同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞株ECV-304生长的抑制作用

目的: 观察同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞生长的影响,探讨高同型半胱氨酸血症(HHCY)致动脉粥样硬化(As)的机制。方法: 将不同浓度Hcy与ECV-304细胞体外共培养不同时间,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞生长抑制率,3H-TdR掺入法检测细胞DNA合成。结果: 显微镜见对照组细胞呈单层鹅卵石样紧密排列,而实验组随Hcy浓度的升高及作用时间的延长,细胞排列杂乱,聚集成团。低浓度Hcy对细胞生长的抑制作用不明显,5.0、10.0 mmol/L Hcy对细胞生长呈现抑制作用,且两组浓度作用72 h的生长抑制率高于作用48 h (P< 0.01)。5.0、10.0 mmol/L Hcy作用48 h、72 h,3H-TdR掺入抑制率高于相应对照组和低浓度组,且作用72 h的掺入抑制率显著高于48 h (P<0.01)。结论: Hcy对VEC具有直接损伤作用,可以时间及剂量依赖方式抑制ECV-304细胞的生长及DNA的合成。     

缺氧对ECV-304细胞CASK表达及细胞内分布的影响

目的 了解缺氧后ECV-304细胞钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase, CASK)蛋白表达及细胞内分布的变化.方法 将培养的ECV-304细胞置于缺氧(5%O2) 条件培养1、3、6、12 h,用Western blot方法检测CASK表达的变化,用免疫组化技术观察CASK在细胞内分布情况.结果 ECV-304细胞的CASK表达随缺氧时间延长而逐渐增高,3 h开始增加,6 h达高峰,12 h下降但仍高于正常.免疫组织化学染色的结果显示,随着缺氧时间的延长,细胞染色加深、并出现CASK向核膜聚集的现象.结论 缺氧可以影响CASK的蛋白表达和细胞内分布,提示CASK可能是一个新的值得关注的缺氧相关蛋白.     

低浓度长春花碱对ECV-304细胞迁移及管样结构生成的影响

目的 研究在体外培养中低浓度长春花碱(VBL)对ECV-304细胞的迁移及管样结构生成的影响.方法 分别用改良的Boyden室迁移测试法和Matrigel上血管新生的短期二维培养模型来评价低剂量VBL对ECV-304细胞迁移及管样结构生成的作用.结果 ECV-304细胞经0.1、2.5、5.0和10.0 μg/L VBL预处理24 h后,其迁移抑制率分别为39.8%、56.9%、80.5%和97.2%,与对照组比较有显著差异(P＜0.01);在Matrigel上形成管样结构数量逐渐减少,结构逐渐破坏,呈剂量依赖关系.结论 低浓度VBL能有效抑制ECV-304细胞的迁移及管样结构生成.     

低浓度长春花碱对ECV-304细胞迁移及管样结构生成的影响

目的研究在体外培养中低浓度长春花碱(VBL)对ECV-304细胞的迁移及管样结构生成的影响。方法分别用改良的Boyden室迁移测试法和M atrigel上血管新生的短期二维培养模型来评价低剂量VBL对ECV-304细胞迁移及管样结构生成的作用。结果ECV-304细胞经0.1、2.5、5.0和10.0μg/L VBL预处理24 h后,其迁移抑制率分别为39.8%、56.9%、80.5%和97.2%,与对照组比较有显著差异(P<0.01);在M atrigel上形成管样结构数量逐渐减少,结构逐渐破坏,呈剂量依赖关系。结论低浓度VBL能有效抑制ECV-304细胞的迁移及管样结构生成。     

蒿甲醚对体外培养SGC-7901细胞及ECV-304细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察中药蒿甲醚对体外培养SGC-7901细胞及ECV-304细胞增殖及细胞周期的影响.方法:取对数生长期的SGC-7901细胞配制成5 × 104 mL-1.的单细胞悬液,接种于96孔板,培养24 h,加入不同浓度(1000.00、500.00、250.00、125.00、62.50、31.25 mg/L)的蒿甲醚,以生理盐水为空白对照,继续培养48 h,采用MTT法测定SGC-7901细胞的生长抑制率和IC50,并以人脐静脉内皮细胞ECV-304作对照.应用流式细胞仪分析500 mg/L蒿甲醚作用24、48、60、72、84 h后细胞凋亡率和细胞周期变化.结果:随着药物浓度的增加和作用时间的延长,蒿甲醚对SGC-7901和ECV-304细胞的生长抑制作用具有时间和剂量依赖性(P<0.05).蒿甲醚作用于SGC-7901、ECV-304细胞24、48、72 h的,IC50分别为(504.74 ± 3.87)、(130.46 ± 3.12)、(83.46 ± 2.92)和>1000、>1000、(384.42 ± 13.74) mg/L,2种细胞间比较差异均有统计学意义(P均<0.05).流式细胞术结果显示SGC-7901细胞出现明显的凋亡峰,随着作用时问的延长,其凋亡率逐渐升高(P<0.05),细胞周期S及G2/M期细胞放大量减少,细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05).结论:蒿甲醚具有诱导胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的作用.     

体外γ干扰素对脐静脉内皮细胞ECV-304的作用

血管生成存在于正常生理过程，如排卵，受精卵的着床等，也存在于损伤修复和肿瘤的发生、发展过程。血管生成是通过内皮细胞的分裂增殖而完成，各种参与血管生成因子的最终作用位点是血管内皮细胞。γ干扰素(IFN-γ)是Th1细胞免疫细胞因子，同时可下调血管生成，但确切机制不清楚。本研究在体外观察IFN-γ对人脐静脉内皮细胞株细胞生长的影响，旨在探讨IFN-γ下调血管生成的可能机制。     

同型半胱氨酸诱导内皮细胞炎症损伤及金雀异黄酮的保护作用机制探讨

目的:探讨金雀异黄酮(genistein,GEN)对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的内皮细胞毒性和炎症的抑制作用及其分子机制。方法:采用MTT法检测细胞活性,倒置显微镜观察细胞形态变化,酶联免疫吸附法(ELISA)检测相关炎症分子白细胞介素-6(IL-6)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)。结果:单独加5.0 mmol/L的Hcy组活力最差,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。显微镜下见对照组细胞呈单层鹅卵石样紧密排列,细胞状态良好,而Hcy 5.0 mmol/L组细胞排列杂乱,凋亡增多,状态也最差。ELISA结果发现,与对照组比较,5.0 mmol/L的Hcy能显著增强IL-6及ICAM-1表达(P<0.01)。然而GEN(10、50、100μmol/L)能够增强细胞活力,显著抑制由Hcy介导的IL-6及ICAM-1表达的增强,大大改善细胞状态,尤其是100μmol/L的GEN(P<0.01)。结论:GEN对Hcy介导的内皮细胞毒性及炎症反应有明显的抑制作用。     

川芎嗪二苯甲基哌嗪衍生物对ECV-304细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究川芎嗪二苯甲基哌嗪衍生物对ECV-304细胞氧化损伤的保护作用。方法：用过氧化氢致ECV-304细胞损伤,以四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活数量。结果：川芎嗪二苯甲基哌嗪衍生物具有对ECV-304细胞氧化损伤的保护作用,其活性比川芎嗪强。结论：川芎嗪二苯甲基哌嗪衍生物具有对ECV-304细胞氧化损伤的保护作用。     

Baicalein抑制人血管内皮细胞ECV-304的增殖和迁移

目的　探讨选择性 12 -脂氧酶抑制剂baicalein对血管内皮细胞增殖和移行的抑制作用。方法　采用倒置显微镜、光镜、流式细胞仪进行细胞周期分析、MTT检测、缺损闭合实验观察分析不同浓度baicalein作用后 ,人脐静脉内皮细胞系ECV 30 4细胞形态、增殖和迁移的变化。结果　 (1)不同浓度 (0 .1～ 10 0 μM )的baicalein处理ECV 30 4细胞 2 4～ 12 0h后或一定浓度 (30 μM)的baicalein处理ECV 30 4细胞不同时间 (1～ 6d)后 ,内皮细胞变形 ,有不同程度的变性、坏死 ,与baicalein的浓度和作用时间成正比 ;(2 )细胞周期分析显示baicalein处理后细胞周期阻滞在G0 /G1期 ,4 8h时相点最为显著 ;并在G0 /G1期前出现高于对照的凋亡峰 (Sub G1) ,12h时相点最高(10 .6 % ) (P <0 .0 1) ;(3)缺损闭合实验baicalein处理组的ECV 30 4细胞缺损区面积显著大于对照组 (P <0 .0 1)。结论　选择性 12 脂氧酶抑制剂baicalein抑制血管内皮细胞的增殖和迁移 ,初步证明亦有诱导凋亡的作用 ,在影响血管生成中有一定意义     

高级蛋白氧化产物对人脐静脉内皮细胞ECV-304的作用

目的 观察体外制备的高级蛋白氧化产物修饰蛋白（AOPP-HSA）对人脐静脉内皮细胞（ECV-304细胞株）的作用.方法 在高压液相色谱仪（HPLC）中将人血清白蛋白（HSA）用次氯酸处理制备AOPP-HSA,观测AOPP-HSA对ECV-304细胞增殖和凋亡,细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和E-选择素（E-selectin）及单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达,以及P50、P65和I-кB的mRNA表达含量的影响.结果 （1）AOPP-HSA与ECV-304细胞共同孵育后,可使其增殖指数下降,约为对照组的70%～80%.凋亡试验结果：AOPP-HSA组细胞早期凋亡较对照组升高17%.（2）ECV-304细胞有ICAM-1和MCP-1的基础表达,与AOPP-HSA共同孵育24 h后,两者的表达均有上调,以VitE预先孵育后,其表达量均较相应浓度AOPP-HSA组有明显下降;ECV-304细胞无E-selectin的基础表达,给予AOPP-HSA后也无改变.（3）ECV-304细胞与AOPP-HSA共同孵育后,其P50、P65的mRNA的相对表达含量均显著上调,在VitE干预组,P50、P65的相对表达含量较相应AOPP-HSA组下降.I-кB mRNA的相对表达含量在AOPP-HSA 100～400 μmol/L各组均明显下降,而在AOPP-HSA 600 μmol/L组中,其I-кB的相对表达含量出现显著的升高,给予VitE干预后,I-кB的相对含量也出现明显升高.结论 AOPP-HSA对ECV-304细胞具有多种生物学效应,可抑制增殖、促进凋亡、上调黏附分子和趋化因子的表达.这些作用可能是通过影响NF-кB而产生的.氧化应激参与了这些作用的发生.     

熊果苷拮抗H2O2损伤的研究

目的通过体外细胞学实验观察熊果苷拮抗H2O2的作用.方法体外培养人脐静脉内皮细胞ECV-304,将细胞分为对照组、损伤组和熊果苷组,熊果苷组提前12h加入熊果苷,500μmol/L H2O2诱导细胞氧化应激状态.光镜实验比较各组细胞形态学的变化;MTT实验比较各组细胞增殖活力的改变.结果光镜下可见,对照组细胞结构清晰,呈单层铺路石状紧密排列;损伤组细胞变形、皱缩、排列紊乱、脱落明显,胞浆内出现空泡;熊果苷组细胞形态结构基本清晰,但细胞有轻度肿胀,其它接近于正常对照组;MTT结果显示,与损伤组相比,熊果苷能明显保护ECV-304细胞增殖活力(P<0.05).结论本实验结果提示,熊果苷可以抵御H2O2所致ECV-304细胞氧化应激损伤.     

低糖诱导人脐静脉内皮细胞一氧化氮与活性氧变化的研究

目的观察低浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞一氧化氮(NO)与活性氧(ROS)变化的影响。方法以体外培养人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12为研究对象,将实验分为正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖)、低糖组(2.8mmol/L葡萄糖)、无糖组(0mmol/L葡萄糖)。分别用2.8、0mmol/L葡萄糖干预HUVEC-12细胞,经过1、2、4、12h后,硝酸还原酶法测定NO产量,化学比色法测定一氧化氮合成酶(NOS)活性,Dihydroethidium荧光探针法测定细胞内ROS水平。结果与正常对照组相比,低糖组与无糖组NO水平降低(P<0.01),NOS活性下降(P<0.01),细胞内ROS水平升高(P<0.01),均呈剂量依赖关系。同一浓度组内随着时间的延长,内皮细胞NO水平、NOS活性进一步降低(P<0.01),ROS水平进一步升高(P<0.05),各指标都具有浓度和时间依赖性。结论低糖可导致内皮细胞功能障碍,NO水平降低,NOS活性下降,其机制可能与低糖导致内皮细胞氧化应激损伤有关。     

2型糖尿病大鼠肾脏活性氧物质与NO关系的探讨

目的研究糖尿病大鼠肾脏活性氧物质与一氧化氮(NO)系统的关系。方法制备高脂高糖加小剂量链脲佐菌素(35mg/kg)诱导的2型糖尿病大鼠模型。将大鼠分为正常对照组10只和糖尿病组20只;观察糖尿病大鼠肾脏氧化应激状态及NO系统的表达,肾功能改变及抗氧化指标与NO的相关性分析。结果糖尿病大鼠成型12周时SOD,SOD/MDA降低,MDA升高,与正常对照组比较差异有统计学意义;NO、总NOS、iNOS、cNOS均较正常对照组明显升高。肾脏肥大指数、尿微量清蛋白、基质比、肾小球截面积与SOD/MDA呈负相关,与NO、总NOS呈正相关;SOD/MDA与总NOS、NO之间存在负相关。结论氧化应激,NO均参与糖尿病肾病的发生、发展,它们之间的平衡可能是抗氧化治疗在糖尿病肾病中的关键。     

一氧化氮合酶基因转染小鼠内皮祖细胞的实验研究

目的 探讨利用脂质体介导内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因体外转染小鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPC)的可行性.方法 密度梯度离心法分离ICR小鼠骨髓来源单个核细胞培养制备小鼠EPC并鉴定;构建、扩增、提取并纯化pcDNA3.0/eNOS基因质粒;用EPC培养基配成2×105·mL-1细胞悬液,按0.6 mL/孔重新铺6孔板,待细胞生长至80％左右融合时,用脂质体LipofectamineTM 2000体外转染eNOS基因至EPC.转染48 h后,采用RT-PCR检测EPC中eNOS的表达,硝酸还原酶法检测EPC中一氧化氮(NO)的含量,荧光探针DCFH-DA活性氧检测氧自由基(ROS)的含量.结果 成功培养EPC,成功构建pcDNA3.0/eNOS基因载体.转染48 h后,EPC中eNOS表达量明增加(P＜0.01),NO含量明显升高(P＜0.01),ROS含量明显降低.结论 脂质体介导eNOS基因能够有效转染小鼠EPC,并能在EPC中有效表达.     

Effect of polysaccharide sulfate 916 on the production of nitric oxide in ECV3 04 cells induced by cytokines and H2O2

Objective To investigate the effect of polysaccharide sulfate 916 (PS916) on the productio n of nitric oxide (NO) in ECV304 cells induced by tumor necrosis factor-α (TNF α), interleukin-1β (IL-1β) and H(2)O(2) in vitro. Methods Production of NO in ECV304 cells was measured by the Griess method and the proli feration of cells was tested by the MTT method. The activity of NO synthase was detected spectrophotometrically.Results Production of NO in ECV304 cells decreased after treatment with 40 ng/ml IL-1 β and 40 ng/ml TNFα, but increased in the presence of H(2)O(2) 0.1 mmol/L . PS916 significantly enhanced NO production in ECV304 cells in a dose-depende nt manner in the TNFα and IL-1β treated groups and decreased it in the H2O 2 treated group. Proliferation of ECV304 cells was inhibited by TNFα and H 2O2 and no effect was found in the IL-1β treated group. PS916 increased the proliferation of cells treated with TNFα and H(2)O(2) dose-dependently. In vitro, PS916 has no effect on the activity of NO synthase. Conclusion PS916 has a protective effect on ECV304 cells exposed to IL-1β, TNFα and H2 O2.     

硝苯地平对内皮细胞和平滑肌细胞一氧化氮生成的影响

钙离子通道拮抗药能够有效治疗某些心血管系统疾病。本实验研究了钙拮抗药硝苯地平对离体培养的内皮细胞及平滑肌细胞一氧化氮生成的影响。结果表明硝苯地平能够有效抑制上述细胞一氧化氮的释放,且抑的帽效应呈剂量依赖关系。提示钙拮抗药的治疗作用可能与其抑制一氧化氮的释放有关。