利用腺病毒载体导入CTLA4Ig基因对大鼠同种心脏移植免？…

目的 探索ＣＴＬＡ４Ｉｇ基因在实验动物体内的表达以及对大鼠同种心脏移植后的免疫抑制作用。方法 利用腺病毒作载体,将ＣＴＬＡ４Ｉｇ基因导入同种心脏移植的本鼠体内,以编码β－半乳苷酶的有复制缺陷的腺病毒重组体（Ａｄｅｘ／ＬａｃＺ）为对照,观察基因在实验动物体内的表达以及对同种异体心脏移植后的免疫抑制作用。逆转录多聚酶链反应（ＲＴ０ＰＣＲ０法检测ＣＴＬＡ４Ｉｇ基因在大鼠体内的表达,并用流式细胞仪来测定血     

利用腺病毒载体导入CTLA4Ig基因对大鼠同种心脏移植免疫抑制作用的研究

目的　探索CTLA4Ig基因在实验动物体内的表达以及对大鼠同种心脏移植后的免疫抑制作用。方法　利用腺病毒作载体 ,将CTLA4Ig基因导入同种心脏移植的受体鼠体内 ,以编码 β 半乳糖苷酶的有复制缺陷的腺病毒重组体 (Adex/LacZ)为对照 ,观察该基因在实验动物体内的表达以及对同种异体心脏移植后的免疫抑制作用。逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)法检测CTLA4Ig基因在大鼠体内的表达 ,并用流式细胞仪来测定血中CTLA4Ig蛋白质的浓度变化。 结果　导入的CT LA4Ig基因能够在大鼠肝脏中表达 ,血中CTLA4Ig的浓度明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,而且移植后心脏的存活时间显著长于对照组 (P <0 .0 1)。结论　CTLA4Ig基因能在大鼠体内良好表达并明显拮抗同种移植排斥反应     

CTLA4Ig转基因治疗器官移植排斥

T细胞活化所致的免疫排斥反应是器官移植的最大障碍。CD2 8 B7共刺激途径在T细胞活化中起主要作用 ,应用CTLA4Ig以封闭CD2 8 B7途径可明显延长移植器官的存活。本文综述CTLA4Ig转基因治疗的方法、效果及其机制     

CTLA4Ig转基因治疗器官移植排斥(文献综述)

T细胞活化所致的免疫排斥反应是器官移植的最大障碍.CD28-B7共刺激途径在T细胞活化中起主要作用,应用CTLA4Ig以封闭CD28-B7途径可明显延长移植器官的存活.本文综述CTLA4Ig转基因治疗的方法、效果及其机制.     

CTLA4Ig基因在延长大鼠移植胰岛存活中的作用

胰岛移植是治疗糖尿病的理想方法 ,有效的胰岛移植可代替长期胰岛素的使用。胰岛移植存在的最主要问题是免疫排斥反应 ,因此降低移植物免疫原性和诱导受体对胰岛移植物耐受是解决排斥反应问题的方法。ＣＴＬＡ4Ｉｇ是阻断Ｂ7 ＣＤ2 8共刺激信号传导最有效的免疫抑制剂 ,国外在这方面研究较多 ,取得了良好效果[1] ,国内尚未见报告。本研究利用脂质体 (ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ)载体包裹ＣＴＬＡ4ＩｇｃＤＮＡ质粒后转染鼠胰岛和肌肉细胞 ,观察ＣＴＬＡ4Ｉｇ基因表达在延长糖尿病大鼠移植胰岛存活方面的作用。一、材料和方法1 动物和主要试剂 :大…     

CTLA41Ig基因在糖尿病大鼠胰岛移植中的作用

为探讨融合蛋白（ＣＴＬＡ４Ｉｇ）基因在糖尿病大鼠体内表达及其产物延长胰岛移植物存活的作用，利用脂质体（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ０载体包裹ＣＴＬＡ４ＩｇｃＤＮＡ质粒后转染鼠胰岛和肌肉细胞，检测移植后ＣＴＬＡ４Ｉｇ基因表达水平和Ｔ淋巴细胞转化率，观察ＣＴＬＡ４Ｉｇ基因表达在延长糖尿病鼠胰岛移植物和大鼠存活时间的作用。结果：胰岛移植术后实验（Ａ）组、对照（Ｂ）组Ｔ淋巴细胞转化率有明显差异（Ｐ〈０．０５）。Ａ     

CTLA4Ig转基因治疗器官移植排斥

T细胞活化所致的免疫排斥反应是器官移植的最大障碍。CD28-B7共刺激途径在T细胞活化中起主要作用，应用CTLA4Ig以封闭CD28-B7途径可明显延长移植器官的存活。本文综述CTLA4Ig转基因治疗的方法、效果及其机制。     

局部转染CTLA-4Ig抑制大鼠异体复合组织移植急性排斥反应的研究

目的：观察腺病毒介导融合基因细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（cytotoxic T-lymphocyte associated antigen-4,CTLA-4Ig）局部转染大鼠同种异体移植的复合组织对急性排斥反应的抑制作用。方法：以近交系Brown Norway大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,采用腹部游离皮瓣作为异体复合组织移植（composite tissue allotransplantation,CTA）模型。将受者分为3组,A组（空白对照组）：异体皮瓣离体保存时不感染腺病毒,只灌注PBS溶液;B组（阴性对照组）：异体皮瓣离体保存时灌注携带增强型绿色荧光蛋白的重组腺病毒（Ad—EGFP）;C组（基因治疗组）：异体皮瓣离体保存时灌注AdCTLA-4Ig。术后观察各组移植皮瓣的排斥情况及存活天数,进行组织病理学检查,并观察CTLA-4Ig在移植组织中的表达情况及对急性排斥反应的抑制作用。结果：①A组、B组皮瓣移植物平均生存时间分别为（7．8±1．5）天和（7．1±1．6）天,C组移植皮瓣平均存活时间为（10．4±2．3）天,C组存活期长于A组和B组,差异有统计学意义（P〈0．01）;②移植皮瓣病理学检查：术后第7天,A组与B组移植皮瓣均发生严重急性排斥反应,而C组排斥反应较A组和B组轻微,但C组术后第11天也表现出严重急性排斥反应;③移植前后血清白细胞介素2（interleukin-2,IL-2）水平：各组移植术后早期发生急性排斥反应时,IL-2均有明显升高,但实验组血清IL-2水平在第3天、第7天时均明显低于两对照组（P〈0．01）。结论：建立了一种新的异体复合组织移植局部基因转染模型,皮瓣灌注AdCTLA-4Ig能获得融合基因在移植复合组织中的表达,局部产生的CTLA-4Ig能抑制急性排斥反应的发生,延长移植物存活时间。     

CTLA－4Ig的免疫抑制作用

ＣＴＬＡ－４Ｉｇ是一种通过基因重组产生的可溶性嵌合蛋白，和ＡＰＣｓ表面Ｂ７分子有高度亲合力．Ｂ７和Ｔ细胞表面的ＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４结合能产生共刺激信号，使Ｔ细胞充分活化，从而产生对移植物的排斥反应，ＣＴＬＡ－４Ｉｇ能与ＣＤ２８竞争性地结合３７分子，阻断共刺激信号的发生，产生免疫抑制作用。ＣＴＬＡ－４Ｉｇ与目前常用免疫抑制剂的作用机理不同，有可能诱导供者抗原特异性免疫耐受。本文综述ＣＴＬＡ－４Ｉｇ的作用机理及其在移植免疫研究中的应用。     

大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植后排斥反应

目的研究大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植术后排斥反应的可行性。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。将实验分为2组。对照组:供心获取过程中不给予任何干预处理;实验组:在供心获取的过程中,以质粒载体携带CTLA4-Ig(pUF1-CTLA4-Ig)经过冠状动脉灌注供心。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测供心组织中CTLA4-IgmRNA的表达,观察移植心存活时间;酶联免疫法(ELISA)检测血清γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平;观察移植心的组织学改变;用免疫组织化学SABC法检测移植心组织中CD4 和CD8 T细胞的浸润。结果实验组移植心存活时间较对照组明显延长[(11.70±1.24)dvs(5.62±0.74)d,P<0.05]。移植后5d,实验组移植心组织中可见CTLA4-IgmRNA的表达;对照组病理学检查可见心肌间质出现弥漫性的炎性细胞浸润,伴有局部的心肌坏死,组织间质水肿,实验组仅有局灶性血管外周及心肌间质内炎性细胞浸润,未见坏死;对照组移植心组织中浸润的CD4 和CD8 T细胞数量明显高于实验组(P<0.01);实验组血清IFN-γ水平明显低于对照组(P<0.01),但血清IL-4水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论经冠状动脉灌注转染CTLA4-Ig基因,可以抑制心脏移植后排斥反应。     

负载Ad-CTLA4Ig的未成熟树突状细胞延长大鼠移植肾存活时间的探讨

目的 探讨负载细胞毒性淋巴细胞抗原4免疫球蛋白基因重组腺病毒(Ad-CTLA4Ig)的受者未成熟树突状细胞(DC)对大鼠移植肾存活时间的影响.方法 选择雄性SD大鼠为供者,雄性Wistar大鼠为受者,建立大鼠肾移植模型.将受者随机分为4组,每组12只.制备Ad-CTLA4Ig及受者未成熟DC悬液,37℃混合孵育6 h,于移植前7 d,实验组经腹腔内注射负载Ad-CTLA4Ig的DC悬液;Ad-CTLA4Ig对照组、重组腺病毒空载体(Ad-VG)对照组和生理盐水(NS)对照组分别经腹腔内注射1 ml Ad-CTLA4Ig、Ad-VG和NS.观察各组移植肾的存活时间、组织形态学改变、受者血液中腺病毒中和抗体滴度、血清CTLA4Ig水平及混合淋巴细胞反应(MLR)的变化.结果 实验组移植肾存活时间为(94.6±9.0)d,较各对照组显著延长:[Ad-CTLA4Ig对照组为(39.6±10.6)d,Ad-VG对照组为(8.6±2.8)d,NS对照组为(8.4±2.6)d],差异均有统计学意义(P＜0.01),实验组移植肾组织损伤程度较轻,血液中腺病毒中和抗体滴度及混合淋巴细胞反应指数均较各对照组显著减少;实验组血清CTLA4Ig水平较Ad-CTFLA4Ig对照组显著升高.结论 负载Ad-CTLA4Ig的受者未成熟DC可减少腺病毒中和抗体,维持CTLA4Ig的稳定表达,从而延长大鼠移植肾的存活时间.     

腺病毒介导的hCTLA4-Ig和FasL基因转移诱导大鼠同种异体肾移植长期存活的作用

目的 探讨腺病毒介导hCTLA4-Ig和FasL基因转移延长异基因大鼠肾移植物存活时间及其相关机制.方法 供、受者分别为SD系大鼠和Wistar系大鼠,建立大鼠肾移植模型.实验分为4组:对照组、空载病毒Ad-EGFP处理组、Ad-CTLA4-Ig处理组、Ad-CTLA4-Ig+Ad-FasL处理组.对照组不予处理,其他各组在供肾冷保存时,经供肾动脉灌注(1×10~9-5 ×10~9)PFU/ml Ad-EGFP、Ad-CTLA4-Ig、Ad-CTLA4-Ig+Ad-FasL.术后比较各组的存活时间、移植肾组织学、肾功能和免疫组织化学等的改变.结果 肾移植受者平均存活时间Ad-CTLA4-Ig+Ad-FasL处理组(64.67±6.41)d、Ad-CTLA4-Ig处理组(31.33 ±6.77)d与对照组(8.17±1.17)d,空载病毒Ad-EGFP处理组(8.00±1.55)d比较明显延长(P均＜0.01),并且Ad-CTLA4-Ig+Ad-FasL处理组优于Ad-CTLA4-Ig处理组(P＜0.01);对照组和空载病毒Ad-EGFP处理组术后血清肌酐浓度迅速上升,其余两组移植肾功能保持稳定.结论 Ad-CTLA4一Ig和Ad-FasL介导的基因转移能够诱导异基因肾移植物长期存活;该效应为供体特异性,与调节性T细胞和同种反应性T细胞的删除有关.     

大鼠小肠移植早期应用趋化因子受体拮抗剂抑制移植物急性排斥反应

目的探讨趋化因子受体拮抗剂(MetRANTES)在小肠移植早期应用对排斥反应的免疫抑制作用及其与他克莫司的协同效应。方法SD大鼠为供者,Wistar大鼠为受者,建立异基因节段性异位小肠移植模型。移植后将大鼠分为4组,每组24只。第1组为对照组,移植前后不作任何处理;第2组为MetRANTES组,小肠移植后(0～7d)腹腔注射MetRANTES200μg/d;第3组为小剂量他克莫司(FK506)组,小肠移植后(0～7d)腹腔注射FK5060.5mg·kg-1·d-1;第4组为MetRANTES联合FK506组,2种药物的应用方法与第2、3组相同。观察移植大鼠的一般状况和存活时间以及免疫细胞浸润情况,并于移植术后3、5、7d分别取各组大鼠移植肠标本(n=6)进行组织病理学检查,采用免疫荧光染色和激光扫描共聚焦显微镜技术对移植肠RANTES和CD4 、CD8 、CD25 T淋巴细胞的表达进行连续定量测定。结果第1～4组大鼠平均存活时间分别为(7.37±1.19)d、(22.32±8.60)d、(23.64±6.58)d和(30.55±4.18)d,第2、3、4组大鼠与第1组相比,存活时间明显延长(P<0.01);第4组大鼠存活时间更长,与第2、3组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。第1组全部死于急性排斥反应及感染,组织病理学检查显示移植后第3、5、7d分别符合轻、中、重度排斥反应。第2、3、4组病理学检查无明显排斥反应征象。第1组大鼠的移植肠RANTES表达在术后各时段均显著高于其他3组(P<0.01),其动态变化与急性排斥反应的进程呈正相关;第2组和第4组大鼠移植肠RANTES、CD4 、CD8 和CD25 T细胞的表达均明显低于第1组(P<0.01)。结论MetRANTES能明显抑制小肠移植急性排斥反应,有效保护移植肠功能,显著延长移植物的存活时间,并可增强小剂量他克莫司的免疫抑制作用。     

Prevention of Acute Lung Allograft Rejection in Rat by CTLA4Ig

CTLA4 immunoglobulin (CTLA4Ig), which binds with a high affinity to B7-1 and B7-2, interrupts T-cell activation by inhibiting costimulatory signal. CTLA4Ig has been used in hopes of achieving antigen-specific tolerance induction in several solid organ transplants. In lung allograft rejection, however, its use has been controversial in terms of its effect on prevention of rejection. In the present study, the effect of murine CTLA4Ig on rat-lung allograft rejection was investigated. Rat left-lung transplantation was performed in an RT1 incompatible donor (Brown Norway; BN)-recipient (F344) combination. All allografts (n = 12) without any treatment were rejected within 7 days after transplantation. A single injection of murine form CTLA41g at a dose of 100 microg intraperitoneally (ip) or intravenously (iv) on day 1 post-transplantation achieved long-term graft survival (>90days) in 2/5 (40%) and 3/8 (38%), respectively. Moreover, 6/7 (86%) allografts in rats that received iv injection of 500 microg CTLA4Ig survived more than 90days. Allograft survival in the CTLA4Ig 500 microg iv recipient group was significantly longer than that in the no-treatment control or control immunoglobulin group (p <0.01). Four out of seven recipients bearing functional allografts for more than 90 days with the CTLA4Ig treatment accepted donor-specific skin grafts, whereas all third-party skin grafts (n=3) were rejected. Prevention of rat-lung allograft rejection could be achieved by intravenous administration of CTLA4Ig, resulting in long-term allograft survival with acceptance of donor-specific skin grafts.     

Factors relevant for the induction of rejection by indirect recognition in a rat heart allograft model: effect of CTLA4lg treatment on indirect alloactivation induced by immunization with donor MHC I peptides

Abstract We have defined factors relevant for the induction of rejection by indirect recognition in a rat heart allograft model and analyzed the influence of CTLA4Ig treatment on indirect alloactivation induced by donor MHC I peptides in a DA → LEW heart allograft model. Indirect allorecognition of MHC I led to accelerated graft rejection and was accompanied by the induction of anti-peptide antibodies and donor pep-tide-activated T cells. In an attempt to block the B7-induced costimulatory signal of T cell activation, CTLA4Ig was administered to graft recipients in addition to MHC I peptide treatment. CTLA4Ig therapy, however, was not effective in preventing the humoral or cellular anti-donor immune response, nor did it prevent accelerated graft rejection.     

Adenovirus‐mediated gene transfer of CTLA4lg gene results in prolonged survival of heart allograft

Abstract It has been demonstrated that the administration of CTLA4Ig protein can induce the suppression of allograft and xenograft rejection. The purpose of this study is to determine the effect of adenovirus‐mediated gene transfer with CTLA4Ig gene on the transgene expression and suppression of alloimmune response in allogeneic cardiac transplantation of rats. Adenoviral vectors with β galactosidase or human CTLA4Ig cDNA (Adex/LacZ, Adex/hCTLA4Ig) were constructed. These vectors were transduced to the liver of Lewis (LEW) rats by intravenous injection. Then LEW rats received heterotopic cardiac transplantation from Dark Agouti rats. Experiments were performed using both CTLA4Ig gene transduction and/or immunosuppressant FK506. The transgene expression after adenovirus‐mediated transfer with CTLA4Ig cDNA lasted for several months, compared with several weeks after that in controls, which was proportional to the blood concentration of CTLA4Ig protein. By the administration of 1 × 10⁹ PFU of Adex/hCTLA4Ig, the survival of cardiac grafts was significantly prolonged, compared with controls or the use of 1 × 10⁸ PFU of Adex/hCTLA4Ig. In the rats with beating grafts over 100 days, the blood concentrations of CTLA4Ig were undetectable. The combination therapy using a low titer Adex/hCTLA4Ig and low‐dose of FK506 was synergistically effective on this cardiac transplantation model. In conclusion, adenovirus‐mediated gene transfer with CTLA4Ig gene was efficient for the prolongation of both transgene expression and allograft survival.     

小肠移植术后排斥反应的诊断与治疗四例报告

目的 总结小肠移植术后排斥反应的诊断和治疗体会.方法 4例患者小肠移植术后均采用阿来佐单抗诱导及单用他克莫司(Tac)的无激素维持方案,术后前3个月血Tac浓度维持在10～15μg/L,术后4个月开始减少至5～10 μg/L,术后7个月开始减少至5/μg/L.术后采用临床症状观察、移植肠内镜观察及移植肠黏膜活检等方法监测排斥反应.排斥反应的诊断和分级则依据2003年国际小肠移植会议上确立的小肠移植急性排斥反应的病理学诊断标准.当发生IND级至轻度排斥反应时,提高血Tac浓度至15/μg/L并联合短程小剂量激素治疗,如排斥反应控制不理想,则应用大剂量激素冲击治疗;当发生中度排斥反应时,则提高血Tac浓度至15μg/L并联合大剂量激素冲击治疗.同时积极预防全身感染,停止肠内营养使肠道彻底休息.结果 4例患者术后共发生排斥反应9次,术后3个月内3例发生IND级至轻度排斥反应4次,术后3～6个月2例发生IND级至轻度排斥反应3次,术后7～12个月2例发生中度排斥反应2次.发生的9次排斥反应经治疗后均得到很好控制,移植肠功能恢复良好.IND级或轻度排斥反应的恢复时间为2～8d(平均4.8 d),中度排斥反应为15d.4例患者中有2例的存活时间已超过1年,1例为术后8个月余,1例为术后4个月,目前均在顺利康复中.结论 移植肠黏膜活组织病理学检查仍然是诊断排斥反应的金标准.提高血Tac浓度及联合应用激素治疗可成功逆转小肠移植排斥反应.     

亲属活体小肠移植后急性排斥反应的监测与治疗一例

目的探讨亲属活体小肠移植后急性排斥反应的监测与治疗。方法对1例短肠综合征患者施行亲属活体小肠移植，手术分两期进行。供者为患者的母亲，供、受者HLA有4个抗原相符。移植肠段长120cm，一期手术时供、受者肠道不进行吻合，移植肠两端在腹壁造口，一期手术后188d，再行二期手术，分别将受者残存小肠的近端、远端与移植肠袢的近端、远端作端侧吻合。术后观察移植小肠引流液的性状，定期内镜观察，并行移植肠组织学检查。采用他克莫司、霉酚酸酯及甲泼尼龙预防排斥反应，并予两剂达利珠单抗诱导。结果受者两次手术均顺利。一期手术后37d出现急性排斥反应，给予皮质激素冲击治疗9d，未能逆转，后改为莫罗单抗-CD3治疗8d后逆转。术后121d，肠镜及组织学检查证实移植肠修复良好，小肠绒毛形态及结构基本正常，D-木糖吸收试验提示移植肠吸收功能改善。现患者已存活213d，体重增加4．5kg，进半流质饮食，生活自理。结论小肠移植后可采取肠镜和组织学检查，并结合临床表现来综合判断排斥反应。发生急性排斥反应时，及时予以激素冲击治疗，无效时可用莫罗单抗-CD3。