胃癌术中腹腔灌洗液的CEA mRNA的检测及意义

目的　探索建立一种较敏感的检测胃癌手术时腹腔灌洗液中游离癌细胞的方法。方法　应用实时荧光逆转录 -多聚酶链反应 (RT PCR )方法定量检测 65例胃癌术中腹腔灌洗液的CEA mRNA ,同时用腹腔冲洗细胞学方法 (PLC )涂片寻找癌细胞。设 5例良性胃疾病的术中腹腔灌洗液及5例健康志愿者血液为阴性对照。结果　 (1)良性胃病组和对照组CEA mRNA均为阴性 ;(2 )胃癌组中RT -PCR方法检测游离癌细胞的阳性率为 47.7% ,无假阳性 ;而PLC的检出率仅为 12 .3 %。胃癌组中CEA mRNA阳性率与肿瘤浸润深度、病理分期 (I II和III IV期 )、有无腹膜转移均有明显相关性 (均P 0 .0 5 )。结论　实时荧光RT PCR较PLC方法检测胃癌患者腹腔灌洗液中的游离癌细胞具有更高的敏感性及特异性 ;游离癌细胞的存在和肿瘤临床病理因素有一定的相关性。     

腹腔液胃癌细胞学与CEA mRNA检测比较的意义

目的：探讨胃癌病人术中腹腔冲洗液细胞学及腹腔冲洗液、腹膜组织中的癌胚抗原（CEA）mRNA，以探讨对腹腔中游离癌细胞和预测腹膜转移的诊断价值。方法：收集48例胃癌和5例胃良性病变病人的腹腔冲洗液或腹水，并同时切除少量大网膜、膈腹膜和盆腔腹膜作为对照。冲洗液行常规细胞学检查，并逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）法检测腹腔游离癌细胞和网膜组织中CEA mRNA的表达。结果：腹腔冲洗液和腹膜组织中的CEA mRNA的阳性率分别为39．58％（19／48）和43．75％（21／48），皆高于腹腔冲洗液细胞学27．08％（13／48）（P＜0．05）。CEA mRNA的表达与淋巴结转移、肿瘤浸润深度、浆膜侵犯程度及TNM分期呈正相关。结论：腹腔冲洗液CEA mRNA和细胞学检查是检测腹腔游离癌细胞和预测腹膜转移的有效方法；如同时行腹膜组织CEA mRNA的检测可能更有助于诊断。     

胃癌腹腔微转移的研究及其临床意义

目的运用细胞学及RT-PCR方法检测胃癌患者术中腹腔冲洗液和腹膜组织,以探讨这些方法对预测胃癌腹腔微转移的意义.方法收集3 8例胃癌和5例胃良性病变患者的术中腹腔冲洗液,并同时切除少量大网膜、腹膜作为对照.用RT-PCR方法测定冲洗液中游离细胞的CEAmRNA表达,同时作冲洗液细胞学检查（PLC）.结果腹腔冲洗液和腹膜组织中的CEA mRNA的阳性率分别为36.8%（14/38）和39.5%（15/38）,皆高于腹腔冲洗液PLC的26.3%（10/38）.CEA mRNA的阳性率与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、浆膜侵犯深度有关.结论CEART-PCR方法对于检测腹腔微量游离癌细胞较PLC有更高的灵敏度和特异性,是一种检测胃癌腹腔微转移的有效方法.     

腹腔冲洗液检测CEA预测胃癌腹膜种植转移的临床意义

目的 探讨检测胃癌腹膜转移诊断的方法.方法 收集50例胃癌患者(胃癌组)及10例胃良性病变患者的腹腔冲洗液,并以胃癌原发灶组织标本作为对照.采用流式细胞术检测标本中肿瘤标志物CEA,采用HE染色进行腹腔冲洗液细胞学(PLC)检查,同时分析上述资料的临床意义.结果 胃癌组腹腔冲洗液中CEA阳性表达率为54.0%(27例),明显高于PLC所检测的24.0%(12例)的阳性率(P＜0.05).阳性检出率随着肿瘤浸润深度,TNM分期,胃壁受侵程度的增加而增加.胃癌组原发灶中CEA的阳性表达率为86.0%(43例),对照组腹腔冲洗液中CEA无阳性表达.结论 流式细胞术检测腹腔冲洗液中CEA可作为预测胃癌腹膜种植转移的手段.     

腹腔镜下进展期胃癌根治术中腹腔游离癌细胞检测的意义

目的探讨腹腔镜下进展期胃癌根治术对腹腔脱落肿瘤细胞检测的影响,并探讨提高腹腔游离癌细胞检出率的方法。方法选取华中科技大学同济医学院附属协和医院胃肠外科35例初治的进展期胃癌病人,行腹腔镜下胃癌根治术。所有病人分别在术中探查前及关腹前各行一次腹腔冲洗,并收集灌洗液。比较两组灌洗液中肿瘤脱落细胞阳性检出率及肿瘤标志物上皮膜抗原(epithelial membrane antigen,EMA)、癌抗原(carbohydrate antigen,CA)125、CA19-9和癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的表达情况。结果35例进展期胃癌病人探查前腹水或腹腔灌洗液中涂片细胞学检查中检出阳性率为5.7%(2/35),关腹前为5.7%(2/35),两者统计比较差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学法检测探查前与关腹前腹水或腹腔灌洗液中EMA的表达(4/35,3/35)比较,差异无统计学意义(P>0.05);两个时间点CA125的表达(1/35,3/35)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。探查前腹水或腹腔灌洗液中,腹腔灌洗液脱落细胞学法游离癌细胞检出阳性率为5.7%(2/35),而免疫组织化学法检测EMA的阳性率为11.4%(4/35),两者比较差异有统计学意义(P=0.010);免疫组织化学法检测CA125的阳性率为8.6%(3/35),与腹腔灌洗液脱落细胞学法(2/35)比较,差异有统计学意义(P=0.005);免疫组织化学法联合检测EMA及CA125的阳性率为11.4%(4/35),与腹腔灌洗液脱落细胞学法(2/35)比较,差异有统计学意义(P=0.010)。结论腹腔镜下进展期胃癌根治术并不会增加癌细胞脱落风险,且肿瘤脱落细胞发生率低。但腹腔镜下胃癌根治术后腹腔游离癌细胞的诊断,需要更为有效的检测方法。     

腹腔镜胃癌根治术后腹腔游离癌细胞的变化及意义

目的 对比研究腹腔镜与开腹胃癌根治术后腹腔游离癌细胞的变化,探讨腹腔镜胃癌根治术的安全性及可行性.方法 收集2006年4月至2008年6月间63例腹腔镜、61例开腹胃癌根治术患者术前、术后腹腔灌洗液,分别运用细胞学和荧光定量PCR方法 检测腹腔游离癌细胞的阳性率和癌胚抗原(CEA)mRNA的表达变化,观察胃浆膜受侵面积与腹腔游离癌细胞阳性率的关系.结果 腹腔镜组术后腹腔灌洗液游离癌细胞的阳性率为25.4%,与开腹组(29.5%)比较差异无统计学意义(P＞0.05);腹腔镜组术后腹腔灌洗液CEA mRNA阳性率为41.3%,与开腹组(40.3%)比较差异亦无统计学意义(P＞0.05).腹腔镜组术前、术后腹腔游离癌细胞均为阳性的病例,其浆膜平均受侵面积为(16.2±2.2)cm2,而术前、术后游离癌细胞均为阴性的病例,其浆膜平均受侵面积为(5.3±0.8)cm2,腹腔游离癌细胞的阳性率与浆膜受侵面积呈正相关(R2=0.874,P=0.000).结论 腹腔镜胃癌根治术并不增加腹腔游离癌细胞的阳性检出率.     

腹腔冲洗液CEA mRNA检测对胃癌微转移的临床评估及意义

目的：评估腹腔冲洗细胞学检查和CEAmRNA检测对胃癌预后的临床意义。方法：收集胃癌及对照（胃良性疾病）组患者的腹腔冲洗液标本,进行腹水细胞病理学和CEA巢式RT-PCR检测,并评价其与临床病理参数的关系。结果：腹水肿瘤细胞检测阳性率为30.3%,CEA巢式RT-PCR检测阳性率为48.5%,其结果与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关（P〈0.05）,而与肿瘤的大小无关（P〉0.05）。对照组腹水肿瘤细胞和CEA检测阳性率均为0。结论：胃癌患者腹腔冲洗液CEAmRNA检测可作为判断胃癌侵袭转移、术后复发情况及患者预后的参考指标之一。     

分离的肿瘤细胞常可在胃和结肠直肠癌病人的腹腔中检出

免疫细胞学方法可以检出多种肿瘤弥散至骨髓的肿瘤细胞，在胃肠道癌肿病人的腹腔灌洗液中找出分离的肿瘤细胞，后者当与病人的生存密切相关。作者取84例胃癌和109例结肠直肠癌病人并检定其骨髓和腹腔内的分离细胞（26例未取得骨髓标本，22例因粘连而未能行腹腔灌洗）。8mL骨髓取自右骼前上棘处，腹腔灌洗则在捣动肿瘤前进行；IL等渗盐水用作灌洗，吸出后经离心和制片（每一玻片可获2．5×105个细胞），用免疫过氧化酶法染色细胞。应用以下6种不同的单抗：CIP83，抗CEA；CA19－9，决定Lewis血型抗原；17IA，膜抗原；Ra96，粘蛋白；C54…     

1297例胃癌病人术中灌洗细胞学检查

腹膜转移是胃癌病人最常见的死亡原因，一旦浆膜受侵犯，即使施行了根治性手术，仍有50％的病人出现腹膜转移。为了正确预测腹膜的转移，作者通过对胃癌病人术中进行腹腔灌洗查找恶性细胞，从而确立腹腔中游离肿瘤细胞与病人肿瘤复发的关系。方法1975.4～1997.5间，作者对1297例胃癌病人进行了术中灌洗细胞学检查。开版后马上注入200ml生理盐水，人工腹腔内扩散后，从左隔下、小网膜与肝胆韧带间隙和直肠子宫陷凹收集约100ml液体，立即加入1ml肝素，1500转／分离心5分钟，将有核细胞涂片，用巴氏、吉姆萨及PAS染色后进行细胞学检查。按照P…     

胃癌细胞增殖与腹腔灌洗液中端粒酶活性及腹膜转移的相关性研究

目的 研究胃癌增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）表达与腹腔灌洗液端粒酶活性及腹膜转移的相关性，并比较腹腔灌洗液中端粒酶活性和细胞学检测游离癌细胞预测腹膜转移的应用价值。方法 应用免疫组化SP法检测60例胃癌患者胃癌组织中PCNA表达，PCR—TRAP-ELISA法检测腹腔灌洗液中端粒酶活性，同时行腹腔灌洗液脱落细胞学（peritoneal lavage cytology．PLC）检测；并分析其与相关临床病理因素的关系。结果 胃癌患者腹腔灌洗液中端粒酶活性的阳性率为41．7％；与浆膜侵犯、组织学类型、浸润深度、浆膜受累面积及腹膜转移密切相关，并随着浸润深度及浆膜受累面积的增加而升高（P〈0．05）。PLC检测阳性率为25．0％；在伴肉眼可见腹膜转移灶（P1-3）者明显增高，也随着浸润深度及浆膜受累面积的增加而升高。两种方法检测的阳性率总体上差异无统计学意义。但在未分化型癌、pT1、伴肉眼可见腹膜转移灶（P1-3）者端粒酶活性阳性率明显高于PLC。PCNA增殖指数（PI）在腹腔灌洗液端粒酶活性表达阳性者明显高于表达阴性者，伴肉眼可见腹膜转移灶（P1-3）者明显高于无肉眼可见腹膜转移灶（P0）者，浆膜受侵者明显高于浆膜未受侵者（P均〈0．05）。结论 两种方法均适用于胃癌腹腔脱落癌细胞的诊断或腹膜转移的预测，端粒酶活性检测微量癌细胞的灵敏度优于PLC法检测；胃癌端粒酶活性与恶性增殖活性密切相关；胃癌高增殖活性是浆膜受侵及腹膜转移的重要原因。     

腹腔镜检查结合RT-PCR在胃癌诊疗中的临床意义

目的：探讨进展期胃癌术前腹腔镜检查与RT—PCR检测腹腔灌洗液中游离癌细胞CEAmRNA的表达水平,在胃癌患者术后微转移及预后的临床意义。方法：对22例进展期胃癌患者术前行腹腔镜探查,灭菌生理盐水冲洗腹腔4～5次,收集脱落细胞．进行细胞学检查和RT—PCR检测CEAmRNA表达水平。结果：22例胃癌患者中,细胞形态学捡测31．8％（7／22）阳性,RT—PCR捡测54．5％（12／22）CEAmRNA阳性表达,二者阳性率有显著性差异（P〈0．05）。结论：诊断性腹腔镜检查、RT—PCR与PLC有效结合,可提高腹腔转移复发诊断的灵敏性和特异性,有助于对胃癌分期、淋巴转移和预后的综合判断,对胃癌的辅助治疗提供依据。     

实时荧光定量PCR检测结直肠癌腹腔CEA水平及其临床意义的研究

目的:应用实时荧光定量PCR技术检测结直肠癌腹腔内CEA水平并探讨其临床意义.方法:2003年5月至2004年3月,收集在日本爱知癌症中心手术107例结直肠癌病例的腹腔冲洗液,每个样本的cDNA应用随机引物合成,并在罗氏的实时荧光定量PCR(LightCycler)上进行定量分析.每个样本同时进行常规细胞学检查.所有病例术后经过平均为1年的随访.结果:CEA mRNA的阳性率和水平均与肿瘤的侵润度(T),分期以及淋巴结转移相关.在一个合理界定值上,CEA和CK-20检测的敏感度与特异度均为100%和100%,而常规的细胞学检查则为33%和100%.结论:CEA定量分析是检测结直肠癌腹腔微转移的敏感和特异的方法,CEA mRNA水平的异常与术后的无瘤生存率显著相关.其临床意义有待于更长期的随访结果.     

Detection of Micrometastases in Peritoneal Washings of Pancreatic Cancer Patients by the Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction

OBJECTIVE: Pancreatic cancer patients with positive (+) peritoneal cytology have a prognosis similar to stage IV patients. We studied the ability of quantitative real time-polymerase chain reaction (RT-PCR) to detect micrometastases in patients undergoing staging laparoscopy. METHODS: Peritoneal washes were obtained prospectively from 35 consecutive patients with pancreatic adenocarcinoma undergoing staging laparoscopy and 16 patients undergoing laparoscopy for benign disease. Each sample was assessed by cytologic examination and RT-PCR analysis for tumor markers: CEA, CK7, Kras2, and MUC1. Markers and their combinations were evaluated on the basis of their deviance from the ideal marker. RESULTS: Pathologic stages for pancreatic cancer patients were: 1A-1 (3%), IB-1 (3%), IIA-5 (15%), IIB-13 (38%), III-5 (15%), IV-9 (26%). Eight patients were cytology (+) and stages IIA-1, IIB-2, IV-5. Twenty-five patients were RT-PCR (+). The optimal threshold for cycle amplification was 35 based on a receiver operating characteristic curve. CEA had the best profile of sensitivity, specificity, PPV, NPV, and the smallest deviance. CONCLUSION: RT-PCR using a panel of tumor markers, including CEA, was comparable in sensitivity, specificity, PPV, and NPV to cytology. RT-PCR could represent a more sensitive method for detection of subclinical peritoneal tumor dissemination; this may be useful in patient selection for operative management and clinical trials.     

Intraoperative lavage for cytological examination in 1,297 patients with gastric carcinoma.

BACKGROUND: This study examined the clinical value of intraoperative peritoneal lavage for cytological examination in patients with gastric cancer. Peritoneal dissemination is the most frequent mode of recurrence for this tumor. METHODS: A retrospective of lavage findings, other factors, and outcome was performed in 1,297 patients with gastric cancer who underwent intraoperative peritoneal lavage. RESULTS: The 5-year survival rate of patients with positive lavage cytology was only 2%. Patients who underwent curative resection and had negative cytology had a significantly better 5-year survival rate (P < 0.001). Even among patients with macroscopic peritoneal dissemination, the survival rate was significantly better with negative cytology, which reflected fewer free cancer cells in the peritoneal cavity. Serum concentrations of carcinoembryonic antigen and carbohydrate antigen 19-9 were significantly higher in patients with positive cytology. Multivariate analyses indicated that intraoperative cytological findings was an independent prognostic factor for survival, and was the most important factor for predicting peritoneal recurrence. CONCLUSIONS: Intraoperative peritoneal lavage cytology is important in predicting survival and peritoneal recurrence in gastric cancer.     

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目的　研究细胞角蛋白 2 0 (CK2 0 )和癌胚抗原 (CEA)单抗免疫细胞化学 (ICC)染色方法在胃癌病人腹腔冲洗液脱落癌细胞检测中的临床应用价值。方法　应用CK2 0和CEA两种标志物 ,对 30例胃癌病人腹腔冲洗液细胞涂片进行免疫细胞化学染色及常规腹腔冲洗液细胞学检查 (CY) ,检测腹腔内脱落癌细胞。结果　ICC阳性检出率 (43 3%)明显高于CY (2 3 3%) (P <0 0 5 ) ;CK2 0单抗检出 13例ICC阳性病例中的 12例(92 3%) ,优于CEA(76 9%) ;腹腔内癌细胞的脱落与浆膜受侵、胃癌分化程度、有无淋巴结转移相关 (P <0 0 5 ) ,并与临床分期密切相关 (P <0 0 1)。结论　采用CK2 0单抗免疫细胞化学染色方法检测腹腔冲洗液中脱落癌细胞是一种简单有效的方法 ,有临床实用价值。     

Prognostic value of peritoneal lavage cytology in gastric cancer

The microscopic detection of free peritoneal tumour cells in peritoneal lavage fluid in gastric cancer patients is a useful predictor of peritoneal recurrence and poor prognosis. The aim of this study was to verify the prognostic significance of intraoperative peritoneal lavage cytology and its value as a predictor of peritoneal recurrence. We evaluated the presence of free peritoneal tumour cells with extemporary cytological examination in a series of 170 peritoneal washing samples from patients undergoing gastrectomy for gastric cancer over the period from January 1992 to June 2001. Twenty-eight patients (16%) had positive extemporary lavage cytology and there were no false-negatives as compared with the final examination. All patients with positive cytology presented serosal infiltration (T3/T4). Positive peritoneal lavage cytology was a predictor of poor prognosis and peritoneal recurrence: the 24 month survival rate was 17% for positive and 60% for negative cases (P = 0.003); in positive cases 71% of recurrences were located in the peritoneum. Intraoperative cytological examination of peritoneal washings can detect the presence of free malignant cells in the peritoneal cavity and can be used to select patients who may benefit from intraperitoneal chemotherapy.