人U937细胞吞噬IgA免疫复合物的研究

目的 对IgA Fc受体(FcaR Ⅰ)介导的U937细胞吞噬IgA免疫复合物进行研究。方法 以异硫氰酸荧光素(FITC)标记的8．9NIP／BSA为抗原，与抗NIP的IgA或IgA抗体结合，分别形成IgA免疫复合物(IgA IC)和IgG免疫复合物(IgG IC)，再与经佛波醇乙酯(PMA)刺激分化为单核细胞样的13937细胞孵育，流式细胞仪分析U937细胞吞噬IgA Ic和IgG IC的情况。结果 U937细胞表面：FcaR Ⅰ表达量高于3种IgG Fe受体(FcγRⅠ、FcγRⅡ、FcγRⅢ)。PMA刺激后细胞表面FcαRⅠ上调明显，吞噬IgAIC能力增加。FcαRⅠ介导的U937细胞对IgA IC的吞噬作用高于FcγRⅠ和FcγRⅡ介导的对IgG IC的吞噬作用，且这种吞噬作用是特异性的。在补体受体CRl和CR3作用下，U937细胞对IgA IC的吞噬作用有所增强。结论 FcαRⅠ介导单核细胞非常强的吞噬IgA IC的作用。     

U937细胞ClqR介导对酵母多糖颗粒的吞噬及其与FcγR的协同作用

在证实了人Ｍφ系Ｕ９３７细胞ＣｌｑＲ在生理离子强度（Ｉ０．１５）下可与１２５Ｉ－Ｃｌｑ结合的基础上研究了ＣｌｑＲ对Ｕ９３７细胞吞噬酵母多糖颗粒（Ｚ）的调节作用。该细胞不吞噬Ｚ，但可吞噬Ｃｌｑ或ＩｑＧ调理的Ｚ（ＣＺ、ＩＺ），若以Ｃｌｑ和ＩｇＧ调理（ＩＣＺ），吞噬指数分别是ＣＺ和ＩＺ的６倍和２．５倍。将调理颗粒热灭活，或加入兔抗人ＣｌｑＦ（ａｂ’）２，或以高浓度Ｃｌｑ或抗人ＣｌｑＲｍＡｂＥ８预处理Ｕ９３７细胞，均可不同程度地抑制对ＣＺ或ＩＣＺ的吞噬，但Ｃｌｑ预处理却使对ＩＺ和Ｚ的吞噬增强。资料表明，Ｕ９３７细胞通过ＣｌｑＲ介导对酵母多糖颗粒的吞噬，且与ＦｃγＲ有协同作用。     

脂质过氧化物对培养的U937单核细胞系的损伤作用

将U937单核细胞与tbooH共同孵育24、48小时后,观察tbooH对U937单核细胞的损伤效应。结果显示细胞内Lpo含量增高,SOD活力降低,与膜功能密切相关的膜流动性亦明显降低。说明脂质过氧化作用可能是动脉粥样硬化(AS)过程中单核细胞损伤的主要原因。     

TM-TNF-α介导的反向信号协同增强sTNF-α对U937细胞的激活作用

目的用sTNFRⅠ预先激活TM-TNF-α介导的反向信号，观测其对sTNF-α激活单核细胞系U937细胞的影响。方法预先用sTNFRⅠ与U937细胞作用30min，洗涤后加入sTNF-α作用不同时间，观测预激活反向信号对sTNF-α刺激U937产生活性氧、胞内促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的转录及IkB-α水平(Western blot)的影响。结果单独用sTNFRⅠ激活的反向信号并不影响U937细胞的功能，而预激活反向信号能协同增强sTNF-α刺激U937细胞产生活性氧，且呈sTNFRⅠ浓度、sTNF-α浓度依赖关系；预激活反向信号协同增强sTNF-α刺激U937炎性细胞因子mRNA(TNF-α、IL-1β、IL-8等)的转录水平；并促进U937细胞IkB-α的降解。结论预先激活TM-TNF-α介导的反向信号协同增强sTNF-α对U937的激活作用，提示反向信号可能参与机体对早期炎症反应的调节。     

槲皮素对U937细胞系抑制增殖和诱导凋亡作用的研究

目的 探讨黄酮类化合物槲皮素（Que）对人类单核细胞白血病U937细胞系的抑制增殖和诱导凋亡的作用。方法 应用MTT法检测不同浓度槲皮素对U937细胞的增殖抑制作用；AO／PI荧光染色后倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化；琼脂糖凝胶电泳测定细胞DNA的片段化；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布。结果槲皮素能明显抑制U937细胞增殖，并存在剂量-效应关系和时间-效应关系；诱导U937细胞出现凋亡所具有的形态学和生化特征；随着槲皮素浓度升高，凋亡细胞和坏死细胞比例增加；将细胞特异性地阻滞在S期，出现凋亡峰。结论 槲皮素能抑制U937细胞增殖，诱导细胞凋亡，并具有细胞周期特异性。     

人血单核细胞和U937细胞产生IFN-α的比较

一般认为人体单核-巨噬细胞(Mo-Mφ)系在体外诱生IFN-α较为困难,本文试图找到适合的培养条件,使Mo-M(?)系能在体外诱生IFN-α.结果显示:经M-CSF长期预处理和IFN-γ的短期预处理或单用IFN-γ短期预处理后,NDV刺激均能使人外周血Mo-M(?)产生较高水平的IFN-α;U937细胞只能产生低水平的IFN-α.     

Carvedilol Modulates In-Vitro Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor-Induced Interleukin-10 Production in U937 Cells and Human Monocytes

Both granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) and interleukin-10 (IL-10) are important mediators regulating inflammatory responses. Inflammatory processes have an important role in atherogenesis. In this paper, the effects of carvedilol on GM-CSF-induced IL-10 production were examined on human monocytic cell line, U937, and purified human monocytes. First, we showed that one-time carvedilol pretreatment at concentrations 0.3-10 μM dose-dependently inhibited GM-CSF-induced IL-10 production in U937 cells. In addition, we found carvedilol to be non-cytotoxic at concentrations equal to or less than 10 μM. However, at concentrations higher than 10 μM, carvedilol induced programmed cell death in U937 cells. The inhibition of GM-CSF-induced IL-10 production by carvedilol was also observed at the expression of mRNA. Furthermore, the inhibition of IL-10 production was demonstrated in GM-CSF-activated purified human peripheral blood monocytes. Finally, long-term carvedilol pretreatment of U937 cells up to 2 months at concentrations of 1.0 μM mildly enhanced the IL-10 production. Our observations that carvedilol modulated GM-CSF-induced IL-10 production may have some implication in understanding the broad-spectrum effects of carvedilol in regulating inflammatory reactions.     

TM-TNF-α介导的反向信号下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达

目的：观测TM-TNF-α介导的反向信号对sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的影响，构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变体，并进一步验证。方法：sTNF-α激活U937细胞后撤除，加入可溶性TNFR（sTNFRⅠ）激活TM-TNF-α介导的反向信号，用RT—PCR方法检测反向信号对活化后U937细胞因子IL-1β、IL-8 mRNA的影响；采用分子克隆技术构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变重组体，采用电穿孔法转染U937，并用Western blot检测蛋白表达。结果：sTNF-α激活U937细胞后撤除，高表达的细胞因子IL-1β、IL-8 mRNA随着时间的延长而逐渐降低；sTNFRⅠ激活的TM-TNF-α介导的反向信号可加速细胞因子mRNA的降解，且使mRNA降解至50％的时间分别由约75、60分钟缩短至约45、35分钟。成功构建TM-TNF—α胞浆段缺失突变重组体pcDNA3．0-△csTM-TNF—α并瞬时转染U937细胞，Western blot结果显示U937细胞膜表面除表达26000的野生型TM-TNF-α蛋白外，还可表达约20000的突变体蛋白。这种缺失胞浆段的突变体蛋白可竞争性抑制反向信号对活化后U937细胞因子mRNA的下调作用。结论：TM-TNF-α介导的反向信号可下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达；且TM-TNF-α胞浆段为其介导的反向信号所必需。     

U937细胞表达成纤维细胞生长因子受体

以逆转录－ＤＮＡ聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）自Ｕ９３７细胞钓出了两条ｃＤＮＡ片段。将其克隆入ＴＡ克隆载体后进行ＤＮＡ测序。结果证明ｃＤＮＡ片段分别是人成纤维细胞生长因子受体１（ＦＧＦＲ１）的细胞外段和细胞内段ｃＤＮＡ。这一结果表明，Ｕ９３７细胞可以表达ＦＧＦＲ１ｍＲＮＡ。     

维生素D3诱导的U937细胞中CD14表达的实验研究

目的: 探讨维生素D3诱导U937细胞上CD14蛋白的表达及其对内毒素 (LPS)刺激的反应性。方法: 用0. 1μmol/LVitD3与U937细胞共同培养 24h诱导CD14基因的表达, 并观察U937细胞对不同浓度的LPS刺激不同时间的反应性。结果: VitD3能稳定诱导U937细胞表达CD14mRNA和CD14蛋白。经VitD3诱导的U937细胞对LPS刺激的敏感性显著增强, 表现为低浓度LPS刺激即能诱导该细胞核中NF -κB激活, 促进TNF- αmRNA的转录和表达, 并将表达的TNF α释放入培养上清中。结论: VitD3能诱导U937细胞中CD14基因和蛋白的表达, 并增加其对LPS刺激的反应性。     

冬凌草甲素增强巨噬细胞对凋亡的U937细胞的吞噬作用

目的：研究具有诱导肿瘤细胞凋亡活性的冬凌草甲素，促进巨噬细胞对因凋亡的肿瘤细胞的吞噬作用。 方法： DNA凝胶电泳检测UV照射（2.4 J/cm2, 4 min）的人组织淋巴瘤U937细胞凋亡；Giemsa染色，Hoechst 33258染色，镜下检测计数吞噬作用。 结果： UV照射（2.4 J/cm2, 4 min）诱导U937细胞发生凋亡，琼脂糖凝胶电泳可见凋亡典型的DNA梯带。2.7 μmol·L^-1的冬凌草甲素具有增强U937分化的巨噬细胞对UV照射诱导凋亡的U937细胞的吞噬作用，并呈时间剂量依赖性，但对非特异性荧光颗粒的吞噬效果较弱。加入抗TNFα和抗IL-1β的抗体，培养12 h, 吞噬增强作用明显受抑制。冬凌草甲素在人外周血来源的巨噬细胞吞噬凋亡的U937细胞过程中同样发挥增强吞噬的效果。 结论： 冬凌草甲素可特异地增强巨噬细胞对凋亡的U937细胞的吞噬作用，其吞噬机制是通过诱导巨噬细胞TNFα和IL-1β的释放。     

利用抑制性减数杂交技术(SSH)研究IL-10抑制表达的新基因

目的　利用抑制性减数杂交 (SSH)技术筛选IL 10抑制表达的新基因。方法　以PHA刺激的U937细胞为tester,以PHA刺激同时IL 10抑制的U937细胞为driver,提取mRNA ,反转录构建cDNA文库 ,利用SSH技术筛选IL 10抑制表达的新基因。结果　通过SSH技术 ,发现了 15个可能的IL 10抑制表达的基因 ,其中 6个与GenBank中已公布的表达序列检签 (expressedsequencetag ,EST)片段没有明显同源性 ,为新基因 ,其中之一经EST拼接 ,得到全长cDNA ,为一种新的C C家族趋化因子 ,已被GenBank收录 ,收录号码为AF0 96 985。挑选 4个新基因进行Northernblot分析 ,发现IL 10可抑制其中 3个新基因表达。结论　SSH技术是一种高效的差异基因筛选方法 ,IL 10可抑制多种包括新细胞因子基因的表达     

rGM—CSF对U937细胞系膜MHC分子及CD86分子表达的作用

本实验研究了人重组ＧＭ－ＣＳＦ对Ｕ９３７人单核细胞样细胞系ＨＬＡ和ＣＤ８６分子表达的调节作用，将Ｕ９３７细胞在ｒＧＭ－ＣＳＦ１０μｇ／Ｌ培养１ｄ，ＨＬＡ－ＤＲ分子的表达率为８３％，对照组为９１％，培养ｄ表达率为５１％，对照组为７８％，培养５ｄ，表达率为５３％，对照组为８１％，Ｕ９３７细胞在ｒＧＭ－ＣＳＦ１０μｇ／Ｌ浓度下培养１ｄ，ＣＤ８６分子表达率为２％，对照组为１．６％，培养３ｄ，表达率为３．９     

Apoptin基因/壳聚糖纳米粒的制备及其对U937细胞凋亡的诱导作用

目的以羧甲基壳聚糖为基质材料,制备apoptin基因缓释微球,探讨其对U937细胞凋亡的作用。方法采用复凝聚法制备apoptin/壳聚糖微球,分别用光镜观察微球形态、内切酶研究其稳定性、DNA电泳阻滞分析apoptin/壳聚糖最佳比例、PCR测定apoptin基因作为复制摸板能力、用MTT法检测其抗肿瘤活性。结果壳聚糖与apoptin基因可形成稳定的微球,其直径在200～300之间,成球性较好,apoptin/壳聚糖微球P/N最佳质量比为5.5:1。微球能够有效防止DNA酶的降解作用,apoptin/微球载体中的基因仍具有DNA复制摸板功能,并能有效地转染U937细胞,转染48h可诱导U937细胞发生凋亡,从而抑制瘤细胞生长。结论apoptin基因与羧甲基壳聚糖可形成稳定的缓释微球,并能有效地转染肿瘤细胞,诱导肿瘤细胞发生凋亡。     

上调c-myc基因的表达对U937白血病细胞的影响

 目的：构建稳定表达外源c-myc基因的人单核细胞白血病细胞株U937,并初步分析其特性。方法：首先构建重组质粒MSCV-c-myc-IRES-GFP （MMIG）载体,分别用MMIG及空载体MSCV-IRES-GFP（MIG）包装病毒,并感染U937细胞,用流式细胞术分选绿色荧光细胞,获得 U937/GFP和U937/MYC细胞,用荧光显微镜及流式细胞术检测GFP阳性率,用Western blotting测定细胞中c-Myc、survivin、X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）和Bcl-2的蛋白表达水平,流式细胞术检测U937/GFP和U937/MYC细胞周期,并用MTT法测定U937/GFP和U937/MYC细胞的生长情况,克隆形成实验检测克隆形成能力。结果：荧光显微镜观察,MIG和MMIG病毒感染后,2种细胞均表达绿色荧光蛋白;流式细胞术结果显示,MIG病毒感染的细胞荧光率为26.0%,MMIG病毒感染的细胞荧光率为277%;Western blotting的结果显示,c-Myc蛋白在MMIG病毒感染的细胞中表达水平升高。流式细胞术分选后,荧光显微镜观察可见绿色荧光蛋白表达明显增多,U937/GFP和U937/MYC细胞绿色荧光蛋白表达率分别达98.7%和93.7%。 U937/MYC细胞中c-Myc蛋白表达较U937/GFP细胞显著升高,c-Myc蛋白下游的survivin表达增多,而凋亡相关蛋白XIAP及Bcl-2的表达则没有明显变化。细胞周期检测显示,U937/MYC细胞处于S期的细胞数增多。MTT实验结果显示,U937/MYC细胞的生长速率较U937/GFP细胞增快。U937/MYC细胞的克隆形成能力较U937/GFP细胞强。结论：成功构建了c-myc基因高表达的U937稳定细胞株U937/MYC。在U937/MYC细胞中,c-Myc及其下游的survivin表达明显上调,处于细胞周期S期的细胞数增多、细胞生长加快、克隆形成能力增强,提示c-Myc可能通过增强自我更新能力、加快细胞周期、促进相关抗凋亡蛋白表达从而提高细胞的存活率。     

LPS调节U937细胞上B7-H1表达的初步研究

目的了解脂多糖（LPS）刺激后U937细胞上B7-H1的表达变化情况。方法培养U937细胞,用荧光半定量实时PCR和流式细胞仪技术,分别观测未刺激和用LPS刺激的U937细胞B7-H1mRNA与蛋白的表达情况。结果未经刺激的U937细胞组成性表达B7-H1,LPS刺激可显著增强B7-H1基因mRNA的转录和蛋白的表达。结论LPS在转录与翻译两个环节均可上调U937细胞B7-H1的表达水平。     

几种细胞因子对登革病毒感染U937细胞的影响研究

本文作者研究了几种细胞因子（ｒＩＬ－１，ｒＩＬ－２，ｒＩＬ－６，ｒＴＮＦ－α，ｎＩＦＮ－α和ｎＩＦＮ－γ）对Ｄ２Ｖ感染Ｕ９３７细胞的影响，结果显示：除ｎＩＦＮ－γ对ＤＶ感染Ｕ９３７细胞的感染无影响外，其余几种细胞因子都可使Ｄ２Ｖ感染Ｕ９３７细胞的感染率明显降低，为研究细胞因子在ＤＶ感染中的作用作了初步探索。     

甘露聚糖结合凝集素诱导人白血病细胞系U937细胞凋亡

目的研究甘露聚糖结合凝集素（MBL）对白血病细胞系U937凋亡的影响。方法不同浓度MBL处理U937细胞后,应用CCK-8法分析细胞增殖情况,Hoechst33258染色观察细胞核及染色质,AnnexinV/PI双染流式细胞术分析细胞凋亡率,real-timePCR和免疫印迹分析凋亡相关基因及蛋白表达。结果 30～50μg/mlMBL培养72h,U937细胞增殖明显受抑,出现不同程度核固缩、核碎裂;随MBL浓度升高或作用时间延长,凋亡细胞数逐渐增多;Fas、Caspase-3mRNA、Fas和FasL蛋白表达量升高,Caspase-3和多腺苷二磷酸多聚酶（PARP）蛋白被剪切激活或失活。结论 MBL可诱导白血病细胞U937细胞凋亡,其机制与上调Fas表达、剪切Caspase-3和PAPR有关。     

脂多糖结合蛋白抑制肽抑制脂多糖与人单核巨噬细胞株的结合

目的： 研究脂多糖结合蛋白（LBP）抑制肽对脂多糖（LPS）与人单核巨噬细胞株U937细胞结合的抑制作用，从而探讨LBP抑制肽阻断内毒素信号转导通路的机制。 方法: 夹心ELISA检测LBP抑制肽与LPS的相对亲和力；流式细胞检测分析（FACS）异硫氰酸荧光素标记的LPS（FITC-LPS）与U937细胞的结合；ELISA检测U937细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。 结果： 在相同的浓度下，LBP抑制肽与LPS的亲合力比LBP高，约为LBP的1.15倍。LPS组平均荧光强度（MFI）明显高于对照组，LBP显著增强了LPS与U937细胞的结合，促进了LPS的内在化；LBP抑制肽组MFI显著低于LBP组(P<0.01)，即P12减弱了FITC-LPS与U937细胞的结合。而且P12抑制了LPS诱导的U937细胞TNF-α的生成。 结论： LBP抑制肽与LPS有一定的亲和力，LBP抑制肽与LBP的致炎位点竞争结合FITC-LPS，从而抑制LPS与单核巨噬细胞的结合，阻止了LPS的内在化，并显著降低了LPS诱导的TNF-α释放。     

白细胞介素-27对白血病细胞株U937细胞生物学行为的影响

目的: 探讨白细胞介素-27(IL-27)对人单核细胞白血病细胞株U937细胞的影响及其机制。方法: 用不同剂量的重组人IL-27和U937细胞分别共培养24h和48h,用荧光定量PCR测定细胞中促凋亡基因 p53、bax 及caspase-3、主要组织相容性复合物Ⅰ(MHCⅠ)类分子、协同刺激分子CD86和黏附分子CD54的表达,流式细胞仪检测U937细胞表面CD86和CD54的表达,并用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定IL-27对细胞增殖的影响。结果: PCR结果显示经过不同剂量IL-27刺激后,U937细胞中促凋亡基因 p53和bax表达增加,同时,U937细胞中凋亡相关蛋白caspase-3的表达及活性也有相应增加;MTT结果显示,IL-27可以抑制U937细胞增殖并和抗肿瘤药物阿糖胞苷产生协同作用;IL-27可以诱导U937细胞中的MHCⅠ类分子(HLA-A,B,C)、表面的协同刺激分子CD86和黏附分子CD54的表达增加。结论: IL-27可以诱导U937细胞中促凋亡基因的表达,直接抑制细胞增殖,对细胞中MHCⅠ、CD86和CD54的表达有诱导作用。这可能是IL-27抗肿瘤作用的重要机制。