转化生长因子-β1 抗体对肝星状细胞内钙离子浓度的影响

目的: 研究转化生长因子-β1 (TGF-β1 )抗体对肝星状细胞内钙离子浓度([Ca2 ]i)的影响,探讨其预防、治疗肝纤维化和门脉高压的分子机制. 方法: 分别用TGF-β1 抗体和四氯化碳(CCl4 )处理大鼠肝星状细胞,作用24 h后,以Fluo-3/AM为细胞内钙离子荧光指示剂负载细胞,通过激光共聚焦显微镜观察[Ca2 ]i的变化. 再利用正交设计方法,研究不同浓度CCl4 、 TGF-β1 抗体及其作用的先后顺序和二者作用的时间间隔对[Ca2 ]i 的影响. 结果: 不同浓度TGF-β1 抗体、CCl4 及其作用的前后顺序对[Ca2 ]i有显著性影响(P<0.05),两因素作用的时间间隔对[Ca2 ]i的影响无显著性(P>0.05). CCl4在5 ～15 mmol/L范围内显著增加[Ca2 ]i (P<0.05),5 ～20 mg/L TGF-β1 抗体可降低[Ca2 ]i (P<0.05). 结论: TGF-β1抗体可以缓解肝星状细胞内钙超载.     

氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞产生转化生长因子β1的影响

目的 观察氧化苦参碱对传代大鼠肝星状细胞自分泌产生TGFβ1的影响。方法用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌流消化正常大鼠肝脏，Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞并传一代，药物作用于传代HSC，以貂肺上皮细胞(My—l—Ln)生长抑制MTI’法检测培养上清中他隋活性及分泌总量，并抽取HSC的mRNA，RT—PCR半定量分析药物对HSC他F住mRNA的表达。结果氧化苦参碱可减少HSC’rG耶。的分泌总量，并抑制‘IGF任的活化及mRNA的表达。结论氧化苦参碱能抑制肝星状细胞‘rGFA产生并活化可能是与其具有抗肝纤维化的作用有关。     

丹参素对转化生长因子β1刺激肝星状细胞信号传导的影响

目的:探讨丹参素对转化生长因子β1(Transformation growth factor,TGFβ1)刺激大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)信号传导通路的影响.方法:体外分离、培养大鼠肝HSC,检测丹参素(O.062 5～0.2500 mmol/L)对TGFβ1促进HSC活化、HSC表达α-SMA和HSC表达Smad2、Smad3、Smad7 mRNA的影响.结果:丹参素(0.062 5-0.250 0 mmol/L)对TGFβ1引起的HSC增殖具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性(P相似文献   

TGF-β1通过Jagged1/Notch激活小鼠肝星状细胞

目的：研究转化生长因子-β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）激活小鼠肝星状细胞（mouse hepatic stellate cells,mHSC）的具体机制。方法：实验选用mHSC-T25细胞株为实验对象,随机分为激活组（mHSC-T25+10 ng/mL TGF-β1）、抑制组（mHSC-T25+1 μmol/L TGF-β-R1抑制剂）和对照组（mHSC-T25）。qRT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、TGF-β1、转化生长因子β受体1（transforming growth factorβreceptor1,TGF-β-R1）、Jagged1、血管内皮生长因子（vas－cular endothelial growth factor,VEGF）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）等的mRNA表达;细胞免疫荧光法检测α-SMA、Jagged1等蛋白的表达;Western blot检测TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Jagged1、Smad2/3、p-Smad2/3等蛋白的表达。结果：①TGF-β1刺激组中α-SMA、TGF-β1、TGF-β-R1、Jagged1、VEGF、HGF等mRNA表达量均较对照组明显增加而抑制组均明显下降。α-SMA：激活组（315.1±6.2）%,抑制组（34.3±4.5）% （F=3291.956,P=0.000）;TGF-β1：激活组（524.8±14.3）%,抑制组 （29.0±10.7）%（F=469.534,P=0.000）;TGF-β-R1：激活组（235.5±15.2）%,抑制组（17.0±2.8）%（F=392.239,P=0.000）;Jagged1：激活组（548.7±16.6）%,抑制组（17.4±4.7）%（F=364.166,P=0.000）;VEGF：激活组（331.9±19.8）%,抑制组（19.5±3.7）%（F=278.407,P=0.000）;HGF：激活组（376.00±6.51）%,抑制组（16.2±2.7）%（F=640.340,P=0.000）。②激活组高表达α-SMA、Jagged1等蛋白,而对照组、抑制组表达明显较少。α-SMA：激活组0.880±0.016,对照组0.481±0.007,抑制组0.207±0.014 （F=2098.556,P=0.000）;Jagged1：激活组0.796±0.015,对照组0.474±0.021,抑制组0.167±0.005（F=1242.556,P=0.000）。③TGF-β1激活组中TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Jagged1、Smad2/3、p-Smad2/3的蛋白表达量均较对照组明显上调而抑制组均明显下调。TGF-β1：激活组1.180±0.138,对照组0.654±0.061,抑制组0.359±0.012（F=67.706,P=0.000）;α-SMA：激活组1.076±0.063,对照组0.689±0.022,抑制组0.374±0.011（F=239.186,P=0.000）;TGF-β-R1：激活组1.192±0.142,对照组0.710±0.380,抑制组0.378±0.069 （F=57.235,P=0.000）;Jagged1：激活组1.582±0.247,对照组0.817±0.116,抑制组0.364±0.059（F=43.649,P=0.000）;Smad2/3：激活组2.057±0.114,对照组1.203±0.105,抑制组0.664±0.063（F=158.856,P=0.000）;p-Smad2/3：激活组2.088±0.120,对照组1.168±0.107,抑制组0.573±0.120 （F=136.369,P=0.000）。上述实验结果提示,激活组、抑制组与对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：TGF-β1通过Jagged1/Notch激活小鼠肝星状细胞并调控其相关生物学活性。     

转化生长因子β1对胰腺星状细胞中结缔组织生长因子基因的调控作用

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠结缔组织生长因子(CTGF)基因启动子活性的调控作用。方法 将大鼠CTGF基因启动子片段与荧光素酶报告基因组成重组体pcTGF-luc。采用脂质体转染方法将该质粒转至原代分离并培养的2～5代大鼠胰腺星状细胞(PSCs)中,24h后分别在不同时间和不同浓度的体外CTGF-β1刺激下用Dual-luciferase报告系统检测相应荧光素酶的活性。结果 TGF-β1表现为以剂量和时间依赖的方式上调PSCs中CTGF基因启动子活性,TGF-β1在短时间内即可使CTGF基因启动子活性明显增高,并达到高峰,且能有效地保持至36h左右。结论 在PSCs中,TGF-β1主要在转录水平调节CTGF表达,较小浓度和较短时间即可使CTGF启动子活性增强。     

粉防己碱抑制肝星状细胞活化与转化生长因子-β信号转导关系

目的观察不同剂量粉防己碱对静止期大鼠肝星状细胞（HSC）活化的影响,以及该作用与转化生长因子-β（TGF-β）信号转导的关系.方法采用胶原酶原位灌注、密度梯度离心法分离正常大鼠HSC,培养48h后并给予不同浓度粉防己碱（0.25、0.5、1.0、2.0 mg/L）处理.观察HSC形态学变化.采用免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达并进行图像分析;放射免疫法检测上清层粘连蛋白（LN）和Ⅲ型前胶原（PCⅢ）;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测TGF-β1、Smad 7 mRNA表达;Western blot法检测给予粉防己碱1.0mg/L处理的Smad 7表达.结果粉防己碱0.25～2.0 mg/L能抑制体外培养静止期HSC形态向成纤维细胞样转化;降低α-SMA、LN和PCⅢ表达;RT-PCR显示粉防己碱抑制HSC TGF-β1 mRNA表达,抑制率最高达87.85%（P＜0.01）,同时上调Smad 7 mRNA表达,达对照组的2.4～5.8倍（P＜0.01）,两者呈显著负相关（r=-0.755,P＜0.01）.Western blot也显示,与对照组相比,粉防己碱（1.0 mg/L）显著上调Smad 7蛋白表达.结论粉防己碱能直接抑制体外培养的静止期HSC活化,该作用可能是上调Smad 7、影响TGF-β1信号通路并抑制TGF-β1表达的结果.     

转化生长因子-β与肝纤维化的关系

肝纤维化是以包括胶原在内的细胞外基质(ECM)的过度积聚,是多种原因引起的慢性肝病。转化生长因子-β(TGF-β)是具有多种生物活性的细胞因子,参与活化肝星状细胞(HSC),调节ECM的合成和降解等多种功能。本文就TGF-β与肝纤维化之间的关系进行了综述,为预防肝纤维化提供一些新的治疗策略。     

转化生长因子β1在肝纤维化中的作用

转化生长因子β1(TGF-β1)是由2条相同的含112个氨基酸的亚单位通过C硫键联结形成的二聚体的多肽,是一种对细胞的生长、分化、细胞外基质的聚集和免疫反应有着广泛潜在影响的多功能肽类生长因子。TGF-β1是目前已知最重要的致肝纤维化的细胞因子之一。本文就TGF-β在肝纤维化中的作用进行综述。     

过氧化物酶增殖物激活受体γ抑制大鼠肝星状细胞中转化生长因子-β1诱导的结缔组织生长因子表达

目的 探讨过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)对大鼠肝星状细胞(HSC)中转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的结缔组织生长因子(CTGF)表达的抑制作用.方法 常规培养大鼠HSC,预先给予或不给予PPARγ特异性拮抗剂GW9662处理,再经系列浓度的PPARγ天然配体(15-d-PGJ2)或合成配体(GW7845)及TGF-β1序贯作用后,通过半定量RT-PCR及Western-blotting分析CTGF表达状况,透射电镜观察HSC形态学变化.结果 15-d-PGJ2和GW7845可显著抑制HSC中TGF-β1诱导的CTGF表达(同时在转录和转录后水平),且PPARγ配体对CTGF表达的抑制作用可被GW9662部分或完全逆转,说明此种抑制效应确由PPARγ所介导;电镜观察亦显示HSC由活化态向静息态的形态学转变.结论 PPARγ活化可显著抑制HSC中TGF-β1诱导的CTGF表达,提示PPARγ可作为逆转肝纤维化治疗的新的有效靶点.

Abstract：

Objective To investigate the effect of peroxisome proliferator-activated receptor gamma(PPARγ)activation on transforming growth factor betal(TGF-β1)-induced connective tissue growth factor(CTGF)expression in rat hepatic stellate cells(HSCs).Methods Cultured HSCs with or without PPARγ-specific antagonist GW9662 treatment prior to the addition of an increasing amount of PPARγ natural ligand(15-d-PGJ2)or synthetic ligand(GW7845)were stimulated with TGF-β1.The mRNA and protein levels of CTGF expression were detected by semi-quantitative RT-PCR and Western blotting,respectively.The morphological changes of the HSC were obgerved by electron microscope.Results 15-d-PGJ2 and GW7845 significantly inhibited TGF-β1-induced CTGF expression at both mRNA and protein levels in HSCs, and the inhibitory effect was dramatically,if not completely,abolished by pretreatment with GW9662,suggesting that the inhibition was mediated by PPARγ. Morphological observation revealed that PPARγactivation caused obvious changes of HSCs from activated to quiescent phenotypes.Conclusion PPARγ ligand shows potent inhibitory effect on TGF-β1-induced CTGF expression in rat HSCs,suggesting its potential as a candidate agent for treatment and prevention of hepatic fibrosis.     

姜黄素对肝星状细胞转化生长因子β1及受体和I、III 型胶原mRNA表达的影响

目的 探讨姜黄素对体外培养大鼠肝星状细胞（HSC）增殖、转化生长因子β1（TGF-β1）及其受体、下游信号通路及效应的影响。方法 培养HSC细胞,给予不同浓度姜黄素处理,采用MTT比色法检测HSC细胞增殖;Hoechst 33342染色检测姜黄素对HSC凋亡的影响;采用免疫细胞化学法检测Smad3、Smad7蛋白表达;用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测TGF-β1及其I、II受体（TβRI、TβRII）和I、III型胶原（Col-I、Col-III）mRNA的表达。结果 姜黄素能抑制HSC细胞增殖,诱导HSC细胞凋亡,免疫组化结果显示姜黄素能抑制HSC表达Smad3,并提高Smad7表达,RT-PCR结果显示姜黄素使HSC细胞TGF-β1及其I、II受体、Col-I、Col-III mRNA表达降低。结论 姜黄素能抑制HSC增殖和活化,抑制TGF-β1及其受体和信号通路,是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

人胰岛素样生长因子-1的体外抗肝纤维化活性

探讨人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的体外抗肝纤维化作用。检测IGF-1对人正常肝细胞L-02增殖及生长周期的影响;建立CCl₄诱导的肝细胞损伤模型,探究IGF-1抗肝细胞损伤活性;以TGF-β1诱导的肝星状细胞HSC-T6为体外肝纤维化研究模型,检测IGF-1对HSC-T6细胞中纤维化相关蛋白表达水平及对胞内TGF-β1/Smad信号通路的影响。结果显示,IGF-1可解除TGF-β1对L-02生长的抑制作用,提高CCl₄损伤L-02的细胞存活率,降低HSC-T6细胞纤维化相关蛋白表达水平,抑制TGF-β1/Smad信号通路中Smad3的磷酸化。结果表明,IGF-1能够促进肝细胞增殖,保护肝细胞免受损伤,干预TGF-β1/Smad信号通路,抑制胞外基质ECM合成,从而发挥抗肝纤维化效果。     

转化生长因子β对肝星状细胞基质分解素1及其抑制因子基因表达的调节

近来的研究表明 ,肝星状细胞 (ＨＳＣ)是肝脏中基质金属蛋白酶 (ＭＭＰ)及其抑制因子 (ＴＩＭＰ)的主要细胞来源。转化生长因子β(ＴＧＦβ)对其他组织细胞产生ＭＭＰ、ＴＩＭＰ有明显的调节作用 ,它是否调控肝星状细胞ＭＭＰ、ＴＩＭＰ的表达 ,对此目前尚鲜有报道。我们采用逆转录定量聚合酶链式反应(ＰＣＲ )方法对ＴＧＦβ调节肝星状细胞基质分解素 1(ｓｔｒｏｍｅｌｙｓｉｎ 1,ＭＭＰ3)、ＴＩＭＰ1基因表达的情况进行了研究 ,现报道如下。一、材料与方法1 材料 :(1)试剂 :ＴＧＦβ、ＤＭＥＭ培养基 ,购自美国Ｓｉｇｍａ公司 ;总ＲＮＡ提…     

槲皮素对活化大鼠肝星状细胞TGF-β1信号的影响

目的了解槲皮素对肝脏星状细胞(HSCs)通过转化生长因子(TGF)β1诱导的结缔组织生长因子(CTGF)及纤维连接素(FN)表达的影响.方法通过胶原酶与链霉蛋白酶原位灌注、Nycondenz一步法梯度离心分离雄性Wistar大鼠HSCs.培养活化的HSCs无血清饥饿后与10-9～10-5mol/L浓度的槲皮素孵育24,48或72 h.以流式细胞术测定TGFβ1的表达与分泌.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CTGF基因表达,免疫组化检测FN表达.结果流式细胞术检测免疫荧光强度显示10-8～10-5 mol/L 浓度槲皮素可抑制HSCs TGFβ1表达;10-7 mol/L 浓度槲皮素孵育48 h可显著抑制HSCs TGFβ1表达(特异性平均荧光强度分别为13.33±2.44和18.08±2.54,t=16.52, P<0.01).TGFβ1可明显促进活化HSCs CTGF mRNA表达,但10-7 mol/L 浓度槲皮素在72 h内几乎可完全拮抗此效应.与对照相比,10-7 mol/L 浓度槲皮素孵育48 h可显著抑制HSCs FN表达.结论槲皮素可抑制TGFβ1信号通路,包括抑制TGFβ1、FN表达及CTGF的基因表达,具有潜在的抗肝纤维化治疗作用.     

丹参为主的中药舒肝颗粒对活化大鼠肝星状细胞表达转化生长因子β1的影响

目的:观察舒肝颗粒对活化大鼠肝星状细胞表达转化生长因子TGF-β1的影响,以探讨舒肝颗粒对大鼠肝星状细胞活化的影响及相关机制,为舒肝颗粒临床应用提供进一步理论依据。方法:用空白对照组,0.01、0.02、0.04 mg/mL的舒肝颗粒分组处理活化的HSC 24 h后,用放射免疫法测定各组HSCTNF-α表达情况,荧光定量PCR法测定各组HSC TGF-β1表达情况。结果:用荧光定量PCR法测各组TGF-β1的表达情况:空白对照组、舒肝颗粒0.01 mg/mL组、舒肝颗粒0.02 mg/mL组及舒肝颗粒0.04mg/mL组TGF-β1表达水平通过计算2-△△Ct值分别为:(1.00±0.09)、(0.71±0.08)、(0.55±0.07)、(0.44±0.03),且组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:舒肝颗粒可通过抑制HSC TGF-β1的表达,发挥其抗纤维化作用。     

转化生长因子-β与肝纤维化

<正>肝纤维化是一种常见的慢性进行性肝病。肝星状细胞(Hepaticstellatecell,HSC)的激活、增殖以及细胞外基质(ECM)的沉积是肝纤维化的2个重要环节。转化生长因子     

丹参对大鼠肝星状细胞转化生长因子β1与Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的 :探讨丹参抗肝纤维化的可能机制。方法 :链蛋白酶、胶原酶离体灌注大鼠肝脏 ,Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞 (HSC)体外培养。不同浓度的丹参处理 ,用RT -PCR法半定量检测HSC的转化生长因子 β1(TGF - β1)mRNA与Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果 :丹参对HSC的TGF - β1与Ⅰ型胶原mRNA的表达有抑制作用。结论 :丹参抗肝纤维化作用可能与TGF - β1和Ⅰ型胶原mRNA的表达下调有关。     

激活素A对肝星状细胞胶原合成的影响

目的：探讨激活素A(ACTA)对肝星状细胞(HSC)细胞外基质(ECM)合成的影响。方法：采用原位酶灌注法和密度梯度离心法分离HSC。初次传代后，HSC随机分为八组，分别加入不同浓度的ACT A和TGF-β1。加药后24h，采用放射免疫法检测培养液Ⅲ型前胶原和Ⅳ型胶原含量。结果：ACTA能刺激体外培养HSC分泌ECM，在一定浓度范围内(1～100μg/L)呈剂量依赖关系；100μg/L ACT A刺激HSC分泌ECM的能力与10μg/L TGF-β1。相当，而且ACTA能协同TGF-β1发挥该生物学效应。结论：ACTA参与肝纤维化形成。     

骨形态发生蛋白-7对人肝星状细胞转化生长因子β信号转导的影响

目的 通过体外细胞实验,观察骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)对转化生长因子β1(transforming growth factorβ1 ,TGFβ1)处理的人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖,活化及TGFβ信号转导的影响,探索BMP-7抗肝纤维化的机制.方法 以不同浓度(80、40、20 ng/ml)BMP-7及TGFβ1(5 ng/ml)处理人肝星状细胞LX-2,CCK8法检测LX-2增殖,免疫化学染色法观察α-平滑肌动蛋白(α-SMA)与Ⅰ型胶原的表达,RT-PCR检测TGFβⅠ、Ⅱ型受体mRNA,Smad3、Smad7 mRNA的表达.结果 经TGFβ1刺激后,LX-2增殖能力无明显改变.BMP-7(80、40、20 ng/ml)处理后,LX-2细胞增殖均被抑制,抑制率分别为28.9%、19.6%、10.5%(P<0.01).TGFβ1处理组与细胞对照组比较,LX-2表达α-SMA 和Ⅰ型胶原增加(P<0.01),加入BMP-7(20、40、80 ng/ml)处理48 h后可抑制细胞活化和胶原表达,抑制作用随处理浓度增强而增强(P<0.01, P<0.05).5 ng/ml TGFβ1处理48 h后,TβRⅠ、TβRⅡ、Smad3 mRNA表达增加(P<0.01),Smad7 mRNA表达减少(P<0.01).BMP-7可减少Smad3 mRNA表达(P<0.01),增加Smad7 mRNA表达(P<0.01, P<0.05),但对TβR mRNA的表达影响不显著(P>0.05).结论 BMP-7可抑制肝星状细胞的增殖和活化,减少Ⅰ型胶原的表达,其机制可能为抑制TGFβ/Smad通路中Smad3 mRNA表达,增加Smad7 mRNA表达,从而拮抗TGFβ1的促纤维化作用.