转化生长因子-β1基因转染鼠成骨细胞的研究

目的　研究转化生长因子 - β1 (TGF- β1 )基因转染鼠成骨细胞对其生物学特性的影响。方法　将TGF- β1 基因导入成骨细胞 ,通过原位杂交检测和成骨细胞培养上清液 TGF- β1 活性测定 (水貂肺上皮细胞生长抑制试验 ) ,了解转染细胞 TGF- β1 的表达。检测基因转染及转染细胞上清对成骨细胞增殖和碱性磷酸酶 (AL P)活性的影响 ,观察 TGF- β1 基因转染成骨细胞生物学活性的变化。结果　原位杂交检测基因转染成骨细胞可明显表达TGF- β1 。上清液 TGF- β1 活性检测结果显示 1∶ 1、1∶ 2、1∶ 4复合培养基对 Mv1抑制率分别为 16 .3%、2 2 .7%和2 8.2 % ,上清中 TGF- β1 含量越高 ,活化后对 Mv1抑制作用越明显。 TGF- β1 基因转染对成骨细胞生物学活性无明显影响 ,而转染细胞上清活化后可促进成骨细胞增殖 ,抑制 AL P活性。结论　 TGF- β1 基因转染鼠成骨细胞可显著促进 TGF- β1 表达 ,转染细胞生物学特性保持稳定 ,为骨缺损基因治疗的体内研究奠定了基础     

孕激素调节人成骨细胞转化生长因子-β1、β2的表达

目的研究孕激素对正常成人成骨细胞转化生长因子(TGF)-β1、TGF-β2表达的调节作用,探讨孕激素治疗绝经后骨质疏松症(OP)的作用机制.方法鉴定成人成骨细胞(hOB),测定碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素分泌,Van Gieson氏苦味酸酸性复红染色法进行Ⅰ型胶原染色.hOB用孕酮干预.Northern杂交、ELISA分别检测hOB TGF-β1、TGF-β2 mRNA和蛋白质分泌.结果观察到hOB分泌的ALP活性为(74.3±4.7)mU/mg蛋白,培养上清液骨钙素含量为(3.84±0.39)ng/ml蛋白,Ⅰ型胶原染色呈红色.观察到孕酮增强hOB TGF-β1、TGF-β2 mRNA表达呈剂量依赖性(P＜0.001);10-9mol/L孕酮诱导12～24 h促进TGF-β1、TGF-β2 mRNA表达,呈时间依从性.孕酮促进hOB TGF-β1、TGF-β2蛋白质分泌呈剂量依赖性(P＜0.001);10-9mol/L孕酮诱导12～24 h促进TGF-β1、TGF-β2蛋白质分泌,呈时间依从性.结论孕激素可能通过诱导成骨细胞TGF-β1、TGF-β2表达,促进成骨细胞增殖与分化,增强成骨功能及骨基质合成,促进骨形成.     

碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞中转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达的影响

目的　探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对体外成骨细胞中的生长因子 :转化生长因子 β1 (TGF β1 )和bFGFmRNA表达的影响。 方法　将体外培养的新生SD大鼠颅骨成骨细胞 ,用不同浓度的bFGF(5～ 50 μg/L)进行处理 ,利用核酸原位分子杂交 ,检测两种生长因子在细胞中mRNA的表达。结果　依bFGF浓度的增加成骨细胞内TGF β1mRNA表达分别是对照组的 1 .5、1 .6、1 .9和 2 .0倍 ;bFGFmRNA表达则分别是对照组的 1 .2 8、1 .37、1 .40和 1 .51倍。bFGF组中 ,TGF β1和bFGFmRNA的表达量均明显高于对照组 (P <0 .0 1 )。结论　外源性bFGF可以对成骨细胞自分泌bGFG产生影响 ,还能够促进TGF β1的合成     

孕激素调节人成有细胞转化生长因子—β1、β2的表达

目的　研究孕激素对正常成人成骨细胞转化生长因子 (TGF) β1、TGF β2表达的调节作用 ,探讨孕激素治疗绝经后骨质疏松症 (OP)的作用机制。方法　鉴定成人成骨细胞 (hOB) ,测定碱性磷酸酶 (ALP)活性、骨钙素分泌 ,VanGieson氏苦味酸酸性复红染色法进行Ⅰ型胶原染色。hOB用孕酮干预。Northern杂交、ELISA分别检测hOBTGF β1、TGF β2mRNA和蛋白质分泌。结果　观察到hOB分泌的ALP活性为 (74 3± 4 7)mU/mg蛋白 ,培养上清液骨钙素含量为 (3 84± 0 3 9)ng/ml蛋白 ,Ⅰ型胶原染色呈红色。观察到孕酮增强hOBTGF β1、TGF β2mRNA表达呈剂量依赖性 (P <0 0 0 1) ;10 -9mol/L孕酮诱导 12～ 2 4h促进TGF β1、TGF β2mRNA表达 ,呈时间依从性。孕酮促进hOBTGF β1、TGF β2蛋白质分泌呈剂量依赖性 (P <0 0 0 1) ;10 -9mol/L孕酮诱导 12～ 2 4h促进TGF β1、TGF β2蛋白质分泌 ,呈时间依从性。结论　孕激素可能通过诱导成骨细胞TGF β1、TGF β2表达 ,促进成骨细胞增殖与分化 ,增强成骨功能及骨基质合成 ,促进骨形成     

转化生长因子-β1、bax在慢性胰腺炎组织中的表达

慢性胰腺炎（CP）是多种病因造成的，以胰腺实质慢性炎症、腺泡细胞被结缔组织替代，伴有腹痛和／或永久性内、外分泌功能障碍为基本特征。我们通过建立犬CP模型，探讨CP胰腺广泛纤维化及胰腺实质减少的可能机制。     

肝癌患者转化生长因子—β1及其受体的表达和意义

目的 探讨肝癌患者转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）及其受体的表达情况和意义。方法 酶联免疫吸附法检测２７例行胆囊切除术者（对照组）和３６例肝癌患者（肝切除组）肝切除手术前后血清ＴＧＦ－β１浓度;免疫组织化学法检测３６例肝癌和癌周组织标本中相关受体的表达情况。结果 肝癌患者血清ＴＧＦ－β１浓度较对照组显著升高（Ｐ〈０．０５）;患者肝切除术后血清ＴＧＦ－β１浓度较术前有显著升高（Ｐ〈０．０１）,而胆     

转化生长因子-β家族调控成骨细胞分化的分子基础

转化生长因子β家族是成骨细胞分化的基本调节因子,可提高成骨细胞特异性基因的表达和促进细胞外基质合成,控制成骨细胞分化。其分子基础涉及多信号通路,并通过转录和转录前后水平调控实现其生物效应。     

转化生长因子β1基因修饰成骨细胞复合仿生基质材料治疗骨缺损的研究

目的：探讨转化生长广大因子β1(TGFβ1)基因修饰成骨细胞复合仿生基质材料修复鼠胫骨骨缺损的治疗效果。方法：将TGFβ1基因转染成骨细胞后与涂覆多聚赖氨酸(PLYS)的聚DL乳酸(PDLLA)仿生基质材料复合，植入鼠胫骨骨缺损模型，术后摄X线片和组织学检查观察修复情况。结果：实验绑4间时X线片可见骨痂形成，组织学观察有类骨组织和新骨形成，成骨细胞贴附于基质材料表面。8周时缺损基本修复，新骨密度与自体骨接近；照组4周时X线片未见骨痂形成，组织学观察没有类骨组织形成，基质材料表面成骨细胞贴附较少，材料腔隙中有大量淋巴细胞浸润。8周时植入材料基本吸收，为纤维组织替代。结论：将分子生物学和组织工程学结合以修复骨缺损，能获得理想的治疗效果。     

转化生长因子-β1基因转染骨髓基质细胞的瞬时表达与稳定表达

目的 探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）基因转染骨髓基质细胞（BMSCs）的表达能力。方法 取6周龄新西兰白兔BMSCs,传代培养后以3μl阳离子脂质体（Lipofectamine):1μg pcD-NA3J-TGF-β1的比例转染,通过免疫组织化学染色及图像分析对3组15份样本检测TGF-β1表达水平;利用水貂肺上皮细胞生长抑制法检测TGF-β1生物活性,分析转染的量效关系和时效关系。结果 瞬时表达组转染后48h免疫组织化学染色部分细胞呈强阳性,稳定表达组全部细胞呈强阳性表达持续4周以上。图像分析显示转染细胞TGF-β1表达显著增强,与对照组比较差异有非常显著性（P＜0．01）。量效关系显示,在转染体系中pcDNA3-TGF--β1(μg）：阳离子脂质体（μl）为1：3时,TGF-β1表达效率最高;时效关系显示,稳定表达组TGF-β1表达活性较瞬时表达组更强。结论 TGF-β1基因转染可使BMSCs有效地表达活性TGF-β1而产生生物效应。     

转化生长因子-β1在脑血管畸形中的表达

转化生长因子 β(TGF β)具有细胞生长与分化、细胞黏连与细胞外基质的形成、修复损伤、免疫调节以及胚胎发育等多种生物学功能[1,2 ] 。小鼠体内实验显示TGF β能快速诱导血管形成,在体外实验中也观察到促进胶原蛋白的形成[3 ] 。我们采用TGF β1RNA狭缝杂交观察TGF β1在脑血管畸形(AVMs)中的作用。一、材料和方法1.标本来源:取自我院和华山医院神经外科(陈衔成教授提供部分标本)手术切除14例脑AVMs及其周围脑组织标本和8例正常脑血管和脑组织标本液氮速冻,-70℃保存。2 .总RNA提取、RNA电泳:用Trizol试剂提取总RNA电泳…     

增生性瘢痕转化生长因子β及其受体的分布及表达

目的　探讨转化生长因子 β(TGF β)及其受体在增生性瘢痕形成中的作用机制。　 方法　收集临床手术切除后的正常皮肤组织 7例和增生性瘢痕组织标本 11例 ,用免疫组织化学和原位杂交的方法检测TGF β及其TGF β受体 (TGFR)Ⅰ、TGFRⅡ在组织中的定位分布、蛋白和mRNA表达。　结果　在正常皮肤组织中 ,与TGF β1 、TGF β2 、TGFRⅠ比较 ,TGF β3和TGFRⅡ呈较高表达 ;在增生性瘢痕组织中则呈现与正常皮肤组织中的表达相反的结果。与正常皮肤组织相比 ,增生性瘢痕组织中TGF β1 、TGF β2 和TGFRⅠ的蛋白和mRNA表达均明显增加 ,而TGF β3和TGFRⅡ的蛋白以及mRNA表达相对减少。　结论　创面愈合过程中TGF β及其受体不同水平的表达与增生性瘢痕的形成直接相关。     

转化生长因子-β1反义RNA腺病毒载体的构建

目的构建含转化生长因子β1(TGF-β1)反义RNA的重组腺病毒重组体。方法将TGF-β1的cDNA5＇端630bp片段反向插入穿梭载体pAdTraek-CMV,构建为TGF-β1反义RNA的重组体(pAdTrack-antiTGFβ1),将重组体pAdTrack-antiTGFβ1与包装质粒pAdEasy-1共转染BJ5183细菌。用选择培养基筛选同源重组的阳性克隆,同源重组的腺病毒载体转染293细胞,在荧光显微镜下观察细胞中的绿色荧光蛋白(GFP)及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组的腺病毒。结果构建了含rGF-β1反义RNA的重组腺病毒,其滴度为2.4×10     

阴茎硬结症的相关基因表达及TGF-β1的治疗效应

目的　筛选参入及调控阴茎硬结症的相关基因 ,探讨其发病机理及针对相关基因治疗的应答作用。方法　用基因芯片、细胞生物学和分子生物学技术对自行构建的三个阴茎硬结症细胞系进行研究 ,用TGF β1治疗后观察相关基因表达差异。 结果　MCP 1是参与阴茎硬结症病理过程的关键下游基因 ,在硬结及其周围组织构建的细胞系有高表达 (P <0 0 5 ) ,TGF β1治疗后明显上调其表达水平 (P <0 0 5 )。结论　MCP 1在阴茎硬结症的发病过程中起重要作用 ,是某些基因调控的下游基因 ,以此为靶基因的治疗将提高疗效、减少并发症。该研究为进一步明确阴茎硬结症的病因及发病机理和探索中西医结合治疗提供了分子水平的依据     

转化生长因子β1诱导肌纤维母细胞分化机制的研究

目的 探讨肺移植后闭塞性细支气管炎中转化生长因子β1（TGF-β1）诱导肌纤维母细胞分化的机制。方法 闭塞性细支气管炎动物模型采用Smad3野生型和基因敲除小鼠进行的同种异体异位气管移植,并采用原代培养的气管纤维母细胞,通过免疫组化、免疫荧光、Western Blotting、逆转录聚合酶链反应和DNA凝胶电泳迁移率检测等手段,检测肌纤维母细胞分化的标志物α平滑肌肌动蛋白（αSMA）的表达,以及Smad3、p38和ERK1／2的激活。结果 在闭塞性细支气管炎的受累气道中,发现有αSMA的大量表达。对纤维母细胞进行的离体研究,发现TGF-β1诱导Smad3激活,表现为蛋白磷酸化、细胞核转位和DNA结合。TGF-β1引起肌纤维母细胞分化增加,表现为αSMA在转录和蛋白水平的表达增加;而在缺乏Smad3的纤维母细胞中,TGF-β1诱导的肌纤维母细胞分化明显减少（t=2,080,P=0．027;t=1．982,P=0．032）,但未完全消除。TGF-β1可通过激活p38和ERK1／2来促进少量肌纤维母细胞的分化。结论 TGF-β1可通过激活Smad3依赖性和非依赖性信号传导途径,主要是Smad3依赖性途径,来促使纤维母细胞向肌纤维母细胞的转化,最终导致闭塞性细支气管炎的发展。     

Effects of basic fibroblast growth factor on biological characteristics of osteoblasts

Objective: To elucidate the effects of exogenous basic fibroblast growth factor ( bFGF ) on biological characteristics of rat osteoblasts cultured in vitro. Methods: The osteoblasts isolated from a Sprague-Dawley rat and cultured in vitro were treated with different concentrations of bFGF ( 5-50 ng/ml) respectively. At 24 hours after treatment, the proliferating cell nuclear antigen was measured with immunocytochemistry, alkaline phosphatase (ALP) activity was determined and the expression of transforming growth factor beta 1 ( TGF-β1 )was detected to observe the effects of bFGF on growth and differentiation of osteoblasts. Resu/ts: bFGF ( 5-50 ng/ml ) could obviously promote the growth of osteoblasts. The intracellular expression of TGF-β1 mRNA increased significantly, but the intracellular ALP content decreased. Conclusions: bFGF can obviously stimulate the proliferation of osteoblasts and promote the synthesis of TGF-β1, but cannot promote the differentiation of osteoblasts.     

Effect of fluvastatin on transforming growth factor beta 1 expression in peritoneal dialysis rats model

ObjectiveTo investigate the effect of fluvastatin on TGF-β1 expression in a rat model of peritoneal dialysis(PD). MethodsA rat model of PD was built by intraperitoneal injection of 2.5% or 4.25% peritoneal dialysate. SD rats were randomly divided into 7 groups: (1) Normal control group; (2)Saline control group: saline 100 ml/kg intraperitoneal injection(IP) each day; (3) Fluvastatin treatment group: fluvastatin intragastrically administration 10 mg/kg each day; (4) 2.5% PD group: 2.5% peritoneal dialysate IP 100 ml/kg everyday; (5)4.25% PD group: 4.25% peritoneal dialysate IP 100 ml/kg everyday; (6)2.5% PD plus fluvastatin treatment group: 2.5% peritoneal dialysate IP 100 ml/kg plus fluvastatin 10 mg/kg everyday; (7)4.25% PD plus fluvastatin treatment group: 4.25% peritoneal dialysate IP 100 ml/kg plus fluvastatin 10 mg/kg everyday. The rats were sacrificed at 6 weeks and peritoneal tissues were dissected. The expressions of TGF-β1 and FN were examined by RT-PCR and immunohistochemical analysis. Masson staining was used for histological examination. ResultsMasson staining showed that the peritoneum thickened in 2.5% and 4.25% PD group than in normal control group and saline control group. The fluvastatin treatment ameliorated the thickening of peritoneum induced by PD. RT-PCR and immunohistochemical analysis showed that the mRNA and protein expression of TGF- β1 and FN increased in 2.5% and 4.25% PD group than in normal and saline control group (all P＜0.05). The fluvastatin treatment ameliorated the increased expression of TGF-β1 and FN induced by PD. There was no statistically significant difference among normal control group, saline control group and fluvastatin treatment group in both peritoneal thickness and the expression of TGF-β1 and FN. ConclusionFluvastatin can reduce the increased expressions of TGF -β1 and FN in rat peritoneum and ameliorate the thickening of peritoneum induced by PD.     

Ⅱ型胶原、转化生长因子β1和碱性成纤维细胞生长因子在脊柱侧凸患者关节突软骨中分布及表达的实验研究

目的研究青少年特发性脊柱侧凸（AIS）和先天性脊柱侧凸（CS）畸形最严重部位一顶椎凸、凹侧下关节突软骨中Ⅱ型胶原、转化生长因子β1（TGF—β1）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达特点。方法22例AIS患者,18例CS患者作为研究对象。取两组患者的顶椎和端椎凸、凹侧的下关节突,采用苏木素-伊红（HE）染色、免疫组化和原位杂交方法观察关节突的病理改变和Ⅱ型胶原、TGF-β1及bFGF在关节突中分布的特点。将所得的免疫组化和原位杂交图像输入图像分析系统,进行半定量分析,并作统计学分析。结果Ⅱ型胶原、TGF-β1、bFGF在AIS和CS中的有基本相似的表达特点,免疫组化和原位杂交方法均显示顶椎凹侧的表达高于凸侧,差异有统计学意义（P〈0．05）;上下端椎的凸凹侧之间及凸凹侧的上下端椎之间的表达差异无统计学意义,顶椎、上下端椎各对应部位在AIS与CS之间的表达差异无统计学意义;Ⅱ型胶原在凸侧与凹侧顶椎的表达高于同侧上、下端椎,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论AIS和CS顶椎关节突软骨呈现退变及发育不全等征象,凹侧较凸侧明显。AIS和CS中Ⅱ型胶原、TGF—β1及bFGF在顶椎凹侧表达的增高可能为脊柱畸形后异常的生物力学引起了关节突细胞间基质重建而进行代偿的结果。压应力可引起TGF—β1及bFGF的表达增高;压应力和张应力均可以引起Ⅱ型胶原的表达增高,但顶椎凹侧压应力比凸侧张应力的影响更大。     

人血管内皮细胞生长因子的cDNA克隆及其在兔成骨细胞中的表达

目的 获得人ＶＥＧＦ１６５ ｃＤＮＡ并构建其真核表达载体,探讨应用血管内皮细胞生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）基因治疗骨科各种疾患的可行性。方法 采用巢式（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ）技术。从ＨＬ６０细胞中扩增出人血管内皮生长因子（ｈＶＥＧＦ１６５）ｃＤＮＡ,并将这一ｃＤＮＡ克隆至ｐｃＤＮＡ３真核表达载体上,     

Urinary transforming growth factor beta1 in children and adolescents with congenital solitary kidney

The aim of the study was to assess urinary transforming growth factor beta1 (TGF beta1) level in children and adolescents with congenital solitary kidney (CSK), depending on estimated glomerular filtration rate (eGFR) and compensatory overgrowth of the kidney. The study group (I) consisted of 65 children and young adults, 0.5–22 years of age (median 10.0 years) with CSK and no other urinary defects. The control group (C) contained 44 healthy children and adolescents, 0.25–21 years old (median 10.3 years). We used an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to determine the urinary level of TGF beta1, the Jaffe method to assess creatinine concentration, and the Schwartz formula to estimate GFR. Kidney length was measured while the patient was in a supine position, and overgrowth (O%) was calculated with reference to the charts. Urinary TGF beta1 level in CSK patients was more than twice as high as that in controls (P < 0.05). Also, eGFR in patients with CSK exceeded the values in the control group (P < 0.01). Compensatory overgrowth of the solitary kidney was found (median 19.44%). Urinary TGF beta1 concentration was positively correlated with eGFR (r = 0.247, P < 0.05), uric acid concentration (r = 0.333, P < 0.01), and percentage of overgrowth (r = 0.338, P < 0.01) and body mass index (BMI) centile (r = 0.274, P < 0.05). We concluded that, although proteinuria and progressive renal insufficiency is not observed in patients with CSK during childhood, the renal haemodynamic changes are present and may be a risk factor for impairment of renal function and hypertension in future life.     

大鼠小肠转化生长因子β1重组腺病毒载体的构建和表达

目的构建可调控性大鼠小肠TGF-β1表达的重组腺病毒载体。方法按RNA提取试剂（TRIzol Reagent）说明书步骤从大鼠小肠组织抽提总RNA，克隆TGF-β1基因；经穿梭载体与可调控性腺病毒载体骨架连接，鉴定后在HEK293细胞包装。获得高滴度病毒后。取上清检测绿色荧光蛋白（GFP）的表达，观察目的基因的表达情况。结果扩增出与预期大小一致的cDNA片段，其中TGF-β1大小为1173bp；其基因序列与GenBank登录的大鼠TGF-β1基因序列完全一致。重组TGF-β1腺病毒获得的滴度约为10nPFU／ml；病毒包装后绿色荧光蛋白表达的检测结果显示，绿色荧光蛋白随着时间的延长，表达量逐渐增高；与预期结果一致。结论构建的可调控性大鼠小肠TGF-β1重组腺病毒载体得到了正确表达，为进一步研究TGF-β1干扰树突状细胞分化成熟诱导小肠移植免疫耐受提供了依据。