TaqMan RT—PCR检测HAV方法的建立

目的建立以TaqMan为特点的RT—PCR检测。方法本研究利用反转录酶将病毒RNA反转录成cDNA，再以cDNA为模板用Taqman探针法进行RTPCR扩增反应，进行病毒核酸定性检测。结果本研究分别选用0．14、0．16．0．18、0．2（μmol／L）的浓度。当退火温度为56℃时荧光强度最强，反应的灵敏度最好。CV值的最大为1．66％，〈5％。结论本研究建立的TaqMan RT-PCR方法高特异性，简单．重复性好，避免假阴性，宜应用于甲肝的病原型监测。     

游离雌三醇时间分辨免疫荧光分析法的建立

目的建立游离雌三醇（uE3）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）方法。方法采用竞争抑制一步法建立检测uE3的TRFIA分析方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的灵敏度为0．14nmol／L,线性范围为0．14—120nmol／L,回收率为97．7％。分析内和分析间变异系数分别为1．6％-4．1％和4．4％-8．8％。与E2、孕酮和睾酮的交叉反应率分别为0．24％、0．36％和0．40％。149份血样用本试剂与进口的同类试剂同时检测,其相关系数为0．925。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

透射免疫比浊法和速率散射免疫比浊法测定C反应蛋白的比较

目的：评估透射免疫比浊法和速率散射比浊法检测C反应蛋白(CRP)的灵敏度和特异性。方法：用免疫透射比浊法和速率散射比浊法同时检测了80例各种患者血清中CRP浓度。结果：两种方法在8—20mg／L、20～40mg／L、40～80mg／L、80～160mg／L、160～300mg／L范围内测定C反应蛋白的相关系数是0．990、0．996、0．995、0．992、0．997．说明两种方法的相关性是良好的，而在低值1～8mg／L的测定中两方法的相关系数为0．928．结论：速率散射免疫比浊法在低值和高值测定中可以得到较为准确的CRP检测结果。     

生物素-链霉亲和素技术一步法检测人心肌肌钙蛋白T

目的：用已获得的两株抗人心肌肌钙蛋白T(cTnT)单克隆抗体N15C和N16D建立检测cTnT的生物素—链霉亲和素技术一步法。方法：应用酯化生物素对N15C进行标记,应用辣根过氧化物酶对N16D进行标记。将待检血清或抗原标准品、生物素标记的N15C和酶标记N16D加入经链霉亲和素包被的96孔酶标板微孔中,然后加入OPD,硫酸终止反应后,在λ=490nm处读取A值,根据标准曲线求出各样本值。结果：建立的方法检测cTnT,检测灵敏度为1．0μg／L,可定量检测范围为2．0～32．0μg／L。11例AMI患者和10例正常人用该法进行血清检测,与Enzymun—Test TnT试剂盒相比,阳性符合率为82％,特异性为100％。经重复检测表明本方法检测低浓度cTnT批内变异系数为4．70％,批间变异系数为9．36％;检测高浓度cTnT批内变异系数为3．20％,批间变异系数为8．25％。结论：该方法特异性高,重复性好,较常规双抗体夹心ELISA法有更高的灵敏度。     

TDx—FLMⅡ和卵磷脂鞘磷脂比预测胎儿肺成熟的比较

目的：评估检测荧光偏极化分析Ⅱ（TDx—FLMⅡ）和卵磷脂鞘磷脂比（L／S）预测胎儿肺成熟的有效性。研究设计：回顾分析了218例连续成对的TDx—FLMⅡ和L／S结果。对采集羊水72h内活产的109例妇女进行灵敏度和特异度分析。对研究期间所有妇女及采集羊水72h内活产的妇女都进行了一致性检验。结果：研究期间，9例呼吸窘迫综合征（RDS）婴儿出生。TDx—FLMⅡ和L／S最佳界值检测RDS均有100％的灵敏度。与TDx—FLMⅡ相比，L／S存在特异度增加趋势（L／S：80％粥FLMⅡ：73％）。TDx—FLMⅡ和L／S总一致性接近75％。结论：TDx—FLMⅡ和L／S均为检测RDS灵敏度较高的试验，但二者之间一致性较低。本研究结果为最优应用TDx—FLMⅡ和L／S检测（连续或反射级联反应）胎儿肺成熟提供了参考。     

冠心病患者妊娠相关血浆蛋白A含量与血管内皮功能关系探讨

 【目的】探讨冠心病患者血循环妊娠相关血浆蛋白A（PAPP—A）水平与内皮功能的关系。【方法】64例冠心病患者，其中稳定型心绞痛组34例，急性冠脉综合征组30例，分别检测其相关内皮功能，包括肱动脉血流介导的血管舒张反应（FMD）和高敏C-反应蛋白（hs—CRP）、内皮素（ET）、一氧化氮（NO）水平，并用酶联免疫法检测血清PAPP—A。【结果】稳定型心绞痛组患者同急性冠脉综合征组相比PAPP—A[（6×10^-3±5×10^-1U／L与（19×10^-3±13×10^-3）U／L，P〈0．05]、hs-CRP[（0．5±0．3）mg／L与（3．6±2．2）mg／L，P〈0．01]、NO[（57±4）μmol／L与（45±5）μmol／L，P〈0．05]和FMD（6．0％±0．8％与3-3％±1．2％，P〈0．05）的差异有统计学意义。逐步选择多重回归分析，按α=0．10水准，发现PAPP—A与hs—CRP和FMD存在直线关系，Lnhs—CRP的偏相关系数为0．333（95％置信区间：0．138-0．527，P〈0．01），FMD的偏相关系数为-0．623（95％CI：-1．144—0．102，P〈0．051，其中常数项为5．570。高PAPP—A（〉11．094×10^-3U／L）患者hs—CRP明显增高[（5．3±4．2）mg／L与（1．3±0．6）mg／L，P〈0．01），FMD则降低（3.3％±2．4％与6．2％±3．6％，P〈0．05）。【结论】PAPP-A可作为间接评估冠心病患者血管内皮功能的指标之一。     

超敏C反应蛋白与降钙素原在细菌感染中的相关性分析及诊断价值

目的：探讨超敏C反应蛋白（Hs—CRP）和降钙素原（PCT）在细菌感染中的相关性,并分析二者在细菌感染临床诊断中的应用价值。方法：随机选取2013年2～5月在我院诊治的165例细菌感染者及122例非细菌感染者作为研究对象,测定两组患者血中Hs—CRP与PCT的水平,分析两者相关性及其用于预测细菌感染的价值。结果：细菌感染组患者Hs—CRP、PCT水平及白细胞总数、中性粒细胞计数显著高于非细菌感染组（t分别为15．35、9．72、13．36、13．92,P均〈0．05）。细菌感染组患者HS—CRP与PCT之间存在相关性（r=0．826,P〈0．05）。预测细菌感染时,PCT的临界值为0．39rig／L,灵敏度、特异度分别为88．2％和77．1％;Hs—CRP的临界值为41mg／L,灵敏度、特异度分别为76．2％和71．5％;两者联合预测的灵敏度和特异度分别达到92．3％和81．5％。结论：Hs—CRP与PCT可作为细菌感染临床诊断的重要依据,两者联合检测可相互补充,具有重要的临床指导意义。     

气相色谱法程序升温测定工作场所中的苯系物

目的建立气相色谱法测定工作场所中苯、甲苯、乙苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯和苯乙烯的检测方法。方法确立本检测方法的条件试验,如色谱条件等;进行气相色谱法程序升温测定工作场所中苯系物的方法学试验。结果7种成份在11min内完成测定并具有较好的分离效果;在（0．4～700．0）μg／L浓度范围内可获得较好的直线方程,相关系数（r）为0．9990—0．9999;最低检出限分别为：苯0．2μg/L、甲苯2．5μg／L、乙苯3．6μg／L、对二甲苯3．6μg／L、间二甲苯0．9μg／L、邻二甲苯3．4μg/L、苯乙烯1．3μg／L。精密度RSD为1．1％～3．7％,回收率为90．0％-108．1％。结论此方法操作简便、重现性好,提高了灵敏度,适用于检测工作场所中苯系物的含量。     

免疫增强透射比浊法测定超敏C-反应蛋白的方法学评价

目的：对免疫增强透射比浊法在全自动生化分析仪上测定超敏C-反应蛋白(Hs-CRP)的方法进行评价。方法：检测该方法的分析范围、最低检测限、精密度、抗干扰能力及参考范围。结果：免疫增强透射比浊法测定Hs-CRP的分析范围为0．125～12．5mg／L，最低检测限为0.115mg／L，批内、批间精度分别为0．89％和0．90％；本实验室Hs-CRP的参考范围为0．20～2．60mg／L。结论：免疫增强的透射比浊法在全自动生化分析仪上测定Hs-CRP的方法具有敏感性高、稳定性好、方便快速的优点，适宜于在临床推广应用。     

妊娠期糖尿病筛查时不同种族是否需要不同标准

目的：研究妊娠期糖尿病的诊断标准是否应根据种族进行标准化。研究设计：回顾性研究了14565例进行妊娠期糖尿病筛查的孕妇，初步结果判定是根据100g葡萄糖耐量试验诊断的妊娠期糖尿病，即空腹或餐后1h、2h、3h血糖界值分别为0．95g／L、1．80g／L、1．55g／L、1．40g／L，如任意两项达到或超过其界值，则诊断为妊娠期糖尿病。50g葡萄糖耐量试验的界值在1．30-1．50g／L之间。针对白人、非裔美国人、拉丁人及亚洲人，比较葡萄糖负荷试验不同界值的灵敏度、特异度及假阳性率和阳性预测值。通过受试者操作特征曲线比较其灵敏度和特异度。结果：种族不同则葡萄糖筛查试验的灵敏度和特异度也有所不同。大体上，非裔美国人在本研究范围内的灵敏度和特异度最高。如将葡萄糖负荷试验的假阳性率控制在10％，则非裔美国人的界值应为1．33g／L，白人为1．40g／L，拉丁人为1．43g／L，而亚洲人应为1．47g／L。当葡萄糖负荷试验的界值较低（1．30～1．35g／L）时，亚洲人的阳性预测值最高（30．0％和34．0％），而当葡萄糖负荷试验的界值较高（1．45～1．50g／L）时，非裔美国的阳性预测值最高（46．0％和51．5％）。在葡萄糖负荷试验的界值范围内，白种人的阳性预测值最低（P〈0．001）。     

RP-HPLC法测定自制尼美舒利分散片含量及有关物质

目的：建立RP—HPLC法测定尼美舒利分散片的含量及有关物质。方法：采用DiamonsilTMC18（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱，乙腈-0．01mol／L磷酸二氢钾（三乙胺调pH=6．5）（55：45）为流动相。检测波长254nm，流速1．0ml／min。结果：尼美舒利与各杂质及降解产物分离良好，在150—350μg／ml范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率99．75％，RSD为0．82％，最低检测限为35ng，最低定量限为110ng。结论：该方法简便、快速、准确、灵敏度高、重复性好，可用于尼美舒利含量及有关物质的测定。     

冠心病患者妊娠相关血浆蛋白A含量与血管内皮功能关系探讨

【目的】探讨冠心病患者血循环妊娠相关血浆蛋白A（PAPP—A）水平与内皮功能的关系。【方法】64例冠心病患者，其中稳定型心绞痛组34例，急性冠脉综合征组30例，分别检测其相关内皮功能，包括肱动脉血流介导的血管舒张反应（FMD）和高敏C-反应蛋白（hs—CRP）、内皮素（ET）、一氧化氮（NO）水平，并用酶联免疫法检测血清PAPP—A。【结果】稳定型心绞痛组患者同急性冠脉综合征组相比PAPP—A[（6×10^-3±5×10^-1U／L与（19×10^-3±13×10^-3）U／L，P〈0．05]、hs-CRP[（0．5±0．3）mg／L与（3．6±2．2）mg／L，P〈0．01]、NO[（57±4）μmol／L与（45±5）μmol／L，P〈0．05]和FMD（6．0％±0．8％与3-3％±1．2％，P〈0．05）的差异有统计学意义。逐步选择多重回归分析，按α=0．10水准，发现PAPP—A与hs—CRP和FMD存在直线关系，Lnhs—CRP的偏相关系数为0．333（95％置信区间：0．138-0．527，P〈0．01），FMD的偏相关系数为-0．623（95％CI：-1．144—0．102，P〈0．051，其中常数项为5．570。高PAPP—A（〉11．094×10^-3U／L）患者hs—CRP明显增高[（5．3±4．2）mg／L与（1．3±0．6）mg／L，P〈0．01），FMD则降低（3.3％±2．4％与6．2％±3．6％，P〈0．05）。【结论】PAPP-A可作为间接评估冠心病患者血管内皮功能的指标之一。     

反相高效液相色谱法测定头孢西酮钠原料药的含量及有关物质

目的建立头孢西酮钠含量测定及有关物质测定的HPLC法。方法反相高效液相色谱法，流动相：0．2mol／L的磷酸二氢钾：乙腈=85：15；检测波长为280；流速为1ml／min；进样量：20td。结果头孢西酮钠在0．0804～0．294mg／ml浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好，r=0．99999，最低检限为0．02ng，本方法的重复性与精密性良好（RSD％：0．23％，n=6）经专属性试验，可知杂质峰与主峰分离良好，理论塔板数均大于4000，分离度均大于3。该方法的平均回收率为100．62％（n=9）。结论该方法简便，灵敏度高，结果准确，可用于头孢西酮钠原料药含量及有关物质的检测。     

火焰原子吸收法直接测定蒸馏酒中的锰

目的探索直接测定蒸馏酒中锰的火焰原子吸收法。方法应用火焰塞曼偏振原子吸收分光光度计，采用塞曼扣背景，波长279．6nm，灯电流5．0mA，狭缝1．3nm，气体流量空气15．0L／min、燃气2．0L／min、测量高度7．5mm。根据酒样的乙醇浓度配制相应以乙醇浓度为溶剂的锰标准系列溶液，测定吸光度，与样品吸光度比较，测定酒样中锰的含量。结果线性范围为0．05～5．00mg／L，回归方程Y=0．2900X＋0．0116，相关系数r=0．9999，最低检测浓度为0．009mg／L；准确度：酒样中分别加入0．50mg／L的锰，测得其回收率为95．0％～105．O％，平均99．6％；精密度：在0．682mg／L、0．873mg／L、0．733mg／L浓度下测得相对标准偏差RSD分别为1．6％、1．0％、1．6％。结论该法简便、快速、特异性强、相关性好、灵敏度高、准确度好、精密度高、线性范围宽。     

微波消化石墨炉原子吸收分光光度法测定血中铅镉

目的 比较微波消化法与硝酸稀释法处理血样以测定血铅和血镉的优劣。方法 利用微波消化法处理血样，探讨了微波消化血样的最佳条件，对方法的检出限、精密度、回收率、线性范围进行了考察。结果检出限为：铅（Pb）0．72μg／L，镉（Cd）0．16μg／L；精密度：Pb15．0—8．7，Cd18．7—8、4；回收率：Pb94．7％～98、3％，Cd95．1％～98．6％。结论 与国标方法WS／T20—1996和WS／T34—1996相比，微波消化法的线性范围、精密度、检出限都有很大的改善。     

毛细管气相色谱法测定鲑鱼中多氯联苯残留量

目的：建立气相色谱法测定水产品鲑鱼中多氯联苯残留量的测定方法。方法：采用HP-5弹性石英毛细管（30m×0．32mm，0．25μm）色谱柱，进样口温度为250℃；检测器温度为300℃。不分流进样，程序升温，检测器为63Ni电子捕获检测器，高纯氮气为载气。结果：6种多氯联苯在0．002mg／L-0．1mg／L范围内线性关系良好（r〉0．998），其检出限范围为0．01μg／L，该方法的回收率为86．1％-92.3％、相对标准偏差≤6．5％。结论：该方法的准确度、灵敏度、回收率及重现性均符合要求：     

5-羟色胺转运体蛋白基因多态性与替加色罗治疗便秘型肠易激综合征疗效的关系

目的探讨5-HT转运体蛋白（SERT）基因启动子区域（5-HTTLPR）的多态性，及其对5-HT4受体部分激动剂（替加色罗）治疗便秘型肠易激综合征（C—IBS）疗效的影响。方法按罗马Ⅱ诊断标准入选41例C—IBS患者，基线期2周，试验期4周，替加色罗6mg/次，2次／d。用PCR方法对此41例患者和96例健康对照者的5-HTTLPR区多态性进行对照研究，探讨其对C—IBS患病及药物疗效的影响。结果C—IBS患者及对照组均以S／S基因型为常见，但L／L型的基因频率C—IBS组高于对照组（24．2％vs7．3％；P〈0．05）；治疗后总体症状感觉缓解率为S／S：85．0％，S／L：70．0％，L／L：36．3％（P〈0．05）；SGA评分：S／S组和S／L组疗效优于L／L组（P〈0．05）；单个症状缓解情况（包括每周排便次数、粪便性状、便后排空感、腹胀）：S／S组和L／S组均优于L／L组（P〈0．05）。结论L／L型人较易患C—IBS；S／S组和S／L组的替加色罗疗效优于L／L组。     

胃癌患者幽门螺杆菌L型感染的临床研究

目的：探讨胃癌与幽门螺杆菌L型（Hp—L）感染的关系。方法：取186例胃癌患者胃窦和胃体黏膜组织常规切片后经革兰氏染色和免疫组化染色镜检Hp—L型细菌。结果：Hp—L型检出率为56．45％（105／186），革兰染色和免疫组化染色法检出率分别为60．22％（112／186）和58．60％（109／186），差异无显著性（x^2=0．1，P〉0．05），男女患者阳性率依次为69．16％（74／107）和39．24％（31／79），前者明显高于后者（x^2=16．55，P〈0．01）。30岁以下、30岁～、40岁～、50岁～患者Hp—L型阳性率分别为33．33％（4／12）、41．38％（12／29）、52．73％（29／55）、66．67％（60／90），差异有显著性（x^2=9．39，P〈0．05）。Hp—L型阳性率在肠型胃癌患者中为75．42％（89／118），明显高于弥漫型患者为23．53％（x^2=47．26，P〈0．01）；胃窦部胃癌患者（64．71％）高于贲门部患者（41．79％）。结论：GC患者Hp—L型感染率较高，且男性高于女性。Hp—L型检出率随年龄增长而增高，且主要作用于胃窦部。是引起肠型胃癌的重要致病因子之一。     

康妇灵胶囊中苦参碱含量测定的研究

目的建立康妇灵胶囊中苦参碱的高效液相色谱含量测定方法。方法采用C18色谱柱，以乙腈-0．2％磷酸溶液（5：95）为流动相；检测波长207nm；流速1．0mL／min。结果苦参碱在0．0354—0．2832μg时线性关系良好，相关系数r=0．9999，平均回收率为97．9％，RSD为1．38％。结论本方法灵敏度高，操作简便，结果准确。     

高效液相色谱法测定人血浆罗哌卡因的浓度

目的 建立测定人血浆罗哌卡因浓度的高效液相色谱方法。方法 LC-6A高效液相色谱仪，色谱柱为Hy—persilC18（150mm×4．6mm，5μm）。以布比卡因为内标，流动相采用乙腈：水=17：83（V／V），流速2．0ml／min，在紫外检测波长210nm处进行检测。结果 本方法标准曲线线性方程为Y=1．1236X＋0．0245（y=0．9997，线性浓度范围为0．025～2．5mg／L）；最低检测限为0．0125mg／L；平均方法回收率为99．63％；日间、日内精密度RSD均〈9％。结论 本方法简便、灵敏、快捷、准确，可用于临床上罗哌卡因血药浓度的监测和药代动力学研究。