三七总皂苷促血管内皮细胞增殖的实验研究

目的 探讨三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)对人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响.方法 用不同浓度三七总皂苷对ECV304细胞进行干预培养,采用四唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;荧光定量聚合酶链反应法(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测VEGF、KDR mRNA的表达;Western blot法检测增殖相关蛋白ERK1/2和pERK1/2蛋白的表达.结果 三七总皂苷在一定浓度范围(100、200、400、800mg/L)能够促进ECV304细胞增殖(P＜0.05),呈明显的剂量依赖性,48h后作用最明显,细胞增殖率分别达112.44％±5.64％、117.20％±11.05％、134.34％±0.40％、141.45％±5.49％;与对照组比较,PNS组ECV304细胞VEGF、KDR mRNA表达量,增殖相关蛋白pERK1/2的表达均明显提高(P＜0.05).结论 三七总皂苷能够促进ECV304细胞增殖,其机制可能与上调VEGF、KDR和pERK1/2有关.     

蚤休皂苷对氧化损伤的脐静脉内皮细胞ICAM-1、VCAM-1表达的影响

目的 研究中药蚤休皂苷对H2O2诱导脐静脉内皮细胞(HUVEC)ECV304损伤的保护作用及其机制.方法 体外培养ECV304,建立氧化损伤的细胞模型,然后分为正常对照组、氧化损伤组以及高、中、低浓度蚤休皂苷预处理组;采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测蚤休皂苷对H2O2诱导的内皮细胞氧化损伤的影响;RT-PCR检测细胞间黏附分子(ICAM-1)、血管细胞黏附分子(VCAM-1)mRNA表达的水平;流式细胞术定量检测各实验组黏附分子ICAM-1、VCAM-1的表达.结果 氧化损伤后细胞吸光度(OD)值低于正常对照组(P<0.01);药物预处理后OD值增加,高浓度蚤休皂苷组的OD值与正常组相比差异无显著性(P>0.05);药物预处理氧化损伤后,ICAM-1、VCAM-1 mKNA的表达水平与损伤组相比明显减弱(P<0.01);损伤组中与内参照的灰度值之比最大,与正常组相比差异有显著性(P<0.01);流式细胞仪定量检测ICAM-1、VCAM-I的结果显示,损伤组中表达ICAM-1、VCAM一1的阳性细胞数均最多,与正常组相比差异有显著性(P<0.01);药物预处理氧化损伤后,阳性细胞数明显减少,且此效应呈剂量依赖性(P<0.01).结论 蚤休皂苷可以保护H2O2造成的HUVEC的氧化损伤,是通过抑制内皮细胞黏附分子的表达从而抑制炎症性损伤,达到保护内皮细胞、抗动脉粥样硬化的目的 .     

VS-1基因转染对血管内皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的构建Ad-VS-1基因转染HUVEC的体外缺氧/复氧模型,探讨VS-1转基因治疗对血管内皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法①建立HUVEC缺氧/复氧（H/R）损伤模型,分为4组：空白组,H/R组,空载腺病毒转染＋H/R组,Ad-VS-1转染＋H/R组;②测定内皮细胞活力（MTT）,超氧化物歧化酶活力（SOD）、丙二醛（MDA）、eNOS、NO表达、炎症因子ICAM-1、VCAM-1、TNF-α的表达情况;③在Ad-VS-1转染＋H/R组基础上增设Hb、KT5823、SB203580和W ortm an in 4个信号抑制组,流式细胞仪测定细胞凋亡率进行统计学分析。结果①成功构建Ad-VS-1转染HUVEC表达后H/R模型;②与空白组比较,H/R组和空腺病毒感染＋H/R组的MTT、SOD含量、eNOS、NO表达显著降低,而MDA、ICAM-1、VCAM-1、TNF-α含量显著增加（P〈0.05）;与H/R组和空载腺病毒感染＋H/R组比较,VS-1转染＋H/R组MTT、SOD、eNOS、NO表达含量明显回升,而MDA、ICAM-1,TNF-α生成量明显回落（P〈0.05）;③与H/R组和空载腺病毒感染＋H/R组比较,VS-1转染组细胞凋亡率明显降低,而4组信号抑制剂组的细胞凋亡率较VS-1转染组均明显回升（P〈0.05）。结论Ad-VS-1成功转染HUVEC,并通过PI3K/Akt-eNOS-NO-cGMP-PKG和P38MPAK等信号途径,抑制氧化应激和炎症反应,产生显著的抗血管内皮细胞缺氧/复氧损伤作用,为今后VS-1抗心肌缺血/再灌注损伤研究奠定基础。     

三七总皂苷对拟缺血损伤脑微血管内皮细胞转化生长因子-β、血管内皮生长因子表达的影响

目的观察三七总皂苷对拟缺血损伤脑微血管内皮细胞的凋亡和转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响,以期揭示三七总皂苷发挥脑保护作用的分子机制。方法原代培养大鼠脑微血管内皮细胞,采用氧糖剥夺法制备拟缺血损伤模型,分为正常组、模型组、三七总皂苷组,流式细胞术检测细胞凋亡情况、酶联免疫吸附法检测细胞TGF-β1,VEGF-B水平、Western blotting法检测细胞TGF-β蛋白的表达水平。结果模型组细胞凋亡率与正常组相比显著性升高（P<0.01）;与模型组相比,三七总皂苷组细胞凋亡率明显下降（P<0.01）;与正常组相比,模型组细胞上清液中TGF-β1含量明显增多（P<0.05）;与正常组相比,模型组细胞上清液中VEGF-B含量显著性增多（P<0.01）;与模型组相比,三七总皂苷组中细胞上清液中VEGF-B含量明显增多（P>0.05）;正常组内皮细胞TGF-β表达量较少,造模后,TGF-β表达显著增加（P<0.05）,三七总皂苷能够下调TGF-β蛋白的表达。结论三七总皂苷可能通过抑制内皮细胞的凋亡,保持内皮细胞的完整性,上调VEGF表达,促进缺氧条件下血管的新生,这可能是三七总皂苷脑保护的机制之一。     

参三七皂苷Rb1对缺氧复氧损伤心肌细胞[Ca2+]i含量和钙稳态的影响

目的:探讨参三七皂苷Rb1预处理对肥厚心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤游离钙([Ca2+]i)的影响及其与心肌细胞保护作用与关系。方法:采用体外培养乳鼠心肌细胞,血管紧张素I(IAngII)刺激形成肥厚模型,实验分为7组:①正常对照组(C);②肥厚细胞模型对照组;③肥厚细胞H/R损伤组(H+H/R);④-⑦:Rb1预处理(0.01～10μmol/L)+H/R组;用激光共聚焦显微镜测定[Ca2+]i以及对电压依赖和受体操纵性激动剂KCl,NE诱发细胞内钙离子变化的影响。结果:经缺氧2h复氧1h后,肥厚细胞H/R组[Ca2+]i荧光强度较对照组显著增高,Rb1预处理组细胞内[Ca2+]i荧光强度较肥厚细胞H/R损伤组显著降低(P<0.01)。Rb1预处理使KCl、NE诱发的细胞内钙荧光强度仅增加61.3%和78.9%,升幅显著下降(P<0.01)。结论:参三七皂苷Rb1预处理具有显著减轻H/R肥厚心肌细胞钙超载作用,是其细胞保护作用的重要机制。     

氧自由基在血管紧张素Ⅱ诱导ECV304细胞增殖中的作用

目的 探讨氧自由基在血管紧张素Ⅱ诱导ECV304细胞增殖中的作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞株(ECV304),实验分为AngⅡ处理组、NAC干预组和正常对照组.采用改良MTT法、Fenton反应和硝酸酶还原法分别观察AngⅡ处理组、NAC干预组和正常对照组的ECV304细胞的增殖率和细胞产生氧自由基(·OH)的量.结果 一定浓度的AngⅡ(0.03125～1μmol/L)作用12 h时ECV304细胞增殖率增加,明显高于正常对照组(P＜0.05);AngⅡ可诱导ECV304细胞产生氧自由基(·OH),氧自由基(·OH)的含量与ECV304细胞增殖率呈显著负相关;10 mmol/L NAC可抑制1μmol/L AngⅡ对ECV304细胞的增殖作用,与正常对照组相比无显著性差异(P＞0.05).结论 AngⅡ可诱导ECV304细胞产生氧自由基(·OH),氧自由基(·OH)含量与AngⅡ呈时间和剂量依赖性;NAC可抑制AngⅡ对ECV304细胞的增殖作用,这可能与减少氧自由基(·OH)的含量有关;氧自由基(·OH)可能是AngⅡ诱导ECV304细胞增殖的主要信号转导分子之一.     

阿魏酸川芎醇酯对氧化损伤内皮细胞ICAM-1表达的影响

观察川芎嗪衍生物阿魏酸川芎醇酯(TMPF)对H2O2引起的脐静脉内皮细胞(ECV304)氧化性损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法以H2O2损伤ECV304细胞建立氧化损伤模型,以川芎嗪(TMP)作为阳性对照药物,观察TMPF对氧化损伤的ECV304细胞的保护作用[按试剂盒说明测量微量丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力;采用Real-Time PCR测定ICAM-1mRNA含量;采用Elisa检测ICAM-1蛋白表达]。结果与正常对照组比较,H2O2损伤组细胞内的MDA含量明显升高(P<0.01),TMP与TMPF各浓度保护组MDA含量明显低于H2O2损伤组(P<0.05或P<0.01),且TMPF保护组MDA含量均低于同剂量TMP保护组(P<0.05);与正常对照组比较,H2O2损伤组细胞内的SOD水平明显降低(P<0.05或P<0.01),在12.5μmol.L-1 TMP保护组和TMPF保护组与H2O2损伤组相比差异无统计学意义(P>0.05),在TMP和TMPF的其他浓度上与H2O2损伤组相比差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。H2O2可上调ICAM-1mRNA的含量,正常对照组ICAM-1mRNA的含量为H2O2损伤组的0.245倍,25.0μmol.L-1 TMP保护组ICAM-1mRNA的含量为H2O2损伤组的0.454倍,25.0μmol.L-1 TMPF保护组ICAM-1mRNA的含量为H2O2损伤组的0.376倍。H2O2损伤组细胞ICAM-1蛋白的表达量显著高于正常对照组(P<0.01),25.0μmol.L-1 TMP保护组ICAM-1蛋白的表达量低于H2O2损伤组(P<0.05),而25.0μmol.L-1 TMPF保护组ICAM-1蛋白的表达量显著低于H2O2损伤组(P<0.01)。结论 TMPF对H2O2引起内皮细胞氧化性损伤有明显的保护作用,能减少内皮细胞脂质过氧化物MDA的生成,提高SOD活性,TMPF能降低损伤细胞ICAM-1mRNA的含量及其蛋白表达。TMPF对氧化损伤内皮细胞中ICAM-1表达上调有较强的抑制作用,这可能是TMPF对内皮细胞氧化损伤保护作用的重要机制。     

三七总皂苷对大鼠肝移植中胆管细胞缺血再灌注损伤保护的实验研究

目的探讨胆管上皮细胞缺血再灌注损伤的机制及三七总皂苷（panax notoginseng saponins,PNS）在大鼠肝移植中胆管细胞I/R损伤中的作用。方法采用吻合肝动脉的大鼠原位肝移植模型。分三组观察在不同条件下胆管细胞的病理形态变化及PNS对此缺血再灌注损伤的影响。结果缺血再灌注的胆管细胞损伤更重,氧自由基生成更多,NF-κB表达更多,PNS预处理保护组胆管细胞损伤明显减轻。结论缺血再灌注损伤能加重胆管细胞的损伤,PNS预处理可减轻该损伤,其机制可能为抑制氧自由基生成,减少NF-κB的表达。     

三七总皂苷对大鼠下肢缺血-再灌注的保护作用

目的：观察三七总皂苷（PNS）对大鼠下肢缺血-再灌注后血液中的SOD、MDA等指标的影响。方法：腹正中切口开腹夹闭腹主动脉建立大鼠双下肢及盆腔缺血-再灌注模型，分为假手术组、缺血1h组、缺血2h组、缺血1h＋PNS治疗组和缺血2h＋PNS治疗组。721型可见分光光度计测血清中的SOD、MDA值以及缺血前后、三七总皂苷处理前后的变化，光镜下观察腓肠肌的变化。结果：三七总皂苷可降低缺血大鼠血清中MDA的含量．升高血清中SOD的含量，减少体内脂质过氧化物的产生，减轻缺血-再灌注后对大鼠骨骼肌的损伤。结论：三七总皂苷具有拮抗缺血-再灌注骨骼肌损伤的作用，可能与其一方面减少氧自由基的产生，另一方面通过激活抗氧化酶SOD活性，抑制氧自由基，降低脂质过氧化物，从而发挥抗脂质过氧化损伤的作用有关。     

三七皂苷R1对心房颤动大鼠心肌炎症相关因子和金属基质蛋白酶表达的影响

【目的】研究三七皂苷R1对心房颤动大鼠细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、金属基质蛋白酶-2（MMP-2）和金属机制蛋白酶-2抑制因子（TIMP-2）的影响，探讨三七皂苷R1防治心房颤动的机制。【方法】将102只大鼠根据随机数字法分为对照组、心房颤动组和三七皂苷R1组，每组34只。采用尾静脉注射乙酰胆碱-氯化钙建立心房颤动大鼠模型。三七皂苷R1组大鼠腹腔注射2mL三七皂苷R1水溶液。心电图测定心房颤动持续时间，Masson染色观察心肌纤维化程度，免疫组化法测定心房组织MMP-2和TIMP-2蛋白表达，酶联免疫吸附实验（ELISA）测定血清ICAM-1、TNF-α、MMP-2和TIMP-2水平，免疫印迹法（Western blotting）测定心房组织ICAM-1、TNF-α和Ⅰ型胶原蛋白水平。【结果】三七皂苷R1治疗前，两组心房颤动持续时间比较差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，三七皂苷R1组心房颤动持续时间（6.37±2.02）s，低于治疗前和心房颤动组（P<0.05）。Masson染色显示：对照组大鼠心房肌间质胶原纤维量正常；心房颤动组大鼠心房肌间质见大量胶原纤维；三七皂苷R1组大鼠心房肌间质见片、点状胶原纤维。与对照组比较，心房颤动组和三七皂苷R1组大鼠血清ICAM-1、TNF-α、MMP-2水平升高［（137.52±16.59）10-6g/L、（14.25±1.08）10-6g/L、（435.26±17.63）10-9g/L；（109.25±14.62）10-6g/L、（12.31±1.27）10-6g/L、（288.47±15.52）10-9g/L］（P<0.05），TIMP-2水平降低［（3541.27±331.24）10-9g/L；（3975.46±313.24）10-9g/L］（P<0.05），心房组织ICAM-1、TNF-α和Ⅰ型胶原蛋白水平（0.23±0.07、0.51±0.09、0.63±0.14；0.15±0.06、0.22±0.07、0.27±0.12）升高（P<0.05），心房组织MMP-2蛋白光密度值（0.35±0.07；0.18±0.06）升高（P<0.05），TIMP-2蛋白光密度值（0.11±0.04；0.18±0.03）降低（P<0.05）；与心房颤动组比较，三七皂苷R1组大鼠血清ICAM-1、TNF-α、MMP-2水平降低（P<0.05），TIMP-2水平升高（P<0.05），心房组织ICAM-1、TNF-α和Ⅰ型胶原蛋白水平降低（P<0.05），心房组织MMP-2蛋白光密度值降低（P<0.05），TIMP-2蛋白光密度值升高（P<0.05）。【结论】三七皂苷R1通过降低心房颤动大鼠血清和心房组织ICAM-1、TNF-α、MMP-2水平，升高TIMP-2水平发挥对心房颤动的防治作用。     

黄芪甲苷配伍三七总皂苷对OGD/R大鼠脑微血管内皮细胞屏障功能的影响

目的 观察黄芪甲苷（astragalosideⅣ, ASTⅣ）配伍三七总皂苷（Panax notoginseng saponins, PNS）对氧糖剥夺后再复糖复氧（oxygen-glucose deprivation/reperfusion, OGD/R）大鼠脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells, r BMECs）屏障功能的影响。方法 原代培养并鉴定r BEMCs,取第3代rBMECs,采用ASTⅣ与PNS高（100μmol/L+60μmol/L）、中（50μmol/L+30μmol/L）、低（25μmol/L+15μmol/L）剂量配伍预处理24 h,以OGD/R建立缺血再灌注损伤模型,同时设立对照组和模型组。CCK-8检测细胞存活情况,利用跨内皮细胞电阻（transendothelial electrical resistance, TEER）检测细胞屏障功能的改变,免疫荧光检测血脑屏障连接蛋白Occludin和ZO-1蛋白含量,Western blot检测黏附分子ICAM-1、VCAM-1的蛋白表达及NF-κB-p65的活...     

重组腺病毒介导hCGPx转染致血管内皮细胞产生抗氧化损伤作用的研究

目的 研究重组腺病毒介导的人胞浆型谷胱甘肽过氧化物酶（hCGPx）转染对血管内皮细胞ECV304氧化损伤保护作用。方法 将含hCGPx cDNA的质粒pGEM-T-hCGPx和重组腺病毒载体pACCMV-pLpA穿梭质粒进行基因重组,构建成pACCMV-hCGPx穿梭质粒后,与包装质粒pJM17共转染293细胞,构建成重组腺病毒AdCMV-hCGPx。用AdCMV—hCGPx转染体外培养的ECV304细胞并分为转染24、48和72h组,以转染空载体的细胞为对照组,检测转染细胞的基因表达水平。各组ECV304细胞经H2O2氧化损伤处理后,分别对细胞的活力和凋亡进行检测分析。结果 各转染组细胞转染基因表达率均显著高于对照组（P〈0．01）。经H2O2氧化损伤处理后,AdCMV-hCGPx转染组细胞活力较对照组明显增强,凋亡受到抑制。结论 重组腺病毒介导的hCGPx转染可保护ECV304细胞抵抗氧化损伤,具有明确的细胞保护作用,其具体保护机制可能与抗氧化和抑制细胞凋亡有关。     

三七总皂苷对人脐静脉内皮细胞损伤后活性的影响

目的:检测三七总皂苷对人脐静脉内皮细胞损伤后的影响,探索三七总皂苷对内皮细胞的保护作用。方法:把体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代培养,共分为6组,即正常组,模型组,三七总皂苷4个浓度组,用10μg·L~(-1)的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)造成细胞损伤模型,三七总皂苷组分别加入不同浓度的三七总皂苷2.5 mg·L~(-1)、5 mg·L~(-1)、10 mg·L~(-1)、20 mg·L~(-1),用CCK-8方法检测各组细胞活性。结果:CCK-8检测结果显示,人脐静脉内皮细胞在TNF-α诱导损伤后,用4个浓度的三七总皂苷干预,随着时间的延长,细胞存活率逐渐降低,组间差异具有统计学意义,其中6 h的细胞存活率最高,24 h的细胞活性最差,差异无统计学意义;和模型组相比,三七总皂苷4个浓度组细胞活性明显较高(P0.01或P0.05),其中5 mg·L~(-1)三七总皂苷组细胞活性最高,与模型组相比,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:三七总皂苷能提高人脐静脉内皮细胞损伤后的活性。     

低浓度葡萄糖诱导ECV304细胞损伤机制的初探

目的 探讨低浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞损伤的可能机制.方法 以人脐静脉内皮细胞株ECV304为细胞模型,用低浓度葡萄糖刺激ECV304细胞,流式细胞仪测定12h内不同时间点细胞ROS产量,之后用低浓度葡萄糖及NADPH氧化酶抑制剂apocynin联合刺激ECV304细胞12 h,用流式细胞仪测定ROS产量,MTT法测定细胞活力,光泽精化学发光法测定NADPH氧化酶活性.结果 低浓度葡萄糖能够显著增加ECV304细胞ROS产量,ROS产量具有时间依赖性和葡萄糖浓度依赖性,低糖能增加NADPH氧化酶的活性.用NADPH氧化酶抑制剂apocynin预处理细胞,能使2.8mmol/L组活性氧产量降低44%,细胞活力提高32%,0mmol/L组活性氧产量降低60%.结论 低糖可以显著增高ECV304细胞氧化应激水平而参与内皮细胞损伤,其部分机制可能与NADPH氧化酶激活有关.     

三七总皂甙对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨三七总皂苷（panaxnonginsengsaponins,PNS）对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用,并研究其对氧化应激及炎症反应相关因子的影响。方法 30只健康雄性SD大鼠,体质量250～300g,随机分为假手术组（Sham组）、肝缺血再灌注组（HIR组）和三七总皂苷治疗组（PNS组）,各10只。HIR组和PNS组构建肝缺血再灌注模型,PNS组术前1h予50mg/kg PNS生理盐水溶液（5mg/mL）腹腔注射,Sham组及HIR组于术前1h给予相同剂量的生理盐水腹腔注射。预处理3h后处死大鼠,检测并比较三组肝组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、髓过氧化物酶（MPO）、细胞间黏附因子-1（ICAM-1）及血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）水平。结果 PNS组肝缺血再灌注损伤后肝组织中MDA水平、MPO活性、ICAM-1含量及血清TNF-α、IL-1β低于HIR组（P〈0.05）,SOD活性则高于HIR组（P〈0.05）。结论三七总皂苷可通过减少氧化应激水平和炎症因子表达,减轻肝缺血再灌注损伤,达到肝脏保护作用。     

急性期脑梗死病人外周血中性粒细胞与低氧-复氧内皮细胞的黏附性

①目的探讨急性期脑梗死病人外周血中性粒细胞（PMN）与低氧-复氧（H／R）血管内皮细胞黏附性，以及抗ICAM-1单抗对其的影响。②方法培养的人类脐静脉内皮细胞株ECV-304经（或不经）H／R和抗ICAM-1单抗处理后，分别加入脑梗死病人外周血PMN并检测黏附率。⑧结果ECV-304经H／R处理后与脑梗死病人外周血PMN黏附率明显增高；抗ICAM-1单抗可显著抑制脑梗死病人外周血PMN与H／RECV-304黏附。④结论脑梗死病人外周血PMN活化，H／R使血管内皮细胞与PMN黏附性进一步增强；ICAM-1参与介导脑梗死后PMN与血管内皮细胞黏附，抗ICAM一1单抗可起部分阻断作用。     

硫酸多糖916对细胞因子和H2O诱导ECV304细胞产生一氧化氮的影响

目的：研究硫酸多糖916（PS916）对TNFα、IL-1β和H2O2诱导ECV304细胞产生一氧化氮（NO）的影响。方法：用Griess试剂测定ECV304细胞产生的NO，用MTT法测定细胞的增殖，用荧光法测定NO合酶的活性。结果：40ng/mlTNFα和40ng/mlIL-1β使ECV304细胞NO产生下降，0.1mmol/L H2O2使NO的产生增加。PS916剂量依赖性增加TNFα、IL-β诱导的ECV304细胞NO的产生，降低H2O2诱导ECV304细胞产生的NO。TNFa和H2O2抑制ECV304细胞的增殖，而IL-1β对ECV304细胞的增殖没有明显影响。PS916剂量依赖性的抑制TNFα和H2O2的作用，增加存活细胞数。在体外，PS916对细胞的NO合酶无明显的影响。结论：PS916在体外实验中对细胞因子和H2O2引起的ECV304细胞损伤有拮抗作用，对细胞表现出明显的保护作用。     

Resistin基因对TNF-α诱导血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:研究抵抗素(resistin)基因对TNF-α诱导血管内皮细胞ECV304表达细胞闻黏附分子1(ICAM-1)的影响.方法:应用分子生物学技术,将resistin基因克隆到载体pEGFP-C1中构建质粒pEG/Resi,脂质体转染ECV304,转染6 h加入20 μg/L TNF-α诱导.用RT-PCR方法分别检测转染18、30、42和54h时resistin和ICAM-1 mRNA表达;同时用免疫印迹法检测resistin蛋白的表达,并用ELISA方法检测各期ECV304上清ICAM-1蛋白表达.结果:经酶切鉴定和测序证实质粒pEG/Resi构建成功并可在ECV304中表达;相同TNF-α诱导条件下转染resistin基因组的ICAM-1表达水平始终高于未转染组,在resistin基因表达高峰(30和42 h)ICAM-1 mRNA和蛋白表达量较未转染组均显著升高(P＜0.05);且ICAM-1 mRNA和蛋白表达水平均随resistin基因表达量的增加而升高.结论:Resistin基因能够增强TNF-α诱导ECV304细胞表达ICAM-1.     

银杏叶提取物对高糖环境下ECV304细胞的保护作用

目的：探讨银杏叶提取物对高糖环境下人脐静脉内皮细胞（ECV304）的保护作用及机制。方法：体外培养的ECV304细胞分为高糖组、银杏叶保护组、甘露醇高渗对照组（甘露醇组）和正常细胞组,在35 mmol•L^-1高糖条件下培养ECV304细胞24 h后,分别收集不同处理组的细胞,检测细胞产生羟自由基（•OH）、超氧阴离子（O^-₂）、丙二醛(MDA)水平,同时测定细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性;采用不同处理组的细胞制作扫描电镜图片,观察细胞及线粒体形态的改变。结果：高糖组细胞产生•OH、O^-₂和MDA水平高于银杏叶保护组（P<0.05）,SOD活性低于银杏叶保护组（P<0.05）。甘露醇组细胞产生•OH、O^-₂、MDA水平显著低于高糖组（P<0.05）。电镜下可见银杏叶保护组线粒体形态完好,线粒体内嵴清晰可见;高糖组线粒体肿胀,线粒体内嵴消失,坏死细胞增多。结论：银杏叶提取物对高糖导致的ECV304细胞损伤具有保护作用。     

仙花活骨丹颗粒含药血清对血管内皮细胞增殖及黏附分子表达的影响

目的以血清药理学方法观察仙花活骨丹颗粒对血管内皮细胞增殖及黏附分子表达的影响,探讨仙花活骨丹颗粒治疗股骨头缺血性坏死的药理学机制。方法建立人脐静脉内皮细胞体外培养模型,将ECV304细胞与仙花活骨丹颗粒不同剂量含药血清一起培养,MTT法观察细胞增殖情况,同时对细胞黏附分子表达进行测定。结景仙花活骨丹颗粒舍药血清处理24h后能不同程度促进血管内皮细胞ECV304的增殖（P〈0．05）,中剂量12h、48h、72h增值最明显（P〈0．01）;但72h较48h增值情况又有所下降。含药血清组CD54（ICAM-1）表达明显较空白对照组增多（P〈0．05）。中剂量组CD54（ICAM-1）表达呈高峰,而大剂量组CD54（ICAM-1）表达又有所降低。中剂量仙花活骨丹颗粒是促进的最佳浓度。结论仙花活骨丹颗粒能够促进内皮细胞的增殖以及细胞粘附分子的表达。