脑缺血再灌注损伤后GAP-43蛋白的表达和意义

目的 探讨脑缺血再灌注损伤后生长相关蛋白-43（GAP-43）的表达对神经元轴突再生的可塑性变化.方法 成年健康雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、假手术组和缺血1h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、3d、7d、14d组,每组各4只（n=4）.应用线栓法制备大鼠脑中动脉闭塞再灌注模型（MCAO）,采用免疫组织化学方法检测GAP-43的表达并观察神经元轴突再生的变化,并进行计算机图像分析.结果 缺血再灌注2h,海马、皮质区及纹状体区GAP-43呈基础表达,6h、12h、24h、48h表达逐渐增高,7d达高峰,P＜0.05,14d达最低表达,P＜0.05.与假手术组比较有显著性差异,P＜0.05.正常对照组无表达.缺血再灌注48h～7d损伤区域神经元轴突呈出芽征,发出突触纤维.结论 脑缺血再灌注损伤后GAP-43呈非特异性表达,并促进神经元的修复和再生.     

槲皮素对脑缺血再灌后FADD蛋白表达的影响

目的研究大鼠脑缺血/再灌后Fas相关死亡域蛋白（FADD）的表达及槲皮素对其影响。方法用免疫组化法测定缺血2h再灌注不同时相缺血半暗带FADD蛋白的表达。结果缺血半暗带脑皮质内FADD蛋白的表达于再灌注3h明显升高,再灌注12h达高峰（P〈0.01）,至再灌注24h其表达明显下降。槲皮素能显著下调其表达（P〈0.01-0.05）。结论脑缺血/再灌后缺血半暗带FADD蛋白表达明显增加,提示可能在脑缺血/再灌注损伤中发挥重要作用。槲皮素可能通过抑制其表达从而达到脑保护的作用。     

8溴-环磷酸腺苷对脑缺血再灌注大鼠PKA及GAP-43蛋白表达的影响

目的:观察脑室注射8-溴-环磷酸腺苷(8-B-cAMP)对脑缺血再灌注大鼠大脑皮质蛋白激酶A(PKA)及生长相关蛋白43(GAP-43)表达的影响。方法:采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,将45只大鼠分为假手术对照组,缺血组(单纯脑缺血再灌注组)和8-B-cAMP组(脑缺血再灌注并脑室注射8-B-AMP)。用放免法测缺血周边区脑组织cAMP的含量,Westernblot(免疫印迹法)检测蛋白激酶A(PKA)及生长相关蛋白43(GAP-43)的表达。结果:脑缺血组6h、24h cAMP的含量下降,GAP-43及PKA蛋白表达减少;8-B-cAMP治疗组脑组织GAP-43蛋白表达较缺血组增加,且这种变化与cAMP的含量及PKA蛋白表达增加相一致。结论:8-B-AMP能够增加PKA及GAP-43的表达从而促进脑缺血再灌注后的轴突再生。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后FADD mRNA及其蛋白的表达变化

目的观察大鼠脑缺血再灌注后缺血半暗带皮质内Fas死亡结构域相关蛋白（FADD）mRNA及蛋白的表达变化。方法用半定量的逆转录PCR（RT-PCR）法检测缺血2h再灌注不同时间点缺血半暗带皮质内FADD mRNA的表达,Western blot检测FADD蛋白表达的变化。结果缺血半暗带脑皮质内FADD mRNA及其蛋白的表达于缺血灌注后3h明显升高,再灌注后12h达高峰（P＜0．01）,至再灌注后24h明显下降。结论脑缺血再灌注后缺血半暗带皮质内FADD mRNA及蛋白表达均明显增加,提示FADD可能在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后GAP-43及IGF-1在神经系统中的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注损伤后生长相关蛋白-43（GAP-43）和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的表达。方法成年健康雄性Wistar大鼠72只，随机分为GAP-43组36只和IGF-1组36只，每组再分为假手术组和缺血1h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、3d、7d、14d组，每组4只（n=4）。应用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注动物模型，免疫组织化学方法检测GAP-43与IGF-1在神经元中的表达。结果GAP-43组：缺血再灌注2h，皮质区、海马及纹状体区神经元GAP-43呈基础表达，6h后表达逐渐增高，7d达高峰，14d开始降低，较假手术组高（P〈0．05）。IGF-1组：缺血再灌2h IGF-1表达明显增高，24h达高峰，48h恒定表达，14d仍维持高表达，较假手术组高（P〈0．05）。结论GAP-43和IGF-1可能参与促进神经元轴突的再生。     

缝隙连接蛋白-43阻断剂辛醇对小鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的观察小鼠脑缺血再灌注后缝隙连接蛋白-43(Cx43)表达变化及缝隙蛋白阻断剂辛醇对小鼠梗死体积的影响。方法采用线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞模型(MCAO模型),应用免疫印迹(Western blot)方法观察脑缺血再灌注损伤前后Cx43表达变化和辛醇对Cx43表达的影响,并计算各组死亡率及脑梗死体积。结果小鼠脑缺血2h再灌注损伤24h条件下,缺血区Cx43表达在损伤前后无明显变化(P>0.05)。辛醇能显著抑制脑缺血再灌注损伤后Cx43表达,降低死亡率及减少脑梗死体积,具有统计学差异(P<0.05)。结论由Cx43组成的缝隙连接蛋白在脑缺血再灌注损伤过程中具有重要作用,缝隙蛋白-43阻断剂辛醇通过抑制海马及皮质Cx43表达,进而降低死亡率及梗死体积,从而发挥神经保护作用。     

低剂量米诺环素对脑缺血再灌注大鼠RGMa表达的影响

目的探讨静脉用低剂量米诺环素对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能恢复及排斥性导向分子(repulsive guidance molecule A,RGMa)表达的影响。方法成年雄性Sprague-Dawley大鼠54只,随机分为假手术组,缺血再灌注组和米诺环素组。采用大脑中动脉线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型。再灌注第2周,分别采用免疫组织化学及Western blot法检测缺血脑组织内RGMa及生长相关蛋白-43(growth associated pro-tein-43,GAP-43)蛋白的表达。缺血再灌注第2、7、14和28天,采用改良的神经功能缺损评分(modified neu-rological severity score,m NSS)及楼梯实验(staircase test)评估大鼠神经功能。结果同缺血再灌注组相比,低剂量米诺环素使缺血侧大脑皮层RGMa蛋白表达降低(0.53±0.08 vs.1.17±0.15,P0.05),GAP-43蛋白表达明显增高(0.94±0.10 vs.0.57±0.09,P0.05),大鼠m NSS评分显著下降并改善大鼠的前肢运动功能(P0.05)。结论静脉用低剂量米诺环素(3 mg/kg)能促进大鼠缺血再灌注损伤后神经功能的恢复,其机制可能与下调RG-Ma蛋白及上调轴突再生相关蛋白GAP-43的表达有关。     

依达拉奉对脑缺血再灌注后FADD、caspase-8表达的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后Fas相关死亡域蛋白（FADD）、caspase-8蛋白的表达及依达拉奉对其的影响。方法用免疫组化法测定缺血2h后再灌注不同时相缺血半暗带FADD、caspase-8蛋白的表达。结果缺血半暗带皮质内FADD、caspase-8蛋白的表达于缺血再灌注后3h明显上升，再灌注12h达高峰（P〈0．01），至再灌后24h明显下降。依达拉奉能显著下调其表达（P〈0．01，P〈0．05）。结论脑缺血再灌注后缺血半暗带FADD、caspase-8蛋白的表达均明显增加，提示二者可能在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用．依达拉奉可能通过抑制其表达而达到脑保护的作用。     

缬沙坦对肾性高血压大鼠模型脑缺血-再灌注后细胞凋亡的影响

目的通过观察血管紧张素Ⅱ受体阻断药缬沙坦对肾性高血压大鼠模型脑缺血。再灌注后神经功能缺损程度和神经元凋亡的影响．探讨血管紧张素Ⅱ受体阻断药的神经保护机制。方法采用Wistar雄性大鼠建立肾性高血压模型，随机分为缬沙坦大剂量组（12mg／kg）、小剂量组（6mg／kg）和缺血-再灌注组．分别于脑缺血2h-再灌注1h和脑缺血2h-再灌注24h时进行神经功能缺损程度评分，并采用TUNEL法和免疫组织化学方法检测海马组织缺血后细胞凋亡发生情况．以及Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达水平的变化。结果缬沙坦大剂量组和小剂餐组大鼠的神经功能缺损程度评分低于缺血-再灌注组（P=0．047，0．043），Bcl-2阳性细胞数目高于缺血-再灌注组（均P=0．000），Bax阳性细胞数目低于缺血-再灌注组（均P=0．000）．且神经元凋亡数目明显减少（均P=0．000）：缬沙坦大剂量组Bcl-2阳性细胞数目明显高于小剂量组（P=0．000）．Bax阳性细胞数目明显低于小剂量组（P=0．000）。神经元凋亡数目较小剂量组明显减少（P=0．000）。结论血管紧张素Ⅱ受体阻断药缬沙坦具有明显改善肾性高血压大鼠模型局灶性脑缺血后神经功能缺损程度、减少神经元凋亡、上调脑组织Bcl-2蛋白及抑制Bax蛋白表达水平的作用．对脑缺血-再灌注损伤后的脑组织有一定的保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后自噬的初步研究

目的：研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后自噬溶酶体相关蛋白随损伤时间表达的规律,检测自噬体、溶酶体的变化。方法：采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,免疫组织化学法检测损伤周边区（皮质）自噬溶酶体相关蛋白Beclinl、cathepsinB的表达,透射电镜观察脑缺血再灌注损伤后神经细胞内自噬体的形成和溶酶体的激活。结果：免疫组织化学检测显示,脑缺血再灌注损伤后4hBeclinl阳性细胞增加（P〈0．01）,24h达高峰,5d仍有较多阳性细胞（P〈0．01）。脑缺血再灌注损伤后2hcathepsinB阳性细胞增加（P〈0．01）,12h达高峰,5d仍有较多阳性细胞（P〈0．01）。透射电镜显示,脑缺血再灌注损伤后2h即可见到损伤周边区神经细胞内自噬体形成、溶酶体增多,12-24h最为明显,持续到5d。脑缺血再灌注损伤后表现为自噬溶酶体相关蛋白Beclin1、cathepsinB阳性细胞数随损伤时间而变化,以及缺血半暗带内自噬体的形成和溶酶体的激活。结果：大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤能激活自噬溶酶体途径。     

脑缺血再灌注后线粒体氧化应激损伤的动态变化

目的探讨脑缺血再灌注后线粒体氧化应激损伤的动态变化特点。方法利用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,通过线粒体分离技术测定线粒体丙二醛、三磷酸腺苷、线粒体膜电位水平,应用Realtime PCR仪测定线粒体基因(线粒体DNA)拷贝数,分析脑缺血再灌注后不同时间点缺血周围皮质线粒体的氧化应激水平及线粒体失功能的动态变化特点。结果①缺血再灌注后线粒体丙二醛水平呈渐进性增高,6 h为(4.61±0.83)nmol·mg-1 prot,72 h达(6.94±0.96)nmol·mg-1 prot,均较对照组显著升高(P0.05);②缺血再灌注6 h后mtDNA拷贝数开始下降,24 h轻度回升,72 h显著下降水平为对照组的62%(P0.01);③脑缺血再灌注后6 h线粒体三磷酸腺苷水平即显著下降,24 h出现短暂升高,再灌后72 h下降水平为对照组的42%(P0.01);④荧光探针检测显示脑缺血再灌注后线粒体膜电位持续下降,再灌注后72h线粒体膜电位水平显著下降至对照组的43%(P0.01)。结论线粒体损伤随缺血再灌注时间延长而呈渐进性加重,氧化应激损伤是构成其损伤的主要因素。缺血后脑组织线粒体存在短暂的内源性代偿修复机制,但不足以逆转氧化应激对线粒体的持续损伤。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后Cx43蛋白的表达模式

目的：建立大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）缺血再灌注模型,探索再灌注后Cx43蛋白的表达模式。方法75只大鼠随机分为MCAO组（60只）和假手术组（15只）。MCAO组均行MCAO手术,术后根据缺血再灌注时间分为0.5、4、12、24 h 4个亚组,每组15只;假手术组不插入线栓。各组进行改良神经损伤严重程度评分（mNSS）、脑组织TTC染色及神经元尼式染色,Western blot及免疫组织化学方法检测各组脑组织Cx43蛋白的表达并进行统计学分析。结果 MCAO组造模成功率75%。MCAO组大鼠mNSS评分明显高于假手术组（P＜0.05）,脑梗死面积增加,额顶叶皮质区神经元大量损伤。Western blot结果显示：假手术组及MCAO 0.5、4、12、24 h组Cx43表达量分别为0.23±0.12、0.58±0.18、0.78±0.07、0.61±0.05和0.27±0.07, MCAO 0.5、4、12 h组与假手术组差异均有统计学意义（P＜0.05）,而MCAO 24 h组与假手术组差异无统计学意义（P＞0.05）。免疫组化结果显示：MCAO组侧脑室下区Cx43的表达在0.5 h开始升高,4 h达高峰,12 h逐渐下降,直至24 h恢复基线水平;与Western blot结果一致。结论 Cx43蛋白在脑缺血性再灌注损伤发生、发展中起重要作用。     

Bone marrow mesenchymal stem cells repair spinal cord ischemia/reperfusion injury by promoting axonal growth and anti-autophagy

Bone marrow mesenchymal stem cells can differentiate into neurons and astrocytes after trans- plantation in the spinal cord of rats with ischemia/reperfusion injury. Although bone marrow mesenchymal stem cells are known to protect against spinal cord ischemia/reperfusion injury through anti-apoptotic effects, the precise mechanisms remain unclear. In the present study, bone marrow mesenchymal stem cells were cultured and proliferated, then transplanted into rats with ischemia/reperfusion injury via retro-orbital injection. Immunohistochemistry and immunofluorescence with subsequent quantification revealed that the expression of the axonal regeneration marker, growth associated protein-43, and the neuronal marker, microtubule-as- sociated protein 2, significantly increased in rats with bone marrow mesenchymal stem cell transplantation compared with those in rats with spinal cord ischemia/reperfusion injury. Fur- thermore, the expression of the autophagy marker, microtubule-associated protein light chain 3B, and Beclin 1, was significantly reduced in rats with the bone marrow mesenchymal stem cell transplantation compared with those in rats with spinal cord ischemia/reperfusion injury. Western blot analysis showed that the expression of growth associated protein-43 and neuro- filament-H increased but light chain 3B and Beclin 1 decreased in rats with the bone marrow mesenchymal stem cell transplantation. Our results therefore suggest that bone marrow mes- enchymal stem cell transplantation promotes neurite growth and regeneration and prevents autophagy. These responses may likely be mechanisms underlying the protective effect of bone marrow mesenchymal stem cells against spinal cord ischemia/reperfusion injury.     

丁苯肽软胶囊对大鼠急性脑缺血再灌注损伤脑组织含水及含钙量的影响

目的 研究丁苯肽软胶囊对大鼠急性脑缺血再灌注损伤脑组织含水量及含钙量的影响.方法 选取健康SD大鼠60只,按照随机数字表随机分为6组,采用4血管法造脑缺血再灌注损伤模型,给药组分别给予不同剂量的丁苯肽软胶囊和复方丹参注射液,观察丁苯肽软胶囊对大鼠急性脑缺血再灌注损伤脑组织含水量及含钙量的影响.结果 丁苯肽软胶囊高剂量组可降低大鼠急性脑缺血再灌注损伤脑组织含水量（75.60%）及含钙量（114.53 pg/g）;中剂量组降低大鼠急性脑缺血再灌注损伤脑组织含水量（80.03%）,降低大鼠急性脑缺血再灌注损伤脑组织含钙量（132.33 pg/g）;低剂量组对大鼠急性脑缺血再灌注损伤脑组织含水量（73.93）及含钙量（106.35 pg/g）有降低趋势,但差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 丁苯肽软胶囊能降低大鼠急性脑缺血再灌注损伤脑组织含水量及含钙量,具有脑保护作用.     

KATP开放剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的观察ATP敏感性钾通道（KATP）开放剂尼可地尔（nicorandil）对大鼠脑缺血／再灌注（I／R）损伤的保护作用及其机制。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分为4组：A组（假手术组）、B组（脑缺血再灌注组）、C组（脑缺血再灌注＋尼可地尔组）及D组（脑缺血再灌注＋尼可地尔＋5-HD组），采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，各组于脑缺血2h后进行再灌注，再灌注22h后观察各组大鼠神经功能评分、脑梗死体积、线粒体标志酶活性和脂质过氧化降解产物丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量。结果（1）B、C、D组再灌注22h后神经功能评分显著低于A组，脑梗死体积、脂质过氧化物MDA含量均显著高于A组，线粒体标志酶活性SDH、CO表达显著低于A组（P〈0.01）；（2）与B、D组比较，C组神经功能评分明显升高，脑梗死体积、MDA含量明显减少，SDH、CO活性明显增高（P〈0.01）；（3）B组和D组各指标之间比较差异均无显著性（P〉0.05）。结论尼可地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用，其机制可能与开放mitoKATP通道、维护线粒体功能、减少氧自由基产生有关。     

大鼠脑缺血再灌后凝血酶与PAR-1的表达及意义

目的探讨大鼠脑缺血再灌后凝血酶（thrombin）及蛋白酶活化受体-1（PAR-1）的表达变化及意义。方法栓线法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,用Western Blot方法检测对照组及脑缺血2h再灌注不同时程组（12、24h,3、7d）凝血酶和PAR1蛋白表达水平。结果对照组可以检测到少量凝血酶（thrombin）和PAR-1的表达,两种蛋白于再灌注12h显著上升。3d达高峰（P〈0．01）,7d下降;缺血再灌注后凝血酶与PAR-1的表达呈高度正相关（r=0．934,P〈0．01）。结论凝血酶和PAR-1蛋白的表达增加可能与脑缺血冉灌注损伤的发病机制有关;凝血酶可能通过激活PAR-1参与了再灌注损伤的病理生理过程。     

大鼠脑缺血再灌注后MMP-9的表达及人工合成E-选择素的干预作用

目的：研究肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）参与大鼠脑缺血再灌注损伤的机制及人工合成E-选择素保护作用的机制。方法：健康SD大鼠,随机分为手术组、假手术组和治疗组。手术组建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型;治疗组术前从股静脉注射人工合成E-选择素;假手术组仅将线栓插到颈外动脉、颈内动脉分叉处,其余步骤同手术组。免疫组化检测脑组织中TNF-α和MMP-9的表达,RT-PCR检测MMP-9mRNA的表达。结果：手术组TNF-α、MMP-9和MMP-9mRNA表达与假手术组比较均有明显升高（P〈0．05）;治疗组TNF-α、MMP-9和MMP-9mRNA表达水平比手术组明显下降（P〈0．05）。相关分析表明,MMP-9mRNA分别与TNF-α和MMP-9的表达呈正相关。结论：大鼠脑缺血再灌注后TNF-α能够在转录水平诱导MMP-9的表达。人工合成E-选择素降低大鼠脑缺血再灌注后缺血脑组织MMP-9表达的机制可能是抑制TNF-α对MMP-9mRNA合成的诱导,从而降低了MMP-9的表达。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注中磷酸化c-Jun氨基末端激酶和蛋白丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1表达变化的研究

目的：观察大鼠局灶性脑缺血再灌注模型磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）和蛋白丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1（MKP-1）的变化,探索p-JNK和MKP-1在脑缺血再灌注损伤中的作用。方法：雄性Wistar大鼠,随机分成假手术组,缺血2h再灌注4h、24h、48h和72h组。应用“线栓法”实现大鼠右侧大脑中动脉闭塞,2h后拔出线栓进行再灌注,并在相应时间点处死大鼠。利用免疫组化法观察p-JNK和MKP-1蛋白表达水平的变化。结果：与假手术组相比,缺血再灌注组大鼠梗死灶周围区皮质p-JNK和MKP-1蛋白表达水平明显升高（P〈0．05）,开始于再灌注后4,48h达到高峰,72h开始下降。结论：P-JNK和MKP-1相互作用,参与了脑缺血再灌注损伤的形成。