左旋棉酚通过ERK通路诱导Daudi细胞发生自噬及意义

目的 探讨左旋棉酚诱导淋巴瘤Daudi细胞发生自噬可能机制及对细胞存活率的影响.方法 采用CCK-8法检测左旋棉酚在体外对Daudi细胞增殖抑制作用的影响;采用台盼蓝排斥实验检测不同处理对细胞存活率的影响;Western blot检测细胞中自噬相关蛋白LC3、ERK和磷酸化ERK的表达情况;AO染色观察经左旋棉酚处理后Daudi细胞酸性小体的变化情况.结果 左旋棉酚能剂量依赖性地抑制Daudi细胞的增殖和促进细胞死亡;AO染色后经左旋棉酚处理的细胞内可观察到大量的酸性小体形成;Western blot显示左旋棉酚能显著上调自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达及增强磷酸化ERK的水平,抑制ERK的磷酸化能下调LC3Ⅱ的表达;ERK抑制剂U0126及自噬抑制剂CQ和3-MA均能显著增强左旋棉酚的杀细胞效力.结论 左旋棉酚可能通过ERK通路诱导Daudi细胞发生自噬,抑制ERK介导的自噬能够显著增强左旋棉酚的抗瘤效应.     

皮肌炎患者外周血B淋巴细胞刺激因子的表达

目的:观察皮肌炎(DM) 患者外周血B淋巴细胞刺激因子(BLyS)的含量及其mRNA在外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达.方法:ELISA法测定10例皮肌炎患者外周血中BLyS含量,同时采用RT-PCR技术检测BLyS mRNA在PBMCs中的表达情况,并取健康体检者作对照.结果:皮肌炎患者外周血BLyS 为(10.25±1.19) μg/L,显著高于健康对照组[(3.19±0.65) μg/L;t=5.186,P<0.01];BLyS mRNA在皮肌炎患者外周血单个核细胞中高表达(0.39±0.04)%,明显高于健康对照组[(0.17±0.01)%; t=5.611,P<0.01].结论:皮肌炎患者外周血中BLyS含量较正常人明显增高,同时伴有PBMCs BLyS mRNA的高表达,提示BLyS分子水平的改变与皮肌炎的发生发展有着密切关系.     

左旋棉酚对HT1080细胞和HSF细胞的抑制增殖作用

目的:探讨左旋棉酚对人纤维肉瘤细胞HT1080和人皮肤成纤维细胞HSF的抑制增殖作用.方法:采用MTT法检测药物对细胞增殖的抑制率,在倒置显微镜下观察细胞的形态学变化.结果:左旋棉酚对HT1080细胞和HSF细胞均有抑制增殖作用,呈浓度与时间依赖性.左旋棉酚对HT1080细胞作用24、48、72、96小时的IC50分别为56.6、12.6、9.2、7.0μM,而对HSF细胞作用24、48、72、96小时的IC50分别为192.3、53.6、42.5、19.4μM.随着药物浓度的增加,HT1080细胞数逐渐较少,脱落的细胞逐渐增多.而HSF细胞变化不明显.结论:左旋棉酚对人纤维肉瘤HT1080细胞有明显抑制增殖和选择性杀伤作用.     

不同体质MRL／lpr狼疮鼠B淋巴细胞刺激因子及其受体基因及蛋白质的表达

目的：建立MRL／lpr狼疮鼠体质的区分方法,并于不同周龄观察肾脏B淋巴细胞刺激因子（ BAFF）、B淋巴细胞刺激因子受体（ BAFF-R）基因及蛋白质的表达,以考察狼疮鼠体质差异的物质基础。方法将12周龄MRL／lpr小鼠按体质分为寒体质、常体质及热体质,随机选取不同体质的小鼠各20只为寒体组、热体组、常体组。分别于12周龄时及20周龄时取材。通过RT-PCR、West-ern Blot等检测方法,检测肾脏 BAFF mRNA、BAFF-R mRNA 及其蛋白质表达。结果寒体质MRL／lpr狼疮鼠肾组织BAFF mRNA及蛋白质、BAFF-R蛋白质的表达均较常体质、热体质低,但各组BAFF-R mRNA的表达无明显差异。结论 MRL／lpr狼疮鼠体质差异可能与肾脏组织BAFF mRNA及蛋白质、BAFF-R蛋白质的表达有关。     

B淋巴细胞刺激因子基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

聚合酶链式反应(PCR)扩增获得了编码BLys(134—285AA)的cDNA片段，该片段以限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ双酶切插入pET32a载体。测序表明除(ATA^263→ATG^263)突变并导致了氨基酸(1263M)突变外，其余序列与Genbank报道的序列一致。蛋白表达用异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导，SDS—PAGE表明：在33ku处有明显的融合蛋白表达，其表达水平高达总茵体蛋白的50％。点印迹证实融合蛋白能与anti—His6Tag抗体反应。生物学活性研究表明BLys协同丝裂霉素能明显地抑制HeLa细胞的生长。     

B淋巴细胞刺激因子及其受体与干燥综合征的研究进展

B淋巴细胞刺激因子(BLyS)是肿瘤坏死因子家族的成员,在B细胞生长、发育和活化中起着重要作用,且主要通过B细胞活化因子受体、B细胞成熟抗原和跨膜激活、钙调和亲环素配基相互作用因子三个受体发挥功能。干燥综合征(SS)是一个以B细胞浸润外分泌腺为特征的自身免疫病,BLyS过度表达与SS的发病机制及病情进展密切相关。BLyS被认为是自身免疫病治疗的一个靶向,阻断BLyS作用可明显改善症状,拮抗BLyS治疗可能成为SS新的治疗方法。     

重组人B淋巴细胞刺激因子基因原核表达载体的构建及鉴定

目的构建人BLyS基因原核表达载体。方法采用RT-PCR方法,从人外周血淋巴细胞的总cDNA中扩增得到474bp的人BLySDNA片段,再用BamHI和EcoRI双酶切后,克隆到原核表达载体pGEX-5X-3中,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒。结果BLyScDNA已经正确克隆到原核表达载体pGEX-5X-3中。结论本实验为研制抗人BLyS单克隆抗体来研究人BLyS与自身免疫性疾病的关系奠定了基础。     

Tristetraprolin通过NF-?B通路抑制肺腺癌细胞自噬

目的研究RNA结合蛋白tristetraprolin在肺腺癌中的表达及抑制自噬作用的分子机制。方法瞬时转染tristetraprolin过 表达质粒,分别在转染tristetraprolin 24、48 及72 h 后采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western blot 检测肺腺癌细胞中 tristetraprolin表达及自噬相关分子Beclin1、LC3II/LCI及p62的表达变化。瞬时转染tristetraprolin过表达质粒及加入TNF-α,将 肺腺癌细胞分为空载组、tristetraprolin 组、空载+TNF-α组及tristetraprolin+TNF-α组,应用免疫荧光和Western blot检测NF-ĸB p65、c-rel、p50分子在细胞核中表达情况。共转染tristetraprolin过表达质粒及IκBα-mut质粒,将肺腺癌细胞分为tristetraprolin 空载组、IκBα-mut 空载组、tristetraprolin 组、IκBα-mut 组及tristetraprolin+IκBα-mut 组,采用RT-qPCR 和Western blot 检测 tristetraprolin表达及自噬相关基因表达变化。结果Tristetraprolin在肺腺癌细胞中RNA及蛋白水平表达低（P<0.001）。过表达 tristetraprolin 后,自噬相关基因Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ在RNA及蛋白水平表达均较空载组降低（P<0.001）。同时,过表达 tristetraprolin后,细胞核内的p65及c-rel蛋白表达较空载组及空载+TNF-α组减少（P<0.05）,但p50表达无明显变化（P>0.05）。 过表达tristetraprolin后,p65及c-rel核移位较空载组减少。共转染IκBα突变质粒及tristetraprolin过表达质粒后,NF-κB信号通 路被阻断,自噬相关基因Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ在RNA及蛋白水平表达较tristetraprolin过表达组升高（P<0.05）,NF-ĸB信号 通路被阻断后tristetraprolin对自噬的抑制作用减弱。结论Tristetraprolin在肺腺癌细胞中低表达,过表达tristetraprolin可能通 过抑制NF-ĸB p65及c-rel核移位而抑制肺腺癌细胞自噬。     

GW3965在Raji细胞中对BLyS表达的影响

目的 探讨肝X受体(liver X receptors,LXRs)的特异性激动剂GW3965在Raji细胞中对B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)表达的影响.方法 MTT法检测不同浓度的GW3965(浓度分别为0.5、5、10 μmol/L)对Raji细胞活性的影响,观察时间为...     

Serum and intrarenal expression of B lymphocyte stimulator and BR3 in lupus nephritis patients

目的 探讨B淋巴细胞刺激因子(BlyS)及其Blys受体3(BR3)在狼疮性肾炎(LN)中的作用.方法 ELISA法检测系统性红斑狼疮(SLE)患者及正常健康体检者血清BlyS、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1(IL-1)的表达水平,免疫组化法检测肾活检确诊为LN的患者及正常对照者肾组织中BlyS及其BR3的表达水平.结果 SLE患者血清Blys、TNF-α以及IL-1的水平显著高于正常对照者(P<0.01);正常对照者的肾小管上皮细胞可中等强度表达BlyS,而LN患者除了肾小管上皮细胞外,肾小管间质浸润的炎性细胞也可表达Blys;正常对照肾组织内无BR3的表达,而LN患者肾组织内有极少BR3的表达,仅见于炎性细胞聚集区;LN患者肾内BlyS的表达水平显著高于正常对照者(P<0.01),且Ⅳ型与Ⅴ型LN肾内BlyS的表达水平均明显高于Ⅲ型LN(P<0.05),而Ⅳ型与Ⅴ型LN间BlyS的表达水平虽差异无统计学意义,但有升高趋势.结论 SLE患者血清BlyS的水平升高,LN患者肾内BlyS的表达水平升高,肾内BR3受体有极少量的表达,提示BlyS及其BR3的变化与LN的病理变化有关.     

狼疮性肾炎患者血清和肾内B淋巴细胞刺激因子及BR3的表达

目的 探讨B淋巴细胞刺激因子(BlyS)及其Blys受体3(BR3)在狼疮性肾炎(LN)中的作用.方法 ELISA法检测系统性红斑狼疮(SLE)患者及正常健康体检者血清BlyS、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1(IL-1)的表达水平,免疫组化法检测肾活检确诊为LN的患者及正常对照者肾组织中BlyS及其BR3的...     

慢性丙型肝炎患者血清BLyS的水平及其临床意义

目的 研究慢性丙型肝炎患者血清BlyS因子水平及其临床意义.方法 采用ELISA法检测58例慢性丙肝患者的血清BLyS水平,并与40例健康对照组比较,检测慢性丙肝患者的检测类风湿因子、肝纤维化血清学指标、以及免疫球蛋白水平,分析他们与BLyS表达水平之间的关系.结果 慢性丙肝患者的平均血清BLys水平高于健康对照组[(4.7±1.1)ng/ml VS(3.1±0.67)ng/ml,P＜0.01)]慢性丙肝患者中类风湿因子阳性者高于类风湿因子阴性[(5.4±0.98)ng/ml VS(4.4 ±1.0)ng/ml,P＜0.01)].BLyS水平与肝纤维化血清学指标透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)有一定的相关性,而与免疫球蛋白(IgG,IgM,IgA),谷丙转氨酶(ALT),HCV-RNA无相关性.结论 慢性丙肝患者存在BLyS过度表达,BLyS可能与慢性丙肝的自身免疫现象以及肝纤维化程度有一定的关系.     

地塞米松体外下调Eomes表达抑制1型辅助性T细胞功能

本文使用地塞米松处理健康人外周血单个核细胞(PBMCs) 72 h后,探究其对CD4+T细胞及其亚群的频数、增殖、凋亡比例;功能性细胞因子及关键转录因子表达的影响。结果显示,地塞米松组CD4+T、2型辅助性T细胞(Th2)、Th17细胞比例增加(P<0.01,P<0.05,P<0.01),Th1细胞比例降低(P<0.01)。Th1细胞上γ-干扰素(IFN-γ)、颗粒酶B(Gzm B)、脱中胚蛋白(Eomes)比例、Eomes与T盒转录因子(T-bet)比值均降低(均P<0.01),晚期凋亡细胞比例增加(P<0.05)。提示地塞米松体外处理PBMCs促进Th1细胞凋亡,改变辅助性T细胞亚群的分布,并通过抑制Th1细胞转录因子Eomes的表达进而抑制其功能。     

地塞米松体外下调Eomes表达抑制1型辅助性T细胞功能

本文使用地塞米松处理健康人外周血单个核细胞(PBMCs)72 h后,探究其对CD4⁺T细胞及其亚群的频数、增殖、凋亡比例;功能性细胞因子及关键转录因子表达的影响。结果显示,地塞米松组CD4⁺T、2型辅助性T细胞(Th2)、Th17细胞比例增加(P<0.01,P<0.05,P<0.01),Th1细胞比例降低(P<0.01)。Th1细胞上γ-干扰素(IFN-γ)、颗粒酶B(GzmB)、脱中胚蛋白(Eomes)比例、Eomes与T盒转录因子(T-bet)比值均降低(均P<0.01),晚期凋亡细胞比例增加(P<0.05)。提示地塞米松体外处理PBMCs促进Th1细胞凋亡,改变辅助性T细胞亚群的分布,并通过抑制Th1细胞转录因子Eomes的表达进而抑制其功能。