异鼠李素对H2O2诱导的肠上皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:评价异鼠李素对H₂O₂诱导的大鼠肠上皮细胞IEC-6氧化应激损伤的保护作用及机制。方法:MTT实验筛选异鼠李素对IEC-6细胞的安全作用浓度用于评价抗H₂O₂诱导的氧化应激损伤功效。设正常对照组、H₂O₂组、N-乙酰半脱氨酸(NAC)组(10μmol/L)、异鼠李素低剂量组(20μmol/L)、异鼠李素中剂量组(40μmol/L)及异鼠李素高剂量组(100μmol/L)。正常对照组常规培养,H₂O₂组用500μmol/L H₂O₂处理,NAC及异鼠李素组分别用10μmol/L NAC,20、40、100μmol/L异鼠李素预处理细胞相应时间后,用500μmol/L H₂O₂继续培养。流式细胞术检测细胞凋亡及ROS水平,试剂盒检测细胞中MDA含量及SOD活性,Western blot检测细胞中Nrf2/HO-1、PI3K/...     

芍药苷对H2O2诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用

目的 研究芍药苷对过氧化氢（H₂O₂）诱导人神经瘤母细胞（SH-SY5Y）凋亡的保护作用及其机制。方法 制备H₂O₂诱导的氧化应激损伤模型。相差显微镜观察SH-SY5Y细胞形态的变化;CCK-8法测定细胞存活率;Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡;碘化丙啶染色、流式细胞仪检测细胞周期;2′, 7′-二氯荧光素二乙酸盐（DCFH-DA）法检测细胞内活性氧（ROS）;INT显色反应法测定乳酸脱氢酶（LDH）的量;ELISA法检测8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的量;caspase-3催化特异性底物反应检测caspase-3活性。结果 与对照组相比,200 μmol/L H₂O₂作用SH-SY5Y细胞24 h,使细胞存活力显著下降（P＜0.01）,细胞凋亡率上升（P＜0.01）,增殖指数（PI）降低（P＜0.05）,8-OHdG的量上升（P＜0.01）,LDH释放量和细胞内ROS量增加（P＜0.01）,caspase-3活性增强（P＜0.01）。与H₂O₂损伤组相比,芍药苷终浓度为20～40 μmol/L,可浓度相关地减轻H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞上述指标的变化（P＜0.05）;芍药苷10 μmol/L组细胞PI、LDH和8-OHdG量未有明显改观,但能显著减轻H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞毒性、ROS和caspase-3活性（P＜0.05）。结论 芍药苷对H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞损伤具有显著保护作用,该作用可能与其清除ROS、减轻DNA氧化损伤、抑制细胞凋亡的caspase通路激活和调节细胞周期有关。     

胡桃楸青皮萃取物对内源性H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用研究

目的探讨胡桃楸青皮萃取物对内源性H2O2诱导血管内皮细胞凋亡的影响。方法建立10 m U葡萄糖氧化酶(GOX)催化生成内源性H2O2损伤内皮细胞模型。1将细胞分成空白对照组、10 m U GOX组及实验组(10 m U GOX与25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L浓度的萃取物共培养)共5组,分别进行相应干预,观察不同剂量胡桃楸青皮萃取物对血管内皮细胞形态学及细胞增殖影响。2将细胞分成空白对照组、10 m U GOX组、10 m U GOX+50 mg/L萃取物混合培养组,分别进行相应干预。采用Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡的形态学改变;Annexin/PI双标记染色后进行流式细胞双色分析,检测内皮细胞凋亡率。结果1与空白对照组比较,10 m U GOX组,10 m U GOX组与25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L混合培养组细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);10 m U GOX组与25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L混合培养组细胞存活率明显高于10 m U GOX组(P<0.05,P<0.01)。2 Hoechst 33258荧光染色及早期凋亡率分析显示,与空白对照组比较,10 m U GOX组细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);与10 m U GOX组比较,10 m U GOX+50 mg/L萃取物组细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论胡桃楸青皮萃取物对内源性H2O2损伤的血管内皮细胞有保护作用,进一步研究表明胡桃楸青皮萃取物对内源性H2O2诱导的内皮细胞凋亡有抑制作用。     

宁夏枸杞总黄酮对H2O2损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的: 研究宁夏枸杞总黄酮对过氧化氢(H₂O₂)损伤的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的保护作用及可能的机制. 方法: 采用H₂O₂诱导HUVEC氧化应激损伤模型.实验分为正常组、1 mmol·L^-1H₂O₂损伤模型组、枸杞总黄酮保护(100,200,400 mg·L^-1) 预孵育24 h组,以及阳性对照(维生素C 20 mg·L^-1)组,预孵育24 h.采用噻唑蓝(MTT)法检测枸杞总黄酮对1 mmol·L^-1 H₂O₂损伤 4 h细胞活性,测定细胞上清液中丙二醛(MDA),乳酸脱氢酶(LDH),超氧化物歧化酶(SOD),一氧化氮(NO). 结果: 与正常组比较,H₂O₂损伤模型组MDA含量、LDH活性均增高,NO生成量、SOD活性明显下降,其差异均具有显著性(P<0.01).枸杞黄酮保护组MDA含量、LDH活性均下降,NO生成量、SOD活性较H₂O₂损伤模型组明显增高(P<0.01),MDA含量、LDH活性的下降程度,NO生成量、SOD活性的增高程度,与枸杞总黄酮呈剂量依赖性. 结论: 宁夏枸杞总黄酮对H₂O₂所致人血管内皮损伤有保护作用,其机制可能与宁夏枸杞总黄酮抑制损伤细胞的脂质过氧化,以及有效提高机体抗氧化酶的活性、清除自由基,促进一氧化氮(NO)的合成有关.     

槲皮素对H2O2致内皮细胞损伤的保护作用

目的:探讨槲皮素对血管内皮细胞损伤的保护作用及机制.方法:采用体外培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304,观察内皮细胞加入槲皮素8,4,2 mg·L-1培养24 h后,再加入H2O2培养18h后,造成血管内皮细胞损伤模型.用流式细胞仪测定内皮细胞死亡率,用ELISA法检测内皮细胞培养液血栓调节蛋白(TM)的含量;荧光分光光度法测定内皮细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性.结果:与H2O2损伤后的模型组相比,槲皮素可以减低细胞死亡率,[模型组细胞死亡率为(28.36±0.10)％,槲皮素高、中、低剂量分别为(8.34±0.01)％,(16.58±0.04)％,(10.12±0.02)％],可使培养液中TM蛋白含量减少,[模型组为(58.5±18.8)μg·L-1,槲皮素高、中、低剂量为(32.7±9.7),(27.8±1.9),(32.1±8.6) μg·L-1]和LDH活性减少[模型组为(1 931.9±159.5) U·L-1,槲皮素高、中、低剂量为(1.092±126.2),(1 159.6±274.2),(1 223.5±120.5)U·L-1].结论:槲皮素能明显保护过氧化氢对内皮细胞的损伤,其保护作用与抗脂质过氧化、保护细胞的完整性有关.     

复方当归注射液对H2O2所致心肌细胞凋亡的保护作用

目的:探讨复方当归注射液对心肌细胞凋亡的保护作用。方法:体外原代培养心肌细胞分为正常组、模型组及复方当归注射液干预组(高、中、低剂量),每组8个样本;采用过氧化氢(H2O2)制备心肌细胞凋亡模型;运用流式细胞仪测定各组心肌细胞凋亡率与细胞内钙离子浓度([Ca2+]i);测定细胞培养上清液的乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平与超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:模型组的细胞凋亡率、[Ca2+]i及LDH、MDA水平显著高于正常组(P<0.01),SOD活性则显著降低(P<0.01);复方当归注射液干预组的细胞凋亡率、[Ca2+]i及LDH、MDA水平显著低于模型组(P<0.01),SOD活性则显著提高(P<0.01),且呈剂量依赖性。结论:复方当归注射液对H2O2所致心肌细胞凋亡有一定的保护作用,其机制可能与其有效清除氧自由基及抑制细胞内钙超载相关。     

黄芪异鼠李素抗肿瘤作用机制的网络药理学分析

目的：通过网络药理学方法和分子对接技术探讨黄芪黄酮类活性成分异鼠李素抗肿瘤作用及调控机制。方法：从中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）数据库筛选出异鼠李素的靶点信息,Gene Cards数据库筛选出肿瘤相关靶点,通过R软件获得二者靶点交集。使用STRING在线数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,Cytoscape软件构建药理学调控网络,筛选出核心靶点。通过R语言进行基因本体论（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析,分析作用靶点相关基因功能及信号通路。最后以活性成分异鼠李素为配体,与核心靶点进行分子对接分析以了解活性成分与核心靶点分子间的亲和力。结果：筛选出异鼠李素调控肿瘤的潜在靶点29个,其中雌激素受体（Estrogen Receptor,ESR）1、前列腺素氧化环化酶（ProstaglandinEndoperoxide Synthase,PTGS）2、RELA癌基因（RELA Proto-Oncogene, NF-KB Subunit,RELA）、雄激素受体（Androgen Receptor,AR）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisom...     

垂盆草总黄酮及异鼠李素对对乙酰氨基酚诱导的L02细胞损伤的保护作用

目的:探讨垂盆草总黄酮及异鼠李素对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的人正常肝细胞(L02)损伤的保护作用。方法:以不同浓度的APAP刺激L02细胞,制备损伤模型,筛选APAP的有效刺激浓度;复制APAP诱导的L02细胞损伤模型,用细胞增殖与活性试剂(CCK-8)检测细胞存活能力,分析盆草总黄酮及异鼠李素对APAP诱导的L02细胞活性的影响;检测细胞上清液中丙二醛(MDA),谷胱甘肽(GSH)含量,超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量。结果:与正常组比较,不同浓度的APAP处理的L02细胞活力显著降低,筛选出的造模条件为10 mmol·L-1APAP孵育24 h,模型组肝细胞上清液中MDA含量升高(P0.05,P0.01),GSH含量降低,SOD,GSH-Px活性降低,AST和ALT含量升高;与模型组比较,垂盆草总黄酮、异鼠李素均能显著提高APAP损伤细胞的存活率,降低MDA含量,提高GSH含量,提高SOD,GSH-Px活性,降低ALT和AST的释放量(P0.05,P0.01)。结论:垂盆草总黄酮及异鼠李素对APAP损伤的L02细胞具有较好的保护作用。     

东方肉穗草异鼠李素诱导HepG2细胞凋亡研究

目的研究东方肉穗草中的主要抗癌活性成分之一异鼠李素诱导HepG2细胞凋亡的机理。方法采用MTT法检测异鼠李素对肝癌HepG2细胞的抑制作用,DAPI染色法对细胞凋亡进行形态学检测。结果实验结果显示异鼠李素对肝癌HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,呈浓度依赖性效应。异鼠李素处理48h的IC50为60μmol/L。荧光显微形态学检测显示异鼠李素处理HepG2细胞后出现细胞凋亡的特征性变化。结论研究表明东方肉穗草异鼠李素可以诱导肝癌HepG2细胞凋亡。     

青藤碱抑制H2O2诱导乳鼠心肌细胞凋亡

目的:探讨青藤碱对H₂O₂诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:在原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞上建立H₂O₂损伤模型,观察不同剂量青藤碱(10,30,100μmol.L^-1)对心肌细胞凋亡率、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、乳酸脱氢酶(LDH)活性及NF-κB蛋白表达的影响。结果:H₂O₂组与空白对照组相比,心肌细胞凋亡率显著增加(P<0.01),并随着时间的延长其凋亡率不断增高;青藤碱明显抑制H₂O₂所诱导各个时间段的心肌细胞凋亡率(P<0.01),降低MDA含量,增加SOD,LDH活性,抑制NF-κB蛋白表达。结论:青藤碱对H₂O₂诱导的乳鼠心肌细胞凋亡有抑制作用,其作用机制可能与其抗脂质氧化、抑制心肌细胞表达NF-κB有关。     

菟丝子总黄酮对过氧化氢损伤的血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨菟丝子总黄酮对H202损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用.方法:于37℃、5％ CO2、95％空气饱和湿度的培养箱内体外培养内皮细胞,将细胞分为4组,即正常对照组:加入DMEM培养液(pH 7.2 ～7.4)、菟丝子对照组(菟丝子0.5mg·L-1)、模型组(过氧化氢终浓度为200 mmol·L-)、菟丝子+过氧化氢组(菟丝子0.5mg· L-1,过氧化氢200 mmol·L-),研究菟丝子总黄酮对受损血管内皮细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)释放情况、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及对细胞形态学的影响.结果:菟丝子总黄酮(0.5 mg·L-1)能明显减轻H2O2对HUVECs所致的氧化损伤,可明显改善氧化损伤的HUVECs形态学变化,H2O2模型组(200 mmol·L-)与空白组比较,LDH释放和MDA含量显著升高(P＜0.01,P＜0.05),SOD释放水平和GSH-Px活力显著下降(P＜0.01),菟丝子(0.5mg·L-1)+ H2O2(200 mmol·L-1)组与H2O2模型组(200 mmol·L-1)比较,LDH释放和MDA含量显著下降(P＜0.01,P＜0.05),SOD释放水平和GSH-Px活力显著升高(P＜0.01).结论:菟丝子总黄酮对H202诱导的HUVECs的损伤具有保护作用.     

龙血通络胶囊对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:本文探讨过氧化氢(H_2O_2)诱导PC12细胞损伤后,龙血通络胶囊的神经保护作用及其潜在作用机制。方法:以500μmol·L~(-1)H_2O_2构建PC12细胞损伤模型,实验分为空白组,模型组(H_2O_2,500μmol·L~(-1)),龙血通络胶囊组(LTC,1,2,4 mg·L~(-1))。通过细胞增殖毒性检测(CCK-8),胞内活性氧(ROS)水平,线粒体膜电位水平(JC-1),细胞凋亡率以及蛋白免疫印迹法(Western blot)评价龙血通络胶囊对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的神经保护作用。结果:与空白组比较,模型组的细胞存活率显著降低(P0.01),ROS水平显著上升(P0.01),线粒体膜电位水平下降,细胞凋亡率显著升高(P0.01),剪切的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)水平显著上升(P0.01)。与模型组比较,LTC组(1,2,4 mg·L~(-1))能浓度依赖性升高细胞的存活率(P0.01),降低ROS水平(P0.05),维持线粒体膜电位水平,降低细胞的凋亡水平(P0.01),并显著降低PARP蛋白的剪切水平(P0.01)。结论:龙血通络胶囊对H_2O_2诱导的PC12细胞损伤具有显著的保护作用,其作用机制可能是通过抑制胞内氧化应激,维持线粒体功能,促进DNA修复等途径进而抑制神经细胞凋亡。     

丹参注射液对血管内皮细胞低氧损伤的保护作用

目的 探讨丹参注射液对血管内皮细胞低氧损伤的保护作用及可能的机制.方法 将体外培养的人脐静脉内皮细胞株(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)分为3组,即常氧培养组、低氧培养组及低氧培养+丹参组,通过倒置相差显微镜观察并比较各组细胞的形态变化;MTT法检测细胞活性;AO/EB染色和Annexin V -FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;利用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧水平;并取各组细胞上清液进行总抗氧化能力检测.结果 丹参能够显著减少低氧引起的细胞凋亡,提高细胞存活率,降低细胞内活性氧水平,并调节细胞总抗氧化能力.结论 低氧条件下,丹参对HUVEC有保护作用,其机制可能与清除自由基有关.     

金丝桃苷对过氧化氢诱导的A549细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究金丝桃苷对过氧化氢(H_2O_2)诱导的A549细胞氧化损伤的保护作用,并探讨其相关的作用机制。方法:体外培养A549细胞,采用H_2O_2(400μmol·L~(-1))作用24 h,建立A549细胞氧化损伤模型,分为空白组,模型组(400μmol·L~(-1)H_2O_2),阳性药(100μmol·L~(-1)N-乙酰半胱氨酸)组和不同浓度金丝桃苷(1,10,100μmol·L~(-1))组。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测活性氧(ROS),丙二醛(MDA)含量,乳酸脱氢酶(LDH),过氧化氢酶(CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。通过罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位改变。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测沉默信息调节因子3(Sirt3),异柠檬酸脱氢酶2(IDH2)和锰超氧化物岐化酶(Mn SOD)蛋白表达。结果:与模型组比较,金丝桃苷显著提高细胞存活率(P0.01),降低LDH的外漏,ROS和MDA含量(P0.05,P0.01),明显增加CAT,SOD,GSH-Px活性(P0.05,P0.01)。金丝桃苷能够显著提高线粒体膜电位,上调Sirt3,IDH2和Mn SOD蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:金丝桃苷能够保护H_2O_2诱导的A549细胞氧化损伤,其作用可能与提高清除ROS能力,调控Sirt3线粒体途径相关。     

松花粉对H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨松花粉对过氧化氢(H_2O_2)诱导人肝癌HepG2细胞应激性氧化损伤的保护作用。方法:将HepG2细胞分为正常组,H_2O_2模型组和样品干预组。样品干预组用不同浓度的松花粉预处理HepG2细胞12 h,H_2O_2模型组和样品干预组用400μmol·L~(-1)过氧化氢氧化损伤细胞2 h,产生氧化应激损伤。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测HepG2细胞活力;微板法检测细胞内活性氧(ROS),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,乳酸脱氢酶(LDH)及丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测抗氧化通路中关键基因核因子E2相关因子2(Nrf2),Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCL)和血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白的表达水平,以评价松花粉对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用。结果:MTT结果显示,与正常组比较,松花粉(80,40,20,10,5 mg·L~(-1))对HepG2细胞没有毒性;H_2O_2模型组中ROS,LDH及MDA的水平显著升高(P0.01),SOD和GSH-Px的活性显著降低(P0.01)。与H_2O_2模型组比较,松花粉干预组中ROS,LDH及MDA的水平显著降低(P0.05,P0.01),SOD和GSH-Px的活性显著升高(P0.05,P0.01)。Western blot结果显示,松花粉显著上调Nrf2,HO-1和GCL的蛋白表达,并下调Keap1的蛋白表达。结论:质量浓度5~20 mg·L~(-1)松花粉可有效保护400μmol·L~(-1)H_2O_2对HepG2细胞应激性氧化损伤。其机制可能与调节SOD,GSH-Px活性,ROS,LDH,MDA水平有关,同时与调控抗氧化通路中关键基因Nrf2,Keap 1,HO-1,GCL蛋白的表达水平有关。     

参芎葡萄糖注射液对H2O2诱导的HUVEC细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨参芎葡萄糖注射液(Shenxiong glucose injection,SGI)对H_2O_2诱导的人脐静脉上皮细胞(HUVEC)细胞氧化模型损伤的保护作用及其机制。方法:体外培养HUVEC人脐静脉内皮细胞,用H_2O_2(130 mmol·L~(-1))处理0.5 h,建立HUVEC细胞H_2O_2氧化损伤模型。SGI组HUVEC细胞用(6%,8%,10%)SGI预处理6 h后,再用H_2O_2处理0.5 h。用MTS法检测细胞存活率;用ELISA法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测凋亡相关基因及蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的mRNA和蛋白表达情况。结果:在130 mmol·L~(-1)H_2O_2作用细胞0.5 h的情况下,细胞存活率降低至50%左右,降低的程度合适,且实验结果重复性好,因此后续实验用该条件建立氧化损伤模型。与H_2O_2组比较,SGI预处理6 h能显著升高细胞存活率(P0.05,P0.01),减少LDH的外漏和MDA的生成(P0.05,P0.01),显著增加SOD,GSH-Px和CAT的活性(P0.05,P0.01)。RT-PCR和Western blot结果表明,SGI能显著上调Bcl-2的表达(P0.05,P0.01),下调Caspase-3,Bax的表达(P0.05,P0.01)。结论:参芎葡萄糖注射液能保护HUVEC细胞对抗H_2O_2诱导的氧化损伤,具有一定的剂量依赖关系,其作用机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

阿魏酸对H2O2致PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨阿魏酸(ferulic acid,FA)对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制。方法:H_2O_2诱导PC12细胞构建氧化应激损伤模型,不同剂量阿魏酸(终浓度为1,10,100μmol·L~(-1))进行干预;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,生化法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)的含量以及细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活性,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中胰岛素样生长因子-1(IGF-1) mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测IGF-1蛋白的表达。结果:不同剂量的阿魏酸(终浓度为1,10,100μmol·L~(-1))干预24 h后能明显改善H_2O_2诱导的PC12细胞的氧化损伤,与模型组比较,给药组细胞存活率明显升高,细胞上清液中LDH的漏出率明显减少(P 0. 01); MDA的含量明显降低(P 0. 05),同时细胞中SOD的含量显著升高(P 0. 01); Real-time PCR结果显示,与空白组比较,模型组IGF-1 mRNA显著降低(P 0. 01),与模型组比较,药物干预24 h后IGF-1 mRNA表达显著升高(P 0. 01); Western blot结果显示,与空白组比较,模型组IGF-1蛋白的表达显著降低(P 0. 01),与模型组比较,药物作用24 h后,能上调IGF-1蛋白的表达(P 0. 01)。结论:FA能够抑制H_2O_2诱导的PC12细胞的氧化损伤,其保护作用机制可能与胰岛信号通路相关。     

当归补血汤对内皮祖细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:研究当归补血汤(DBT)对过氧化氢(H2O2)诱导的小鼠骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)氧化应激损伤的保护作用。方法:采用密度梯度离心法获取小鼠骨髓来源的单核细胞,通过特定培养基培养并鉴定获得EPCs,实验分为空白组,模型组,DBT组(100,200,400 mg·L-1)。采用噻唑蓝(MTT)比色法测定EPCs细胞存活率,构建H2O2诱导的细胞损伤模型;通过MTT,迁移小室(transwell),Matrigel基质胶,超氧化物荧光阴离子探针(DHE),分别检测EPCs增殖、迁移与体外血管形成能力,以及活性氧(ROS)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞自噬相关蛋白泛素结合蛋白SQSTM1(p62),微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型蛋白(LC3-Ⅱ)的蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组EPCs细胞增殖能力、迁移能力、成管腔数及小管分支长度均显著降低(P0.01),胞内ROS水平显著升高(P0.01),自噬标志性蛋白p62显著升高(P0.01),LC3-Ⅱ蛋白表达降低(P0.01);与模型组比较,DBT组能呈浓度依赖性地升高EPCs增殖能力与迁移能力(P0.01),增加细胞成管腔数和小管分支长度(P0.01),降低胞内ROS水平(P0.01);此外,DBT呈浓度依赖性上调了LC3-Ⅱ蛋白的表达(P0.01),降低p62蛋白的表达(P0.01)。结论:当归补血汤能提高氧化应激状态下的EPCs自噬水平,促进损伤的EPCs迁移、增殖能力与血管形成能力,保护氧化应激条件下内皮祖细胞的生物学功能。     

罗布麻总黄酮对过氧化氢致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的：探讨罗布麻总黄酮对过氧化氢（H2O2）所致的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用。方法：采用MTT法观察不同浓度罗布麻总黄酮对HUVEC增殖的影响,流式细胞仪检测不同浓度罗布麻总黄酮对HUVEC细胞周期变化的影响,采用比色法分别检测细胞培养液NO和SOD的活性、MDA和LDH的含量,免疫组化法测定NF-κB的表达。结果：正常细胞组比,200μmol．L—H2O2模型组细胞增殖活性下降,细胞凋亡率明显增加,G0／G1期细胞比率增加,S期细胞和G2／M期细胞比率明显降低,培养上清液中NO和SOD活性明显下降,MDA和LDH的释放量明显增加,NF—κB的表达时明显增加（P〈0．01）。不同浓度的罗布麻总黄酮作用后,与模型组比较,可明显提高细胞增殖活性,降低细胞凋亡率,降低G0／G1期细胞比率,增加S期细胞和G2／M期细胞比率;并可提高细胞上清液中NO水平和SOD活性,降低MDA和LDH的释放,可抑制H2O2引起的NF-κB的过度表达。其中,中、高剂量组有显著性差异。结论：罗布庥总黄酮对H2O2引起HUVEC损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用及调节有关NF—κB的表达有关。     

参芎葡萄糖注射液对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨参芎葡萄糖注射液(Shenxiong glucose injection,SGI)对过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法:体外培养H9c2心肌细胞,用H2O2(300μmol·L-1)处理0.5 h,建立H9c2心肌细胞H2O2氧化损伤模型,SGI组:H9c2细胞用(100,200,400μmol·L-1)SGI处理6 h后,另设空白组与模型组,再用H2O2处理0.5 h。利用流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP);用MTS法检测细胞存活率;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;用蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)的表达情况。结果:在300μmol·L-1H2O2作用细胞0.5 h的情况下,细胞存活率降低至50%左右,降低的程度合适,且实验结果重复性好,因此后续实验用该条件建立氧化损伤模型。与模型组比较,SGI预处理6 h能显著升高细胞存活率(P0.05,P0.01),减少LDH的外漏和MDA的生成(P0.05,P0.01),显著增加SOD,GSH-Px和CAT的活性(P0.01),明显减少H9c2细胞内ROS含量(P0.01),并使MMP丢失减少(P0.01),Western blot表明,SGI能显著上调Bcl-2的表达,下调Caspase-3的表达(P0.05,P0.01)。结论:参芎葡萄糖注射液能保护H9c2心肌细胞对抗H2O2诱导的氧化损伤,其作用机制可能与其提高细胞清除ROS能力和抑制细胞凋亡有关。