电针对局灶性脑缺血大鼠缺血区脑组织神经细胞凋亡及神经生长因子影响的研究

目的 :观察电针督脉经穴“大椎”、“百会”对大鼠缺血区脑组织神经细胞凋亡及NGLF的影响。方法 :用凝闭一侧大脑中动脉的脑缺血大鼠为动物模型 ,采用TUNEL染色法和免疫组化染色S P法进行观察。结果 :缺血 +电针组中 ,大脑皮层梗塞区内TUNEL染色阳性细胞较缺血组显著减少 (P <0 0 1 ) ,NGFR免疫阳性表达在细胞数量上及强度上也均较缺血组及假手术组明显增强 (P <0 0 1 )。结论 :电针能抑制脑缺血后脑内神经细胞的凋亡 ,可增强局灶性脑缺血大鼠脑组织的NGFR的表达 ,对缺血性脑损伤具有一定的保护作用。为临床针灸治疗缺血性脑血管疾病奠定了理论基础     

电针任督脉对局灶性脑缺血大鼠神经功能和神经细胞凋亡的影响

目的探究电针任督脉对局灶性脑缺血模型大鼠神经功能和神经细胞凋亡的影响。方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型,利用改良的神经功能缺损评分表（mNSS）观察治疗后大鼠神经行为学变化情况,并采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测其大脑皮层神经细胞凋亡情况,以及电针任督脉对其的影响。结果大鼠造模后mNSS显著升高,且大脑皮层TUNEL阳性细胞数明显增多：与同时期模型组比较,电针任督脉组脑缺血再灌注7d、14d和28d其mNSS和TUNEL阳性细胞数明显降低。结论电针任督脉可能通过抑制脑缺血再灌注后皮层神经细胞凋亡和改善神经功能缺损来改善脑缺血损伤。     

愈风颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠模型脑神经细胞凋亡影响的实验研究

目的：研究愈风颗粒对大鼠脑缺血再灌注损伤模型神经细胞凋亡的影响。方法：采用大脑双侧颈总动脉闭塞的不完全性脑缺血再灌注模型，选用愈风颗粒及尼莫地平对模型进行治疗，另设正常组做对照。观察各组大鼠大脑皮层神经细胞的病理学、超微病理学以及TUNEL阳性细胞数变化。结果：模型组大鼠大脑皮层神经细胞凋亡教显著高于正常组；中药组及西药组神经细胞凋亡教显著低于模型组；光镜度电镜结果显示模型组大鼠局部脑组织细胞有明显的凋亡现象，而愈风颗粒组有明显的改善作用。结论：愈风颗粒对急性缺血性神经细胞凋亡有一定的拮抗作用。     

愈风颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠模型脑神经细胞凋亡影响的实验研究

目的:研究愈风颗粒对大鼠脑缺血再灌注损伤模型神经细胞凋亡的影响。方法:采用大脑双侧颈总动脉闭塞的不完全性脑缺血再灌注模型,选用愈风颗粒及尼莫地平对模型进行治疗,另设正常组做对照。观察各组大鼠大脑皮层神经细胞的病理学、超微病理学以及TUNEL阳性细胞数变化。结果:模型组大鼠大脑皮层神经细胞凋亡数显著高于正常组;中药组及西药组神经细胞凋亡数显著低于模型组;光镜及电镜结果显示模型组大鼠局部脑组织细胞有明显的凋亡现象,而愈风颗粒组有明显的改善作用。结论:愈风颗粒对急性缺血性神经细胞凋亡有一定的拮抗作用。     

灯盏花素对缺血再灌注鼠脑损伤的脑保护作用研究

目的：探讨灯盏花素对鼠脑梗塞面积、神经功能缺失征象及鼠脑缺血边缘区神经细胞凋亡的影响。方法：采用TTC染色、临床神经功能评分、流式细胞分析和原位末端标记等方法，分别对缺血、缺血再灌注及灯盏花素治疗组鼠脑梗塞面积、神经功能缺失征象、鼠脑缺血边缘区神经细胞的凋亡进行观察和比较。结果：24只大鼠缺血／再灌后TTC染色可见右侧顶叶皮质出现恒定苍白梗塞灶，灯盏花素治疗组于相同时间点脑梗塞面积较缺血／再灌组明显减小；缺血／再灌组大鼠均有明显的神经功能缺失征象，而药物治疗组12只大鼠中只有3只出现轻度的神经功能缺损。假手术组仅有极少量神经细胞凋亡，缺血90min／再灌12h、24h组缺血边缘区神经细胞凋亡明显增多，灯盏花素治疗组于相同时限内细胞凋亡较缺血／再灌组显著关少（P＜0.01）。结论：蛋白激酶C抑制剂灯盏花素能明显减小鼠脑缺血后脑梗塞面积，减轻脑缺血后神经功能缺损，显著减少缺血边缘区神经细胞凋亡数量，减缓缺血区神经元损害，具有显著的脑保护作用。     

电针对脑缺血再灌注大鼠脑组织细胞线粒体膜电位及凋亡的影响

目的:探讨针刺对脑缺血再灌注大鼠神经元保护作用的机制。方法:雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组(Sham)、脑缺血再灌注组(CI/R)及脑缺血再灌注+电针组(CI/R+EA),每组12只。采用改良线栓法制备局灶性脑缺血(MCAO)再灌注模型。于再灌流开始后,CI/R+EA组电针"水沟"百会"穴,电针参数:频率2~15 Hz,间断疏密波,电流强度1 mA,以局部肌肉轻微震颤为度,时间30 min。以罗丹明123和Annexin V-FITC进行荧光染色,通过流式细胞仪检测细胞内荧光强度,分析脑组织细胞线粒体膜电位及凋亡发生率的变化。结果:CI/R组大鼠大脑皮层细胞线粒体膜电位明显低于假手术组(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01);电针治疗后,线粒体膜电位升高,细胞凋亡率受到抑制,与CI/R组比较差异有显著性意义(P<0.01)。结论:针刺治疗可明显减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,上调神经细胞线粒体膜电位水平可能是针刺抑制大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一。     

生姜对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮层神经细胞凋亡及Bcl-2,Bax,caspase-3表达的影响

目的:研究生姜对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮层神经细胞凋亡和相关基因表达的影响.方法:SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型对照组、尼莫地平组、生姜高、中、低剂量组.采用线栓法造成大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),分别于手术前24h、术前1h和再灌注后12 h灌胃给药,共3次.积分法测定MCAO大鼠神经病学症状,末端脱氧核糖核酸介导生物素化脱氧尿嘧啶缺口末端标记(TUNEL)法测定大脑皮层凋亡神经细胞,免疫组织化学方法研究大脑皮层神经细胞caspase-3,Bcl-2和Bax蛋白表达.结果:与假手术组比较,MCAO大鼠大脑皮层凋亡细胞明显增加,caspase-3和Bax蛋白表达增强,Bcl-2/Bax显著降低;生姜能明显降低MCAO大鼠皮层TUNEL,caspase,Bax和Bcl-2阳性细胞数,Bcl-2/Bax显著升高.结论:生姜可通过抑制神经细胞凋亡途径实现对脑缺血及缺血再灌注损伤的保护作用.     

电针调节RIP1/RIP3/MLKL通路对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元程序性坏死的影响

目的：探讨电针“曲池”“足三里”对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用及对大脑皮层神经元程序性坏死的影响。方法：SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、抑制剂组,每组15只。模型组、电针组及抑制剂组大鼠采用改良线栓法制备左侧大脑中动脉阻塞模型;假手术组大鼠仅暴露颈动脉。给予电针组大鼠右侧“曲池“”足三里”电针治疗,30 min/次,1次/d,给予抑制剂组大鼠腹腔注射坏死抑素-1(0.6 mg/kg),均连续干预7 d。观察各组大鼠神经功能缺损评分;HE染色检测梗死区大脑皮层病理损伤程度;TUNEL染色检测梗死区大脑皮层神经元凋亡情况;ELISA法检测梗死区大脑皮层肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素（IL）-1β、IL-6含量;荧光定量PCR及Western blot法分别检测梗死区大脑皮层受体相互作用蛋白（RIP）1、RIP3、底物混合谱系激酶样蛋白（MLKL）mRNA及蛋白的表达水平。结果：与假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高（P<0.01）;HE染色显示,梗死区大脑皮层表现出明显脑缺血再灌注病理损伤;梗死区大脑皮层神经元凋亡率,梗死区大脑皮层中TNF-α、...     

电针对局灶性脑缺血大鼠半暗带神经细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、c-Fos蛋白表达的影响

目的：研究电针百会、曲鬓、前顶穴对局灶性脑缺血大鼠半暗带内神经细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、c-Fos蛋白表达的影响。方法：W istar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,各组再随机分出6h、24h、48h、72h、7d时间点5个小组。采用线拴阻塞大鼠右侧大脑中动脉方法复制局灶性脑缺血动物模型。电针组术后立即进行电针刺激,假手术组、模型组术后不给电针处理。各组术后分别在相应时间点取脑检测半暗带神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax、c-Fos蛋白表达情况。细胞凋亡使用原位末端标记法（TUNEL法）检测,检测Bcl-2、Bax、c-Fos蛋白表达使用免疫组织化学法。结果：假手术组各时间点偶见凋亡神经细胞出现。与假手术组比较,模型组6h、24h、48h、72h时间点细胞凋亡明显增加。针刺组24h、48h时间点细胞凋亡与模型组比较明显减少。假手术组Bcl-2、Bax、c-Fos蛋白表达呈低水平。模型组6h、24h、48h时间点Bcl-2、Bax蛋白表达以及模型组6h、24h时间点c-Fos蛋白表达与假手术组比较明显增多。与模型组比较,针刺组6h、24h、48h、72h时间点Bcl-2蛋白表达增多,针刺组6h、24h、48h时间点Bax蛋白表达减少,针刺组6h时间点c-Fos蛋白表达减少、24h时间点c-Fos蛋白表达增多。结论：电针对局灶性脑缺血大鼠半暗带神经细胞凋亡有明显抑制作用,该抑制作用与电针调节Bcl-2、Bax、c-Fos蛋白表达有关。     

电针对脑缺血再灌注大鼠缺血区皮质神经细胞凋亡和NF-κB表达的影响

目的通过观察电针对脑缺血再灌注大鼠缺血区皮质神经细胞凋亡和NF-κB蛋白表达的影响,研究电针对缺血性脑损伤的保护机制。方法采用大脑中动脉线栓法制作模型,电针大鼠的水沟、内关,运用TUNEL法观察各组大鼠皮质神经细胞凋亡,免疫组化法观察各组大鼠缺血区皮质NF-κB蛋白表达。结果电针组缺血皮质中神经细胞凋亡和NF-κB蛋白表达与模型组相比均降低。结论电针通过抑制NF-κB蛋白表达减少神经细胞凋亡来对抗缺血再灌注脑组织神经损伤。     

针刺对暂时性脑缺血脑内一氧化氮合酶及神经细胞死亡的影响

采用暂时性脑缺血再灌注模型和组织化学、TUNEL细胞标记等实验技术 ,观察神经细胞死亡和一氧化氮合酶 (NitricOxideSynthase,NOS)水平的变化。实验结果表明 ,暂时性脑缺血再灌注时脑内NOS表达显著增加 ,且引起延迟性细胞死亡 ,包括坏死与凋亡。电针可明显减少神经细胞坏死 ,在存活细胞增多的基础上 ,TUNEL阳性细胞的比例有所增加 ;与此同时 ,电针亦使脑内NOS表达显著减弱。提示电针具有神经保护作用 ,且可能与其下调NOS、减少NO的过量生成有关     

丹龙醒脑片对大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马区肿瘤坏死因子α表达和细胞凋亡的影响

目的探讨丹龙醒脑片对大鼠脑缺血再灌注后海马区神经细胞凋亡和肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达的影响,探讨其作用机制。方法应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,用原位末端标记法和免疫组化法分别检测假手术组、模型组、丹龙醒脑片组和尼莫地平组的凋亡细胞数和TNF—α阳性细胞数。结果与假手术组相比,模型组凋亡细胞数和TNF—α表达明显升高（P〈0．05,P〈0．01）;与模型组相比,丹龙醒脑片组凋亡细胞数和TNF—α表达明显降低（P〈0．05）。结论TNF-α表达下降可能是丹龙醒脑片减少大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的分子机制之一。     

不同时间窗电针对脑缺血再灌注大鼠脑组织中HSP70表达及神经元凋亡的影响

目的观察不同时间介入电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织热休克蛋白（HsP）70表达及神经元凋亡的影响。方法线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,分别于缺血后0．5h、2h、6h、12h介入电针。用免疫组化法检测缺血侧脑组织中HSP70的表达,用原位细胞凋亡法检测凋亡细胞,分别测定梗死侧皮质半暗带区和海马CAl区的平均光密度值、凋亡阳性细胞数。结果与模型组比较,各电针组HSP70表达显著升高,0．5h半暗带区及海马CAl区分别为（89．98±6．55）、（128．73±8．03）,2h分别为（90．96±6．38）、（132．25±8．78）,6h分别为（93．71±6．12）、（132．58±7．04）,12h分别为（96．19±7．30）,（133．57±6．19）。皮质半暗带区凋亡细胞数明显减少,0．5h（1．80±0．84）、2h（3．40±1．14）、6h（5．00±1．00）、12h（5．00±2．45）,但海马CAl凋亡细胞数仅在缺血后0．5h电针组显著减少（1．60±1．89）。结论电针可增强HSP70的表达,减少细胞凋亡。从而在脑缺血后神经元保护方面起到重要作用;电针疗法对于缺血再灌注大鼠发挥肯定的脑保护作用,电针应尽早介入缺血性卒中的治疗。     

EFFECT OF ELECTRO-ACUPUNCTURE ON GLUTAMATE TRANSPORTER mRNA EXPRESSION FOLLOWING FOCAL CEREBRAL ISCHEMIA IN RATS

INTRODUCT1ONGlutamateisconsideredtobethemajorex-citatorytransmitterinthecentralnervoussys-tem-Afterreleasingfrompresynapticterminalsbymeansofca -dependentmanner,glutamateactivatespostsynapticglutamatereceptorsandcausesexcitatorysynaptictransmission.Undern…     

Effect of taurine in combination with electroacupuncture on neuronal damage following transient focal cerebral ischemia in rats

The present study was to investigate whether taurine is beneficial to the neuroprotective effects of electroacupuncture (EA) on rat cerebral ischemia induced by transient Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO). Histological change and DNA damage degree were detected by H&E staining and TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling) method. Taurine and EA combination group could significantly decrease the percentages of infarct area and cell loss induced by ischemic injury in the striatum (p<0.05, vs singly treated with taurine or EA), and also the percentage of TUNEL-positive cells was smaller than both singly treated groups (p<0.05). Moreover, immunoreactivities detection of Bcl-2 (which promotes cell survival), Bax (which promotes cell death) and P53 (product of tumor suppressor gene p53) showed that the combination group apparently attenuated P53 immunoreactivities expression whereas augmented the immunoreactivities expression ratio of Bcl-2 to Bax in cortex. These results suggested that combining use of taurine and EA could exert better neuroprotective effects, which might be related to the regulation of apoptosis pathway.     

电针及天麻对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨电针及天麻对缺血性脑损伤的神经保护机制.方法:采用大鼠大脑中动脉闭塞模型造成脑局灶性缺血2 h,再灌注24 h.以HE染色,TUNEL标记和免疫组化的方法观察使用电针及天麻后神经细胞凋亡及相关蛋白表达的变化.结果:针药结合组显示神经元形态病理改变明显减轻,残存细胞率增加更明显,显著降低残存细胞中TUNEL阳性细胞的百分率.Bcl-2/Bax的表达比例增加更显著.结论:电针、天麻及二者结合有抗脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的作用,二者合用比单一作用强.     

电针对高脂血症合并脑缺血损伤大鼠海马区钙结合蛋白D28K蛋白表达的影响

目的:观察针刺对高脂血症合并脑缺血损伤大鼠大脑海马区细胞凋亡及钙结合蛋白(Calbindin)D28 K(CB)表达的影响。方法:SD雄性大鼠,随机分为正常对照组、模型组、治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组,每组10只。采用经典高脂配方饲料喂养并结合FeCl3化学刺激诱导血栓性闭塞大脑中动脉,造成大鼠高脂血症合并脑缺血模型。其中治疗Ⅰ组先电针"三阴交""丰隆",每日1次,治疗10 d后再造脑缺血模型;治疗Ⅱ组在造模成功后再开始治疗。两治疗组造模完成后均电针"三阴交""丰隆",手针"百会""水沟",每日1次,治疗7 d。应用免疫组化方法观察大鼠海马区CB蛋白表达的变化,原位末端标记染色法观察海马区神经细胞的凋亡情况。结果:高脂血症大鼠局灶性脑缺血后细胞凋亡率较正常组明显增高,CB阳性细胞较正常组明显减少,阳性强度也减弱(P0.05);针刺后各治疗组CB阳性细胞的表达明显增加,其中治疗Ⅰ组较治疗Ⅱ组增加显著(P0.05),同时各治疗组神经细胞凋亡亦明显减少,以治疗Ⅰ组较为明显(P0.05)。结论:针刺可减少高脂血症大鼠海马区神经细胞的凋亡,增加CB的表达,减轻脑缺血损伤程度。     

“调神通络”针法对脑缺血大鼠大脑皮层蛋白激酶Cγ、蛋白激酶Cδ表达的影响

目的:探讨局灶脑缺血再灌注大鼠蛋白激酶C(PKC)γ、PKCδ表达在缺血性脑损害中的动态变化规律以及针刺的干预机制。方法:Wistar大鼠随机分为针刺组、模型组和正常组。前两组再分为缺血再灌注4h、12h、24h、72h组。采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血再灌注模型。电针针刺大鼠右侧顶中线和顶旁线,频率2Hz/15Hz,强度1mA。运用免疫组化方法观察缺血侧大脑皮层PKCγ、PKCδ吸光度值。结果:PKCγ、PKCδ在正常组呈基础水平表达,模型组与正常组相比PKCγ、PKCδ表达明显升高(P<0.01)。针刺组与模型组相比,相应时间点PKCγ、PKCδ吸光度值减弱(P<0.01,P<0.05)。结论:脑缺血再灌注损伤后PKCγ、PKCδ的异常表达与神经元坏死、凋亡有密切的联系。针刺能明显减少PKCγ、PKCδ蛋白表达及神经元凋亡,对脑缺血神经元起着保护作用。     

督脉穴位电针对暂时性脑缺血所致神经细胞死亡的影响

目的 :观察电针对神经细胞死亡、DNA损伤及凋亡相关基因蛋白 (Bcl 2、Bax、P53 )表达的影响。方法 :采用短暂脑缺血再灌注 (MCAo)模型 ,应用HE、TUNEL、免疫组织化学等实验技术进行观察。结果 :大脑中动脉阻塞 2hr后 ,随着再灌时间的增加梗塞灶面积进行性发展 ,在不同再灌时间点 ,电针均能减小梗塞面积 ,而且电针可明显减少短暂脑缺血再灌注后细胞坏死和DNA损伤 ,并上调Bcl 2 /Bax比值 ,和减少P53的表达。结论 :电针具有神经保护作用 ,其部分作用可能通过调节凋亡相关基因蛋白的表达而实现