运用血清药理学方法探讨滋肾降糖丸对小鼠MSC成骨分化的影响及其机制

目的：运用血清药理学方法研究滋肾降糖丸对小鼠骨髓基质干细胞（MSC）模型成骨分化的作用及其机制。方法：首先空腹6h后的小鼠口服滋肾降糖溶液,剂量为1.5g·kg^-1,随后在0、0.5、1、2和4h不同时间段收集含药血清;随后用茜素红染色和碱性磷酸酶活性检测的方法调查上述含药血清对MSC成骨诱导分化的影响;最后用实时荧光定量PCR的方法进一步调查含药血清对MSC成骨诱导过程中相关关键基因骨形态发生蛋白（BMP2）及成骨特异性转录因子（RunX2）的表达。结果：含药血清可显著促进MSC的成骨分化,以2h后收集的血清效果最强。Q-RT-PCR实验结果显示,2h含药血清显著促进诱导后第3、6dMSC细胞BMP2及RunX2基因的表达。结论：滋肾降糖丸抗骨质疏松的作用可能与上调MSC上BMP2及RunX2的基因表达,从而促进MSC的成骨分化有关。     

滋肾降糖丸对高脂小鼠模型胰岛素敏感性的影响及其机制

目的探讨滋肾降糖丸对胰岛素敏感性的影响及其分子机制。方法建立高脂饲喂的胰岛素抵抗小鼠模型,血生化检测滋肾降糖丸对该模型胰岛素敏感指数的影响,q-PCR检测滋肾降糖丸对该模型肌肉Glut4基因表达的影响。结果滋肾降糖丸显著促进高脂抵抗小鼠模型胰岛素敏感指数,同时显著上调肌肉Glut4 mRNA的表达。结论滋肾降糖丸具有改善胰岛素敏感性的作用,其机制可能与上调肌肉组织中Glut4基因表达有关。     

阿伦磷酸钠对小鼠骨髓基质细胞成骨和成脂分化的影响

目的在离体条件下研究阿伦磷酸钠对小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)成骨和成脂分化的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测阿伦磷酸钠对骨髓基质细胞增殖的影响,碱性磷酸酶(ALP)活性测定法检测阿伦磷酸钠对骨髓基质细胞(MSCs)成骨分化的影响,油红O染色形态学及定量测定法检测阿伦磷酸钠对骨髓基质细胞成脂分化的影响。结果1×10-10,1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6和1×10-5mol.L-1的阿伦磷酸钠可以促进小鼠原代骨髓基质细胞增殖,抑制骨髓基质细胞的成骨分化及成脂分化。结论阿伦磷酸钠对骨质疏松症的预防和治疗作用可能通过抑制骨髓基质细胞的成脂分化,进而减少脂肪细胞细胞因子的分泌而抑制破骨细胞的形成、激活以及骨吸收功能。     

褪黑素对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

目的探讨褪黑素(MT)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化的影响,以及MT的作用机制。方法取大鼠骨髓分离培养BMSCs,经传代脂向分化,分组进行干预。对照组为单纯脂向分化(模型)组;实验A组用MT进行干预;实验B组用MT和其受体拮抗剂2-苯基-N-乙酰色胺(LZD)共同干预。检测脂肪细胞的比例来比较各组的脂化程度,并应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组细胞中成脂转录因子过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)mRNA的表达。结果实验A组脂化程度明显低于对照组和实验B组(P<0.05)。结论MT能抑制BMSCs向成脂方向分化,并通过其受体机制起作用。这可能与骨质疏松的病因学有关。     

蛇床子素对体外培养骨髓基质干细胞增殖与成骨性分化的影响

目的研究蛇床子素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓培养法培养单核层细胞,培养于含10%FBS的DMEM-F12培养液中,3d后首次换液,9d后传代培养。培养基中蛇床子素终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol·L-1。增殖分析采用MTT法,于成骨性诱导培养d4、8、12、16测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量,d15进行钙化结节组织化学染色及计数。成骨性诱导后不同时间点提取Total RNA,RTReal-Time PCR法检测bFGF、IGF-1、Osterix与Runx-2的基因表达情况。结果蛇床子素剂量依赖性抑制BMSCs增殖,但能明显促进其向成骨性分化,表现为提高BMSCs的ALP活性、促进骨钙素分泌、钙盐沉积量、增加钙化结节数量、提高bFGF、IGF-1、Osterix和Runx-2的mRNA表达水平。结论终浓度为1×10-5mol·L-1蛇床子素能明显促进BMSCs的成骨性分化,证明蛇床子素是中药蛇床子抗骨质疏松的有效成分。     

牡荆苷对骨髓间充质干细胞成脂分化的影响简

目的 探讨牡荆苷对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响.方法 采用细胞的增殖检测（MTT）法检测骨髓间充质干细胞生存率,油红O染色检测细胞成脂分化,实时荧光定量PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）和CCAAT增强子结合蛋白α（C/EBPα） mRNA表达.结果 牡荆苷浓度在1～50 μmol/L范围内对骨髓间充质干细胞生存率无显著影响;牡荆苷可抑制骨髓间充质干细胞成脂分化及PPARγ和C/EBPαmRNA表达.结论 牡荆苷可抑制骨髓间充质干细胞成脂分化,其作用机制可能与抑制PPARγ和C/EBPα基因表达有关.     

维生素D对骨髓基质干细胞成骨分化的分子调控研究进展

骨髓基质干细胞(MSCs)是骨髓基质的组成成分,在骨骼的发育和代谢平衡中起重要作用。该文总结并综述了维生素D及其活性形式1,25二羟基维生素D_3[1,25(OH)_2D_3]通过Wnt信号通路、Wnt5a/ROR2轴、BMP/TGF-β/Samd信号通路、ROS/ERK信号通路对MSCs成骨分化的分子调控,阐明了维生素D对MSCs代谢调控的分子信号通路。     

高脂饮食对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏过氧化物酶体增殖物活化受体γ表达的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体(PPARγ)在高脂饮食所致非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝脏的表达及其意义。方法模型组Wistar大鼠给予高脂饮食饲养,分批于实验第4、8、12周处死,设普通饮食饲养大鼠作对照。测定空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS),计算胰岛素敏感指数(ISI);测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG);苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测大鼠肝脏PPARγmRNA的表达。结果模型组大鼠第4周呈现单纯性脂肪肝,第8~12周从单纯性脂肪肝进展为脂肪性肝炎,个别出现肝纤维化;RT-PCR显示,随着造模时间延长,肝脏PPARγmRNA的表达逐渐减弱,于第12周达到最低。结论持续12周的高脂饮食可以成功复制大鼠NAFLD模型;模型大鼠肝脏PPARγmRNA表达随造模时间的延长而逐渐减弱,PPARγ可以通过对胰岛素抵抗的调控参与NAFLD的发生发展。     

川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞的增殖和分化影响

目的研究川续断皂苷Ⅵ(asperosaponinⅥ,ASAⅥ)对3T3-L1前脂肪细胞的增殖及成脂分化影响,以进一步了解其药理作用。方法以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞,通过噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响;不同浓度(0、10、25、50μmol·L-1)川续断皂苷Ⅵ干预3T3-L1细胞的成脂诱导分化,油红O染色检测3T3-L1细胞分化程度;试剂盒测定各组培养液中葡萄糖及游离脂肪酸含量;荧光定量PCR(Q-PCR)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activatedreceptorγ,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT/enhan-cer-binding proteinα,C/EBPα)mRNA表达水平。结果 MTT法测定表明不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响不同,其中10μmol·L-1浓度组作用24 h后促增殖作用最明显,随着川续断皂苷Ⅵ浓度增加,促增殖效应降低;川续断皂苷Ⅵ能够剂量依赖性的抑制3T3-L1细胞成脂,减少细胞内脂滴聚集,抑制细胞对葡萄糖的吸收利用,减少游离脂肪酸形成,下调成脂过程中PPARγ和C/EBPαmRNA表达。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进3T3-L1细胞增殖作用,并通过下调PPARγ和C/EBPα基因抑制3T3-L1细胞成脂分化。     

川续断皂苷Ⅵ对小鼠骨髓基质细胞ST-2 成脂分化的影响及其机制研究

目的观察川续断皂苷Ⅵ（Asperosaponin Ⅵ,ASAⅥ）对脂肪细胞分化的影响及Wnt 通路的调节。方法以小鼠骨髓基质细胞系ST-2 为研究对象,将其分为对照组、成脂分化组以及4 个不同剂量的ASAⅥ组。其中对照组加入溶媒,成脂分化组加入成脂诱导分化试剂,ASAⅥ组除加入成脂诱导分化试剂外,使用不同浓度（10-7、10-6、10-5、 10-4 mol/L）的ASAⅥ干预细胞。各组细胞处理5 d 后,行油红O 染色,观察脂滴形成情况并计算成脂率进行定量分析;荧光定量PCR（FQ-PCR）检测成脂相关基因PPARγ、FABP4 和Wnt/β-连环素（β-catenin）通路蛋白β-catenin 的 mRNA 表达水平;Wnt 通路抑制剂DKK1 干预诱导成脂分化的ST-2 细胞5 d,FQ-PCR 检测ASAⅥ所调节的 PPARγ、FABP4 和β-catenin mRNA 表达水平。结果与成脂分化组相比,10-5 mol/L 和10-4 mol/L ASAⅥ组中分化的脂肪细胞显著减少,10-5、10-4 mol/L ASAⅥ明显抑制PPARγ、FABP4 的mRNA 表达,但上调β-catenin mRNA 表达。 DKK1 能够逆转ASAⅥ对ST-2 细胞成脂分化的抑制作用,促进PPARγ、FABP4 的mRNA 表达,抑制β-catenin 的 mRNA 表达。结论ASAⅥ能显著抑制ST-2 细胞的成脂分化,这一作用可能是通过Wnt/β-catenin 通路的激活所介导的。     

人绒毛膜来源的间充质干细胞成骨成脂分化潜能

目的:探讨人绒毛膜来源的间充质干细胞(hCDMSC)体外生长特性和成骨成脂分化潜能,证实人绒毛膜来源的间充质干细胞作为组织工程种子细胞的可行性.方法:取胎盘组织基蜕膜面用胶原酶和胰蛋白酶法分离培养,通过传代扩增观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖曲线,体外向成骨、成脂诱导分化,茜素红和油红O染色鉴定细胞分化能力,RT-P...     

Effect of lead on proliferation and neural differentiation of mouse bone marrow-mesenchymal stem cells

Bone marrow-mesenchymal stem cells (MSCs) are considered to be an ideal source of stem cells for assessing the effects of environmental toxins on the proliferation, multipotency and differentiation of adult stem cells. The aim of this study was to investigate the effect of lead on the proliferation and neuronal differentiation of murine MSCs. MTT assay used in this study revealed that while the proliferation of MSCs is sensitive to higher than 10 μM lead, a 50% reduction in the rate of their proliferation can be achieved in the presence of 60 μM lead. The results of immunocytochemistry and RT–PCR showed that β-mercaptoethanol induced-neuronal differentiation is also reduced after the treatment of MSCs by 60 μM lead. Furthermore, the comet assay analysis of MSCs showed a substantial increase in DNA damage in the lead treated cells compared to the control. In conclusion our results revealed for the first time that lead is not only cytotoxic to the survival and proliferation of MSCs but also inhibits their differentiation to neurons in a dose-dependant manner. Therefore, MSCs appear to be an alternative method for assessing the cytotoxic effects of such environmental hazards.     

大鼠脂肪干细胞的体外分离培养及对脂肪颗粒移植的影响

目的分析体外大鼠脂肪干细胞(ADSCs)混合脂肪移植后的存活情况。方法无菌条件下切取大鼠腹股沟脂肪组织,消化、分离培养得到第3代ADSCs,行成骨诱导(茜素红染色)和成脂诱导(油红O染色)。用CM-Dil荧光标记第3代ADSCs,24只大鼠每只背部皮下3处分别植入1.5ml脂肪颗粒、1.5ml荧光标记的ADSCs(密度为5×107个细胞/ml)和0.9ml荧光标记的ADSCs+0.6ml脂肪颗粒。术后2周、1个月和3个月每次取出8只大鼠的移植物,石蜡切片HE染色观察病理变化,冰冻切片荧光显微镜下观察ADSCs定位。结果 ADSCs成骨诱导2周后茜素红染色阳性,成脂诱导3周后油红O染色阳性。ADSCs与脂肪颗粒混合移植能明显改善脂肪组织的病理学变化。结论体外分离培养的大鼠ADSCs具有成骨、成脂分化的潜能,能改善脂肪颗粒移植时的脂肪组织的液化吸收现象。     

桂枝茯苓丸对前列腺增生模型小鼠的影响研究

目的:研究桂枝茯苓丸对前列腺增生模型小鼠的影响。方法:ip丙酸睾酮素复制小鼠良性前列腺增生模型。给药组分别ig给予桂枝茯苓丸高、中、低剂量;并用前列康作阳性对照。于末次给药24h后处死动物,取前列腺称量其湿质量,并进行病理学检查。结果:桂枝茯苓丸给药组小鼠前列腺指数均显著低于模型组(P<0.01);病理镜检显示桂枝茯苓丸给药组前列腺减轻,同时可见坏死灶的形成和大量的腺体上皮细胞脱落到腺腔内或凋亡,尤以高、中剂量组最为显著。结论:桂枝茯苓丸可显著抑制小鼠前列腺增生。     

人脐带问充质干细胞体外培养、鉴定及其诱导分化的研究

目的通过体外分离、培养及鉴定人脐带间充质干细胞（humanumbilicalcordmesenchymalstemcells,hUCMSCs）,探讨其多向分化潜能。方法取正常足月新生儿脐带,采用组织贴壁培养法分离原代hUCMSCs,观察细胞生长形态。采用流式细胞仪技术检测hUCMSCs细胞表型及细胞周期。通过成神经细胞诱导和成脂肪细胞诱导,鉴定hUCMSCs的多向诱导分化能力。结果成功分离和培养hUCMSCs原代细胞,经流式细胞仪鉴定高表达间质细胞标志CD44和CDl05,阳性率为96．73％和96．10％,整合素受体CD29阳性率为99．53％;低表达造血系标志CD34和CD45阳性率为0．80％和1．91％,人白细胞抗原HLA-DR阳性率为1．41％。细胞周期检测hUCMSCs主要处于G0／G1期。hUCMSCs成神经细胞诱导,出现神经元样细胞;免疫组化检测神经巢蛋白（Nestin）呈阳性表达。hUCMSCs成脂肪细胞诱导,出现空泡样脂肪滴,油红O染色可见脂质沉积。结论hUCMSCs具有多向分化潜能,可跨胚层诱导分化为多种组织类型的细胞。     

中药制剂苓槐丸提取物对小鼠过敏性皮炎的治疗作用及机制研究

目的研究中药制剂苓槐丸对过敏性皮炎的治疗作用及机制。方法制备苓槐丸甲醇提取物（MELH）,观察其对过敏性皮炎模型鼠耳肿胀程度及炎症因子释放的影响;而后,检测MELH 对肥大细胞RBL鄄2H3 脱粒作用及细胞信号通路的影响。结果MELH 可有效抑制过敏性皮炎模型鼠耳炎症性肿大（P 〈0. 05）,及抑制鼠耳组织中IFN-γ和TNF-α水平升高（P 〈0. 05）。MELH 可剂量依赖性抑制佛波酯（PMA）和钙离子载体（A23187）联合引起的RBL鄄2H3 细胞的组胺释放（P〈0. 05）和p38 MAPK 磷酸化。结论MELH 通过抑制T 细胞炎症因子的释放、肥大细胞脱粒作用及p38 MAPK 通路的活化,阻止T细胞向Th1免疫偏离,总体说苓槐丸可起到明显的抗过敏性皮炎作用。