钙调神经磷酸酶在血管紧张素Ⅱ刺激的大鼠心肌细胞肥大中的作用及其活性调节

目的:观察钙调神经磷酸酶(CaN)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激的大鼠心肌细胞肥大中的作用及其活性调节。方法:建立AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大模型,观察CaN抑制剂对AngⅡ刺激的心肌细胞 [³H]-亮氨酸掺入的影响,以及各种因素对心肌细胞CaN酶活性的影响。结果:10、 100、 1000 nmol·L^-1的AngⅡ作用12 h分别使心肌细胞的CaN活性增加了13%、 57%(P＜0.05)、 228%(P＜0.01)。AngⅡ(10 nmol·L^-1)刺激心肌细胞2 h内,CaN活性与对照组无明显差异(P＜0.05);AngⅡ刺激心肌细胞12 h以上,CaN活性才明显增高(P＜0.05)。Losartan(50 μmol·L^-1)、H₇(50 μmol·L^-1)及Fura-2/AM(4 μmol·L^-1)可明显抑制AngⅡ刺激的心肌细胞CaN活性;而PD98059(50 μmol·L^-1)对AngⅡ刺激的心肌细胞CaN活性无明显影响。AngⅡ(10^-7mol/L)刺激的大鼠心肌细胞 [³H]-亮氨酸掺入明显高于对照组(P＜0.01),而CaN特异性抑制剂-环孢素A(0.5~5 μg/mL)可以明显抑制AngⅡ刺激的心肌细胞 [³H]-亮氨酸掺入。结论:依赖Ca²⁺/CaM活化的CaN可能在AngⅡ刺激的心肌细胞肥大中起重要作用;CaN的活化可能有赖于胞内Ca²⁺水平的持续升高,另外,CaN的活性还可能受到蛋白激酶C等信号分子的磷酸化调节。     

环胞霉素A抑制神经肽Y诱导大鼠心肌细胞肥大效应

目的:观察Ca²⁺/CaM依赖的钙调神经磷酸酶(CaN)抑制剂环胞素A(CsA)对神经肽Y诱导心肌细胞肥大效应的影响。方法:用神经肽Y(NPY)刺激Wistar乳鼠心肌细胞,并用环胞素A加以干预。应用氚-亮氨酸([³H]-Leu)掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率、RT-PCR法测心肌细胞c-junmRNA表达。结果:(1)心肌细胞氚-亮氨酸([³H]-Leu)掺入量测定:与对照组相比,NPY10nmol/L组氚-亮氨酸([³H]-Leu)掺入量有所增高,但与对照组比无显著差别,而NPY100nmol/L组心肌细胞氚[³H]-Leu掺入量较对照组明显增高(P＜0.05)。CsA组和对照组相比无显著差别。(2)心肌细胞内c-junmRNA表达:NPY组心肌细胞c-junmRNA的RT-PCR产物量明显高于对照组和CsA组(P＜0.01),对照组和CsA组间无显著差别。结论:NPY刺激心肌细胞蛋白质合成增加、心肌细胞原癌基因(肥大早期反应基因)c-junmRNA表达,提示NPY可诱导心肌细胞肥大;CaN抑制剂CsA可阻断NPY上述效应,说明Ca²⁺/CaM依赖的CaN信号途径在其中起重要作用。     

Pyk2促进血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的探讨富含脯氨酸蛋白酪氨酸激酶(Pyk2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠心肌细胞肥大的作用及其机制。方法提取大鼠乳鼠原代心肌细胞,随机分为对照组、AngⅡ诱导组(AngⅡ剂量为100 nmol/L,将其加入心肌细胞培养皿中刺激24 h)、Pyk2抑制剂PF-431396组(PF-431396剂量为10μmol/L,在AngⅡ刺激前30 min加入心肌细胞培养皿中)以及PF-431396干预AngⅡ诱导组(AngⅡ剂量为100 nmol/L,PF-431396剂量为10μmol/L)。用细胞骨架蛋白(α-actinin)免疫荧光染色检测心肌细胞表面积大小;real-time PCR检测心肌细胞中肥大指标(ANP和β-MHC) mRNA表达;Western blot检测心肌细胞p-Pyk2、Pyk2以及p53的蛋白表达。结果在AngⅡ刺激下,心肌细胞表面积增大(P<0. 05)、肥大指标的mRNA水平升高(P<0. 05)、p-Pyk2和p53的蛋白水平增加(P<0. 05);而加入Pyk2抑制剂PF-431396后,心肌肥大指标明显改善,p-Pyk2和p53的蛋白表达降低(P<0. 05)。结论 Pyk2通过p53信号通路促进AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大。     

血管紧张素Ⅱ经AT1受体和ERK1/2上调心肌细胞Cx43间隙连接

目的：探讨血管紧张素Ⅱ对培养新生鼠心室肌细胞Cx43间隙连接的影响及其机制。 方法： AngⅡ处理培养心肌细胞24 h。缬沙坦、PD98059在AngⅡ刺激细胞前1 h加到培养基中，对照组加等体积药物溶剂DMSO。用Western blotting分析、代谢标记和免疫沉淀测定、电镜观察心肌细胞Cx43表达、合成和间隙连接。 结果： Western blotting分析显示用10-9-10-6 mol/L AngⅡ刺激细胞24 h，Cx43的表达与对照组相比呈浓度依赖性增加；用AngⅡ 0.1 μmol/L刺激心肌细胞24 h，磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)活性高于对照组（P<0.01），AT1受体拮抗剂缬沙坦（1 μmol/L）能完全阻断AngⅡ增加P-ERK1/2活性；用AngⅡ 0.1 μmol/L刺激心肌细胞24 h，Cx43表达及P-ERK1/2活性均高于对照组(P<0.01)，ERK1/2激酶特异性抑制剂PD98059(1 μmol/L) 能阻断AngⅡ上调Cx43表达和增加P-ERK1/2活性。代谢标记和免疫沉淀测定显示AngⅡ处理组放射渗入Cx43的量明显高于对照组（P<0.01）,缬沙坦(1 μmol/L)能完全阻断AngⅡ增加放射渗入Cx43的量。电镜观察表明用AngⅡ 0.1 μmol/L刺激心肌细胞24 h，AngⅡ处理组细胞间隙连接数目和大小大于对照组（P<0.05）。 结论： AngⅡ通过AT1受体和ERK1/2促进培养心肌细胞合成Cx43，上调Cx43表达和增加间隙连接数目及大小。     

miR-31及其靶基因LATS2在大鼠肥大心肌细胞中的表达

目的观察大鼠心肌细胞肥大过程中miR-31及其靶基因LATS2的表达变化。方法构建双荧光素酶基因报告系统鉴定miR-3l对LATS2的靶向作用。体外培养原代大鼠心肌细胞,给予10-6mol/L血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激构建体外心肌细胞肥大模型,RT-q PCR检测miR-31、LATS2及心肌肥大基因ANP与β-MHC表达,心肌细胞F肌动蛋白荧光探针染色观察心肌细胞形态变化,Western blot进一步检测LATS2蛋白表达。结果 miR-3l可与LATS2-3'UTR基因片段特异性结合并使荧光素酶活性显著降低。10-6mol/L AngⅡ干预48 h后可检测到心肌细胞肥大基因ANP及β-MHC表达上调(P0.01和P0.05),干预96 h后心肌细胞表面积明显增大。伴随心肌细胞的肥大变化,miR-31表达显著上调(P0.01),LATS2在基因及蛋白水平均明显下调(P0.05)。结论伴随大鼠心肌细胞的肥大变化,miR-31表达显著上调,而LATS2在基因及蛋白水平均明显下调。     

肌原纤维调节因子-1在心肌肥大中的作用研究

目的：研究肌原纤维调节因子-1(MR1)在心肌肥大中的变化及其作用。 方法： 选取rMR1 mRNA的3个Stem-loop结构作为靶点，构建RNA干扰载体，对乳鼠心肌细胞进行瞬时转染，通过定量RT-PCR，选定第1靶点进行RNA干扰以封闭MR1基因；采用心肌细胞［3H］-亮氨酸掺入、形态学检测、蛋白质提取、Western blotting技术，检测蛋白合成速率、细胞表面积、rMR1蛋白表达等指标，观察MR1基因沉默对于血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ, AngⅡ)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的影响。 结果： AngⅡ组［3H］-亮氨酸掺入较对照组增加24.1%(P<0.01)，其细胞表面积较对照组高65.8%(P<0.01)，rMR-1蛋白表达水平升高；AngⅡ的上述作用可被卡托普利完全消除；MR1基因封闭后，由AngⅡ诱导的［3H］-亮氨酸掺入降低30.2%(P<0.01)，细胞表面积较AngⅡ组降低31.1%(P<0.01)，rMR-1蛋白表达较对照组减少。 结论： AngⅡ诱导的心肌细胞肥大与rMR-1表达上调有关。MR-1可能通过促进心肌收缩蛋白的合成参与心肌肥大的发生。     

钙蛋白酶调节致心肌细胞肥大的信号转导

目的： 探讨钙敏感的calpain对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）介导的致心肌细胞肥大的钙调神经磷酸酶（CaN）信号通路的调节。方法: 原代培养的乳鼠心肌细胞为模型，AngⅡ刺激细胞Ca2+内流和（或）内贮细胞Ca2+释放， ［3H］-Leu掺入法反映心肌细胞蛋白合成速率，Fura-2/AM比率荧光成像分析细胞内钙信号变化，免疫印迹检测心肌细胞μ-calpain、m-calpain、CaN磷酸化及蛋白表达。结果: Ang Ⅱ呈浓度依赖性（10^-8-10^-5 mol·L^-1）促心肌细胞［Ca2+］i增加,各刺激组［Ca2+］i与对照组差异显著(P<0.01或P<0.05)。AngⅡ（10-7 mol·L^-1）剌激心肌细胞15 min后, μ-calpain的磷酸化明显增加，但其蛋白表达量无显著改变（P>0.05）, m-calpain蛋白表达及磷酸化量显著差异，CaN的蛋白表达量无显著改变，但其磷酸化增强, 环孢素A（CsA）抑制CaN的磷酸化。AngⅡ可使无血清培养新生大鼠心肌细胞［3H］-Leu掺入率随时间增加而增加，与对照组差异显著(P<0.01或P<0.05)，且在10^-8-10^-5 mol·L^-1范围内呈量效依赖关系。结论: AngⅡ剌激细胞外Ca2+跨膜内流和（或）内贮Ca2+的释放导致μ-calpain的激活，进一步激活钙敏感的CaN信号通路，在心肌肥厚的病理过程中起重要作用。     

槲皮素通过抑制蛋白酶体活性减轻心肌细胞肥大

目的:探讨槲皮素对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的防治作用及机制。方法:分别在原代新生大鼠心肌细胞和培养的H9c2心肌细胞,用100 nmol/L的AngⅡ诱导心肌细胞肥大模型,并给予3种不同浓度的槲皮素(10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L)处理,利用免疫荧光检测原代和H9c2心肌细胞表面积的改变,采用荧光底物法检测H9c2心肌细胞蛋白酶体的活性变化,以及用Western blot检测H9c2心肌细胞糖原合酶激酶(GSK)-3α/β、Akt及其磷酸化情况。结果:与对照组相比,模型组原代心肌细胞和H9c2心肌细胞表面积均显著增大,槲皮素处理组2种心肌细胞表面积较模型组均明显减小,而20μmol/L槲皮素组减小更明显(P0.05)。在H9c2细胞实验中发现模型组蛋白酶体的糜蛋白酶样、半胱天冬酶样和胰蛋白酶样活性明显升高,20μmol/L和40μmol/L槲皮素组半胱天冬酶样和胰蛋白酶样活性较模型组均明显降低,而糜蛋白酶样活性只有在槲皮素20μmol/L时有显著差异(P0.05);Western blot检测结果显示,模型组磷酸化(p)-GSK-3α、p-GSK-3β和p-Akt水平较对照组均明显增加,而20μmol/L和40μmol/L槲皮素处理均使p-GSK-3α、p-GSK-3β和p-Akt水平明显下降(P0.05)。结论:槲皮素可明显抑制蛋白酶体活性从而减轻心肌细胞肥大,其机制可能是通过下调Akt活性而升高GSK-3α/β活性实现的。     

葛根总黄酮对离体神经肽Y诱导的心肌细胞肥大的影响

目的:观察葛根总黄酮对离体神经肽Y(NPY)诱导的心肌细胞肥大效应的影响。方法:建立体外培养的大鼠心肌细胞培养体系,实验分(1)对照组、(2)NPY组:加入终浓度为100 nmol/L的NPY、(3)NPY+葛根总黄酮4个浓度组:分别加入100 nmol/L NPY和0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L、3 mg/L的葛根总黄酮。应用氚-亮氨酸([³H-Leu])掺入法测定心肌细胞蛋白合成率;RT-PCR法测心肌细胞C-jun mRNA表达;组织化学法测心肌钙调磷酸酶(CaN)活性。结果: NPY组心肌细胞[³H-Leu]掺入量为896±34;C-jun mRNA表达为23 132.62±1 787.28;CaN活性为35.62±4.60,与对照组(分别为[³H-Leu]752±46、C-jun mRNA 17 819.49±1 452.06、Can22.94±6.20)相比有显著差异(P＜0.01、P＜0.05)。而葛根总黄酮1-3 mg/L可使在NPY作用下的心肌细胞[³H-Leu]掺入量下降(3个剂量组分别为797±78、772±58、786±43);C-jun mRNA表达减少(分别为18 035.32±1 592.23、18 043.90±1 726.19、18 072.29±1 692.34);CaN活性降低(分别为28.34±6.40、25.69±5.90、26.37±3.50)与对照组相比无显著差异(P＞0.05)。结论:NPY可诱导心肌细胞肥大;葛根总黄酮在1-3 mg/L浓度可阻断其效应,其作用可能与抑制CaN活性、阻断Ca²⁺/CaM依赖的CaN信号途径有关。     

Gαq/11信号转导通路在血管紧张素Ⅱ引起心肌肥大中的作用

目的:研究Gαq/11介导的信号转导通路在血管紧张素II(AngII)引起心肌肥大中的作用。方法:复制2K1C肾性高血压大鼠模型,分别在术后1、2、4、8周观察高血压大鼠和卡托普利治疗后大鼠血流动力学的变化;测定心肌肥大指数并用放免法测定心脏AngII含量;采用免疫印迹法测定心脏Gαq/11含量;以[³H]标记的4,5-二磷酸磷脂酰肌醇(PIP₂)为底物,测定磷脂酶C(PLC)活性。培养乳鼠心肌细胞,测定AngII刺激后心肌细胞[³H]-亮氨酸掺入和Gαq/11含量的变化。结果:2K1C大鼠在术后2周血压开始明显升高并从2周开始出现心肌肥大;心脏AngII含量在术后1-8周均明显增高;心脏Gαq/11含量在4周和8周时分别比假手术组高25.0％和35.8%(P＜0.05)。PLC活性在2周、4周和8周时比假手术组分别高12.8%、21.8%和21.0%(P＜0.05)。卡托普利治疗可以降低血压逆转心肌肥大,并抑制Gαq/11含量增加和PLC活化。AngII刺激培养的心肌细胞1h即可引起Gαq/11含量增加,刺激24h-亮氨酸掺入才明显增加。结论:激活Gαq/11及其下游的信号分子是介导AngII引起心肌肥大的重要信号转导途径。     

神经肽Y活化大鼠心肌细胞内Ca2+及钙调素依赖的钙调神经磷酸酶途径

目的 观察神经肽 Y (NPY)对心肌细胞内Ca2+及钙调素(CaM)依赖的钙调神经磷酸酶(CaN)信号传导途径的影响.方法 以NPY刺激心肌细胞.用环胞素A(CsA)特异性抑制CaN活性.应用Western印迹测细胞内CaN-α蛋白表达.采用组织化学法测CaN酶活性.用Fluo3-AM荧光标记法观察心肌细胞胞质及核内钙离子浓度变化.结果 加入100 nmol/L NPY刺激后,心肌细胞CaN酶活力较对照组明显增高(P＜0.05),10 nmol/L NPY组和CsA 组(100 nmol/L NPY + 5 μg/ml CsA) CaN酶活性与对照组相比,差异无统计学意义.100 nmol/L NPY组心肌细胞内CaN-α蛋白表达较对照组显著增高(P＜0.05). 加入100 nmol/L NPY在10 min内,心肌细胞胞浆及核内钙含量与对照组相比,差异无统计学意义.经100 nmol/L NPY刺激24 h后,心肌细胞胞浆及核内钙含量明显高于对照组(P均＜0.01).结论 NPY可活化心肌细胞内Ca2+及CaM-CaN途径.NPY刺激下产生的细胞内钙增加,可能是其活化CaN途径的始动环节.     

钙通道阻滞剂对缺氧右心室心肌钙调神经磷酸酶活性的调控作用

目的:探讨钙调神经磷酸酶(CaN)在大鼠慢性缺氧性右心室肥大中的作用以及L-型钙通道阻滞剂对其的影响。方法:将大鼠置于氧浓度为(10±0.5)%的大型玻璃舱中每天24 h缺氧持续共7 d建立大鼠慢性缺氧模型。实验大鼠分为3组,每组各20只,即正常组、缺氧组、苯磺酸氨氯地平(norvasc)处理组,缺氧组持续缺氧21 d,norvasc处理组在缺氧的同时灌喂norvasc 30 mg·k^-1·d^-1。第21 d每组取10只大鼠分离心脏称重,并测CaN活性水平,另10只取心脏测定心肌细胞[Ca²⁺]_i。结果:(1)缺氧组右室与左室加室间隔的重量比、右室重/体重均明显高于正常组和norvasc处理组(均P＜0.01) 。(2)缺氧组右心室心肌细胞[Ca²⁺]_i 明显高于正常组(P＜0.01),而norvasc处理组则明显低于缺氧组(P＜0.01)。(3)缺氧组右心室心肌CaN活性明显高于正常组(P＜0.01),而norvasc处理组则明显低于缺氧组(P＜0.01)。结论: CaN可能参与了大鼠慢性缺氧性右心室肥大, L-型钙通道阻滞剂可能是通过降低心肌细胞内钙浓度,调控CaN活性而阻滞慢性缺氧右心室肥大。     

体外心肌细胞牵张刺激装置的建立

目的：设计一套实用的体外培养心肌细胞牵张刺激模拟装置，为探讨心肌细胞机械刺激转导机制提供研究方法。方法：应用自行设计制作的离心力牵张装置模型和传统膜牵张模型刺激培养的乳鼠心肌细胞，通过细胞体积、数量，培养液中血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）水平和乳酸脱氢酶活性和同位素标记亮氨酸掺入法评价心肌细胞受损和肥大情况。结果：离心力牵张装置提供180 r/min的离心力和传统的20%的膜牵张力均可使培养心肌细胞体积明显增大，但对培养的心肌细胞的数量无显著影响。牵张刺激对培养液中乳酸脱氢酶活性影响无显著差异。[³H]-亮氨酸掺入在离心力牵张组（12 h为1295.17±51.19，24 h为1447.50±35.96，P<0.05）和膜牵张组（12 h为2015.50±79.06，24 h为1870.00±45.91，P<0.01）均显著高于对照组（12 h为1122.67±51.63，24 h为1210.67±90.92）。Ang Ⅱ在离心力牵张组[ 12 h为(22.6±3.2) ng·g^-1，24 h为(52.7±3.4) ng·g^-1 ]和膜牵张组[ 12 h为(28.3±6.3) ng·g^-1，24 h为(65.1±6.4) ng·g^-1 ]均明显高于同期未牵张组[ 12 h为(17.7±1.9) ng·g^-1，24 h为(37.8±2.3) ng·g^-1 ]。结论：离心力牵张装置可刺激培养心肌细胞发生肥大反应，与传统装置比较对其形态和代谢的影响小，应用更广泛和方便。     

PKCζ与Raf在Ang Ⅱ引起的大鼠血管平滑肌细胞ERK1/2活化中的作用

目的:研究血管紧张素II(AngⅡ)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)肥大的信号转导途径中PKCζ与Raf的作用关系。方法:[3H]-亮氨酸掺入反映VSMC蛋白质合成;Western blotting检测ERK1/2和PKCζ表达;免疫共沉淀实验检测信号分子间的相互作用。结果:AngⅡ刺激可引起VSMC[3H]-亮氨酸掺入显著增加,PKC非特异性抑制剂和PKCζ假底物抑制剂(PS-PKCζ)均明显抑制AngⅡ引起的作用。PS-PKCζ预处理使AngⅡ刺激VSMC的ERK1/2磷酸化水平明显降低。转染dominant negative Raf(Raf S621A)质粒的VSMC中的PKCζ磷酸化水平与转染野生型Raf质粒无明显差异。AngⅡ刺激使Ras与Raf结合增加,但PKCζ抑制剂不影响AngⅡ引起的Raf与Ras的结合。转染Raf S621A抑制Raf活化后,AngⅡ引起的ERK1/2磷酸化水平降低。结论:在VSMC中,PKCζ亚型参与AngⅡ诱导的VSMC蛋白合成,但PKCζ可能通过非依赖Raf的途径激活ERK1/2。     

HO通过减少ROS生成抑制AngⅡ的致血管平滑肌细胞增殖肥大

目的:观察血红素加氧酶（HO）在AngⅡ致血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和肥大中的作用并探讨其可能机制。方法:（1)免疫印迹法测定平滑肌细胞HO-1蛋白表达水平;（2）β-液体闪烁记数仪测定［3H］-TdR和［3H］-亮氨酸掺入量;（3)乙酰乙酸双氯荧光素（DCFH-DA）法测定平滑肌细胞内活性氧（ROS）水平。结果:（1) Hemin组HO-1蛋白表达水平与对照组和AngⅡ组相比均明显升高（P<0.01）。（2）AngⅡ使血管平滑肌细胞［3H］-TdR和［3H］-亮氨酸掺入量较对照组分别升高20.7％和18.0％（P<0.01）,而给予HO底物Hemin则抑制了［3H］-TdR和［3H］-亮氨酸掺入量的增加, 给予HO的抑制剂ZnPPIX则可以促进AngⅡ所致的［3H］-TdR、［3H］-亮氨酸掺入量的增加。(3) AngⅡ组ROS水平明显高于对照组（P<0.01）;Hemin组ROS水平较AngⅡ组降低了62.7％,而ZnPPIX组高于AngⅡ组39.5％。结论:HO可抑制AngⅡ所导致的VSMCs的增殖和肥大,其机制可能与减少细胞内ROS生成有关。     

伊贝沙坦对血管紧张素Ⅱ所致心肌细胞蛋白质合成和肌球蛋白重链表达的影响

目的 观察伊贝沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所致心肌细胞中蛋白质合成速率及肌球蛋白重链(MHC)基因表达改变的影响.方法 以AngⅡ及伊贝沙坦分别或同时作用于培养的细胞.采用放射性同位素[3H]-leu掺入法检测培养心肌细胞蛋白质合成速率.应用荧光定量PCR方法检测心肌细胞心房利钠肽因子(ANF)以及α-MHC、β-MHC的表达.结果 AngⅡ处理使心肌细胞中[3H]-Leu掺人增加(P＜0.05),同时ANF mRNA的表达明显高于正常(P＜0.05);α-MHC mRNA的表达显著低于正常(P＜0.05),而β-MHC mRNA的表达显著高于正常(P＜0.05),α-MHC/β-MHC的比值下降(P＜0.05).当伊贝沙坦与AngⅡ共同作用于培养的心肌细胞时,与AngⅡ组比较,[3H]-Leu的掺入明显下降(P＜0.05),与正常组比无统计学意义(P＞0.05);同时ANF的表达下降,与正常组比无统计学意义(P＞0.05);心肌细胞中α-MHC的表达明显增高(P＜0.05),而β-MHCmRNA的表达显著降低(P＜0.05),α-MHC/β-MHC的比值上升(P＜0.05).结论 伊贝沙坦能抑制AngⅡ所致的心肌细胞肥大和细胞中α-MHC向β-MHC表达的转换.     

钙信号机制在神经肽Y诱导心肌细胞肥大中的作用

目的探讨钙依赖的信号转导途径在神经肽Y诱导心肌细胞肥大中的作用.方法用NPY刺激Wistar 乳鼠心肌细胞,并用Ca2+/CaM依赖的钙调神经磷酸酶(CaN)的特异性抑制剂环胞素A(CsA)加以干预.应用3H—Leu 掺入量法测定心肌细胞蛋白质合成速率,用Fluo3-AM荧光标记细胞内游离钙离子,观察不同作用时限内心肌细胞胞浆及核内钙离子浓度变化.结果①心肌细胞3H-Leu掺人量测定:与对照组相比,NPY10nM组3H-Leu掺入量有所增高,但与对照组比无显著差异,而NPY100nM组心肌细胞3H—Leu掺入量较对照组明显增高(p<0.05).CsA组和对照组相比无显著差异.②加入100nmol/L NPY即刻至10min内,心肌细胞胞浆及核内钙含量均无显著差异.经100nmoL/L NPY刺激24h后,心肌细胞胞浆及核内钙含量明显高于对照组(p<0.001,p<0.001).结论NPY刺激心肌细胞蛋白质合成增加,提示NPY可诱导心肌细胞肥大;CaN抑制剂CsA可阻断NPY上述效应,说明Ca2+/CaM依赖的CaN信号途径在其中起重要作用.较长时间的NPY刺激可导致心肌细胞胞浆及核内钙Ca2+浓度增加,这可能是活化CaN信号途径的始动环节.     

神经肽Y活化大鼠心肌细胞内Ca^2＋及钙调素依赖的钙调神经磷酸酶途径

目的 观察神经肽 Y （NPY）对心肌细胞内Ca^2＋及钙调素（CaM）依赖的钙调神经磷酸酶（CaN）信号传导途径的影响.方法 以NPY刺激心肌细胞.用环胞素A（CsA）特异性抑制CaN活性.应用Western印迹测细胞内CaN-α蛋白表达.采用组织化学法测CaN酶活性.用Fluo3-AM荧光标记法观察心肌细胞胞质及核内钙离子浓度变化.结果 加入100 nmol/L NPY刺激后,心肌细胞CaN酶活力较对照组明显增高（P＜0.05）,10 nmol/L NPY组和CsA 组（100 nmol/L NPY ＋ 5 μg/ml CsA） CaN酶活性与对照组相比,差异无统计学意义.100 nmol/L NPY组心肌细胞内CaN-α蛋白表达较对照组显著增高（P＜0.05）. 加入100 nmol/L NPY在10 min内,心肌细胞胞浆及核内钙含量与对照组相比,差异无统计学意义.经100 nmol/L NPY刺激24 h后,心肌细胞胞浆及核内钙含量明显高于对照组（P均＜0.01）.结论 NPY可活化心肌细胞内Ca^2＋及CaM-CaN途径.NPY刺激下产生的细胞内钙增加,可能是其活化CaN途径的始动环节.     

钙信号机制在神经肽Y诱导心肌细胞肥大中的作用

目的探讨钙依赖的信号转导途径在神经肽Y诱导心肌细胞肥大中的作用.方法用NPY刺激Wistar乳鼠心肌细胞,并用Ca2+/CaM依赖的钙调神经磷酸酶(CaN)的特异性抑制剂环胞素A(CsA)加以干预.应用3H-Leu掺入量法测定心肌细胞蛋白质合成速率, 用Fluo3-AM荧光标记细胞内游离钙离子, 观察不同作用时限内心肌细胞胞浆及核内钙离子浓度变化.结果①心肌细胞3H-Leu掺入量测定:与对照组相比,NPY10nM组3H-Leu掺入量有所增高,但与对照组比无显著差异,而NPY100nM 组心肌细胞3H-Leu掺入量较对照组明显增高(p<0.05).CsA组和对照组相比无显著差异.②加入100nmol/L NPY即刻至10min内,心肌细胞胞浆及核内钙含量均无显著差异.经100nmol/L NPY刺激24h后,心肌细胞胞浆及核内钙含量明显高于对照组(p<0.001,p<0.001).结论 NPY刺激心肌细胞蛋白质合成增加,提示NPY可诱导心肌细胞肥大;CaN抑制剂CsA可阻断NPY上述效应,说明Ca2+/CaM依赖的CaN信号途径在其中起重要作用.较长时间的NPY刺激可导致心肌细胞胞浆及核内钙Ca2+浓度增加,这可能是活化CaN信号途径的始动环节.     

参麦注射液对AngⅡ诱导培养心肌细胞凋亡的影响

目的:观察参麦注射液对血管紧张素-Ⅱ(AngⅡ)诱导培养心肌细胞凋亡的影响。方法: 乳鼠心肌细胞原代培养,MTT法观察参麦注射液对培养心肌细胞活力的影响;荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡,Fluo-3荧光探针标记测定钙离子荧光强度。结果: AngⅡ(10^-7mol/L)孵育48 h后心肌细胞凋亡明显多于对照组(P＜0.05);参麦注射液(0.5 g/L、1.0 g/L)组心肌细胞活力显著高于AngⅡ组(P＜0.05);参麦注射液(1.0 g/L)组AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡率明显低于AngⅡ组(P＜0.05),AngⅡ所导致的心肌细胞内钙超载明显轻于AngⅡ组(P＜0.01)。结论: 参麦注射液对AngⅡ诱导的细胞凋亡具有明显的抑制作用,其机制可能与其抑制心肌细胞内钙超载有关。