糖尿病对血-视网膜屏障超微结构影响的研究进展

糖尿病视网膜病变（diabeticretinopathy,DR）是全世界最主要的致盲性眼病,也是最严重和最常见的微血管病变之一。糖尿病可造成血一视网膜屏障的损害引起血管源性水肿和神经组织损伤,造成视力下降。内层血-视网膜屏障主要是由视网膜毛细血管内皮细胞的紧密连接构成,此屏障阻碍血液的渗透及内源性物质和外源性物质在视网膜中的自由扩散,使视网膜保持恒定的环境,有效的供应营养物质。糖尿病患者的视网膜中由于细胞因子、生长因子、晚期糖基化终产物、炎症、高血糖症和周细胞丢失的增加,导致视网膜血管内皮细胞通透性增加。本文就糖尿病所引起的血-视网膜屏障超微结构改变进行综述。     

石斛多糖对糖尿病大鼠血-视网膜屏障的保护作用及其机制

背景 糖尿病视网膜病变(DR)的发病机制涉及多条通路,近年来炎症因子相关的通路学说在DR发病中的作用越来越受到人们的关注.研究表明,高糖环境下视网膜内肿瘤坏死因子-α(TN F-α)等促炎因子含量增加,从而加速视网膜中紧密连接蛋白的异常,导致血-视网膜屏障(BRB)破坏.研究发现石斛多糖可抑制TNF-α的高表达,但其在DR早期对TNF-α表达的影响尚不清楚. 目的 研究石斛多糖对糖尿病大鼠TNF-α诱导的BRB通透性异常及视网膜内紧密连接蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)、连接蛋白-5(claudin-5)表达的影响.方法 将50只清洁级成年SD大鼠分为正常对照组、糖尿病模型组及低、中、高剂量石斛多糖组,每组10只大鼠,糖尿病模型组和低、中、高剂量石斛多糖组大鼠均采用链脲佐菌素腹腔内注射法诱导糖尿病模型.低、中、高剂量石斛多糖组于建模成功后6周按照分组分别用100、200及300 mg/(kg·d)石斛多糖灌胃,正常对照组和糖尿病模型组大鼠用生理盐水灌胃.干预后8周各组大鼠心脏灌注伊文思蓝并获取双侧眼球,分别进行相关指标检测,通过测定大鼠视网膜中伊文思蓝质量浓度评估大鼠视网膜渗漏量;采用Western blot法检测大鼠视网膜内ZO-1、occludin、claudin-5蛋白的相对表达量,采用ELISA法检测大鼠视网膜中及血清中TNF-α的质量浓度.结果 正常对照组、糖尿病模型组及低、中、高石斛多糖组大鼠视网膜伊文思蓝渗漏量分别为(12.68±1.30)、(30.45±2.60)、(22.12±1.15)、(17.99±1.00)和(21.49±1.00) μg/μl,糖尿病模型组大鼠视网膜伊文思蓝渗漏量明显高于正常对照组,低、中、高石斛多糖组视网膜伊文思蓝渗漏量明显低于糖尿病模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.01).Western blot检测显示,糖尿病模型组大鼠视网膜中TNF-α蛋白相对表达量为1.12±0.10,明显高于正常对照组的0.27±0.03,低、中、高石斛多糖组视网膜中TNF-α蛋白表达量明显低于糖尿病模型组,ZO-1、occludin和claudin-5蛋白表达量明显高于糖尿病模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);ELISA法检测显示,糖尿病模型组大鼠视网膜和血清中TNF-α质量浓度明显高于正常对照组,低、中、高石斛多糖组大鼠视网膜和血清中TNF-α质量浓度明显低于糖尿病模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).不同剂量石斛多糖组各指标的比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 石斛多糖可能通过下调糖尿病大鼠视网膜中TNF-α的表达和上调紧密连接蛋白的表达而改善糖尿病大鼠BRB通透性的异常.     

两种糖尿病大鼠模型血-视网膜屏障难EB通透性的比较

目的探讨2种糖尿病大鼠模型血-视网膜屏障对伊凡思蓝（Evans-Blue，EB）通透性的改变。方法对照组及1周、4周和16周时Sprague-Dawley（SD）和Brown-Norway（BN）糖尿病大鼠，EB45mg·kg^-1颈静脉注入，分别检测视网膜中EB含量。结果对照组及1周、4周和16周时SD和BN糖尿病大鼠视网膜标准化EB含量分别为（12．24±3．11）ng·mg^-1、（21．68±4．41）ng·mg^-1、（21．78±3．17）ng·mg^-1、（23．56±4．05）ng·mg^-1和（13．22±3．59）ng·mg^-1、（23．41±4．47）ng·mg^-1、（26．40±5．00）ng·mg^-1、（31．01±4．46）ng·mg^-1，糖尿病大鼠视网膜标准化EB含量明显高于对照组，其差异均有显著性（P〈0．05）。2种不同种系大鼠相比，BN糖尿病大鼠1周、4周和16周时视网膜标准化EB含量均显著高于SD大鼠（P〈0．05），而对照组差异无显著性（P〉0．05）。结论通过检测视网膜内EB含量，可以比较精确的发现早期糖尿病大鼠视网膜病变中血-视网膜通透性的改变。不同大鼠种系的差异性决定了其对STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜通透性改变的不同。     

糖尿病血-视网膜屏障破坏的机制研究进展

血-视网膜屏障破坏所致的血管渗漏是糖尿病视网膜病变视力下降的主要原因,血管内皮细胞以及周围基质成分所构成的视网膜内屏障是受累的主要部位,血管内成分可以跨过受损的细胞间连接间隙,或通过细胞的吞饮囊泡的形态移动到组织间隙,这两种方式都在糖尿病视网膜病变中存在.内皮细胞间结构的破坏,吞饮方式的增加与高血糖异常代谢所致的氧化应激、炎症反应,以及周围其他细胞如周细胞、胶质细胞的凋亡,异常活化,以及由各种细胞所分泌的细胞因子如血管内皮生长因子(VEFG)和基质金属蛋白酶(MMP)等有密切的关系.     

五苓散对糖尿病视网膜病变大鼠血-视网膜屏障的保护作用

目的：探讨五苓散对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠血-视网膜屏障的保护作用及其机制。

方法：SD雄性大鼠50只随机分为空白组、模型组、高剂量组、低剂量组、阳性对照组,每组10只,采用高脂高糖饮食联合腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。高剂量组和低剂量组大鼠采用五苓散水煎液灌胃,模型组和空白组大鼠采用等量生理盐水灌胃,阳性对照组大鼠右眼球内注射康柏西普。给药12wk后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清C反应蛋白(CRP)和可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)表达水平,HE染色观察视网膜组织结构,伊文思蓝(EB)渗漏试验观察大鼠血-视网膜屏障通透性,免疫组织化学法检测血管内皮生长因子(VEGF)在视网膜中的表达。

结果：模型组大鼠空腹血糖水平和视网膜组织EB渗透量、CRP和sICAM-1表达均较空白组明显升高,高剂量组大鼠视网膜组织EB渗透量、CRP和sICAM-1表达均低于低剂量组和阳性对照组(均P<0.05)。模型组大鼠视网膜神经节细胞层结构紊乱,视网膜水肿,VEGF表达明显升高; 与低剂量组和阳性对照组比较,高剂量组大鼠视网膜组织神经节细胞排列较清晰,水肿减轻。

结论：五苓散能有效降低糖尿病大鼠血清炎症因子水平,降低视网膜组织中VEGF的表达,减轻水肿,保护血-视网膜屏障。     

两种糖尿病大鼠模型血-视网膜屏障对EB通透性的比较

目的 探讨2种糖尿病大鼠模型血-视网膜屏障对伊凡思蓝(Evans-Blue,EB)通透性的改变.方法 对照组及1周、4周和16周时Sprague-Dawley(SD)和Brown-Norway(BN)糖尿病大鼠,EB 45 mg·lg-1颈静脉注入,分别检测视网膜中EB含量.结果 对照组及1周、4周和16周时SD和BN糖尿病大鼠视网膜标准化EB含量分别为(12.24±3.11)ng·mg-1、(21.68±4.41)ng·mg-1、(21.78±3.17)ng·mg-1、(23.56±4.05)ng·mg1和(13.22±3.59)ng·mg-1、(23.41±4.47)ng·mg1、(26.40±5.00)ng·mg-1、(31.01±4.46)ng·mg-1,糖尿病大鼠视网膜标准化EB含量明显高于对照组,其差异均有显著性(P＜0.05).2种不同种系大鼠相比,BN糖尿病大鼠1周、4周和16周时视网膜标准化EB含量均显著高于SD大鼠(P＜0.05),而对照组差异无显著性(P＞0.05).结论 通过检测视网膜内EB含量,可以比较精确的发现早期糖尿病大鼠视网膜病变中血-视网膜通透性的改变.不同大鼠种系的差异性决定了其对STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜通透性改变的不同.     

局部应用尿激酶对大鼠血-视网膜屏障外向通透性的影响

背景 视网膜血管再通是治疗视网膜血管阻塞性疾病的关键.研究证实,玻璃体腔注射尿激酶可抑制视网膜毛细血管内皮细胞间紧密连接复合体中Occludin蛋白的表达. 目的 用伊文思蓝(EB)玻璃体注射法观察尿激酶眼局部注射后大鼠血-视网膜屏障(BRB)外向通透性的变化. 方法 采用随机数字表法将60只SD大鼠随机分为4个组,各组大鼠均以右眼作为实验眼.尿激酶玻璃体注射组大鼠将尿激酶350 U(商品单位)4μl注入右眼玻璃体腔,同容积的PBS以同样方式注射作为PBS玻璃体注射组,尿激酶球后注射组大鼠将10μl 1000U尿激酶注入右眼球后组织,等容积的PBS以同样方式注射作为PBS球后注射组.上述药物注射后24 h,所有大鼠右眼玻璃体腔注射质量分数0.5％ EB 4μl.EB注射后4h摘取大鼠右侧眼球,完整取出玻璃体并以甲酰胺温浴萃取EB.所得提取液以甲酰胺-分光光度法检测EB的质量浓度,并据此推算大鼠玻璃体腔内EB的质量浓度,对各组间大鼠玻璃体中EB质量浓度进行比较. 结果 尿激酶玻璃体注射组大鼠玻璃体呈淡蓝色反光,眼科手术显微镜下可见视网膜血管;尿激酶球后注射组大鼠玻璃体呈蓝色,眼底血管不易显示,而PBS玻璃体注射组和PBS球后注射组大鼠玻璃体均呈深蓝色反光,眼底无法窥见.尿激酶玻璃体注射组、PBS玻璃体注射组、尿激酶球后注射组和PBS球后注射组大鼠玻璃体的甲酰胺EB溶液吸光度(A)值分别为0.181±0.008、0.450±0.017、0.330±0.009和0.436±0.012;尿激酶玻璃体注射组大鼠玻璃体腔内EB的质量浓度为(0.266±0.014)g/L,明显低于PBS玻璃体注射组、尿激酶球后注射组和PBS球后注射组的(0.667±0.026)、(0.496±0.015)和(0.657±0.017)g/L,4个组间差异有统计学意义(F=100.406,P＜0.01),其中尿激酶玻璃体注射组大鼠玻璃体EB质量浓度均明显低于其他3个组,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 大鼠眼局部应用尿激酶可增加BRB的外向通透性,玻璃体腔内注射EB是检测大鼠BRB外向通透性的可靠方法.     

糖尿病视网膜病变血-视网膜屏障的损伤机制

糖尿病严重影响了视网膜微循环,从而引起一系列组织结构的病理改变.这些改变最终可导致内皮细胞过度增生,血管通透性改变,异常的视网膜血管形成并发视力减退.本文阐述了高血糖对视网膜微血管系统的影响,从细胞功能和分子生物学的角度阐明高血糖所导致的细胞损伤效应.高血糖可通过影响细胞连接功能、诱导细胞凋亡以及改变细胞间的相互作用等方式对视网膜血管细胞造成损伤.这将为人们了解糖尿病视网膜病变发生发展中的分子及细胞缺陷提供新思路.     

基质金属蛋白酶抑制剂GM6001干预外伤性增生性玻璃体视网膜病变的研究

目的 观察外伤性增生性玻璃体视网膜病变(tPVR)和外伤后应用GM6001的大鼠视网膜组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、TIMP-2在病程中的表达变化.评价GM6001干预tPVR的效果.设计 实验研究.研究对象 SD大鼠108只.方法 将大鼠随机分为生理盐水(实验对照)组、tPVR组和外伤后应用GM6001组.分别于外伤后1、3、7、14、21、28天(d)对各组大鼠视网膜组织MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2的表达进行Western印迹法检测.主要指标 大鼠视网膜组织MMP-2、MMP.9及TIMP-1、TIMP-2的表达情况.结果 Western印迹法结果显示大鼠视网膜中的MMP-2在tPVR组外伤后3、7、14、21、28 d表达显著增高;外伤后14、21、28 d,应用GM6001组MMP-2表达明显低于tPVR组.MMP-9在tPVR组各个亚组表达显著增高;外伤后1、3、7、14、21 d,应用GM6001组与tPVR组比较,MMP-9表达明显降低.tPVR组大鼠视网膜中的MMP-2/TIMP-2比值在14、21、28 d增高,在外伤后应用GM6001组明显低于tPVR组.MMP-9/TIWP-1比值在tPVR组各个亚组均增高,在外伤后应用GM6001组均明显低于tPVR组.结论 MMP-2与TIMP-2、MMP-9与TIMP-1失衡参与了tPVR发生发展的病理过程,GM6001可促进其动态平衡重新建立,在干预tPVR的发生发展中起重要作用.     

血-视网膜外屏障发育的研究现状

血-视网膜外屏障(BRB)由视网膜色素上皮(RPE)细胞间的连续网状紧密连接构成,是维持视网膜及视觉生理状态的重要基础.BRB由视神经管的膨出部分视泡发育而来,随着胚胎发育逐渐形成.发育过程中紧密连接复合体的结构及分子组成均发生了改变,且受周围组织的调控.BRB的发育具有种属差异.干细胞来源的RPE细胞有可能成为研究RPE屏障功能的最佳模型.     

玻璃体腔注射环孢菌素A对糖尿病大鼠血视网膜屏障的保护作用及机制

目的 观察和探讨玻璃体腔注射环孢菌素A(CsA)对糖尿病(DM)大鼠血视网膜屏障(BRB)的影响及其作用机制.方法 8～10周龄健康Sprague-Dawley雄性大鼠48只,随机分为正常对照组、DM组、CsA组及二甲基亚砜(DMSO)组,每组12只.对DM、CsA及DMSO组大鼠进行一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液建模,正常对照组大鼠腹腔注射等量的柠檬酸钠缓冲液.注射后72h,采用免疫组织化学染色法检测视网膜内外渗的内源性白蛋白评价BRB的渗透性;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测视网膜细胞间粘附分子(ICAM-1)的蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测视网膜血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 与正常对照组相比,DM组大鼠视网膜外渗的白蛋白增多,视网膜内ICAM-1、VEGF表达明显升高,差异均有统计学意义(F=29.350,29.240,9.658;P＜0.01).与DM组相比,CsA组大鼠视网膜外渗的白蛋白减少,视网膜内ICAM-1、VEGF表达明显下降,差异均有统计学意义(t=3.174,5.000,3.352;P＜0.05);DMSO组大鼠视网膜外渗的白蛋白、视网膜内ICAM-1及VEGF表达均无明显变化,差异无统计学意义(t=0.420,0.561,0.312 ;P＞0.05).结论 玻璃体腔注射CsA对DM大鼠BRB具有保护作用.其机制可能与CsA降低ICAM-1及VEGF的表达有关.     

糖尿病鼠视网膜细胞间黏附分子-1的表达与血视网膜屏障破坏的关系及曲安奈德的治疗作用

目的 探讨糖尿病(DM)鼠视网膜血管细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在血视网膜屏障(BRB)破坏中的作用及玻璃体注射曲安奈德(TA)对BRB破坏的治疗作用。〓 方法 60只Wistar鼠建立DM模型，分为对照组、DM 4个月组和DM 6个月组。每组各分为免疫组织化学组和BRB测定组，BRB测定组再分为未行TA治疗组、TA治疗1周组和2周组。大鼠玻璃体内注射TA 5μl。视网膜铺片免疫组织化学染色观察视网膜ICAM-1的表达及形态学变化，图像分析软件测定内皮细胞平均吸光度(A)［旧称光密度（OD）］，定量ICAM-1表达。测定视网膜伊凡思蓝(EB)含量，评价BRB的变化。 结果 免疫组织化学组:对照组视网膜血管无明显ICAM-1阳性表达，同对照组相比，DM 4个月组阳性表达显著增强(P＜0.001)，已出现毛细血管管径粗细不一等形态学改变；DM 6个月组阳性表达进一步增强(P＜0.001)，形态学改变进一步加重，可出现无细胞性毛细血管。BRB测定组:各对照组间EB含量无统计学差异(P＞0.05)。未行TA治疗组中，两DM组EB含量明显高于对照组(P＜0.001)，且DM 6个月组高于4个月组(P＜0.01)。TA治疗组中，各DM组EB含量均显著降低(P＜0.001)，但组间无统计学差异(P＞0.05)，然而DM 4个月治疗2周组已基本恢复正常(P＞0.05)，余治疗组仍高于对照组(P＜0.05)。内皮细胞 A 值与视网膜EB含量呈直线相关(r=－0.959)。 结论 糖尿病鼠视网膜ICAM-1的表达与BRB破坏呈正相关。玻璃体内注射TA可有效减轻BRB破坏。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 24-27)     

Effect of piroxicam on the blood-retina barrier in experimentally induced diabetes in rats

The effect of piroxicam on the blood-retina barrier was evaluated in rats with experimentally induced diabetes. Diabetes was induced in rats by intraperitoneal injection of streptozocin (STZ). Diabetic rats were divided into two equal groups: those treated with piroxicam, a long-acting platelet inhibitor, and an untreated control group. Vitreous fluorophotometry (VFP) was performed both before and two weeks after induction of diabetes and piroxicam intake. Streptozocin-induced diabetes caused an alteration in the blood-retinal barrier evidenced by an increase in vitreous fluorescein concentration in diabetic rats compared with normal rats. Piroxicam intake did not lead to significant change in vitreous fluorescein concentrations. However, the examination had to be terminated at two weeks because of cataract formation. The piroxicam treated group showed less incidence of lens opacity formation (59.1% compared to 81.8% in the untreated group, p = 0.0006). Piroxicam administration appears to protect the diabetic rat eye against lens opacification.This work was supported in part by U.S. Public Health Service Grants EY02377, EY07541 and EY08137 from the National Eye Institute, National Institutes of Health, Bethesda, MD and by the Juvenile Diabetes Foundation International and Pfizer, Inc.     

枸杞多糖对糖尿病大鼠血糖、血脂及血-视网膜屏障通透性的影响

背景糖尿病视网膜病变（DR）的特征是毛细血管闭锁、微循环障碍和局部缺血性视网膜新生血管形成,其确切的发病机制尚不十分清楚。目的观察枸杞多糖（LBP）对糖尿病（DM）大鼠血糖、血脂、血一视网膜屏障通透性的影响,探讨LBP对DR的保护作用及机制。方法SD大鼠54只,按随机数字表法随机分为3组,每组18只。其中36只大鼠尾静脉注射45mg／kg链脲佐菌素（STZ）建立DM模型,72h后血糖〉16．7mol／L、尿糖阳性者为造模成功。成模后第2天LBP治疗组给予200mg／（kg·d）LBP灌胃,DM组给予等量生理盐水灌胃,其他18只正常鼠为正常对照组。各组大鼠造模后4、8、12周抽取心脏血检测血糖、甘油三酯和总胆固醇水平,获取视网膜组织,用伊文思蓝渗漏实验检测视网膜血管的渗透性。结果各时间点DM组和LBP治疗组大鼠的血糖水平均高于正常对照组。4、8、12周时LBP治疗组大鼠的血糖水平明显较同时间点DM组明显下降,下降幅度分别为57％、40％、36％,差异均有统计学意义（P〈0．01）。DM组大鼠各时间点甘油三酯浓度明显高于正常对照组,差异均有统计学意义（P〈0．01）,LBP治疗组在4周、8周时甘油三酯的浓度与正常对照组比较差异均无统计学意义,而12周时高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。DM组大鼠在8周、12周时血液中的总胆固醇浓度明显高于正常对照组,差异均有统计学意义（P〈0．01）,而LBP治疗组在各时间点与正常对照组比较差异均无统计学意义（P〉O．05）。造模后4、8、12周大鼠视网膜血管渗透性增加,DM组伊文思蓝的渗透量分别为（26．23±2．00）、（29．78±1．78）、（34．08±3．03）μg／g,明显高于正常对照组的（12．34±4．30）、（12．76±2．11）和（12．45±4．40）μg／g,差异均有统计学意义（P〈0．01）,各时间点LBP治疗组伊文思蓝的渗透量明显低于DM组,差异均有统计学意义（P〈0．01）。伊文思蓝的渗透量与血糖、甘油三酯的浓度变化均呈高度正相关（r=0．896、0．859,P=0．000）,与总胆固醇的浓度变化呈显著正相关（r=0．770,P=0．000）。结论LBP可降低DM大鼠血糖及血脂水平,抑制DM大鼠血一视网膜屏障通透性的增加。     

FFA及OCT对STZ诱导的早期糖尿病大鼠视网膜的活体观察

背景 链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病SD大鼠是进行糖尿病视网膜病变（DR）发病机制研究常用的动物模型,以往主要用离体眼球进行观察,荧光素眼底血管造影（FFA）和光学相干断层扫描（OCT）技术可活体观察眼底,但目前FFA和OCT联合用于DR模型的观察尚未报道. 目的 将FFA和OCT联合用于STZ诱导的糖尿病SD大鼠的眼底检查,动态观察糖尿病模型早期阶段视网膜血管的渗漏及视网膜厚度的变化情况.方法 将60只清洁级SD大鼠按随机数字表法随机分为2个组,糖尿病组大鼠一次性腹腔内注射溶于柠檬酸钠溶液的STZ诱导糖尿病大鼠模型,对照组大鼠以同样的方式注射柠檬酸钠溶液.分别于造模前及造模成功后第4、8、12周在大鼠全身麻醉状态下采用FFA联合Spectralis HRA＋OCT（SD-OCT）动态观察和比较各组大鼠左眼视网膜血管的渗漏情况及视网膜厚度的变化情况.FFA检查时大鼠腹腔内注射质量分数20％荧光素钠（0.012 ml/g）并快速观察视盘及上方、下方、鼻侧、颞侧、鼻上、鼻下、颞上、颞下视网膜共9个方位的视网膜血管情况,OCT检查时测量距视盘上方、下方、鼻侧、颞侧2个视盘直径（DD）处的视网膜厚度.采用组织病理学检查测量视网膜厚度并与OCT测量结果进行比较.结果 FFA检查结果显示,大鼠的视盘位于视网膜中央,血管走行呈放射状.荧光素钠注射后60 s背景荧光消失,需重复注射.至造模成功后12周,各组大鼠视网膜均未发现荧光素渗漏.OCT结果显示,正常SD大鼠的OCT图像与人类相似,共分为十层,与组织病理学检测的结果相吻合.距视盘2 DD处上方、下方、鼻侧、颞侧4个方向视网膜厚度及内外界膜间的厚度比较差异均无统计学意义（P＞0.05）.造模后4周、8周,与对照组大鼠比较,糖尿病组大鼠视网膜厚度无明显增加,差异均无统计学意义（P＞0.05）;造模后12周糖尿病组大鼠的视网膜厚度和内外界膜间厚度与对照组大鼠比较均明显增加,差异均有统计学意义（P＜0.05）.OCT测量的视网膜厚度和内外界膜间量化分析结果与组织病理学结果并不完全一致. 结论 SD-OCT联合FFA有助于活体观察糖尿病大鼠视网膜厚度的动态变化,评估血管渗漏情况,为糖尿病的发病机制研究、防治及病情监测提供依据.     

Effect of morphological abnormalities on blood retinal barrier permeability in diabetic retinopathy

The morphological base for the impaired function of the blood retinal barrier was studied in 50 eyes of 10 insulin dependent and 21 non-insulin dependent patients with various levels of diabetic retinopathy. The permeability of the blood retinal barrier (P_BRB) was determined by vitreous fluorophotometry with correction for autofluorescence, lenstransmission and non-protein bound plasma fluorescein concentration. Morphological abnormalities of diabetic retinopathy assessed by fundus photography and fluorescein angiography were individually scored on a decimal scale and related to the P_BRB by multiple regression analysis. The P_brb was not correlated to morphological abnormalities of non-proliferative retinopathy [(1) microaneurysms, (2) hard exudates, (3) soft exudates, (4) intraretinal hemorrhages, (5) fluorescein leakage, and (6) capillary closure, p > 0.3]. The P_BRB was correlated to morphological abnormalities of (pre)proliferative retinopathy [(1) intraretinal microvascular abnormalities (S_irma) and (2) new vessels (S_neo): p_brb = A – B.S_IRMA – C.S_neo with P_BRB in nm/sec, A = 1.5 ± 0.5, B = 0.9 ± 0.2 and C = 1.7 ± 0.4, R² = 0.65, p < 0.0001]. It can be concluded that the increased blood retinal barrier permeability in diabetic patients is mainly due to (pre)proliferative abnormalities and not to non-proliferative abnormalities.     

玻璃体腔重复注射抗血管内皮生长因子单克隆抗体bevacizumab对糖尿病大鼠视网膜的毒性观察

目的 观察玻璃体腔重复注射抗血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体bevacizumab(商品名Avastin)对糖尿病大鼠视网膜的毒性作用.方法 40只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组(A组)和糖尿病组,分别为10、30只.糖尿病组采用链脲佐菌霉素(STZ)尾静脉注射方法制作糖尿病动物模型.随机选取10只作为糖尿病视网膜病变(DR)组(B组),不作任何处理;其余20只大鼠左眼为实验组(C组),玻璃体腔注射25 mg/ml的bevacizumab 3 μ1,共注射3次,每次间隔10 d;右眼为实验对照组(D组),不给予任何处理.末次注射后20 d,采用闪光视网膜电图(F-ERG)对各组大鼠行视网膜功能检测;溴化乙锭(EB)染色视网膜铺片,荧光显微镜观察各组大鼠视网膜血管变化情况;苏木精-伊红(HE)染色,光学显微镜观察大鼠视网膜形态学变化;免疫组织化学染色法观察大鼠视网膜各层Thy-1及VEGF阳性表达情况.结果 F-ERG检测显示,A、B、C、D 4组暗适应a、b波潜伏期,暗适应b波振幅及振荡电位(Ops)总振幅比较,差异均有统计学意义(F=33.165,36.162,19.955,23.243;P值均=0.000);A、B、C、D4组暗适应a波振幅比较,差异无统计学意义(F=0.097,P=0.961).荧光显微镜观察发现,A组大鼠视网膜血管走行良好,B组大鼠视网膜血管走行纡曲、扩张,C组大鼠视网膜血管走形规则、变细,D组大鼠视网膜可见微血管瘤.光学显微镜观察发现,A组大鼠视网膜层次结构整齐分明,B组大鼠视网膜各层细胞结构排列紊乱,C组大鼠视网膜各层细胞排列整齐,D组大鼠视网膜各层细胞排列不整齐.免疫组织化学染色发现,Thy-1阳性表达主要位于神经节细胞层(GCL),极少数位于内丛状层、内核层.VEGF阳性表达主要定位于GCL,少量位于神经纤维层、内核层及视网膜色素上皮层.结论 玻璃体腔重复注射bevacizumab对糖尿病大鼠视网膜有一定毒性作用.

Abstract：

Objective To observe the retinal toxicity of repeated intravitreal injection with bevacizumab(Avastin)in diabetic rats.Methods Forty male Sprague Dawley(SD)rats were randomly divided into normal group(Group A,10 rats)and diabetes mellitus group(30 rats).The rats in diabetes mellitus group were induced with streptozotocin injection for diabetic retinopathy model.And then randomly divided into diabetic retinopathy(DR)group(Group B,10 rats),the rats were not intervened;the left eyes of the other 20 rats were intravitreal injected with bevaeizumab 3 μ1(25 mg/m1)for 3 times as experimental group(Group C);the right eyes of the 20 rats were not intervened as experimental control group(Group D),20 days after last intravitreal injection,retinal function was measured by Flicker Electroretinogram (F-ERG);retinal vascular pattern was determined by fluorescence microscopy of ethidium bromide(EB)stained retinal flat mounts;retinal morphological changes were determined by light microscope on hematoxylin-eosin (HE) stained sections;Thy-1 and VEGF expression was measured by immunohistochemistry staining.Results F-ERG showed that-the differences of a-and b-waves-the b-wave amplitude and the Ops-wave amplitude in the implicit time between group A,B,C and D were significant (F=33.165,36.162,19.955,23.243;P=0.000);the differences of a-wave amplitude between group A,B,C and D was not significant(F=0.097,P=0v961).Retinal blood vessel pattern was normalin Group A;retinal vascular vessels were tortuous and irregularly expanded in Group B:retinal vascular vessels of Group C were regular and thinner than Group A;microaneurysm were showed in Group D.Light microscope displayed that the layers of the rat retina of Group A were regular,the retinal architectures of Group B were irregular,the retinal layers were regular in Group C,the retinal layers were irregular in Group D.Immunohistochemistry staining discovered that Thy-1 and VEGF were mainly expressed in ganglion cell layer(GCL).Conclusion Repeated intravitreal injection of bevacizumab iS toxic tO retina of diabetes mellitus rats.     

叔丁基对苯二酚对2型糖尿病大鼠视网膜细胞的保护作用及其机制

背景 细胞凋亡是糖尿病视网膜病变(DR)中的重要机制之一,氧化应激、高糖等可启动细胞凋亡通路,从而造成细胞损伤.叔丁基对苯二酚(tBHQ)是一种抗氧化应激药物,但其在DR的发生和发展过程中是否发挥视网膜细胞的保护作用尚不明确. 目的 观察tBHQ对2型糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子(VEGF)及Bcl-2表达的影响,探讨tBHQ通过核因子-E2相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路对2型糖尿病大鼠视网膜可能的保护机制.方法 选取50只清洁级健康雄性SD大鼠.应用随机数字表法随机选取其中10只大鼠为正常对照组,以正常饲料喂养;其余40只大鼠采用高脂高糖饲料喂养4周后空腹12h,然后大鼠腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病模型.造模成功大鼠均衡分组,模型对照组大鼠继续给予高脂高糖饮食,tBHQ干预组大鼠于造模后1周在高脂高糖饲料中添加质量分数1％ tBHQ进行干预,各组大鼠分别于造模后4周和12周收集大鼠心脏全血,检测各组大鼠空腹血糖(FPG),血浆总胆固醇(TC)、总三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;采用放射免疫分析法检测各组大鼠空腹血清胰岛素(FINs)含量.采用免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜中VEGF、bcl-2蛋白的表达分布;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法定量检测各组大鼠视网膜中Bcl-2 mRNA和VEGF mRNA的相对表达量. 结果 35只大鼠成功建立2型糖尿病模型.各组大鼠造模后不同时间点FINs含量总体比较差异均有统计学意义(F分组=22.480,P=0.000;F时间=7.636,P=0.008).各组间大鼠血浆FPG、TC、TG和LDL-C含量总体比较差异均有统计学意义(FPG:F分组=78.531,P=0.000;TC:F分组=28.049,P=0.000;TG:F分组=13.108,P=0.000;LDL-C:F分组=6.804,P＜0.05).免疫组织化学检测显示,Bcl-2和VEGF蛋白主要表达于视网膜各层的血管、视网膜神经节细胞(RGCs)层、内核层和外核层.各组间大鼠视网膜中VEGF和bcl-2蛋白的相对表达量总体比较差异均有统计学意义(VEGF:F分组=11.805,P=0.000;bcl-2:F分组=22.943,P=0.000);tBHQ干预组大鼠造模后12周视网膜中bcl-2蛋白的相对表达量明显高于造模后4周,差异有统计学意义(P＜0.05).各组大鼠造模后不同时间点视网膜中VEGF和Bcl-2 mRNA相对表达量总体比较差异均有统计学意义(VEGF:F分组=79.220,P=0.000;F时间=6.090,P＜0.05;Bcl-2:F分组=105.000,P=0.000;F时间=13.170,P=0.001).其中造模后4周和12周模型对照组和tBHQ干预组大鼠视网膜中VEGF和Bcl-2 mRNA相对表达量明显高于正常对照组,tBHQ干预组大鼠视网膜中Bcl-2 mRNA相对表达量明显高于模型对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);tBHQ干预组大鼠造模后12周视网膜中VEGF和Bcl-2 mRNA相对表达量明显高于造模后4周,差异均统计学意义(均P＜0.05). 结论 tBHQ可通过下调视网膜中VEGF的表达和上调bcl-2的表达对DR发挥抗氧化损伤和抗凋亡作用.此外,tBHQ对糖尿病大鼠可能有降血糖、调节胰岛素、降血脂的作用.     

巴曲酶对糖尿病大鼠血视网膜屏障和视网膜血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究巴曲酶对糖尿病大鼠血视网膜屏障以及视网膜血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。 方法 将60只大鼠用链尿佐菌素腹腔注射制成糖尿病大鼠模型，分成糖尿病组（n＝20）、40mg/kg巴曲酶注射组（n＝20）和20 mg/kg巴曲酶注射组（n＝20）。另25只正常大鼠为正常对照组。7d 后处死全部大鼠，通过伊凡思蓝法观察各组大鼠血视网膜屏障情况，酶连免疫吸附法分析视网膜总蛋白中的VEGF含量，比较各组结果。 结果 正常对照组大鼠视网膜内渗漏的伊凡思蓝含量明显低于另外3个糖尿病大鼠组（P<0.01）,不同剂量巴曲酶治疗组之间伊凡思蓝含量无明显差异（P>0.05），巴曲酶治疗的2组大鼠伊凡思蓝含量均比糖尿病组大鼠低（P<0.05）。正常对照组大鼠、不同剂量巴曲酶注射的2组大鼠视网膜内VEGF含量明显低于糖尿病大鼠（P<0.01）；正常对照组视网膜内VEGF含量与20 mg/kg巴曲酶注射组比较无明显差异（P＝0.06）；40mg/kg 巴曲酶注射组视网膜内VEGF含量比正常对照组低(P＝0.01)；不同剂量的巴曲酶治疗组之间VEGF含量无明显差异（P＝0.78）。 结论 巴曲酶治疗减轻了糖尿病大鼠血视网膜屏障功能的损伤，降低了VEGF的表达，提示巴曲酶对糖尿病大鼠血视网膜屏障功能有一定的保护作用。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 16-19)     

动态对比增强磁共振定量检测糖尿病视网膜病变血视网膜屏障渗漏的实验研究

目的　利用动态对比增强磁共振（DCE-MRI）定量检测实验性糖尿病视网膜病变（DR）血视网膜屏障（BRB）破坏程度,并探讨其可行性。方法　40只鼠龄3周的健康Sprague-Dawley （SD）大鼠随机平均分为实验组和正常对照组,实验组大鼠腹腔注射链脲佐菌素,注射48、72 h后检测大鼠空腹血糖及尿糖,血糖浓度在16.65 mmol/L、尿糖(+++)以上者视为建模成功,并按病程再分为糖尿病2、4、6、8个月,组每组各5只大鼠。正常对照组腹腔注射等体积缓冲液,并根据与实验组大鼠年龄匹配原则再平均分为4组,每组大鼠5只。分别在注射后2、4、6、8个月时利用DCE MRI扫描眼球,计算BRB渗漏速度;戊巴比妥过量麻醉后摘除眼球观察视网膜组织形态。采用SPSS 12.0对数据进行统计学分析。结果 　实验组大鼠成模率100%,正常对照组、糖尿病2、4个月组大鼠BRB未见明显渗漏,糖尿病6、8个月组大鼠BRB渗漏速度分别为(0.1399±0.0065)、(0.1816±0.2756) mm³/min,两者之间差异有统计学意义（Z=-2.121,P＜0.05）。实验组大鼠病程4个月时出现明显视网膜组织水肿,细胞排列紊乱,随病程延长逐渐加重,出现血管扩张,出血。结论　DCE MRI能够较精确地检测实验性DR的BRB渗漏速度,定量化评价BRB的破坏程度。