福建省宫颈癌组织中人乳头瘤病毒DNA相关序列的检测

福建省宫颈癌组织中人乳头瘤病毒ＤＮＡ相关序列的检测牛春燕，林肖玉，李浩，刘宝印，林敏，林玉纯关键词：人乳头瘤病毒ＤＮＡ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ印迹杂交，宫颈癌近年来已普遍认识到人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）是宫颈癌一个重要病因，该病毒细小，既在人类也在动物...     

子宫颈组织中人乳头状瘤病毒的PCR检测

①目的探讨人乳头状瘤病毒１６，１８型（ＨＰＶ－１６，ＨＰＶ－１８）感染与慢性宫颈炎、宫颈癌的关系。②方法聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测２２例正常宫颈、５５例慢性宫颈炎、３０例宫颈癌的子宫颈组织。③结果正常宫颈组织中ＨＰＶ－１６，１８的检出率均为０．００％，慢性宫颈炎分别为１８．１８％和７．２７％，宫颈癌分别为５６．６７％和３．３３％．统计学处理表明，宫颈癌组织中ＨＰＶ－１６的检出率明显高于宫颈炎组织（χ２＝１３．６２４，Ｐ＜０．０１），而且Ⅲ度宫颈糜烂组织中ＨＰＶ－１６的检出率也较Ⅰ，Ⅱ度的检出率高，两者比较差异有显著意义（χ２＝１０．５５０，Ｐ＜０．０１），但不同宫颈疾患组织中ＨＰＶ－１８的检出率无统计学意义。④结论子宫颈癌的发生与ＨＰＶ感染密切相关，以ＨＰＶ－１６尤为明显，ＰＣＲ技术是检测组织中ＨＰＶ－ＤＮＡ的敏感、特异的方法     

子宫颈组织中人乳头状瘤病毒的PCR检测

探讨人乳头状瘤病毒１６，１８型感染与慢性宫颈炎，宫颈癌的关系。方法聚合酶链反应技术检测２２例正常宫颈，５５例慢性宫颈炎，３０例宫颈癌的子宫颈组织。正常宫颈组织中ＨＰＶ－１６，１８的检出率均为０．００％，慢性宫颈炎分别为１８．１８％和７．２７％，宫颈癌分别为５６．６７％和３．３３％。统计学处理表明，宫颈癌组织中ＨＰＶ－１６的检出率明显高于宫颈炎组织，而且Ⅲ度宫颈糜烂组织中ＨＰＶ－１６的检出率也较Ⅰ，     

食管癌及癌旁组织中人乳头状瘤病毒DNA的存在状态

作者以人乳头状瘤病毒(HPV)16DNA为探针,采用斑点杂交及Southern分子杂交技术检测24例食管癌及其相应癌旁组织中的HPV16DNA。结果:在食管癌组织中,HPV 16DNA斑点及Southern杂交的阳性率为50％(12/24),癌旁组织为37％(9/24);经Bam H I酶切的食管癌及癌旁组织中,杂交后出现7.2kb的HPV16DNA特异性阳性区带;经Pst I酶切杂交后出现2.7kb、2.3kb、1.75kb、1.18kb四条HPV16DNA阳性区带;未经酶切者来发现阳性杂交带出现。提示人乳头状瘤病毒基因组确实存在于食管癌及癌旁组织DNA中,且多以整合状态存在。     

宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E7基因的DNA改组

目的 利用DNA改组技术进化人乳头瘤病毒16型E7(HPV16E7)基因,建立HPV16E7基因突变体库.方法 从宫颈癌标本中扩增出HPV16E7基因,用脱氧核糖核酸酶(DNaseⅠ)碎片化该基因,切割成50 bp左右的小片段.这些小片段在不外加引物的条件下,利用PCR反应进行重聚,再将重聚物经过一轮普通PCR扩增.结果 电泳切胶回收获得与原片段大小相当的基因片段,改组结果较为成功.结论 DNA改组在HPV16E7改组中的应用并成功,有利于从HPV16E7基因突变题库中筛选出高免疫原性的基因型别,并为进一步构建HPV治疗性疫苗奠定基础.     

新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型L1基因突变谱分析

目的 探讨新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型L1基因的变异,并预测L1蛋白的功能变化。方法 从19份中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌活检组织标本中提取DNA,以此DNA为模板,PCR扩增HPV16 L1全长基因,PCR产物直接测序或克隆后测序,分析新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织HPV16 L1基因多态性及HPV16 L1蛋白功能的变化。结果 PCR检测结果显示宫颈癌组织中HPV16 L1阳性率为84．21％(16／19);测序和序列分析表明L1基因核苷酸多处发生变异,并引起编码氨基酸的变异,L1基因在核苷酸水平形成上6种突变模式(XJL1-1～XJL1-6),各模式与HPV16原型比较,同源性在99．69％～99．87％之间。XJL1-1发生的4处变异是所有变异序列所共有的,XJL1-2～XJL1-6在XJL1-1变异的基础上增加了不同的变异;在氨基酸水平上形成4种突变模式,其中XJL1—1／2／3突变模式占76．92％(8／13),是突变的主流模式;以上突变引起HPV16 L1蛋白疏水性和抗原性的改变,继而改变了L1蛋白的结构及功能。结论中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌患者组织中HPV16 L1基因发生多位点变异,并形成多种突变模式和突变的主流模式;这些突变引起HPV16 L1蛋白疏水性和抗原性的改变,提示HPV16 L1基因突变可能与HPV16的种系发生以及病毒逃避机体免疫识别有关。     

原位杂交法检测喉癌组织中人乳头状瘤病毒的研究

采用原位核酸杂交技术，地高辛标记人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）６Ｂ／１１，１６／１８型ＤＮＡ作探针，对４４例喉癌石蜡包埋标本中ＨＰＶ－ＤＮＡ同源序列进行了检测，同时用１６例喉息肉石蜡包埋标本作为对照。结果显示：ＨＰＶ６Ｂ／１１杂交阳性者在喉癌组为８／４４（１８．２％），喉息肉组为２／１６，（１２．５％）（Ｐ〉０．０５），ＨＰＶ１６／１８杂交阳性者在喉癌组为１９／４４（４３．２％），喉息肉组为２／１６（１     

宫颈癌癌前病变中人乳头状瘤病毒16整合状态的检测

目的　探讨宫颈癌癌前病变中人乳头状瘤病毒(HPV)16DNA整合入宿主基因组的发生情况。方法　选取 108例细胞学为宫颈癌癌前病变的患者,应用多重聚合酶链反应 (PCR)同时检测液基细胞标本中的HPV16L1、E_2和E_6基因。采用通用引物GP_(5+) /GP_(6+)扩增HPVL1基因保守区的一个长 150bp的片断,以检测HPV的存在。E_2PCR引物目标是HPV整合时最常缺失的E_2开放阅读框(ORF)的特殊区域,E_6引物目标是E6ORF。在游离型中,E_2、E_6拷贝数比例相等;在整合型中,E_2缺失;在游离、整合的混合型中,E2的拷贝数少于E_6。对E_2、E_6的PCR产物凝胶电泳条带的面积灰度值进行半定量分析,从而确定HPV16的整合状态。结果　HPV感染者 62例 (57. 41% );HPV16感染者 32例 ( 29. 63% ),其中 15例 ( 46 .88% )为纯游离型; 13例 ( 40 .62% )为混合型; 4例(12. 50% )为纯整合型。HPV16DNA整合和 /或混合型的比例随宫颈病变级别升高而增加,不同病变之间差异有统计学意义(P<0 .01)。结论　HPV16整合入宿主基因组在部分宫颈上皮内瘤变中即已发生。多重PCR同时检测HPVL1、HPV16E_2、E_6基因以及E_2 /E_6比值,是一种在宫颈细胞学标本中同时检测HPV感染、HPV16感染和HPV16整合状态的简便方法。它可以作为细胞学筛查的一种补充手段,以发现向宫颈高     

聚合酶链反应检测膀胱癌组织中人乳头状瘤病毒DNA

目的：为研究简便，快速，特异，灵敏的检测膀胱癌组织中人乳头状瘤病毒，借以探讨膀胱癌的病因。方法：采用聚合酶链反应技术行人乳头状瘤病毒ＤＮＡ检测。结果：正常膀胱粘膜组织中未检出ＨＰＶ：２０例新鲜膀胱移行细胞癌组织中有８例阳性表达，总阳性率为４０％，按ＷＨＯ分级标准，膀胱移行上皮细胞癌Ｉ级检出率５０％，Ⅱ级４３％，Ⅲ级２０％。结论：正常膀胱粘膜到病变组织ＨＰＶ ＤＮＡ从无到有，说明ＨＰＶ感染与癌的发生     

人乳头瘤病毒、疱疹病毒Ⅱ型及人巨细胞病毒与宫颈癌关系的研究

用人乳头瘤病毒(HPV)16,18,11型、疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)N/BglⅡ,L/HindⅢ片段和人巨细胞病毒(HCMV)DNA等6个核酸探针,通过分子杂交技术对宫颈疾患活检标本进行了检测和分析,结果在同一标本中未发现3种病毒DNA均阳性者,但宫颈癌标本中46%HPV和HCMV DNA同时存在,2例HSV-2 DNA阳性的宫颈癌标本中有1例同时存在HCMV DNA。提示宫颈癌的病毒病因是多因素的,HPV,HSV-2和HCMV均可能有关,在宫颈癌发生过程中3者之间可能有某些内在联系。     

聚合酶链反应检测宫颈癌组织中HPV16DNA相关序列

从石蜡包埋的宫颈癌组织和宫颈上皮瘤样病变(CIN)组织中提取DNA,用聚合酶链反应体外扩增人乳头瘤病毒16型(HPV16)的E6区,然后检测组织DNA中HPV16相关序列,以探讨人乳头瘤病毒16型与宫颈癌发生的关系。共检测标本28份,阳性率为42.9%(12/28)。其中宫颈癌阳性率为47.8%(11/23),高于宫颈上皮瘤样病变的阳性率。表明人乳头瘤病毒16型与人宫颈癌的发生有十分密切的关系。     

宫颈癌及癌前病变中人乳头瘤病毒基因型检测

目的：了解人乳头瘤病毒（HPV）基因型在宫颈癌及癌前病变中的分布。方法：采用PCR方法及限制性片段长度多态性分析（RFLP）对231例宫颈癌及宫颈上皮内瘤变患者进行HPV检测并鉴定基因分型。结果：231例宫颈癌及宫颈上皮内瘤变患者中共检出HPV感染192例（83．1％）,其中宫颈上皮内瘤变Ⅰ（CINⅠ）、宫颈上皮内瘤变Ⅱ-Ⅲ（CINⅡ-Ⅲ）和宫颈癌中HPV检出率分别为62．3％、86．8％和98．2％,之间比较差异有显著性（P〈0．01）。HPV的主要基因型分别为HPV16（47．4％）、HPV18（12．5％）、HPV58（9．9％）和HPV52（6．3％）。结论：宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中HPV感染以16、18、58和52型最为常见。     

RELATIONSHIP BETWEEN CYCLIN G1 AND HUMAN PAPILLOMA VIRUS INFECTION IN CERVICAL INTRAEPITHELIAL NEOPLASIA AND CERVICAL CARCINOMA

CERVICAL carcinoma has a long time or a rever-sal precursor period: cervical intraepithelial ne-oplasia (CIN)·CIN presents a biological con-tinuum·It is believed that CIN may progress to an invasivedisease, remain steady, or even reverse·1It is very im…     

人乳头瘤病毒DNA阳性的外阴,宫颈组织病理学表现

目的 探讨外阴、宫颈人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染与局部组织病理学改变的关系,评价组织病理学检查在ＨＰＶ感染诊断中的意义。方法 采用原位杂交和聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法,对１１２例外阴、宫颈病变进行了ＨＰＶ６Ｂ／１１、１６、１８型ＤＮＡ检测,并对ＨＰＶ ＤＮＡ阳性的病变进行组织病理诊断。结果 ＨＰＶ ＤＮＡ阳性者８２例,占７３．２１％,８２例中,组织病理诊断为尖锐湿疣者２２例,其余６０例组织病理学均无     

用原位杂交技术检测人子宫颈癌组织中HPV16E_6转化基因的研究

应用地高辛非放射性标记与检测系统制备人乳头瘤病毒１６型Ｅ６（ＨＰＶ１６Ｅ６）转化基因ＤＮＡ探针，经用斑点杂交检测，探针特异性强，灵敏度达０．１ｐｇ，应用组织切片原位杂交技术检测了４４例子宫颈癌组织。结果表明，ＨＰＶ１６Ｅ６阳性２７例、占６１．３６％，５例正常对照子宫颈组织中未检出。提示ＨＰＶ１６Ｅ６转化基因与子宫颈癌密切相关，为阐明子宫颈癌的病因和ＨＰＶ１６Ｅ６在诊治子宫颈癌中的作用提供了理论依据。     

用聚合酶链反应检测宫颈癌组织中人巨细胞病毒DNA相关序列

为建立检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的ＰＣＲ方法并探讨ＨＣＭＶ与宫颈癌的关系，从石蜡包埋和活检宫颈癌组织中提取ＤＮＡ，用聚合酶链反应体外扩增ＨＣＭＶＥｃｏＲＩＤ片段上一段长１５２ｂｐ的核酸序列，再用地高辛末端转移酶标记法标记和扩增片段互补的ＨＣＭＶ寡核苷酸探针，用该探针证实扩增片段的特异性。检测宫颈癌标本４３例，阳性率为２５．６％（１１／４３），正常宫颈组织８例，阳性率为０。宫颈癌标本阳性率高于正常宫颈标本，提示ＨＣＭＶ与宫颈癌的发生有关。     

人类乳头瘤病毒基因分型及结果分析的临床意义

目的 研究本地区HPV感染及基因类型分布情况,探讨其对宫颈癌防治的意义.方法 对2009年10月至2010年10月来本院就诊的624例患者进行HPV分型检测,共检测2种低危型和13种高危型.结果 624例患者中,HPV阳性率为34.62％(216/624),其中低危型占76％(164/216),HPV 6为高发型,人群以40岁以下为主;高危型占24％(52/216),HPV 16,58,18为高发型,人群以40岁以上为主.结论 本地HPV感染基因型以6,16,18,58为主,应针对此采取措施,防治相关疾病.     

人乳头瘤病毒16型DNA转化人胚肺细胞的实验研究

人乳头瘤病毒(HPV)的16,18,31,33型等与宫颈癌的发病有关,其中HPV16与宫颈癌关系密切。为进一步研究HPV16的致癌性,我们用克隆的HPV16 DNA(2μg/10~5细胞)转染体外培养的人胚肺细胞,并进行了细胞存活时间、血清依赖性、着壁依赖性、间接免疫酶检测、HPV16 DNA、同源序列检测、染色体核型等生物学的研究。结果表明,转染细胞存活时间延长、在软琼脂培养基中形成集落、HPV16特异抗原得以表达、HPV16 DNA的同源序列存在于细胞中。表明本实验用HPV16DNA转染的人胚肺细胞具备转化细胞的某些特征,HPV16有使人胚肺细胞转化的作用。     

子宫颈鳞癌 Rb 基因与 HPV16 E7 基因的相关性研究

用多聚酶链反应—单链构象多态性分析（Ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）以及地高辛标记探针斑点杂交技术对３０例子宫颈鳞癌组织中Ｒｂ抑癌基因及ＨＰＶ１６Ｅ７癌基因进行分析。结果３０例子宫颈鳞癌组织中未检出Ｒｂ基因突变或缺失；２０例癌组织中检出ＨＰＶ１６Ｅ７ＤＮＡ，阳性率为６７％。提示ＨＰＶ１６Ｅ７癌基因与子宫颈鳞癌密切相关。子宫颈鳞癌中Ｒｂ基因结构异常并不常见，而且与ＨＰＶ１６Ｅ７基因的存在状况无明显相关性。