全身照射预处理供体对异基因大鼠肝移植的作用及对受体内CD4~+CD25~+调节性T细胞的影响

目的 探讨全身照射(TBI)预处理诱导大鼠肝移植术后急性排斥反应的发生机制,及CD4~+ CD25~+调节性T细胞的变化在诱导免疫耐受中的作用.方法 以雄性Lewis、DA大鼠为供、受体,随机分为正常对照组、同种肝移植组、自发免疫耐受组、急性排斥反应组.观察各组受体的生存时间及生存率,检测受体术后外周血中ALT、TB含量、Foxp3~+ CD4~+ CD25~+ 调节性T细胞和T细胞亚群上GITR的表达,检测受体术后第14天移植肝的病理变化和受体脾脏CTL杀伤活性.结果 自发免疫耐受组,术后经历短暂排斥反应最终获得免疫耐受并长期存活.急性排斥反应组,在术后第17～21天死亡,与其他组相比,外周血血清中ALT、TB含量明显升高,而Foxp3~+ CD4~+ CD25~+调节性T细胞比例明显降低.TBI预处理大鼠供肝致受体外周血中CD3~+ CD4~+ T细胞上GITR表达降低,CD3~+CD8~+T细胞上GITR表达增加,提高CTL的杀伤活性.结论 通过TBI清除供体大鼠肝移植物中携带的旁路淋巴细胞,致受体外周血中Foxp3~+ CD4~+ CD25~+调节性T细胞表达降低,而使CD3~+ CD8~+T细胞上GITR表达增加,共同诱导大鼠肝移植术后急性排斥反应发生和耐受障碍.     

CD4+CD25+FOXP3+T细胞在肝癌肝移植肿瘤复发中的作用

目的 探讨肝癌肝移植病人移植前后外周血和肿瘤组织中CD4+CD25+FOXP3+T细胞比例变化及其临床意义.方法 用流式细胞仪检测肝癌肝移植病人和其他肝移植病人术后外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞的比例,并采用正常人作对照.用免疫组化法检测肝癌病人和非肝癌病人肿瘤组织中FoxP3的表达及CD8+T细胞浸润的比例.观察肝癌肝移植病人术后及肿瘤复发后调节性T细胞的变化及其对肿瘤复发的影响.结果 流式细胞检测显示肝癌肝移植、非肝癌肝移植的病人术后外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞占CD4+T细胞的比例较正常人明显升高,分别为(10.15±1.00)%、(5.30±1.64)%和(3.20±1.18)%,P<0.05.肝癌肝移植肿瘤复发病人较未复发病人外周血CD4+CD25+FOXP3+T比例明显升高,分别为(15.15±1.50)%和(6.80±1.50)%,P<0.01.免疫组化检测显示肿瘤组织中FOXP3+T细胞增多,CD8+T细胞浸润明显减少.结论 肝癌肝移植肿瘤复发的病人外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞比例升高.调节性T细胞可能通过减少CD8+T细胞浸润,加速肿瘤复发.     

CD4~+CD25~+调节性T细胞诱导同种异体复合组织移植免疫耐受功能的研究

目的 探讨供体抗原特异性CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg),对同种异体复合组织 移植(CTA)受体大鼠细胞免疫耐受功能的影响.方法 采用免疫磁珠法分选CD4~+CD25~+Treg,将数 量1×10~6的CD4~+CD25~+Treg输注入CTA受体的大鼠,术后30 d采取外周血,尼龙毛柱分离T、B细 胞,检测在IgM 抗体刺激下的增殖放射强度的液体闪烁测定(CPM)值及血清lgG和IgA水平,判断 CD4~+CD25~+Treg对T、B细胞功能的影响及CTA的存活情况,并进行统计学分析.结果 分选的CD4~+CD25~+Treg纯度为95.6%.T、B细胞CPM值:正常对照组分别为2436±358、2418±348,Treg 局部干预组为2273±136、2252±127,Treg全身干预组分别为2338±228、2315±218,Treg未干预组分 别为3749±245、3720±224;Treg 未干预组与其三组比较差异均有统计学意义(P<0.01).血清IsG、IgA水平:Treg 局部和全身干预组分别为(12.56±1.30)g/L、(2.38±0.21)g/L和(13.48±1.23) g/L、(2.86±0.24)g/L,与正常对照组(12.35±1.28)g/L、(2.36±0.12)g/L比较差异无统计学意 义(P>0.05),三组与Treg未干预组(16.58±1.12)g/L、(3.75±0.37)g/L比较差异有统计学意义 (P<0.01).Treg 局部和全身干预组CTA存活时间分别为(97±13)和(63±lO)d,显著长于Treg未 干预组的(22±8)d(P<0.01).结论 供体抗原特异性CD4~+CD25~+Treg对T、B细胞功能有明显的 抑制作用,能诱导CTA免疫耐受,延长其存活时间,且局部应用效果优于全身.     

不同分期前列腺癌患者外周血CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞的变化及与胰岛素抵抗的相关性

目的 :观察不同分期前列腺癌患者外周血单个核细胞CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的变化及与胰岛素抵抗的关系。方法:采用流式细胞术检测62例前列腺癌患者(患者组,临床TNM分期Ⅰ期5例、Ⅱ期16例、Ⅲ期21例、Ⅳ期20例)外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数目,计算CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率;并检测其空腹胰岛素及空腹血糖水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用ELISA法测定外周血胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平,分析CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与胰岛素抵抗的相关性,并与42例健康体检者进行对照。结果:与健康对照组相比,前列腺癌患者HOMAIR明显升高(6.68±1.66 vs 3.68±1.42),IGF-1水平明显下降[(96.39±21.21)ng/ml vs(164.56±30.58)ng/ml],PBMC CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T淋巴细胞的百分率[(13.88±0.96)%vs(5.33±0.65)%]及CD4+CD25+Foxp3+Treg绝对值[(3.55±0.29)×107vs(1.99±0.78)×107]明显升高(P0.05,P0.01)。患者PBMC CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T淋巴细胞的百分率及CD4+CD25+Foxp3+Treg绝对数﹑HOMA-IR均随TNM分期逐渐加重而增加,IGF-1逐渐下降;相关性分析表明:CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T及CD4+CD25+Foxp3+Treg绝对数均与HOMA-IR呈明显正相关(r分别为0.689、0.722,P0.01),与IGF-1呈明显负相关(r分别为-0.896、-0.747,P0.01)。结论:前列腺癌患者存在不同程度的胰岛素抵抗,且随着疾病程度的加重,外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数目和比例及胰岛素抵抗逐渐加重;CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞可能通过调节胰岛素抵抗参与其形成和发展。     

性激素与CD4~+CD25~+调节性T细胞的相关性及在肾移植免疫耐受中的作用研究

目的:为明确肾移植术后因供肾、受肾性别差异而排斥反应发生率不同,移植肾存活率不同而进行性激素水平的研究,明确性激素与CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg)的相关性及在肾移植免疫耐受中的作用。方法:选取正常对照组、肾移植组患者各20例,用ELISA法测定外周血性激素睾酮(T)、雌二醇(E_2)水平,用流式细胞术(FCM)测定CD4~+CD25~+Treg占CD~+T细胞比值。结果:肾移植术后女性E_2水平逐渐由高变低,男性T水平逐渐由低变高,CD~+CD25~+Treg水平也随时间相关性而逐渐升高,以单因素方差分析发现:E_2水平平稳期与正常对照组比较无显著差异(P0.05);T平稳期与正常对照组比较无显著差异(P0.05);肾移植男性受者早期2周内调节T细胞水平与正常值比较有明显差异(P0.05),门诊随访肾移植达2年患者其调节t细胞与正常对照组无明显差异(P0.05)。T与CD4~+CD25~+Treg术后均依时间相关性而逐渐上升,以直线相关性分析发现两者有明显相关性(P0.05)。结论:肾移植术后随着下丘脑-垂体-性腺轴的恢复,患者性激素水平及CD4~+CD25~+Treg水平均逐渐恢复正常。排除体重、年龄、透析时间、HLA配型、缺血时间、术后糖皮质激素、免疫抑制剂治疗方式等因素的影响,T与CD4~+CD25~+Treg有明显相关性,男性在肾移植术后不仅可以通过雄激素直接抑制效应T细胞发挥主要免疫抑制作用,还可以通过增加CD4~+CD25~+Treg水平来发挥次要免疫抑制作用。     

CD4+CD25+调节性T细胞对同种胰岛移植免疫耐受的影响

目的 观察体外分离的CD4+CD25+调节性T细胞对同种胰岛移植免疫耐受的影响.方法 免疫磁珠法分离CD4+CD25+调节性T细胞,体外试验观察其对CD4+CD25-T细胞增殖的影响.将数量达1×106的CD4+CD25+调节性T细胞回输胰岛移植受体,对比其对移植物存活的影响.结果 分离的CD4+CD25+调节性T细胞体外试验可明显抑制CD4+CD25-T细胞的增殖.单纯胰岛移植组移植物物存活期为(5.57±0.79)d,回输受体CD4+CD25+调节性T细胞数量1×106、2×106时,胰岛移植物存活时间分别为(15.29±2.29)d和(25.43±2.30)d(P《0.01).CD4+CD25+调节性T细胞回输胰岛移植受体可显著延长移植物存活期,诱导免疫耐受的作用为剂量依赖性.结论 CD+CD25+调节性T细胞体外、体内试验可抑制效应性T细胞功能,诱导胰岛移植免疫耐受.     

胰十二指肠切除术对胰头癌患者CD4~+CD25~+调节性T细胞的影响及临床意义

目的研究胰头癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)比例及其在手术前、后的变化趋势。方法采用流式细胞仪检测胰头癌患者及正常对照组外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的数量,同时监测CD4+/CD8+比值,并进行手术前、后的比较。结果胰头癌患者术前外周血中CD4+CD25+和CD4+CD25highTreg所占比例较正常对照组高(P<0.05),术后则出现不同程度下降,以术后第3天下降最明显(P<0.01,P<0.05);胰头癌患者术后CA19-9水平低于术前,以术后第14天下降明显(P<0.05)。CD4+CD25highTreg与CA19-9的变化趋势大致相同。胰头癌患者术前CD4+/CD8+比值比正常对照组低(P<0.05),手术后进一步降低,于手术后第7天达最低(P<0.05)。结论胰十二指肠切除术可能有助于机体抗肿瘤免疫的恢复,胰头癌患者围手术期可作为免疫干预的重要窗口期,CD4+CD25+调节性T细胞可作为免疫干预的靶点。     

CD4+CD25+调节性T细胞在维持小鼠肝脏移植自发性免疫耐受状态中的作用

目的 探讨CD4+CD25+调节性T细胞在维持小鼠肝脏移植免疫耐受状态中的作用.方法 进行小鼠原位肝脏移植,诱导出移植免疫耐受后,向受体注射抗CD25抗体(PC61)以去除CD4+CD25+T细胞,检测受体内CD4+CD25+T细胞数量及叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)的表达以确定CD4+CD25+T细胞完全被清除,同时观察受体生存时间.结果 与同种同系小鼠肝脏移植结果 相似,同种异系肝脏移植小鼠的生存时间亦均超过70 d.移植免疫耐受诱导后,PC61不同注射方案均能完全去除受体小鼠肝脏、脾脏及血液中的CD4+CD25+T细胞,且移植肝脏中Foxp3 mRNA的表达也明显降低,表明完全去除了CD4+CD25+调节性T细胞,但肝脏移植动物生存时间并未受到影响.结论 CD4+CD25+调节性T细胞对于小鼠肝脏移植自发性免疫耐受的维持并非必需.     

调节性CD4~+CD25~+T细胞的分离纯化及免疫功能研究

目的 制备调节性CD~+ CD25~+T细胞(Treg)分析其免疫功能,诱导局部免疫耐受防治同种异体复合组织移植(CTA)排斥反应.方法 采用免疫磁珠法(MACS)从雄性大鼠脾脏细胞分离CD4~+CD25~+Treg(1×10~6),2%锥虫蓝染色检测活性、流式细胞术分析其纯度,在5 mg/L抗CD3的刺激下观察其反应性、增殖及其与200 U/ml细胞介素(IL)-2的关系.结果 从8只雄性大鼠脾脏分选出的CD4~+CD25~+Treg活性平均为(97.90±0.36)%及纯度为(96.05±0.41)%,CD3刺激呈低反应,按比例培养抑制率为89%,IL-2可使CD4~+CD25~-抑制逆转.结论 MACS能快速分选出较高纯度的CD4~+CD25~+Treg,并且活性良好在体外具有免疫无能及免疫抑制作用,能满足动物CTA排斥反应研究的需要.     

不同免疫抑制方案对肾移植术受者CD4~+ Foxp3~+ 调节性T细胞的影响

目的 探讨不同免疫抑制剂方案对肾移植术受者外周血CD4~+ Foxp3~+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)表达水平的影响.方法 定群研究了2006年1月至2008年1月在本移植中心接受初次移植50例随访满1年肾移植受者,分为钙调神经蛋白抑制组(钙调神经蛋白抑制剂+吗替麦考酚酯+强的松)19例,其中环孢素组10例,他克莫司组9例;雷帕霉素组(雷帕霉素+吗替麦考酚酯+强的松)31例.另取20例行规律血液透析终末期肾病患者为对照组.采用流式细胞仪的方法检测3组外周血CD4~+ Foxp3~+ Treg占CD4~+ T细胞的比例,比较各组间表达水平与不同免疫抑制方案的关系.结果 钙调神经蛋白抑制剂组、雷帕霉素组和终末期肾病组3组年龄、性别比无统计学差异(P>0.05).钙调神经蛋白抑制剂组、雷帕霉素组2组冷缺血时间、HLA错配率、群体反应性抗体(PRA)和急性排斥反应发生率无统计学差异(P>0.05).雷帕霉素组和终末期肾病组CD4~+ Foxp3~+ T细胞占CD4~+ T细胞的比例均明显高于钙调神经蛋白抑制组,差异有统计学意义(P<0.01).使用环孢素患者和他克莫司患者外周血中CD4~+ Foxp3~+ T细胞占CD4~+ T细胞的比例之间无显著性差异(P>0.05).结论 肾移植术后服用雷帕霉素组患者外周血CD4~+ Foxp3~+ Treg占CD4~+ T细胞的比例显著高于服用钙调神经蛋白抑制组患者,提示雷帕霉素有助于诱导宿主对移植肾免疫耐受.     

大鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分离及功能鉴定

目的：研究利用免疫磁珠分选法稳定分离正常大鼠脾脏CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的方法。方法：采用免疫磁珠两步法分离大鼠脾组织CD4^＋CD25^＋T细胞。首先采用藻红蛋白（PE）标记的抗CD25抗体和抗PE多功能磁珠试剂盒阳性分选CD25^＋T细胞,再用抗异硫氰酸荧光素（FITC）标记抗体和抗IgG磁珠阳性分选获得CD4^＋CD25^＋T细胞。分离后的细胞经流式细胞仪检测分离纯度,台盼蓝染色检测细胞存活率,体外增殖实验检测其对CD4^＋CD25^-T细胞的免疫抑制作用。结果：两次阳性分选后获得的CD4^＋CD25^＋T细胞纯度为（90.4±1.6）%,细胞存活率为（92.6±2.4）%。体外增殖实验表明,CD4^＋CD25^＋T细胞能明显抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖（P〈0.01）。结论：采用免疫磁珠法两次阳性分选,可稳定地获得纯度理想并有免疫抑制功能的大鼠CD4^＋CD25^＋T细胞。     

肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-8样分子2在调节性T细胞中的表达

目的:观察肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-8样分子2(TIPE2)在CD4<'+>CD25<'+>调节性T细胞(CD4<'+>CD25<'+>Treg)中的表达.方法:免疫磁珠法分离正常BALB/C小鼠脾脏CD4<'+>CD25<'+>Tregs,流式细胞术鉴定CD4<'+>CD25<'+>Treg的纯度.激光共聚焦荧光法检...     

反复自然流产患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的检测

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)在反复自然流产发病机制中的作用。方法:应用流式细胞术检测29例原因不明的反复自然流产妇女(URSA组)和20例正常妊娠妇女(正常对照组)外周血中CD4+CD25+Tr的比例。结果:URSA组外周血中CD4+CD25brightTr百分率[(1.98±0.96)%]显著低于正常对照组[(3.21±1.25)%,P<0.05],而2组间CD4+CD25+总百分率、CD4+CD25dim细胞百分率以及CD4+CD25bright/CD4+比值均无显著性差异(P均>0.05)。结论:URSA的发生可能与患者CD4+CD25brightTr比例下降有关,CD4+CD25brightTr在母胎免疫耐受中发挥重要作用。     

CD4~+T淋巴细胞内ATP含量与肝癌肝移植术后肿瘤复发的关系

目的探讨CD4+T淋巴细胞内三磷腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量与原发性肝癌(肝癌)肝移植术后肿瘤复发的关系。方法 64例次肝癌肝移植,56名健康志愿者(对照组)纳入该研究。采集外周血标本,用ImmuKnowTM免疫细胞功能测定试剂盒检测CD4+T淋巴细胞内ATP值。根据样本采集时肝癌肝移植患者是否发生肝癌复发,将采集的64份全血标本分为非复发组(51份)和复发组(13份)。结果健康对照组、非复发组、复发组的CD4+T淋巴细胞内ATP含量分别为(459±121)ng/ml、(308±101)ng/ml、(138±97)ng/ml,复发组的ATP值明显低于非复发组和对照组。ATP值降低(147ng/ml)时肝癌复发的风险明显增加,与肝癌复发存在良好的相关性。结论 CD4+T淋巴细胞内ATP含量与肝癌肝移植术后肿瘤复发具有良好相关性,监测肝癌肝移植术后患者的上述指标对评估其免疫状态、制定个体化治疗方案具有实用价值。     

以西罗莫司为基础三联抗肿瘤疗法对大鼠肝癌肝移植复发模型T淋巴细胞的影响

目的探讨以西罗莫司为基础联合槐耳颗粒、胸腺肽α-1的三联抗肿瘤疗法对大鼠肝癌肝移植复发模型T淋巴细胞的影响。方法 72只Sprague-Dawley(SD)大鼠以随机数字法分为三联组、西罗莫司组、槐耳组、胸腺肽组、阳性对照组、空白组,每组12只。除空白组外,其余各组均采用化学诱癌法建立模拟肝癌肝移植术后复发的动物模型。模型建立后,取阳性对照组大鼠鉴定模型是否成功建立。采用流式细胞术分别检测各组大鼠外周血调节性T细胞(Treg)占CD4+T淋巴细胞比例(Treg%)、CD4+T淋巴细胞占淋巴细胞总数比例(CD4+T%)及CD8+T淋巴细胞占淋巴细胞总数比例(CD8+T%)。采用Spearman秩相关分析Treg%与CD4+T%、CD8+T%及CD4+/CD8+T淋巴细胞比值(CD4+/CD8+)之间的关系。结果大鼠肝癌组织病理切片提示建模成功。阳性对照组的Treg%高于空白组,差异有统计意义(P0.05)。三联组的Treg%明显低于阳性对照组、胸腺肽组和槐耳组,明显高于空白组(均为P0.05)。与阳性对照组比较,三联组、西罗莫司组和胸腺肽组的CD4+T%和CD8+T%较高,差异有统计学意义(均为P0.05)。三联组的CD4+T%和CD8+T%均高于胸腺肽组、西罗莫司组和槐耳组,差异有统计学意义(均为P0.05)。各组大鼠的外周血Treg%与CD4+T%、CD8+T%和CD4+/CD8+均呈负相关,且三联抗肿瘤疗法可降低Treg%与CD4+/CD8+之间的负性相关关系。结论西罗莫司为基础的三联抗肿瘤疗法可降低大鼠外周血Treg水平,提高T淋巴细胞数量及CD4+/CD8+,发挥抗肿瘤细胞生长和增殖的作用。     

胰十二指肠切除术对胰头癌患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响及临床意义

目的研究胰头癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）比例及其在手术前、后的变化趋势。方法采用流式细胞仪检测胰头癌患者及正常对照组外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的数量,同时监测CD4^＋/CD8^＋比值,并进行手术前、后的比较。结果胰头癌患者术前外周血中CD4^＋CD25^＋和CD4＋CD25highTreg所占比例较正常对照组高（P〈0.05）,术后则出现不同程度下降,以术后第3天下降最明显（P〈0.01,P〈0.05）;胰头癌患者术后CA19-9水平低于术前,以术后第14天下降明显（P〈0.05）。CD4＋CD25highTreg与CA19-9的变化趋势大致相同。胰头癌患者术前CD4^＋/CD8^＋比值比正常对照组低（P〈0.05）,手术后进一步降低,于手术后第7天达最低（P〈0.05）。结论胰十二指肠切除术可能有助于机体抗肿瘤免疫的恢复,胰头癌患者围手术期可作为免疫干预的重要窗口期,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞可作为免疫干预的靶点。     

术前MELD评分和术后CD14^＋／HLA—DR测定在肝移植术后感染预测中的意义

目的：探讨原位肝移植术前终末期肝病模型（MELD）评分和术后CD14^＋单核细胞人自细胞DR抗原（CD14^＋／HLA-DR）表达率的变化在术后感染预测中的临床意义。方法：按美国胸科医师协会／危重病医学会的定义,将83例肝移植术后患者分为非感染组、感染组、感染性休克组,分别测定3组患者术前血胆红素、凝血酶原时间国际标准化比值（INR）、血肌酐,计算MELD评分,并动态检测术后CD14^＋／HLA—DR表达率,分析其在感染监测中的价值。结果：感染组和感染休克组术前血胆红素、INR、血肌酐和MELD评分均显著高于非感染组（P〈0．01）,CD14^＋／HLA-DR表达率均显著低于非感染组（P〈0．01）。感染组和感染休克组之间比较,上述指标均无显著性差异（P〉0．05）。感染发生后,感染组、感染性休克组的CD14^＋／HLA—DR值显著下降,与非感染组比较,差异具有显著性（P〈0．05或P〈0．01）;感染最重时两组的CD14^＋／HLA—DR值均降到最低值,与非感染组比较,差异具有显著性（P〈0．01）。结论：术前MELD评分和术后CD14^＋／HLA—DR表达率是监测肝移植术后感染发生及判断预后的良好指标。对术前高MELD评分或术后可疑感染的患者,动态监测CD14^＋／HLA-DR表达率对病情判断和治疗调整均有较好的指导意义。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在维持小鼠肝脏移植自发性免疫耐受状态中的作用

目的 探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在维持小鼠肝脏移植免疫耐受状态中的作用。方法 进行小鼠原位肝脏移植,诱导出移植免疫耐受后,向受体注射抗CD25抗体（PC61）以去除CD4^＋CD25^＋T细胞,检测受体内CD4^＋CD25^＋T细胞数量及叉状头／翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）的表达以确定CD4^＋CD25^＋T细胞完全被清除,同时观察受体生存时间。结果与同种同系小鼠肝脏移植结果相似,同种异系肝脏移植小鼠的生存时间亦均超过70d。移植免疫耐受诱导后,PC61不同注射方案均能完全去除受体小鼠肝脏、脾脏及血液中的CD4^＋CD25^＋T细胞,且移植肝脏中Foxp3mRNA的表达也明显降低,表明完全去除了CD4^＋CD25。调节性T细胞,但肝脏移植动物生存时间并未受到影响。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞对于小鼠肝脏移植自发性免疫耐受的维持并非必需。     

小鼠天然CD4^＋CD25^＋调节性T细胞表达α7烟碱型乙酰胆碱受体

目的探讨C57BL／6J小鼠的天然CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）是否存在α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAchR）。方法使用小鼠调节性T细胞试剂盒分离小鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Treg,流式细胞术鉴定CD4^＋CD25^＋Treg的纯度。分别采用免疫荧光染色、共聚焦显微镜、Western印迹和逆转录聚合酶链反应检测Treg表面α7nAchR蛋白／基凶表达：结果α-银环蛇毒素-FITC染色、流式检测显示Treg细胞表面结合α-银环蛇毒素-FITC;共聚焦显微镜成像观察到Treg细胞表面结合大量α-银环蛇毒索;Western印迹检测证实Treg细胞样本中检测到了清楚的α7nAchR条带,分子量大小约为55kD;RT-PCR分析发现Treg细胞样本中检测到了199bp大小的特异性α7nAchR目的基因条带。结论小鼠天然CD4^＋CD25^＋Treg细胞表达α7nAChR。     

脐血间充质干细胞心肌移植对梗死区CD4^＋T、CD8^＋T淋巴细胞分布的影响

目的研究犬脐血间充质干细胞（cbMSC）心肌移植对梗死区CD4^＋T、CD8^＋T淋巴细胞分布的影响。方法取犬脐带血,密度梯度离心法分离出单个核细胞,贴壁培养法扩增间质干细胞;采用随机数字表法将成年雄性杂种犬36只分为实验组和对照组,采用结扎冠状动脉左前降支的方法建立急性心肌梗死动物模型;实验组取第4代细胞用5-氮杂胞苷诱导72h,LacZ报告基因标记后经冠状动脉移植入犬心脏的梗死区域,对照组注射等体积的IMDM培养液;采用免疫组织化学法检测表达pgal的移植细胞以及梗死区域CD4^＋T、CD8^＋T的分布,应用Image—Proplus 5．1软件进行图象分析。结果异体犬cbMSC移植心肌梗死区后可长期存活;图象分析显示,实验组移植后第2、4、8周时,CD4^＋T的累积光密度值（IOD）为44．35±7．03,19．29±4．11和20．27±3．51,CD4^＋T与CD8^＋T的10D比值为0．63±0．12,0．51±0．15和0．66±0．08;对照组CD4^＋T的10D值为65．78±10．27,28．02±2．59和29．79±6．83,CD4^＋T与CD8^＋T的IOD比值为1．28±0．20,1．34±0．09和1．50±0．16,两组比较实验组明显低于对照组。检测表明,实验组移植后第2、4、8周时CD8^＋T的IOD为69．88±7．84,37．80±8．83和30．81±7．42,高于对照组的51．28±10．01,20．87±4．50和19．91±2．87。结论初步的实验结果表明,犬cbMSC的同种异体移植能产生免疫耐受,其机制可能与其抑制CD4^＋T,减少局部浸润的CD4^＋T数量,降低局部CD4^＋T／CD8^＋T比值有关。