed in other countries. CONCLUSION: SHV-2 was the main ESBLs in this study. The bla(SHV-2) and bla(TEM-19) in this study originated from the same transferable variants respectively. The prevalent SHV-2 in different countries resulted from convergent evolution. It seems possible that the bla(TEM-19) identified by this study might originate directly from the transferable bla(TEM-1) identified in this study.     

儿童感染肺炎克雷伯菌产AmpC酶和ESBLs的检测及耐药性分析

目的了解广州地区儿童感染肺炎克雷伯菌产质粒介导的AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及其耐药特征,为临床合理用药提供参考依据。方法采用标准纸片扩散法检测ESBLs,头孢西丁三维试验法检测AmpC酶,K-B纸片法测定肺炎克雷伯菌对抗菌药物的敏感性。结果共检出248株肺炎克雷伯菌,其中46株产AmpC酶,阳性率为18.5%;157株产ESBLs,阳性率为63.3%;同时产AmpC酶和ESBLs菌株阳性率为18.1%。产AmpC酶肺炎克雷伯菌对第三代头孢菌素高度耐药,耐药率达80%～100%;对头孢吡肟、含酶抑制剂复合药的耐药率也在56.5%～93.5%之间;但对环丙沙星、阿米卡星的耐药率则在30%以下,对亚胺培南全部敏感。产ESBLs菌株对头孢菌素、含酶抑制剂复合药的耐药率也较高,在50%～91.7%之间,但对阿米卡星、环丙沙星、亚胺培南仍高度敏感。ESBLs阴性肺炎克雷伯菌对所测抗生素的敏感率均在81.2%以上。产酶菌株耐药率明显比非产酶菌株高。结论广州地区儿童感染肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶的状况已十分突出;产酶菌株对常用抗生素的耐药率较高;碳青霉烯类抗生素可作为治疗产AmpC酶和/或E...     

长春地区部分医院革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的基因类型及分布

目的:了解长春地区部分医院超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs)基因在革兰阴性杆菌中的分布及类型,为合理使用抗生素提供依据。方法：对165株临床分离革兰阴性杆菌采用 PCR方法分别扩增SHV、TEM和CTX基因片段。PCR产物经测序后,登录GenBank查询并比较基因类型。结果：在165株革兰阴性杆菌中检出耐药基因及多重耐药基因68株, 其中 TEM型检出率最高（12.12%）,其余依次为CTX-M-1型（4.24%）,SHV型（3.64%）和CTX-M-9型（3.03%）;同时检出 SHV+TEM型、TEM+CTX-M-1型、TEM+CTX-M-9型、TEM+CTX-M-1+CTX-M-9型和 SHV+TEM+CTX -M-1+CTX-M-9型等多组多重耐药基因。随机选择扩增阳性的 PCR产物进行测序,得到 SHV-11亚型、TEM-1亚型、CTX-M-3亚型、CTX-M-15亚型、CTX-M-14和CTX-M-18亚型。结论:长春地区部分医院革兰阴性杆菌ESBLs的基因类型主要为TEM-1亚型、SHV-11亚型、CTX-M-14亚型和CTX-M-18亚型。     

某院肺炎克雷伯菌产质粒AmpC酶基因型及耐药性研究

目的调查该院临床分离肺炎克雷伯菌产质粒AmpC酶表型和基因型携带情况及其对常用抗生素的耐药性,为临床合理用药提供参考。方法采用Vitek2-compact全自动细菌鉴定药敏系统对临床分离菌株进行鉴定及药物敏感试验,采用头孢西丁三维试验检测AmpC酶表型,采用多重PCR方法检测AmpC基因并经DNA测序确定其基因型别。结果 2010年7月至2011年6月共分离到116株肺炎克雷伯菌,产AmpC酶肺炎克雷伯菌占18.1%(21/116)。产AmpC酶肺炎克雷伯菌多重耐药情况严重,对氨基糖甙类、喹诺酮类及大多数头孢菌素类抗菌药物的耐药率在57.1%～100%,对加酶抑制剂复合药氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、头孢哌酮/舒巴坦及哌拉西林/他唑巴坦的耐药率分别为90.5%、85.7%、42.9%、38.1%,所有菌株对碳青霉烯类抗生素亚安培南和美罗培南仍全部敏感。产AmpC酶菌株对头孢西丁、第3代头孢菌素及氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸等抗生素的耐药率明显高于不产酶株(P<0.05)。21株产酶菌株均携带DHA-1型AmpC酶基因。结论该院肺炎克雷伯菌产AmpC酶株检出率较高,产酶菌株多重耐药情况严重。临床应根据药敏结果合理选用抗菌药物,以减少耐药菌株的产生。     

产超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌基因型研究

目的：了解泸州地区临床分离产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌的ESBLs基因型的流行特征。方法：用聚合酶链反应法（PCR）对ESBLs菌株进行扩增,产物行琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下观察结果,明确ESBLs基因型。结果：97株产ESBLs菌株中基因分布数据为TEM基因型15株（15.5%）,SHV基因型17株（17.5%）,非TEM、非SHV基因型占67.0%。结论：本地区产ESBLs肺炎克雷伯菌基因型部分为TEM型和SHV型,较大部分为其他型ESBLs。     

肺炎克雷伯杆菌β-内酰胺酶的分子特性

目的 探讨头孢哌酮（MIC≥8mg/L）加舒巴坦后头孢哌酮的最低抑菌浓度（MIC）降低2倍以上的肺炎克雷伯杆菌β－内酰胺酶分子特性。方法 用PCR扩增和DNA测序方法,测定分子量及等电点以及酶动力。结果 4株为克雷伯杆菌含有TEM型基因,2株肺炎克雷伯杆菌TEM型酶的氨基酸序列与TEM－1相比在117位及118位发生了氨基酸变异。4株肺炎克雷伯杆菌都产生2种以上的酶,等电点从5.4-9.3,相对分子量从23000－34000。酶动力学研究表明,肺炎克雷伯杆菌中99592及99607产生的酶能够水解头孢他啶、头孢噻肟及头孢曲松,并且99592的酶活性大于99607的酶活性。结论 肺炎克雷伯杆菌可能产生新的抑制剂敏感的TEM型超广谱酶。     

Distribution of TEM and SHV beta-lactamase genes among Klebsiella pneumoniae strains isolated from patients in Tehran.

BACKGROUND: There are numerous types of extended spectrum beta-lactamases (ESBLs), of which TEM and SHV are predominant among Klebsiella pneumoniae strains. Nosocomial infections with strains of K. pneumoniae are common in healthcare centers in Iran. However, no information is available on the prevalence of different phenotypes of ESBL strains in Tehran hospitals. MATERIAL/METHODS: To determine the resistance of K. pneumoniae to beta-lactam antibiotics in Tehran hospitals, 145 isolates were tested using the disk diffusion method. The MICs for ceftazidime were also determined using microbroth dilution assay. Isolates showing MIC >/=4 for ceftazidime were subjected to PCR to target the bla(SHV) and bla(TEM) genes and screened for ESBL production by the phenotypic confirmatory method. RESULTS: All strains were susceptible to imipenem. Resistance to ceftazidime and cefotaxime were 31% and 32%, respectively. Fifty-six isolates showed MIC >/=4 microg/ml for ceftazidime, of which 50 were positive for ESBL in the phenotypic confirmatory test. The prevalence of bla(SHV) and bla(TEM) among these isolates was 69.6% (n=39) and 32.1% (n=18), respectively. Resistance to ciprofloxacin was found among 32% of the ESBL strains. CONCLUSIONS: SHV is the dominant enzyme among the ESBL-producing strains of Klebsiella pneumoniae in Iran. The high rate of co-resistance to ceftazidime and ciprofloxacin is a matter of concern and treatment requires further attention to the results of susceptibility.     

不动杆菌属多重耐药及泛耐药的分子机制研究

目的 调查B内酰胺酶、整合子、外膜蛋白（Omp）及外排泵在多重耐药和泛耐药不动杆菌属中所起的作用。方法 收集1999至2004年北京、广州和福州对碳青霉烯类耐药的非重复的90株菌。脉冲场凝胶电泳（PFGE）和随机引物多态性DNA（RAPD）分型确定这些耐药株的亲缘关系，选取7个不同克隆深入研究其机制。等电聚焦电泳测定酶的等电点；碱裂解法提取质粒；对各种B内酰胺酶TEM、SHV、PER、OXA-、IMP-、VIM-进行聚合酶链反应（PCR）及序列分析；对整合子基因进行PCR及序列分析。结果 2004年北京协和医院发生泛耐药株P克隆的暴发流行，此克隆株对常用广谱抗菌药物均不敏感。7个不同克隆株均产多种B内酰胺酶：TEM-1酶、高产AmpC酶、SHV型酶、OXA-23型碳青霉烯酶（6株）及IMP-8型金属酶（1株），1个克隆株还产PER-1型酶。这7个克隆株对大多数超广谱6内酰胺类（包括碳青霉烯类）、红霉素、氯霉素、利福平均耐药，2个克隆株对头孢哌酮／舒巴坦、阿米卡星敏感，4个克隆株对左氧氟沙星敏感。所有7株对米诺环素、黏菌素敏感。发现5种不同结构的整合子，携带水解氨基糖苷类、利福平、氯霉素及碳青霉烯类（bla1MR-8）的耐药基因。结论 不动杆菌产生OXA-23型碳青霉烯酶或IMP型金属酶、通过基因重组获得各种携带不同基因盒的整合子，共同介导其多重耐药性或泛耐药性。泛耐药株对个别不常用的抗菌药物如黏菌素、米诺环素仍敏感。     

Epidemiological and antibiotic resistant study on extended-spectrum β-lactamase-producing Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae in Zhejiang Province

Objective To investigate the epidemiological status of extended-spectrum β-lactamase (ESBL) producing Escherichia coli (E.coli) and Klebsiella pneumoniae (K.pneumoniae) and the drug resistance profiles of such organisms .Methods A total of 282 clinical isolates of E .coli and 180 of K .pneumoniae were collected from different districts of Zhejiang Province .Inhibitor potentiated broth dilution tests were performed for detecting extended-spectrum β-lactamases .Etests were performed to detect the drug resistance of these strains against nine commonly used antibiotics Results The prevalence of extended-spectrum β-lactamases in E .coli and K .pneumoniae was 34.0% and 38.3%, respectively .The average prevalence of extended-spectrum β-lactamases in E .coli and K .pneumoniae was 35.7% .The resistance prevalence of extended spectrum β-lactamase producing strains to ceftazidime and cefotaxime was 40% and 26% respectively, so were those to cefepime, cefoxitin, piperacillin-tazobactam, cefoperazone-sulbactam, amikacin and ciprofloxacin .All these strains were sensitive to imipenem .Conclusion The results in this study showed that the prevalence of extended-spectrum β-lactamases was high, while extended-spectrum β-lactamase producing strains were resistant to most antimicrobial agents except imipenem .