CA125时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的 研制CA125时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立CA125 TRFIA试剂盒。对试剂盒各项指标进行评价。结果 该试剂盒的工作范围为10～600U／ml,分析灵敏度为1．07U／ml，批内、批间的精密度分别为4．5％～8．1％，6．9％～11．5％。与CEA、AFP、CA50、CA15-3、CA19-9无交叉反应。稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年，37℃稳定7d。425份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0～37U／ml。123份血清标本用本试剂盒与国外其他方法的同类试剂盒同时检测，其相关系数为0．939。结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品试剂盒。     

人催乳素时间分辨荧光免疫分析检测试剂的研制

目的建立人血清催乳素的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法。方法采用双抗体夹心法建立人血清催乳素TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒的定量范围为16～11000mU/L,灵敏度为1.36mU/L,批内批间的精密度分别为2.6%～7.6%,5.7%～9.0%;与人胎盘泌乳素(hPL)、人生长激素(hGH)、人黄体生成素(hLH)和人促卵泡激素(hFSH)无交叉反应。30份异常血样用本试剂盒与进口的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.997。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

时间分辨荧光免疫分析技术在HBV-M检测中的应用

目的:比较TRFIA与ELISA两种方法对HBV-M检测的结果,并对其进行分析,了解TRFIA法测定HBV-M的准确性及可行性。方法:对102例就诊患者的血清标本同时采用TRFIA和ELISA两种方法检测乙肝标志物。结果:两种检测方法对HBV-M的结果比较差异无显著性(P>0.05)。但就乙肝患者检测的医学模式来讲,以TRFIA法的结果为标准,与ELISA法比较有所差别,其中HBsAgHBcAb阳性模式者有显著差异(P<0.05),其他医学模式均无差异。结论:TRFIA对HBV-M的检出率高于ELISA,能够弥补ELISA法因灵敏度相对较低所引起的假阴性,TRFIA作为一种高灵敏度的方法,可为临床诊断、疗效观察、及乙肝疫苗的接种提供依据。     

细胞角蛋白19片断时间分辨荧光免疫分析试剂盒的评价及临床应用研究

目的 对自制的细胞角蛋白19片断(CYFRA21-1)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)试剂盒进行临床检测评价,并为该试剂盒在临床的应用提供科学依据.方法 用自制试剂盒检测采集到的血清1 057例,罗氏(Roche)的电化学发光(ECLIA)CYFRA21-1作为对照试验,操作按试剂盒说明书进行,最后对自制试剂盒的准确性和相关性等指标进行计算.结果 本试剂盒在ROC曲线中的AUCROC值为0.989,检测性能优秀.与Roche电化学发光试剂盒比较,其阳性符合率为97.40%,阴性符合率为98.33%,差异均无统计学意义(P＞0.05).自制试剂盒测定的TRF值与电化学发光法测定值相接近,相关系数为0.977,两者相关性好(P＜0.01).结论 本试剂盒检测性能满足临床应用的需要.     

人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的 研制人甲胎蛋白(hAFP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立AFP TRFIA试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果 试剂盒的可测范围为1~1 000U/ml, 灵敏度为0.17U/ml,精密度良好,批内和批间的精密度分别为3.3%~5.9%,3.7%~ 6.5%。与CEA、CA12-5、CA19-9、CA15-3、白蛋白无交叉反应。稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年,37℃稳定7d。426份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0~12U/ml。用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测60份血清标本,其相关系数为0.995。结论 试剂盒各项指标(灵敏度、精密度、特异性、稳定性、准确度)均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

乙型肝炎病毒核心抗体IgM 时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的 利用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立乙型肝炎病毒抗HBc-IgM的检测试剂盒.方法 采用捕获法建立抗HBc IgM TRFIA检测试剂盒.对自制试剂盒的各项性能指标进行评估.结果用自制质控品检测分析内和分析间的精密度分别为4.8～7.2%,7.5～8.6%;与抗-HBs,抗-HBc IgG和抗-HBe无交叉反应;对584份血清样本进行检测并与国产酶联免疫法试剂盒对比,结果 显示自制试剂盒的灵敏度更高;300份健康者血清样本检测结果表明,该试剂盒的cutoff值=阴性对照荧光值×3.5.结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代酶免法试剂盒.     

时间分辨荧光免疫分析法定量检测HBsAg的临床意义

目的 :探讨时间分辨荧光免疫分析法 (TRFIA)定量检测乙肝表面抗原 (HBsAg)的临床意义。方法 :对 3 5 8份乙肝病毒感染者血清标本采用TRFIA法定量检测HBsAg的含量。结果 :急性乙肝组血清HBsAg的含量为 2 0 . 8± 18 . 5 μg/ml ,慢性乙肝组、肝硬化组、肝癌组HBsAg含量分别为 5 . 3± 8 . 7μg/ml ,4 . 5± 7 . 2 μg/ml ,4 .1± 6 . 3 μg/ml,与急性乙肝组相比较差别显著 (P <0 0 1)。HBeAg(+ )组HBsAg含量为 2 6 .8± 18 . 2 μg/ml ,抗HBe(+ )组HBsAg含量为 3 . 6± 4 . 1μg/ml ,两组比较存在显著差异 (P <0 . 0 1)。结论 :采用TRFIA法定量检测HBsAg能较直观地反映乙肝病毒感染者体内乙肝病毒复制的活跃程度 ,结合乙肝其它血清学指标检查 ,对乙肝的病程监测及药物疗效判断具有一定帮助。     

时间分辨荧光免疫法定量检测CA125试剂盒临床应用研究

目的对自制CA125定量测定试剂盒（时间分辨荧光免疫法）进行临床应用研究，为该试剂盒的临床应用提供科学依据。方法按照自制试剂盒操作说明书对收集的410份血清进行测定，以电化学发光CA125定量测定试剂盒（Roche公司）为对照试剂，微粒子酶联免疫定量测定药盒（ABBOTT公司）为复核试剂，对测定的结果进行统计学分析。结果以电化学发光法为对照试验，其阳性符合率为98．35％，阴性符合率为98．81％，检验差异无统计学意义（P〉0．05）；相关系数为0．937，相关性良好；ROC曲线下面积为0．998。结论本试剂盒检测性能能满足临床应用的需要。     

石房蛤毒素时间分辨荧光免疫检测试剂盒的研制

目的制备石房蛤毒素(STX)的单克隆抗体,利用时间分辨荧光免疫分析技术建立石房蛤毒素超微量的检测方法。方法利用STX-KLH偶联抗原免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选后获得稳定分泌抗STX抗体的杂交瘤细胞株,腹水诱生法制备大量单抗,采用间接竞争法建立STX-TRFIA时间分辨荧光免疫检测试剂盒,对试剂盒各项性能进行评价。结果该试剂盒最低检出浓度为1.0 ng/ml,校准曲线线性范围为2.0~512 ng/ml,线性方程Y=-0.455 7X+22.872(|r|=0.998 3),与腹泻性贝类毒素(DSP)、神经毒性贝类毒素(NSP)、失忆性贝类毒素(ASP)均无交叉反应,平均回收率为94.66%,与进口试剂盒同时检测广州市水产品中贝类毒素的含量,其相关系数为0.9764,P0.001。结论试剂盒各项指标均接近进口试剂盒水平,达到检验要求,可满足实际工作需要。     

游离雌三醇时间分辨免疫荧光分析法的建立

目的建立游离雌三醇（uE3）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）方法。方法采用竞争抑制一步法建立检测uE3的TRFIA分析方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的灵敏度为0．14nmol／L,线性范围为0．14—120nmol／L,回收率为97．7％。分析内和分析间变异系数分别为1．6％-4．1％和4．4％-8．8％。与E2、孕酮和睾酮的交叉反应率分别为0．24％、0．36％和0．40％。149份血样用本试剂与进口的同类试剂同时检测,其相关系数为0．925。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

乙型肝炎病毒前S1抗原检测的临床意义

目的探讨乙型肝炎前S1抗原(Pre-S1-Ag)的临床意义。方法采用ELISA方法检测737标本进行乙肝两对半和前S1抗原检测,将结果进行相关性分析。结果前S1抗原(Pre-S1-Ag)在HsAg阳性组和HBeAg阳性组检出率分别为(325/458)70.9%、(218/244)89.3%,均明显高于在对应阴性组中的检出率(P<0.01);Pre-S1-Ag与HB-sAg、HBeAg的符合率分别为70.9%、89.3%,Pre-S1-Ag阳性率低于HBsAg的阳性率,但高于HBeAg的阳性率,Pre-S1-Ag与HBsAg、HBeAg的总体检出率关联显著(P<0.01)。结论血清中前S1抗原是HBV在体内复制的可造标志,前S1抗原与乙肝传染性有密切关系。     

乙型肝炎患者血清病毒前S1抗原的检测及其临床应用

目的 探讨乙型肝炎病毒前S1抗原(Pre-S1Ag)与乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)、e抗原(HBeAg)、抗HBe(anti-HBe)的相关性及临床价值.方法 对848例乙肝患者血清用酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙肝病毒血清标志物(HBV-M)、Pre-S1Ag,用荧光定量PCR测定HBV DNA、用速率法检测丙氨酸氨基转移酶(ALT).同时对乙肝HBV-M全阴性的305例健康人检测血清Pre-S1Ag.结果 848例乙肝患者中HBeAg阳性率为76.2%,Pre-S1Ag总阳性率为62.5%.其中,646例HBeAg阳性患者组中检出Pre-S1Ag阳性率62.2%;202例HBeAg阴性患者中检出 Pre-S1Ag阳性率63.4%,两组的Pre-S1Ag阳性率无明显差异(P＞0.05).Pre-S1Ag阳性患者比Pre-S1Ag阴性患者的ALT异常率显著增高(P＜0.01).结论 无论HBeAg阴性还是阳性,Pre-S1Ag同HBV的复制指标HBV DNA都有较好的一致性,是判断乙型病毒活动性的指标,是无条件开展HBV DNA检测时的最佳选择.     

乙型病毒性肝炎患者前S1抗原检测的意义

目的:探讨乙型肝炎病毒前S1抗原在临床上的应用价值。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和聚合酶链反应(PCR)方法,对306例乙型病毒性肝炎(以下简称乙肝)患者和50例健康人分别检测HBV标志、preS1抗原和乙肝病毒-脱氧核糖核酸(HBV-DNA)。结果:306例乙型肝炎患者preS1抗原和HBV-DNA的检出率分别为53.6%和58.8%;preS1-Ag在HBeAg阳性组和HBeAg阴性组中的阳性率分别为90.9%、29.2%,HBV-DNA在HBeAg阳性组和HBeAg阴性组中的阳性率分别为95.9%、34.6%,以HBV-DNA测定结果为判断标准,则preS1-Ag的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值及符合率分别为87.8%、95.2%、96.3%、84.5%和90.8%;HBV-DNA检出率稍高于PreS1-Ag的检出率,但两者的检出率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:乙肝病毒PreS1抗原与HBeAg阳性、HBV-DNA阳性呈高度相关,PreS1-Ag可与HBeAg、HBV-DNA同时作为HBV存在复制和传染性的重要检测指标,值得临床实验室推广应用。     

人白细胞介素-2与乙型肝炎病毒前S抗原融合蛋白基因疫苗诱导抗前S抗体产生

为了构建抗乙型肝炎病毒（HBV）持续性感染的特异性免疫治疗剂，我们曾构建了人白细胞介素-2（IL－2）与HBV前S（preS）抗原的融合蛋白（IL－2preS）的真核表达克隆，并证明IL－2preS融合蛋白能在哺乳动物细胞中分泌表达。本文以该克隆为基因疫苗，经正常肌肉组织内接种和再生性肌肉组织内接种进行基因免疫，实验结果证明接种IL－2preS基因疫苗能在动物体内诱导抗preS抗体产生，免疫后15天可检出抗体，45天时达高峰值，60天不见下降。再生性肌肉内的免疫效果比正常肌肉的好，所产生的抗体水平前者显著高于后者。结果表明IL－2pres融合蛋白能在机体内分泌表达。提示IL－2preS基因疫苗在人体内可能有多重生物功能，如诱导体液免疫与细胞免疫应答，双重导向作用和细胞膜受体交联效应等。     

时间分辨荧光免疫分析技术定量测定乙型肝炎病毒五项指标的应用评价

目的:评价时间分辨荧光免疫分析技术(TRFLA)检测乙型肝炎病毒标志物(HBV-M)五项指标(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)的应用价值。方法:采用TRFIA法对其配套试剂盒进行准确性和重复性测试;然后对108例随机样本采用TRFIA与酶联免疫吸附试验(ELISA)两种方法同时检测HBV-M五项指标;最后对两种方法的差异指标用微粒子酶免疫分析(MELA)法作复核测定。结果:TRFIA检测HBV-M五项指标的准确性和重复性全部符合标准;两种方法检测结果符合率达95.4%以上,各指标阴阳性结果经配对资料x~2检验均差异无显著性(P>0.05);TRFIA与MEIA复核结果高度相符。结论:TRFIA作为一种高灵敏度的定量方法,对HBV-M五项指标的测定,能为乙肝的临床诊断、疗效观察提供动态数据,并为接种乙肝疫苗提供可靠依据,是一种比较理想的定量检测方法。     

时间分辨荧光免疫分析技术定量测定乙型肝炎病毒五项指标的应用评价

目的：评价时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）检测乙型肝炎病毒标志物（HBV-M）五项指标（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）的应用价值。方法：采用TRFIA法对其配套试剂盒进行准确性和重复性测试；然后对108例随机样本采用TRFIA与酶联免疫吸附试验（ELISA）两种方法同时检测HBV-M五项指标；最后对两种方法的差异指标用微粒子酶免疫分析（MEIA）法作复核测定。结果：TRFIA检测HBV—M五项指标的准确性和重复性全部符合标准；两种方法检测结果符合率达95、4％以上，各指标阴阳性结果经配对资料χ^2检验均差异无显著性（P〉0.05）；TRFIA与MEIA复核结果高度相符。结论：TRFIA作为一种高灵敏度的定量方法，对HBV—M五项指标的测定，能为乙肝的临床诊断、疗效观察提供动态数据，并为接种乙肝疫苗提供可靠依据，是一种比较理想的定量检测方法。     

时间分辨荧光免疫分析技术在检测乙肝标志物中的应用评价

目的:评价时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术在检测乙肝标志物中的应用价值。方法:采用TRF法对5项乙肝标志物检测,并同时进行微粒子酶免技术(MEIA)及ELISA法检测并统计分析。结果:乙肝标志物5项指标的日间变异系数均在5%以下,批内精密度的变异系数<5%,线性测定相关系数为1,各组理论值与实测值之间无差异。靶值与实测值有统计学意义(P<0.01)。乙肝标志物5项指标的携带互污染率小于1.5%,3种方法检测结果临床符合性一致。结论:TRF分析仪采用TRF法对乙肝标志物5项的检测中,TRF法灵敏度高,是一种比较理想的定量检测方法。     

乙肝病毒DNA与前S1抗原及HBcAg检测的意义

目的探讨乙型肝炎病毒DNA与前S1蛋白及HBcAg在乙肝患者血清中的相关性及临床意义。方法对280例乙肝的血清采用酶联免疫吸附法(EIISA)检测前S1抗原、HBcAg,定量PCR检测HBV-DNA。结果HBV-DNA阳性的130例中HBcAg阳性率为82.30%,前Sl抗原的阳性检出率为79.23%,在前Sl抗原阳性的94例中HBcAg阳性率为17.02%,在前S1抗原的阴性的70例中,HBcAg阳性率为8.57%,两者比较有显著性差异(<0.05)。前Sl抗原与HBcAg阳性患者的HBV-DNA拷贝数大部分在107~l08IU/ml之间,且HBcAg的阳性率明显高于前S1阳性率,当HBV-DNA在l03~106IU/ml时,前Sl的阳性率高于HBcAg的阳性率。结论前S1抗原、HBcAg与HBV-DNA符合率较高,检测前Sl抗原和HbcAg同样具有重要的临床意义。