大蒜3个有效部位配伍对3种人胃癌细胞的杀伤作用

目的:观察大蒜3个有效部位组合物对3种人胃癌细胞的杀伤作用,筛选有效部位组合物最佳配伍比例.方法:以大蒜3个有效部位(大蒜油、大蒜总多糖、大蒜总皂苷)为研究对象,选用L16(45)正交表设计分组、给药,以胃癌细胞代谢MTT活力(抑瘤百分率)作为考察指标,采用SPSS软件对实验数据进行处理.结果:大蒜3个有效部位对MKN45细胞杀伤作用的主次顺序为大蒜油(1#)＞大蒜总多糖(2#)＞大蒜总皂苷(5#),其最佳配比为1 #∶2#∶5#=1∶20∶10.大蒜3个有效部位对AGS细胞抑制率影响无明显差别,其最佳配比为1#∶2#∶5#=1∶13.3∶3.3.大蒜总皂苷对人胃癌HGC-27细胞抑制率的影响显著(P＜0.01),影响的主次顺序为大蒜总皂苷＞大蒜油＞大蒜总多糖,其最佳配比为1#∶2#∶5#=1∶200∶50.结论:3种人胃癌细胞对大蒜3个有效部位组合物的杀伤作用的敏感性不同,3个有效部位组合对3种人胃癌细胞杀伤作用的最佳配比浓度亦不相同.     

胃肠安诱导胃癌MKN45细胞自噬的机制

目的:观察健脾复方胃肠安对人胃癌MKN45细胞自噬的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法:体外培养人胃癌MKN45细胞,采用细胞活力检测法(CCK-8)检测不同质量浓度胃肠安(250,500,1000,2000 mg·L^-1)作用体外培养的人胃癌细胞MKN45细胞,共孵育24,48,72 h,检测细胞增殖活力的改变;采用吖啶橙(AO)染色和单丹磺胺戊二胺(MDC)染色观察胃肠安对胃癌MKN45细胞自噬小体及自噬囊泡的变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测微管相关蛋白1轻链3(LC3),酵母ATG6同源物(Beclin1),泛素结合蛋白-1(p62),自噬相关基因5(ATG5),自噬相关基因7(ATG7)mRNA和蛋白的表达。结果:CCK-8实验显示,与空白组比较,胃肠安(500,1000,2000 mg·L^-1)可明显抑制MKN45细胞的增殖能力(P<0.05,P<0.01);AO和MDC染色显示,与空白组比较,随着胃肠安浓度的增加,自噬小体和自噬囊泡含量逐渐增加;Real-time PCR和Western blot结果显示,与空白组比较,胃肠安(1000 mg·L^-1)组细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ,Beclin1,ATG5,ATG7 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),p62表达下降(P<0.05,P<0.01)。结论:胃肠安可诱导人胃癌MKN45细胞自噬,其机制涉及上调自噬相关基因Beclin1,ATG5,ATG7 mRNA和蛋白表达,下调p62 mRNA和蛋白表达,促进自噬标志蛋白LC3-I向LC3-Ⅱ转化。     

大蒜有效部位组合物对模型大鼠胃癌前病变的疗效和作用机制

目的：研究大蒜油-大蒜皂苷-大蒜多糖组合物治疗胃癌前病变的疗效,阐明该组合物治疗胃癌前病变的作用机制。方法：将大鼠随机分为空白对照组（n=14）和造模组（n=144）。于造模22周时,将造模组大鼠再随机分为6组：模型组（n=24）、大蒜油对照组（n=24）、胃复春对照组（n=24）、组合物高、中、低剂量组（3×24）。连续给药13周后处死。取材后,在光镜下观察胃黏膜的病理学变化。同时,采用电化学发光法检测各组大鼠离心血浆中的3种肿瘤标志物CEA、CA199、CA724的水平。运用Western Blotting和Real-time PCR技术检测胃癌前病变大鼠胃组织中TGF-β1和Smad4的蛋白和mRNA表达情况。结果：1）组合物高剂量（2.38 g/kg）组能够显著地改善胃癌前病变大鼠胃黏膜的病理变化。2）组合物高剂量（2.38 g/kg）组能够明显降低胃癌前病变大鼠血清中的CEA、CA199、CA724 3种肿瘤标志物的水平。3）组合物高剂量（2.38 g/kg）组能够下调TGF-β1 mRNA及其蛋白表达水平,而能够上调Smad4 mRNA及其蛋白表达水平。结论：组合物高剂量（2.38 g/kg）组能够显著改善胃癌前病变大鼠胃黏膜的病理变化,降低血清肿瘤标志物水平,调节TGF-β1和Smad4的蛋白表达,从而纠正TGF-β/Smads信号转导通路的异常变化,有效地治疗胃癌前病变。     

不同浓度苦参碱、大蒜素对人胃癌细胞株MKN-45杀伤作用的实验研究

目的:观察不同浓度苦参碱、大蒜素对人胃癌细胞株MKN-45体外生长的影响。方法:体外培养人胃癌细胞株MKN-45,分别用不同浓度的苦参碱、大蒜素处理,采用CCK-8法检测MKN-45细胞的生长情况。结果:不同浓度的苦参碱及大蒜素作用于MKN-45细胞后,对其增殖均表现出了明显的抑制作用,并表现出浓度与作用时长的依赖性,最高抑制值分别达到了96.82%和93.44%。结论:苦参碱及大蒜素可以抑制胃癌MKN-45细胞的增殖,且与作用时间、剂量呈正相关。     

黄芪有效部位的复合型纯化工艺

目的:确定黄芪有效部位的复合型纯化工艺。方法:采用正交试验设计法,以多糖收率、多糖含量为指标,优选了多糖醇沉和除蛋白工艺;以单因素考察法优选了黄芪总皂苷的纯化工艺。结果:总多糖最佳醇沉工艺为醇沉前生药量与浓缩液体积比1∶1,醇沉温度40℃,加入3倍量95%的工业乙醇,醇沉静置18 h,粗多糖除蛋白的最佳工艺为配制质量浓度为15 g.L-1的粗多糖溶液,加入粗多糖溶液1/3体积的Sevage试剂,连续脱除2次;大孔树脂纯化黄芪总皂苷的最佳工艺为使用D101型树脂,树脂-药材比为5∶2,以4BV水洗除杂,再以4 BV 70%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,蒸干即可。结论:此法优选出的工艺可以实现黄芪总多糖、总皂苷的次序提取。工艺流程科学、经济,可有效节约资源,指导工业生产。     

叶下珠醇提物对人胃癌细胞的抑制作用

目的体外实验初步探索叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28增殖、迁移及迁移能力的影响。方法不同质量浓度的叶下珠醇提物作用于人胃癌细胞MKN28,MTT法测定其对MKN28的增殖抑制率,细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果 MTT法结果显示叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28的增殖有明显抑制作用,并且呈现质量浓度和时间依赖性;细胞划痕实验结果显示叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28迁移能力有明显抑制作用;Transwell小室侵袭实验结果显示叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28侵袭能力有明显抑制作用。结论叶下珠醇提物能有效抑制人胃癌细胞MKN28的增殖、侵袭及迁移。     

重楼总皂苷对LiCl诱导人胃癌MKN-45细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨重楼总皂苷(Rhizoma Paridis total saponin,RPTS)在体外对人胃癌MKN-45细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,探讨其作用的可能机制。方法体外培养MKN-45细胞,取对数生长期细胞,加入不同质量浓度RPTS(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μg/m L)处理24h,采用MTT法检测细胞增殖情况;细胞划痕实验、Transwell小室实验检测RPTS对MKN-45细胞迁移和侵袭的影响;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测RPTS对LiCl诱导的MKN-45细胞上清液中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的上调表达的影响;免疫印迹技术(Western blotting)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分别检测RPTS(10、20、40μg/m L)对Li Cl诱导的MKN-45细胞中肿瘤侵袭转移相关分子血管内皮生长因子(VEGF)、环加氧酶-2(COX-2)以及Li Cl作用靶点糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)蛋白和基因表达水平的影响。结果与对照组比较,RPTS 5.0、10.0、20.0、40.0μg/m L可明显下调MKN-45细胞的增殖活性(P0.05、0.001);RPTS 2.5、5.0、10.0μg/m L可抑制MKN-45细胞的迁移和侵袭能力(P0.01、0.001)。与模型组比较,RPTS能够显著下调Li Cl诱导的MKN-45细胞上清液中MMP-9的表达水平(P0.05、0.01);下调细胞中VEGF、COX-2 mRNA和蛋白表达水平;上调Li Cl作用位点GSK-3βm RNA和蛋白表达水平(P0.05、0.001)。结论 RPTS具有体外抑制MKN-45细胞迁移和侵袭的能力,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。     

复合螺旋藻多糖对人胃癌MGC细胞的抑制作用

目的 研究复合螺旋藻多糖对人胃癌MGC细胞的抑制作用.方法 将螺旋藻多糖(PSP)与银杏叶有效成分(GBE)以不同剂量按一定比例复合,观察复合制剂在体外对人胃癌MGC细胞的抑制作用.结果 PSP与GBE 1:1比例复合组、1:2比例复合组和2:1比例复合组对人胃癌MGC细胞的抑制率,高剂量时分别比空白对照组提高92.44%(P<0.01),26.36%(P<0.01)和71.32%(P<0.01);中剂量时分别比空白对照组提高62.37%(P<0.01),20.57%(P<0.01)和24.15%(P<0.01);低剂量时分别比空白对照组提高27.94%(P<0.01),30.36%(P<0.01)和17.92%(P<0.01).结论 单一成分的螺旋藻多糖组对人胃癌MGC细胞也有较好的抑制作用,并呈剂量依赖性.高、中剂量复合螺旋藻多糖对人胃癌MGC细胞的抑制作用,1:1比例配比时抑制效果最好.其中高剂量组1:1配比时抑制率达到92.4%.表明复合螺旋藻多糖在该剂量配比时协同增效作用最大.     

化痰散结方对人胃癌MKN45细胞的体内外抑制作用

目的:观察化痰散结方对人胃癌MKN45细胞及其裸鼠移植瘤的生长抑制作用.方法:应用CCK-8法检测化痰散结方对体外胃癌MKN45细胞的生长抑制作用.建立裸鼠MKN45人胃癌移植瘤模型,并随机分为模型组、中药组和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-fu)组,模型组灌胃生理盐水0.02 mL/g,中药组灌胃化痰...     

白及多糖及其与5-Fu联用对人胃癌MKN45细胞株的影响

目的:探讨白及多糖及其与5-Fu联用对人胃癌MKN45细胞株的影响。方法:以人胃癌MKN45细胞株为对象,采用MTT法测定细胞增殖,HPLC测定细胞内药物浓度,对白及多糖及其与5-Fu联用对人胃癌MKN45细胞株增殖作用进行了观察研究。结果:白及多糖在体外无明显的直接杀伤人胃癌细胞作用,但低、中、高剂量的白及多糖与5-Fu联用均可增加5-Fu的抗肿瘤作用(P0.05);HPLC测定细胞内药物浓度结果显示,在5-Fu剂量相同的情况下,白及多糖与5-Fu联用可使细胞内5-Fu浓度增加(P0.05)。结论:白及多糖能增加5-Fu的抗肿瘤作用。     

基于网络药理学预测大蓟治疗高血压的作用机制

目的：基于网络药理学方法研究中药大蓟治疗高血压的潜在作用机制。方法：利用TCMSP数据库收集大蓟的所有化学成分及作用靶点,通过Cytoscape3.6.1软件构建“成分-靶点”核心网络,利用CluGO插件对关键靶点进行GO功能和通路富集分析并构建“靶点-信号通路”网络,利用Merge功能进一步构建“成分-靶点-信号通路”网络。结果：筛选得到11种药效成分和29个关键靶点,GO功能富集分析涉及21项生物过程和6项分子功能相关条目,KEGG通路富集分析发现13条信号通路。结论：大蓟可能通过油酸、豆甾醇、刺五加苷等药效成分,作用于PTGS2、PTGS1、NCOA2、CHRM3、ADRβ2、CHRM1等关键靶点,参与调控精氨酸和脯氨酸代谢、脂肪细胞中的脂肪分解、钙信号通路等发挥抗高血压效应。     

大黄素对人胃癌细胞MKN45增殖抑制及诱导凋亡的研究

目的：研究大黄素（Emodin）对人胃癌细胞MKN45增殖及诱导凋亡的作用。方法：用噻唑蓝（MTT）法观察Emodin对MKN45的生长抑制作用;用DNA Ladder凝胶电泳法、荧光染色法、流式细胞仪法分析Emodin的诱导凋亡作用。结果：与对照组相比,Emodin能明显抑制MKN45细胞的生长且与浓度、时间呈依赖性,其IC50（48小时）为（47.5±0.3）μmol/L;Emodin处理胃癌细胞后,DNA凝胶电泳结果显示呈明显的梯状条带;吖啶橙（AO）染色观察示细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光、新月型改变、核固缩或片段化及凋亡小体的形成;流式细胞仪分析Emodin能浓度依赖性诱导MKN45细胞凋亡和G2/M期阻滞。结论：Emodin对人胃癌细胞MKN45有明显的生长抑制作用,且该作用与诱导细胞凋亡有关。     

蛇葡萄素诱导人胃癌细胞凋亡的研究

目的:研究蛇葡萄素对人胃癌细胞(SGC-7901)凋亡的影响。方法:MTT比色法测定细胞的增殖抑制率,流式细胞仪Annexin-V FITC/PI双染检测蛇葡萄素33.3,50,75 mg.L-1作用下SGC-7901细胞的凋亡及各细胞周期。结果:蛇葡萄素作用于SGC-7901 48 h后,可明显促进细胞早期凋亡,50,75 mg.L-1细胞凋亡率为(29.03±6.21)%,(43.43±1.00)%,明显高于空白组(11.83±4.67)%(P<0.05,P<0.01)且呈剂量依赖关系。蛇葡萄素33.3,50,75 mg.L-1作用于SGC-7901细胞48 h后,G1期细胞分别为(52.07±4.41)%,(57.07±2.70)%,(58.43±2.66)%明显高于空白对照组(42.00±3.04)%(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。结论:蛇葡萄素能诱导SGC-7901细胞凋亡并使细胞周期阻滞在G1期。     

蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞增殖的抑制作用研究

目的:观察蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞增殖的影响.方法:(1)采用倒置显微镜观察蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞形态的影响;(2)采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法检测蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞生长的影响.结果:蔡氏扶正消癥汤生药能抑制胃癌细胞的增殖.在实验浓度范围内,随着剂量的增加,抑制作用更加明显;同一剂量下,72h内药物作用时间越长,抑制作用越明显.结论:蔡氏扶正消癥汤能够抑制胃癌细胞的增殖.     

胃肠安颗粒通过RUFY3抑制人胃癌MKN45细胞侵袭转移

目的:研究健脾复方胃肠安颗粒抑制人胃癌MKN45细胞侵袭转移的分子机制.方法:体外培养人胃癌MKN45细胞,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)检测不同质量浓度的胃肠安颗粒(600,900,1 200,1 500 mg·L-1)与人胃癌MKN45细胞共孵育24,48,72 h,对细胞增殖活力的影响;采用蛋白免疫印迹法(...     

金龙蛇颗粒对原位移植人MKN-45胃癌组织基因表达谱的影响

目的:利用基因表达谱芯片研究金龙蛇颗粒对MKN-45胃癌的分子机制。方法:抽提经金龙蛇颗粒治疗的裸鼠原位移植人MKN-45胃癌组织和生理盐水阴性对照的瘤组织总RNA并纯化mRNA,分别逆转录并进行荧光标记,制作成cDNA探针,与包含4096个人类基因的cDNA表达谱芯片进行杂交,筛选出两组间差异表达基因。结果:在mRNA水平上,筛选出包括与DNA结合、转录和转录因子、蛋白翻译、细胞周期等相关表达差异的基因共341条,其中44条(比值>2)表达上调(占12.9%),297条(比值<0.5)表达下调(占87.1%)。结论:金龙蛇颗粒可引起MKN-45胃癌组织一系列基因表达的改变,金龙蛇颗粒抗胃癌的基因途径可能是多环节、多层次的结果。     

黄芪莪术配伍药物血清对胃癌MKN45细胞增殖和分化的影响

目的:观察黄芪、莪术配伍药物血清对人胃癌细胞株MKN45增殖和分化的影响,比较中药配伍和单味药应用的不同,为益气活血方法治疗胃癌提供实验依据。方法:通过中药血清药理学方法制备黄芪、莪术配伍药物血清,采用MTT法检测药物血清对MKN45细胞的增殖抑制率;酶标仪测定分化标志酶AKP、LDH的活性。结果:MTT法实验中,莪术组作用48h后对细胞的抑制作用与正常组相比有显著意义(P<0.01),作用72h,莪术组、配伍组对细胞增殖仍有抑制作用,与正常组相比有显著意义(P<0.01),且配伍组在24h、48h、72h均对MKN45细胞增殖维持稳定的抑制率。通过酶标仪检测,配伍组作用的MKN45细胞AKP、LDH活性表达均明显降低,与正常组相比有显著意义(P<0.05),配伍组与黄芪组相比有统计学意义(P<0.01)。结论:黄芪、莪术配伍药物血清能够抑制胃癌MKN45细胞增殖并诱导其分化,与单味药应用相比具有增效、疗效稳定优势,提示益气活血法是中医药治疗胃癌的有效治则治法。     

养正散结汤对人胃癌MKN-45细胞增殖、凋亡及ERK通路的影响

目的:探讨养正散结汤对人胃癌MKN-45细胞增殖、凋亡及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路的影响。方法:将养正散结汤组(0. 5,1,1. 5,2,2. 5,3,3. 5 g·L~(-1))作用于胃癌MKN-45细胞,设置空白组,分别孵育24,48,72 h后采用细胞增殖活性检测方法(CCK-8)检测细胞增殖情况;用养正散结汤组(0. 4,0. 8 g·L~(-1))处理细胞,运用平板克隆形成实验观察细胞的克隆形成能力;用4,8 g·L~(-1)养正散结汤干预细胞,利用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;用2,4,8 g·L~(-1)养正散结汤处理细胞,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测ERK表达及其磷酸化水平。结果:与空白组比较,养正散结汤组能明显抑制MKN-45细胞的增殖,处理24,48 h后,养正散结汤从2 g·L~(-1)开始,处理72 h后,从1. 5 g·L~(-1)开始,细胞存活率逐渐降低,呈明显浓度依赖性(P 0. 05,P 0. 01)。经不同质量浓度的养正散结汤干预48 h后,养正散结汤组细胞克隆形成率显著低于空白组(P 0. 01),呈一定的量效关系,0. 8 g·L~(-1)养正散结汤干预后,MKN-45细胞集落基本无法形成;养正散结汤组细胞凋亡率明显高于空白组(P 0. 05,P 0. 01);干预12 h后,与空白组比较,养正散结汤从4 g·L~(-1)开始下调MKN-45细胞中ERK蛋白的磷酸化水平(P 0. 01)。结论:养正散结汤能抑制人胃癌细胞MKN-45的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与抑制ERK的磷酸化有关。