慢性氟中毒对大鼠神经细胞线粒体分裂蛋白Drp1表达的影响

目的 研究慢性氟中毒大鼠大脑皮质神经细胞线粒体分裂基因动态相关蛋白1(Drp1)表达的改变.方法 将120只SD大鼠(1月龄、体重100 ～ 120 9)以单纯随机法分为3组(对照组、低氟组和高氟组),每组40只,各组染毒剂量以饮水中加入氟剂量计算:分别为0、10和50 mg/L;染毒3个月和6个月时,每组分别处死20只.采用免疫组织化学方法和免疫蛋白印迹法(western-blotting)检测线粒体分裂蛋白Drp1表达.结果 3个月时,Drp1的蛋白免疫组织化学强阳性表达神经细胞个数发生了改变,与对照组[(36.3±5.8)个]相比较,低氟组[(34.7±4.1)个]的改变无统计学意义(t=1.5,P＞0.05),而高氟组[(45.0±4.7)个]表达增加(t=8.8,P＜0.05);westernblotting法蛋白印迹平均灰度值也具有相同的改变,与对照组(0.59±0.03)相比,低氟组(0.62±0.03)和高氟组(0.71±0.02)的水平升高(t值分别为0.02、0.11,P值均＜0.05).6个月时,Drp1的蛋白免疫组织化学强阳性表达神经细胞个数发生了改变,与对照组[(33.2±4.4)个]相比较,低氟组[(36.6±3.8)个]和高氟组[(39.4±4.2)个]升高(t值分别为3.5,6.3,P值均＜0.05);westernblotting法蛋白印迹平均值也有改变,与对照组(0.65±0.06)相比,低氟组(0.80±0.09)和高氟组(0.76±0.08)的水平升高(t值分别为0.1、0.1,P值均＜0.05).结论 高剂量染氟可造成分裂基因Drp1表达改变,慢性氟中毒神经细胞损伤可能与线粒体分裂亢进有关.     

复方中药对慢性氟中毒大鼠氟骨症的骨形态计量学影响

目的 评价复方中药制剂对慢性氟中毒大鼠骨氟症的治疗效果。方法 取断乳2周的纯系Wistar大鼠88只,体重为（91.1±10.0） g,按体重应用随机数字表法分为对照组16只、中氟组(染氟剂量50 mg/kg)24只、高氟组（染氟剂量100 mg/kg)24只、高氟低钙低蛋白组（染氟剂量100 mg/kg,且蛋白质与钙的含量为中氟组和高氟组的一半)24只。染氟6个月后,各组采用股动脉放血法处死8只;染氟组余下的16只大鼠再分为2个小组,一组为持续染氟阳性对照组,另一组模拟氟病区实际情况,在持续染氟的基础上应用复方制剂进行治疗;分别在治疗前、治疗后30 d和60 d时收集大鼠24 h尿样。在灌服90 d时,处死大鼠,并分离四肢骨。尿氟含量用氟离子选择电极法测定。骨氟含量采用高温灰化-氟离子选择电极法法测定。用Micro-CT（显微CT）技术检测大鼠四肢骨骨矿物质密度（BMD）、组织骨密度（TMD）、结构模型指数（SMI）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁分离度（Tb.Sp）、各向异性（a1/a3）、骨小梁连接密度（Conn.D）、骨小梁与全部骨组织体积比（BV/TV）、骨表面积与体积比（BS/BV）、骨小梁数目（Tb.N）。结果 应用复方中药治疗60 d时,中氟治疗组、高氟治疗组和高氟低钙低蛋白治疗组尿氟均低于相应的阳性对照组。用药90 d时,各治疗组骨氟亦低于相应的阳性对照组;中氟治疗组Conn.D［(1 443.81±684.09) mm-3］低于中氟阳性对照组［(2 403.68±124.02) mm-3］;高氟治疗组TMD［(500.16±85.63) mg/cc］、Conn.D［(856.22±329.92) mm-3］和BV/TV(0.44±0.04)低于相应的高氟阳性对照组［(639.96±9.51) mg/cc, (1 325.61±113.06) mm-3, (0.49±0.00)］。结论 综合尿氟、骨氟及四肢骨BMD、BV/TV等指标改变,提示该复方中药对大鼠氟骨症具有一定的治疗效果。     

豆浆对慢性氟中毒大鼠血清氟及骨氟含量的影响

目的研究豆浆对慢性氟中毒的影响。方法以雌性Wistar大鼠24只按体重随机分为3组，每组8只，实验周期为180d。第1组为正常水对照组：自由饮用正常水（0 mmolF／L）；第2组为豆浆干预组：自由饮用3．42mmolF／L含氟水＋豆浆（平均每日 10ml／只）；第3组为染氟组：自由饮用3.42 mmolF／L含氟水。实验180d后测其血清氟及骨氟含量。结果染氟组大鼠血清氟和骨氟含量均明显高于正常水对照组和豆浆对照组，差异有显著性（P〈0．05），豆浆干预组血氟明显下降，与染氟组比差异有显著性（P〈0．05），但骨氟含量与染毒组比较差异无统计学显著性。结论豆浆可能具有降低血氟作用：     

氟对大鼠肝功及GSH-Px基因表达影响

目的探讨不同浓度氟对大鼠肝功和谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)基因表达及肝细胞超微结构影响。方法在饮水中加入不同剂量氟化钠喂饲大鼠30 d后,测定血清氟含量、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力、肝组织中GSH-Px活性及mRNA表达,观察大鼠肝细胞超微结构。结果随染氟剂量增加,各剂量组大鼠血氟浓度逐渐增加,血清中AST、ALT含量逐渐增加,呈剂量-效应关系(R=0.889,R=0.729,P0.01);GSH-Px酶活力单位从(19.672±1.025)下降至(11.777±1.529),与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01);GSH-Px的mRNA表达下降(P0.05)。中、高剂量组大鼠肝细胞超微结构可见线粒体肿胀,有较多脂肪变性。结论过量氟可能诱导GSH-Px的mRNA表达下降,使大鼠肝脏抗氧化系统受到抑制。     

慢性氟中毒对大鼠肾脏氧化应激反应的影响

探讨慢性氟中毒对大鼠肾脏氧化应激反应的影响。健康大鼠随机分为4组,计算脏器系数;测定肾脏CAT、NOS活性及MDA和NO含量。CAT和NOS活力和NO含量降低,MDA升高。氧化应激效应增强可能是氟致肾脏损伤机制之一。 更多还原     

慢性氟中毒大鼠氟、抗氧化酶类变化及硒的影响

Ｗｉｓｔａｒ大鼠饮１．５８、２．６３ｍｍｏｌ／Ｌ高氟水１４个月造成慢性氟中毒，另２组大鼠在饮高氟水同时加饲２．０ｍｇ／ｋｇ硒饲料。在氟中毒不同时期分３批测其血清、尿液氟（Ｆ）、硒（Ｓｅ）含量；全血、血清、肝、肾脏谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性；还原、氧化型谷胱甘肽（ＧＳＨ、ＧＳＳＧ）和脂质过氧化物（ＬＰＯ）含量。结果：氟中毒大鼠尿、血Ｆ升高；血清、组织ＬＰＯ在氟中毒早、中、晚期持续升高；ＧＳＨ－Ｐｘ、ＳＯＤ和ＧＳＨ早期上升，中、晚期明显下降。提示氟中毒大鼠存在明显脂质过氧化损伤，抗氧化酶类和抗氧化剂表现为从代偿到失代偿，最终造成自由基代谢紊乱。补Ｓｅ后氟中毒大鼠尿Ｆ排泄，血Ｆ下降；ＧＳＨ－Ｐｘ、ＳＯＤ和ＧＳＨ恢复，ＬＰＯ下降。此与Ｓｅ拮抗高Ｆ及对抗氧化酶类、抗氧化剂和脂质过氧化物产生直接或间接作用有关。     

慢性氟中毒大鼠体氟积累排泄动态变化及硒的影响

Ｗｉｓｔａｒ大鼠饮３０和５０ｍｇ／Ｌ高氟（Ｆ）水造成慢性氟中毒，同时另外两组大鼠饮高Ｆ水、饲２ｍｇ／ｋｇ加硒（Ｓｅ）饲料。１年内每月测饮水、摄食和排尿量，而后计算其日平均摄Ｆ、排Ｆ量，并每月测尿液Ｆ含量。喂养至４、８、１４个月时将大鼠分３批处死，测尿液、肝脏、血清Ｓｅ和骨骼、肝脏、肾脏、血清Ｆ含量。结果两组氟中毒大鼠与对照组比较摄Ｆ量升高，排Ｆ／摄Ｆ比值降低。尿Ｆ的升高与水Ｆ浓度及饮Ｆ时间呈正相关。骨、肝Ｆ大量蓄积出现于氟中毒中期，血Ｆ在氟中毒晚期明显上升。同未加Ｓｅ氟中毒大鼠比较，两组加Ｓｅ组大鼠尿、肝、血Ｓｅ升高。与此同时大鼠摄食、饮水状况改善，体重增加；排尿量升高；尿Ｆ排泄量和排Ｆ／摄Ｆ比显著提高；同时骨、肝、肾和血清Ｆ含量降低。     

燃煤型氟中毒对大鼠骨骼组织形态计量学影响

目的 探讨燃煤型氟中毒对大鼠骨组织形态计量学影响。方法 建立低蛋白低钙条件下燃煤型氟中毒大鼠模型;测定大鼠24 h尿氟、骨氟,根据氟斑牙判断损伤程度;采用X线骨密度仪测定大鼠股骨及胫骨骨密度;扫描电子显微镜下观察大鼠股骨松质骨超微结构的形态学改变,观察大鼠胫骨上端骨形态静态计量学参数改变。结果 染氟组大鼠100%发生氟斑牙;染氟组大鼠骨氟含量[(199.90±106.84) mg/kg]与骨密度(0.205 3 g/cm²)明显高于对照组[分别为(30.06±6.11) mg/kg、0.185 4 g/cm²],差异有统计学意义(P<0.05);形态计量学结果显示,染氟组大鼠胫骨上端骨小梁面积[(67 612.02±1 662.23)mm²]、骨小梁周长[(7 655.44±918.05)mm]、骨小梁个数[(38.25±4.99)个/mm]均明显高于对照组[分别为(50 951.43±9 046.88)mm²、(5 172.42±789.70)mm、(27.75±4.19)个/mm](均P<0.05)。结论 单纯低蛋白低钙条件下,过量氟暴露可导致大鼠骨形态计量学出现以骨软化为主的病理改变。     

氟对大鼠骨组织RBPJ及相关基因表达影响

目的 观察氟中毒大鼠骨组织中核转录抑制因子(RBPJ)、Jag1和Hes5蛋白表达变化,探讨Notch通路与氟骨症关系。方法 成年SD大鼠24只,随机分为3组:对照组(饮水含氟<1 mg/L),低、高氟组(饮水含氟50、100 mg/L),每组8只;饲养6个月后,收集尿液和骨组织,测定尿氟和骨氟,观察骨组织学变化并测定骨组织系列形态学指标,免疫组化法检测成骨细胞中RBPJ、Jag1和Hes5蛋白表达,免疫印迹法和实时荧光定量法分别检测骨组织RBPJ、Jag1和Hes5蛋白与mRNA表达量。结果 与对照组比较,低、高氟组大鼠尿氟和骨氟[分别为(11.80±1.08)、(18.08±1.13)mg/L和(5974.76±2036.13)、(7996.51±2669.93)μg/g)]均升高(均P<0.05);染氟组大鼠骨组织呈骨质硬化病理改变;与对照组比较,低、高氟组大鼠骨组织RBPJ蛋白表达[分别为(4.985±0.913)、(4.279±1.507)]均升高,高氟组Jag1、Hes5蛋白表达[分别为(0.112±0.024)、(0.128±0.039)]均降低(均P<0.05);与对照组比较,高氟组大鼠骨组织Jag1、RBPJ mRNA表达量[分别为(0.0057±0.0054)、(0.0055±0.0044)]降低(均P<0.05)。结论 过量氟抑制Notch通路信号,使该通路下游靶基因表达受到抑制,从而促进成骨作用,参与氟骨症发病过程。     

铝对大鼠神经细胞线粒体氧化磷酸化功能的影响

目的探讨铝中毒对神经细胞线粒体氧化磷酸化功能的影响。方法Wistar大鼠37只,分对照组、氯化铝低剂量组、氯化铝高剂量组,饲养3个月,建立铝中毒模型。氧电极法及华氏(Warburg)检压法测定线粒体的耗氧量、呼吸控制率(RCR)和二磷酸腺苷/氧(ADP/O)比值。以RCR评价线粒体的完整性及程度,用ADP/O评价线粒体氧化磷酸化的效率。结果低剂量组、高剂量组与对照组比较,ADP/O、RCR显著降低(P<0.01),高剂量组与低剂量组比较,ADP/O显著降低(P<0.01)。氧电极法呼吸Ⅲ态(R3)耗氧量低剂量组与对照组比较显著升高(P<0.01),高剂量组与低剂量组比较显著降低(P<0.01);呼吸Ⅳ态(R4)耗氧量低剂量组、高剂量组与对照组比较显著升高(P<0.01)。华氏检压法耗氧量低剂量组、高剂量组与对照组比较显著升高(P<0.01),高剂量组与低剂量组比较显著降低(P<0.05)。结论低剂量铝染毒时线粒体氧化磷酸化部分解偶联,脑细胞轻度损伤,为可逆性变化。而高剂量铝染毒时线粒体氧化磷酸化效率很低,脑细胞损伤严重,线粒体损伤十分明显,可能是不可逆性变化。     

慢性氟中毒大鼠骨组织形态计量学改变及血清骨代谢标志物表达

目的探讨慢性氟中毒大鼠骨组织病理形态学改变及与氟性骨损伤相关的骨代谢标志物的改变。方法 48只健康SD大鼠随机分为4组,对照组饮用自来水,低氟组、中氟组、高氟组分别饮用含50 mg/L、150 mg/L和250 mg/L氟化钠的自来水。饲养6个月后,检测氟斑牙发生率,氟离子选择电极法检测各组大鼠尿氟、骨氟、血氟含量;取大鼠股骨干骺端进行苏木精—伊红染色,光镜观察骨组织形态学改变;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清骨代谢标志物含量。结果大鼠体重、氟斑牙发生情况与氟负荷量的变化:低中氟组雌鼠体重增幅较对照组小,高氟组雌鼠体重增幅较对照组大;高氟组雄鼠体重增幅小于对照组、低、中氟组雄鼠。各染氟组大鼠氟斑牙检出率、尿氟、骨氟和血清氟含量均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),而且随染氟剂量增高,氟斑牙严重程度、尿氟、骨氟和血清氟呈上升趋势。大鼠股骨组织形态计量学结果:中、高氟组雌雄大鼠的骨皮质厚度均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),中、高氟组雄鼠骨小梁面积大于对照组,差异有统计学意义(P0.05);低氟组雌雄鼠骨小梁平均面积均小于对照组,差异有统计学意义(P0.05);低、中、高氟组雌雄成骨细胞数均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。BGP、BALP、PⅠNP检测结果:低、中、高氟组雌雄鼠BGP、BALP、PⅠNP均小于对照组,差异多有统计学意义(P0.05)。CTX-Ⅰ、TRACP-5b检测结果:低、中、高氟组雌雄鼠CTX-Ⅰ、TRACP-5b均小于对照组,差异多有统计学意义(P0.05)。结论经饮水染氟6个月后,反映成骨活性和破骨活性的骨代谢指标在不同剂量组中表现为不同程度下调,骨组织形态计量显示中高氟组大鼠骨量增加;低氟组大鼠则出现骨量减少的指征。提示氟对成骨活性与破骨活性均有影响,且与染氟剂量有关。     

丙烯酰胺亚慢性染毒大鼠脑组织线粒体形态变化对能量代谢的影响

观察丙烯酰胺亚慢性染毒大鼠脑组织线粒体形态变化与能量代谢的关系。42只大鼠随机分组,丙烯酰胺亚慢性染毒。电镜观察脑组织线粒体形态变化,检测ADP和ATP的比值。随染毒时间延长,线粒体形态发生改变,ADP和ATP的比值也逐渐升高。丙烯酰胺可以损伤脑组织中线粒体形态结构,从而影响其正常功能,影响能量代谢。 更多还原     

慢性氟中毒致大鼠肾脏损伤作用

目的 探讨氟致大鼠肾损伤的分子机制.方法 将大鼠分为对照组和自由饮用氟化钠溶液低、中、高(15,30,60 mg/L)4组;9个月后处死大鼠,测定肾脏抗氧化水平和核因子κB(NF-κB)的表达量.结果 低、高氟组丙二醛(MDA)含量与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性分别为(1.61±0.18),(1.63±0.26)nmol/mg.prot和(11.39±1.38),(6.86±0.99)U/mg.prot,明显高于对照组(P<0.05);各染氟组超氧化物歧化酶(SOD)活性虽有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);随着染毒剂量加大,NF-κB表达量呈上升趋势,与对照组(0.136±0.024)比较,高氟组(0.178±0.019)明显升高(P<0.05).结论 慢性氟中毒可致大鼠肾脏组织氧化损伤.     

慢性氟中毒大鼠睾丸超微结构观察

本研究雄性大鼠饲饮１５０ｍｇ／Ｌ的含氟水６个月，常规方法作睾丸超薄切片，透射电镜观察结果如下：①曲精小管精子形成过程明显损伤，头帽和顶体形成不良，成熟精子生成减少；部分支持细胞滑面内质网扩张，线粒体呈多形性改变，溶酶体增多。②睾丸间质细胞滑面内质网扩张甚至空泡化，线粒体减少，脂滴减少。研究结果表明，氟化钠能导致曲精小管生精细胞损伤，精子生成受阻，间质细胞损伤等改变。     

慢性氟中毒对大鼠骨组织Dlx5蛋白及其mRNA表达的影响

目的观察慢性氟中毒对大鼠骨组织中转录因子Dlx5蛋白和mRNA表达水平的影响,探讨Dlx5在氟骨症发病机制中的可能作用。方法本研究用36只SD大鼠按性别随机分成3组,对照组（饮自来水,含氟〈0．5rag／L）、低氟组（饮含氟5．0mg／L的自来水）、高氟组（饮含氟50mg／L的自来水）,6个月后用氟离子选择电极法测定大鼠尿氟及骨氟含量,HE染色观察骨组织病理学改变,并采用原位杂交技术、免疫组织化学方法,对大鼠骨组织进行Dlx5蛋白及mRNA水平的定量分析。结果HE染色显示染氟大鼠骨组织骨小梁增宽、骨皮质增厚等骨硬化表现;染氟大鼠骨组织Dlx5蛋白及mRNA表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义（F1低－蛋白－28．381,F高－蛋白－343．515,F1低－mRNA－27．767,F高－mKNA－353．987,P均〈o．05）。结论过量的氟可上调Dlx5蛋白及mRNA水平的表达,促进成骨细胞的增殖与分化,从而出现骨质硬化。     

亚慢性氟中毒对大鼠骨组织Runx2 mRNA表达的影响

目的观察亚慢性氟中毒对大鼠骨组织中转录因子Runx2 mRNA表达的影响,探讨Runx2在氟骨症发生中的可能作用。方法 40只Wistar大鼠按体重随机分成4组,染氟组大鼠饮用含氟50、100、150 mg/L的自来水,对照组大鼠饮用自来水;3个月后测定大鼠血清及骨组织氟含量,并采用SYBR Green Real-time RT-PCR法检测骨组织中Runx2 mRNA表达情况,同时观察骨组织病理学改变。结果 HE染色显示染氟组大鼠呈现骨皮质增厚、骨小梁增多等骨硬化表现;染氟组大鼠骨组织中Runx2 mRNA表达显著高于对照组,且随染毒剂量升高,表达亦逐渐升高。结论过量的氟可能通过增加骨组织Runx2基因表达水平来促进间充质干细胞向成骨细胞系分化,使骨形成增加。     

煤烟型氟中毒模拟实验及二氧化硫对氟中毒的影响

模拟煤烟型氟中毒地区农民燃煤方式,设高氟高硫组(氟化物与SO_2浓度分别为0.631和40.97 mg/m~3)、高氟低硫组(氟化物与SO_2浓度分别为0.583和5.086 mg/m~3),以及无燃煤污染的对照组(氟化物与SO_2浓度分别为0.008和0.191 mg/m~3), SD大鼠自然吸入中毒5个月。实验结果表明,中毒组大鼠均发生了氟斑牙,对照组牙齿无变化;实验组大鼠血清氟、尿氟、骨氟与牙齿氟均非常显著高于对照组。高氟高硫组大鼠的氟斑牙发生率高于高氟低硫组,牙齿病变表现严重,显示SO_2对大鼠的氟斑牙病变有加强作用。     

刺梨汁对慢性氟中毒的影响及机理研究

用高氟饲料喂养大鼠６个月，复制出慢性氟中毒模型，再自由饮用刺梨汁３个月，探讨刺梨汁对慢性氟中毒的影响及机理。结果表明：刺梨汁可明显改善氟中毒的一般状况，对已形成的氟斑牙影响不大，但可促进尿氟排泄，降低血清和骨氟含量及尿羟脯氦酸含量，提高血清中维生素Ｃ、维生素Ｅ和血清、肝、肾ＧＳＨ含量，增强血、肝、肾ＧＳＨ－Ｐｘ和ＳＯＤ活性，降低血清、肝和肾ＬＰＯ含量，降低尿γ－ＧＴ和血清ＧＰＴ活性及肝ＴＧ含量，提示：刺梨汁具有明显桔抗慢性氟中毒作用，其机理可能是通过促进尿氟排泄和抗氧化作用。     

慢性氟中毒大鼠肾脏损害机理及部位研究

用３０、６０和１２０ｍｇ／Ｌ含氟水饲养大鼠１２周。结果发现：尿ｒ—ＧＴ活性和尿蛋白含量显著升高；肾ＭＤＡ含量显著升高，肾ＧＳＨ含量和肾ＧＳＨ－Ｐｘ活性显著降低；肾损害指标与肾脂质过氧化指标存在显著相关关系。肾线粒体和微粒体ＭＤＡ含量显著升高，其各自标志酶ＳＤＨａｓｅ和Ｇ－６－Ｐａｓｅ活性显著降低，而且各亚细胞器ＭＤＡ含量升高分别与各自标志酶活性降低存在显著负相关关系．结果提示：慢性氟中毒引起肾脏近曲小管和肾小球损害；损害机理之一是脂质过氧化，慢性氟中毒可致肾细胞线粒体和微粒体发生脂质过氧化损害作用．     

慢性氟中毒对雄性大鼠肝脏的损伤及其抗氧化能力的影响

目的研究慢性氟中毒大鼠肝脏中总抗氧化能力(T-AOC)、一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活力的变化,以探讨氟中毒对肝脏损伤的机制。方法将18只6周龄健康 SPF-VAF 雄性 Wistar 大鼠随机分为高氟组(200 mg/L 氟化钠溶液)、低氟组(100mg/L 氟化钠溶液)和对照组(自来水),每组6只。各组动物可自由饮水,连续染毒6个月。染毒期间,每月测定各组大鼠体重。染毒结束后,取出肝脏称重,并计算肝脏系数。采用比色法测定肝脏匀浆中 T-AOC 和 NOS 活力,采用硝酸还原酶法测定 NO 的含量。结果对染毒期间各月大鼠体重进行组间比较,差异均元统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,低氟组和高氟组大鼠肝脏重量及肝脏系数均明显增加,差异有统计学意义(P<0.01);NO 含量和 NOS 活力也均明显增高,而 T-AOC 降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与低氟组比较,高氟组大鼠肝脏组织中 T-AOC 降低,NO 含量和 NOS 活力增高(P<0.05)。结论不同剂量慢性氟染毒对实验大鼠肝脏有明显毒性作用。机体摄入过量的氟,可使肝脏内 NOS 异常表达,NO 合成量增加,从而造成肝脏内氧自由基水平的提高,降低了肝脏的抗氧化能力。