甲型H1N1流感病毒NA蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备

目的:利用原核系统表达甲型H1N1流感病毒NA蛋白,制备NA特异性单克隆抗体。方法:采用RT-PCR技术扩增A/Shenzhen/71/09病毒株NA基因,通过原核表达系统表达含6×His标签NA重组蛋白,利用镍离子亲和柱进行纯化。使用NA蛋白以100g/只剂量免疫BALB/C小鼠,3次免疫后,利用杂交瘤技术筛选分泌NA特异性单克隆抗体的细胞株,采用Western-blot方法对单抗进一步验证。结果:成功克隆A/Shenzhen/71/09NA基因,长度约1400bp。将NA基因克隆入原核表达载体pET-21b(+),经IPTG诱导后在大肠杆菌包涵体中检测到目的蛋白,分子量约50kd。采用尿素变性处理后借助6×His标签对蛋白进行纯化。用纯化蛋白免疫小鼠,将脾细胞与SP2/0细胞融合,使用ELISA检测细胞上清NA抗体,共筛选1株持续分泌NA抗体的杂交瘤细胞株7C11。Western-blot验证该单克隆抗体可以特异性结合NA抗原。结论:成功表达甲型H1N1流感NA蛋白,获得1株分泌NA抗体的单克隆细胞株,从而为后续甲流诊断及疫苗研制奠定基础。     

甲型H1N1流感的药食干预

甲型H1N1流感病毒属于正黏病毒科,甲型流感病毒属。其核蛋白（NP）和基质蛋白（MP）不同。典型病毒颗粒呈球状,直径为80～120nm,有囊膜。囊膜上有许多放射状排列的突起糖蛋白,分别是红细胞血凝素（HA）、神经氨酸酶（NA）和基质蛋白M2。流感病毒不断抗凝漂移与抗凝转换。病毒颗粒内为核衣壳,呈螺旋状对称,直径为10nm。     

抗病毒口服液防治甲型流感病毒感染的药效学研究

目的:观察抗病毒口服液对体内外感染甲型H1N1流感病毒模型的防治作用.方法:体内实验采用甲型H1N1流感病毒FM1及PR8株经滴鼻感染的70只ICR小鼠来制备肺炎模型,随机分为正常组,模型组,利巴韦林组,双黄连组,抗病毒口服液2倍量、1倍量、1/2倍量组,每组10只.经预防给药后,计算各组小鼠肺指数;经治疗给药后计算各...     

胚芽滋养胶囊对流感病毒感染小鼠血清IL-2和TNF-α的影响

目的观察胚芽滋养胶囊对流感病毒感染小鼠血清IL-2和TNF-α的影响.方法以流感病毒FM1株滴鼻感染小鼠复制病毒性肺炎模型,应用胚芽滋养胶囊进行治疗,并以病毒唑注射液为对照;检测感染不同时相小鼠血清中IL-2和TNF-α水平.结果流感病毒感染导致小鼠血清IL-2降低,TNF-α增高,而胚芽滋养胶囊可以提高FM1感染小鼠IL-2活性,降低TNF-α水平.结论胚芽滋养胶囊抗病毒作用可能通过调节血清细胞因子水平实现.     

茶黄素衍生物抗甲型流感病毒的作用研究

目的 研究茶黄素衍生物的混合物(含茶黄素、茶黄素-3-没食子酸酯、茶黄素-3'-没食子酸酯和茶黄素-3,3’-双没食子酸酯,简称茶黄素衍生物)抗甲型流感病毒的作用及其机制.方法 采用H5N1假病毒检测体系,观察茶黄素衍生物对A/Thailand/Kan353/2004 H5N1毒株假病毒的抑制作用;采用血凝抑制实验和神经氨酸酶抑制实验进一步分析茶黄素衍生物抗甲型流感病毒的作用机制;采用H1N1 FM 1病毒检测体系,观察茶黄素衍生物对甲型流感病毒FM1的抑制作用;采用MTT法评价茶黄素衍生物对MDCK细胞的毒性.结果 茶黄素衍生物能明显的抑制H5N1假病毒的感染力,IC50为(151.88±18.95)μg/nL;对血凝素HA1亚基无抑制作用;对神经氨酸酶具有抑制作用,IC50为(129.09±1.33)μg/mL;能明显抑制甲型流感病毒FM 1株.此外,茶黄素衍生物对MDCK细胞的毒性较小,CC50为(879.89±4.54) μg/mL.结论 茶黄素衍生物可能通过与血凝素HA2亚基结合而抑制禽流感病毒的感染,同时能够在一定程度上抑制病毒的神经氨酸酶活性,提示茶黄素衍生物是通过多靶点发挥抗H5N1亚型禽流感病毒的作用.     

变应性鼻炎患者治疗前后血清IL-2、TNF-α检测的临床意义

目的：探讨变应性鼻炎患者治疗前后血清IL-2和TNF-α水平的变化意义。方法：应用放射免疫分析测定了69例变应性鼻炎患者血清IL-2和TNF-α含量,并与46名健康人作比较。结果：在治疗前血清TNF-α水平显著地高于对照组（P〈0．01）,而IL-2水平则显著地低于对照组（P〈0．01）,经治疗3个月后,则与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论：变应性鼻炎的发生与发展与血清IL-2和TNF-α水平密切相关。     

变应性鼻炎患者治疗前后血清IL-2、TNF-α检测的临床意义

目的:探讨变应性鼻炎患者治疗前后血清IL-2和TNF-α水平的变化意义.方法:应用放射免疫分析测定了69例变应性鼻炎患者血清IL-2和TNF-α含量,并与46名健康人作比较.结果:在治疗前血清TNF-α水平显著地高于对照组(P<0.01),而IL-2水平则显著地低于对照组(P<0.01),经治疗3个月后,则与对照组比较无显著性差异(P>0.05).结论:变应性鼻炎的发生与发展与血清IL-2和TNF-α水平密切相关.     

IL-1B基因多态性与甲型H1N1流感温邪传变模式的相关性

目的:探讨白细胞介素-1B基因多态性与甲型H1N1流感温邪传变模式的关系。方法:建立基于飞行时间质谱技术的SNP分型方法,检测167例甲流患者和192例健康对照人群IL-1B基因rs1143623和rs16944位点多态性,将甲流患者辨证分型为温邪不传、顺传和逆传3种模式,比较不同人群等位基因频率差异。结果:rs16944位点具有A和G两种等位基因,A等位基因频率在健康对照、不传型、顺传型和逆传型人群分别为49.5%、60.2%、62.5%和71.4%,甲流3种传变模式人群A等位基因频率均显著高于健康对照(P=0.016,P=0.013,P=0.025)。rs1143623位点等位基因频率在不同人群中差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IL-1B基因rs169441位点多态性与甲型H1N1流感温邪传变模式相关,A等位基因为易感基因,可以作为甲流中医辨证分型的分子遗传标签。     

基于TLR4-MyD88-TRAF6信号通路的麻杏石甘汤抗A型流感病毒感染小鼠所致的病毒性肺损伤研究

目的探索Toll样受体4(TLR4)在A型流感病毒所致肺组织损伤中的影响,并进一步探讨麻杏石甘汤的干预作用。方法以A型流感病毒滴鼻感染WT型小鼠为研究对象,实验设麻杏石甘汤低、中、高剂量(1.4、2.8、5.6 g/kg)组、奥司他韦(21.63 mg/kg)组、模型组和对照组,ig给予相应药物5 d后,处理动物。常规法检测小鼠体质量,计算肺指数、脾指数、胸腺指数,观察肺组织病理变化,ELISA法检测肺泡灌洗液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的量,real-time PCR(RT-PCR)法和Western blotting法检测肺组织中TLR4、My D88、TRAF6m RNA和蛋白的表达。结果麻杏石甘汤能上调A型流感病毒感染小鼠的体质量、脾指数、胸腺指数,改善肺组织病理损伤,降低肺泡灌洗液中促炎因子水平,下调肺指数和肺组织中My D88、TRAF6 m RNA和蛋白表达量,且存在一定的量效关系。其中麻杏石甘汤中、高剂量组的疗效与奥司他韦接近。结论麻杏石甘汤作为有效的抗流感病毒中药复方,能有效地减轻肺部炎症、保护免疫器官、调节细胞因子平衡,其可能的作用机制是通过抑制TLR4-My D88-TRAF6信号通路的激活而缓解A型流感病毒感染小鼠所致的肺损伤。     

绵马贯众中流感病毒H_5N_1神经氨酸酶抑制剂的筛选

目的:筛选绵马贯众中流感病毒H_5N_1神经氨酸酶(NA,neuraminidase)抑制剂。方法:将绵马贯众中已分离得到的99个化合物建立配体库,从Protein Data Bank(PDB)中下载NA(H_5N_1)的X-ray晶体三维结构文件,采用AutoDock Vina软件筛选出与NA有较好结合作用的化合物,并通过神经氨酸酶抑制实验验证筛选出的化合物对NA的作用。结果:通过分子对接筛选出5个与NA有较好结合的化合物,神经氨酸酶抑制实验结果表明候选化合物中Dryocrassin ABBA对NA的抑制作用最强,IC₅₀为(18.59±4.53)μmol/L。结论:绵马贯众中化合物Dryocrassin ABBA具有较好的抗H_5N_1流感病毒神经氨酸酶的作用。     

七味白术散治疗轮状病毒肠炎的临床与实验研究

用七味白术散治疗小儿轮状病毒肠炎６０例，止泻效果优于口服补液盐（ＯＲＳ）组（Ｐ＜０．０５），患儿大便中Ｎａ＋、糖浓度，轮状病毒抗原阳性例数均明显低于ＯＲＳ组。在动物实验中，七味白术散对ＮＩＨ小鼠新生幼仔实验性轮状病毒感染具有较好治疗作用，可降低小鼠病死率，并能降低鼠粪中Ｎａ＋、糖含量，促使轮状病毒抗原消失，减轻感染小鼠小肠粘膜的损伤和绒毛脱落。     

当归补血汤的现代药理研究及其防治阿尔茨海默病的探讨

随着我国人口老龄化,阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)的发病率呈上升趋势。因此,寻觅治疗AD更有效的药物和方法,已成为医药领域的研究热点之一。中药研究表明,当归补血汤以其组方简单、药食两宜、补气生血、调节免疫、抗衰老、不良反应小、临床疗效好,在预防和治疗AD等中枢神经系统疾病上突显优势。     

抗流感合剂治疗流行性感冒的临床研究

目的：观察抗流感合剂在冬春时节对北方地区流行性感冒的疗效。方法：共选择80例流感患者，采取随机分组对照观察的方法。治疗组以抗流感合剂为受试药，对照组选用双黄连颗粒（无糖型，哈尔滨中药三厂生产），均以3天为1疗程。结果：治疗组显愈率是73％，退热平均起效时间为3．26小时，平均退热时间为26．96小时。对照组显愈率是60％，退热平均起效时间5．16小时，平均退热时间为是39．62小时。治疗组明显优于对照组。又在治疗前和治疗后72小时作了细胞因子IL-1、IL-6及TNF—α（酶免法）测定，治疗前每一项含量两组间无显著性差异，而在治疗后则两组问有显著性差异。结论：说明抗流感合剂能在临床上有效地治疗流感，明显降低上呼吸道病毒感染患者血清中细胞因子IL-1（白介素-1）、IL-6（白介素-6）及TNF—α（肿瘤坏死因子）的含量。     

七味红花殊胜散质量标准研究

目的 建立七味红花殊胜散质量标准.方法 采用薄层色谱法对处方中诃子、獐牙菜进行定性鉴别.采用高效液相色谱法对制剂中羟基红花黄色素A 进行定量测定,光电二极管阵列检测器,色谱柱为CAPCELL PAK MGC18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸(30:70),流速1.0 mL/min,检测波长为403 nm,柱温为30 ℃.结果 薄层色谱能定性检出诃子、獐牙菜,斑点清晰,且阴性对照无干扰.羟基红花黄色素A 在0.304～2.280 μg 范围内呈良好的线性关系,r ＝0.999 8,加样回收率为97.92%,RSD＝0.94%.结论 本方法操作简便、专属性、重复性好,可有效控制七味红花殊胜散的质量.     

清炎合剂的抗感染研究

目的：研究清炎合剂的抗感染作用。方法：采用体外抑菌实验及体内抑菌实验方法分成治疗组，对照组进行实验观察，结果：清炎合剂除直接具有抑菌作用外还有增强机体免疫力而达到抑菌的作用。     

清咽利喉片的质量标准研究

目的：研究清咽利喉片的质量控制标准。方法：采用薄层色谱法鉴别方中的厚朴和玄参,采用高效液相色谱法测定方中君药金银花主要有效成分绿原酸的含量。结果：薄层色谱分离清晰,阴性无干扰。定量方法简便、准确,绿原酸在0.198~1.98μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率为99.65%,RSD为1.84%。结论：所建立方法专属性强,灵敏度高,重复性好,可用于清咽利喉片的质量控制。     

清炎洗剂的质量标准研究

目的:建立清炎洗剂的质量标准。方法:以蛇床子素为对照品,甲苯-乙酸乙酯(30∶1)为展开剂对其中的蛇床子药材进行薄层色谱鉴别;以苦参碱为对照品,甲苯-乙酸乙酯-丙酮-浓氨试液(2∶4∶3∶0.2)为展开剂对其中的苦参药材进行薄层色谱鉴别;采用反相高效液相色谱法测定主药蛇床子中蛇床子素含量。结果薄层色谱斑点清晰;蛇床子素在4.75～23.75μg/mL范围内有良好的线性关系,回归方程为C=0.0131A-0.322(r=0.9997),平均回收率为95.26%,RSD为1.55%。结论:方法简便、准确、重现性好,可用于本制剂的质量控制。     

清咽饮治疗慢性咽喉炎76例

慢性咽喉炎是耳鼻喉科的常见病、多发病.笔者用自拟的清咽饮治疗慢性咽炎76例,并与口服冬凌草片51例作对照,疗效显著.现报道如下:     

清咽饮治疗慢性咽喉炎76例

慢性咽喉炎是耳鼻喉科的常见病、多发病.笔者用自拟的清咽饮治疗慢性咽炎76例,并与口服冬凌草片51例作对照,疗效显著.现报道如下: