基于ITS2序列SNP位点鉴定白及药材及其混伪品

为建立白及药材的分子标记鉴定方法,该文提取白及及其混伪品药材的基因组DNA,利用PCR技术扩增rDNA ITS2片段,片段经双向测序、排序、比对,构建邻接树,查找SNP位点。结果显示,ITS2序列不仅能够有效地区分白及与其混伪品,而且存在可用作白及、黄花白及与其混伪药材鉴别的SNP位点。针对标记白及药材的SNP位点设计引物,通过筛选引物和优化特异性扩增条件后,获取引物BJ59-412F,BJ59-412R,HHBJ-225R在同一扩增条件下,可有效扩增白及、黄花白及,其产物长度分别约为350,520 bp,而混伪品则无PCR条带产生。该文所述引物和建立的反应条件可成功将白及、黄花白及与其混伪品药材进行同步鉴定,操作快速、简捷,结果可靠,可作为白及药材的快速分子鉴定方法。     

基于SNP位点鉴定藏菖蒲及其近缘种

目的：采用DNA条形码技术和SNPs技术,快速准确鉴定藏菖蒲及其近缘种、混伪品。方法：提取藏菖蒲及其近缘种的全基因组DNA,扩增内部第二转录间隔区（internal transcribed spacer 2,ITS2）并测序,测序结果用CodonCode Aligner 4.2.7拼接;基于隐马尔科夫模型（Hidden Markov Model,HMM）注释ITS2,采用MEGA5.1进行序列比对,SNP位点查找、种内主导变异分析和系统进化树构建。结果：通过对藏菖蒲同属近缘种的96条ITS2序列进行分析,发现第23位和212位存在稳定的SNP位点,可准确鉴定藏菖蒲;藏菖蒲ITS2序列的种内变异很小,仅在158位存在一个多拷贝位点。结论：该方法快速、准确、特异性强,可用于藏菖蒲的鉴定。     

砂仁的药源调查和商品鉴定

通过调查砂仁主产区药源,并对全国7个省区收集的砂仁商品进行鉴定,结果表明：目前市场流通的商品药材主要来自阳春砂Amomunm villosum、绿壳砂A.villosum var.xanthioides和海南砂A.longiligulare等3种的干燥成熟果实或种子。云南及广东产的阳春砂为砂仁的主流商品。     

砂仁药材质量标准研究

目的：对不同品种、不同产地砂仁药材以及砂仁药材不同部位进行系统的质量标准研究。方法：气相色谱法,水分测定法,灰分测定法。结果：不同品种、不同产地砂仁药材以及砂仁药材不同部位中乙酸龙脑酯含量有明显差异,并与其传统疗效一致;制订了砂仁药材中总灰分、酸不溶性灰分和水分含量的标准。结论：砂仁药材的质量标准研究应选择乙酸龙脑酯为指标并规定其限量。     

基于ITS2 序列鉴定南北葶苈子药材及其混伪品

目的：利用ITS2 序列对多基原药材葶苈子及其混伪品进行分子鉴定,以保证药材质量及临床疗效。方法：提取46 份葶苈子药材及其混伪品的DNA,通过聚合酶链式反应（PCR）扩增其ITS2 序列并双向测序,应用CodonCode Aligner v 4.25 对测序峰图进行校对拼接,并去除低质量序列及引物区,得到ITS2 序列。用MEGA 6.0 软件计算物种种内和种间Kimura 2-parameter（K2P）遗传距离,分析变异位点并构建邻接（NJ）系统聚类树,综合应用相似性搜索法、最近距离法以及NJ 系统发育树等进行鉴定分析。结果：葶苈子的基原植物播娘蒿和独行菜的种内最大K2P 遗传距离分别为0.021 和0.010,均小于其与混伪品之间的种间最小K2P 遗传距离;NJ 树结果显示播娘蒿和独行菜各自聚为一支,表现出良好的单系性,均可与混伪品明显区分开。结论：以上几种鉴定方法分析结果表明,ITS2 序列能准确鉴别南北葶苈子药材与混伪品,为保障临床安全用药提供了新的技术手段。     

基于ITS2序列的维吾尔药材蜀葵及其近缘种鉴定研究

目的:研究蜀葵与药蜀葵特征DNA序列的差异,为鉴定维吾尔药材蜀葵及药蜀葵提供依据。方法:采用试剂盒法提取蜀葵及药蜀葵基因组DNA,PCR扩增ITS2片段,双向测序,应用Mega6.0软件分析序列,计算种内及种间遗传距离,构建NJ鉴别树。结果:蜀葵ITS2序列长度为233 bp,与药蜀葵231~232 bp存在差异;蜀葵种内最大K2P遗传距离为0.004,药蜀葵种内K2P遗传距离为0,蜀葵与药蜀葵种间平均K2P遗传距离为0.0732;NJ树结果表明蜀葵与药蜀葵均单独聚为一支。结论:ITS2序列可用于维吾尔药材蜀葵真伪鉴定的DNA条形码,为保障临床正确用药提供了新的方法。     

砂仁类药材的性状研究

作者将砂仁类药材正品及其伪品的性状特征进行了比较研究。砂仁的正品为阳春砂、绿壳砂、海南砂、湘砂仁、缩砂密；伪品为红壳砂仁、海南假砂仁、长序砂仁、疣果砂仁、印度砂仁、珠母砂仁、山姜仁、华山姜、艳山美、箭杆风、长柄山姜、光叶云南草寇、草豆蔻、益智。     

维吾尔药材新疆圆柏DNA 条形码鉴定研究

目的：本研究采用形态学与DNA 条形码技术,建立维吾尔药材新疆圆柏Juniperus sabina L.及其混伪品的鉴别方法。方法：随机选择不同产地新疆圆柏及其混伪品的叶片和果实,比较外观差异;采用ITS2 序列对新疆圆柏及其混伪品10 份样品进行PCR 扩增并测序,结合GenBank 获得4 条侧柏ITS2序列,比较14 份样品ITS2 序列种内和种间变异,采用K2P 模型构建NJ 系统树。结果：4 种植物叶片和果实外观相态均有相似之处;DNA 条形码ITS2 序列鉴定结果显示,14 份研究样品ITS2 序列长度均为219 bp,种间最大K2P 距离为0.089。结论：ITS2 序列及NJ 树可将新疆圆柏与3 种混伪品植物区分,为维吾尔药材新疆圆柏的标准化奠定基础。     

苍耳子药材及其混伪品ITS2 序列鉴定研究

目的：应用ITS2 序列快速并准确地鉴定中药材苍耳子,为其药材质量、用药安全提供保障。方法：提取苍耳子药材及其混伪品的基因组DNA、扩增ITS2 序列并测序,采用软件CodonCode Aligner V 4. 2 对测序峰图进行校对拼接,并对峰图进行质量控制。应用MEGA 5.0 软件计算种内种间Kimura 2-parameter（K2P）遗传距离,构建邻接（NJ）系统聚类树。结果：苍耳子药材基原物种种内K2P 遗传距离为0,药材基原物种与其他混伪品的K2P 遗传距离分布于0.009~0.542;NJ 树结果显示苍耳子药材与其混伪品均可明显区分。结论：ITS2 序列适用于中药材苍耳子及其混伪品鉴别,进一步验证了DNA 条形码技术鉴定中药材的有效性。     

基于DNA条形码的藤类药材鉴定

目的:对《中国药典》中记载的14种藤类药材进行分子鉴定。方法:以核基因ITS2片段作为DNA条形码,对研究材料进行PCR扩增并双向测序,所得序列经CodonCode Aligner拼接后,用软件MEGA4.0进行相关数据分析,并构建NJ(邻接)树。结果:14种藤类药材的ITS2序列长度为190-284 bp;各药材种内K2P遗传距离为0-0.053,远远小于种间K2P遗传距离(平均值为0.852,最小值为0.309);由所构建的系统聚类树图可以看出,本研究中具有不同产地来源样品的药材均表现出了单系性,同时又与其它药材明显分开。结论:ITS2序列作为条形码适用于鉴定《中国药典》中藤类药材,在中药材的鉴定领域具有重要的应用前景。     

砂仁及其伪品鉴别方法研究进展

砂仁是常用中药，也是我国“四大南药”之一，市场需求量巨大，而在云南、广东等地的种植量不能满足市场需求，仍需大量进口。由于进口国家豆蔻属植物种类丰富，进口砂仁中掺杂大量近缘种，药材鉴别困难，导致如今砂仁药材市场掺伪现象严重。通过查阅了近40年的文献，对目前市场上主要砂仁伪品进行总结，分析了鉴别砂仁真伪品的主要方法。随着砂仁伪品不断变化，传统性状鉴别、显微鉴别、色谱方法等很难实现砂仁的真伪鉴别，分子鉴别方法能够基本实现砂仁真伪鉴别，市场推广应用不足。若要规范砂仁药材市场，需在药材源头控制的基础上，开发更为简易、普适的鉴别方法，同时也为砂仁临床用药安全提供保障。     

砂仁临床功效探究

系统总结砂仁的临床功效,为临床医生用药提供参考。砂仁的临床功效可概括为:芳香化湿,行气宽中;温中止呕、暖脾止泻;行气安胎,降气祛痰;解酒醒神,防碍助运;润肾达下,化消骨鲠。     

近红外光谱法快速测定砂仁中的水分

目的:运用近红外光谱分析技术(NIRS)快速测定砂仁中水分。方法:采用减压干燥法测定砂仁样品中的水分,用标准归一化法和二阶导数法同时对光谱进行预处理,结合偏最小二乘法(PLS)建立砂仁中水分的近红外定量分析模型。结果:所建模型的校正集内部交叉验证相关系数(R2),校正均方差(RMSEC),预测校正均方差(RMSEP)和性能指数(PI)分别为0.986 7,0.242,0.285,92.5。结论:该方法具有简便、快速、准确、无损等特点,可用于砂仁中水分的快速测定。     

中药砂仁化学成分研究

从阳春砂果实中分得7个化合物,经光谱分析鉴定为龙脑乙酸酯,樟脑,龙脑,β-谷甾醇,香草酸,硬脂酸和棕榈酸,香草酸是首次从本植物分得。用GC-MS分析砂仁挥发油成分,鉴定了57个化合物,其中含量1%以上的有龙脑乙酸酯,樟脑,龙脑,柠檬烯,樟烯,月桂烯,蒈烯-3和α-松油醇等8个化合物。     

砂仁及其混淆品的ITS2序列鉴定

目的 应用内转录第二间隔区(ITS2)序列及其二级结构对砂仁混淆品进行鉴定.方法应用CLUSTALX1.83 软件进行序列比对,比对后的长度为252 bp.用MEGA 4.1计算种间、种内遗传距离,并构建系统进化树.结果ITS2序列可以将砂仁的三个来源阳春砂Amomum villosum、绿壳砂Amomum villo...     

砂仁挥发油抗炎活性谱效关系研究

目的:研究7批不同产地砂仁挥发油气象色谱-质谱联用(GC-MS)指纹图谱与抗炎活性的关系,为揭示砂仁挥发油抗炎物质基础提供依据。方法:7批不同产地的砂仁分别为广西、吴川、蟠龙、春城、永宁的阳春砂,云南、缅甸的绿壳砂,采用GC-MS建立不同产地砂仁挥发油指纹图谱。取昆明种小鼠90只,随机分为9组,分别为模型组,地塞米松组(12.5 mg·kg-1),广西组、吴川组、蟠龙组、春城组、永宁组、云南组、缅甸组(均为3.2 g·kg-1的砂仁挥发油),每组10只,ig给予相应剂量药物,模型组给予等体积的生理盐水,每天1次,连续ig 4 d,经二甲苯造模,测定耳肿胀。数据统计分析后,采用灰色关联度分析法研究谱效关系。结果:建立7批不同产地砂仁挥发油GC-MS指纹图谱,确定了其中13个色谱峰为共有峰,并对各共有峰进行了化学成分鉴定;7批砂仁挥发油均有不同程度的抗炎作用,与模型组比较,广西和春城的砂仁无明显的抗炎作用,其他产地和地塞米松均有明显的抗炎作用(P0.05,P0.01)。13个共有峰与抗炎活性均存在一定的关联度,关联度在0.857~0.734,关联度大小依次为:龙脑芳樟醇樟脑α-松油醇α-香柠烯醇D-柠檬烯乙酸龙脑酯α-檀香醇月桂烯匙叶桉油烯醇α-杜松醇莰烯α-蒎烯。结论:砂仁挥发油抗炎作用为"多成分"共同起效的结果,其中抗炎作用较好的吴川和永宁的阳春砂其龙脑、芳樟醇含量均较高,具有明显的关联度。     

HPLC测定不同产地砂仁中原儿茶酸和香草酸的含量

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定砂仁中原儿茶酸和香草酸的含量,并对不同产地砂仁的原儿茶酸和香草酸含量进行比较。方法:采用Phenomenex Luna C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.1%甲酸水为统计相进行梯度洗脱,柱温35℃,流速0.8 mL·min~(-1),进样体积15μL,检测波长260 nm。结果:原儿茶酸在0.000 7~0.008 9 g·L~(-1)呈良好的线性关系,平均回收率100.4%(RSD 3.2%);香草酸在0.000 6~0.030 3 g·L~(-1)呈良好的线性关系,平均回收率99.3%(RSD 2.8%)。对24批不同产地砂仁样品的原儿茶酸及香草酸含量测定结果进行聚类分析,结果显示不同产地砂仁样品分为两大类,一类为阳春砂与绿壳砂,另一类为进口壳砂仁、艳山姜伪品及加工方式为生晒的云南产阳春砂。结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于不同产地砂仁中原儿茶酸和香草酸含量测定,为鉴别不同产地的砂仁样品提供参考。砂仁中香草酸含量受其加工方式影响含量变化明显。