芹黄素对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-435S侵袭和增殖能力的影响

透明质酸酶（Hyalase）是一种基质降解酶，它参与了肿瘤的侵袭转移过程。有研究表明，芹黄素可以抑制Hyalase的活性。我们通过建立乳腺癌细胞体外侵袭模型。观察芹黄索对两种乳腺癌细胞株侵袭和增殖能力的影响。     

脾源性酪氨酸激酶基因的再表达对乳腺癌细胞生长、转移的影响

目的 探讨脾源性酪氨酸激酶（Syk）基因的再表达对裸鼠乳腺癌肿瘤生长和转移的影响。方法 5-氮-2’-脱氧胞苷处理人乳腺癌细胞株MDA-MB-435s，甲基化特异性PCR（MSP）检测Syk基因的甲基化，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Syk基因的再表达，并用此处理过的细胞株和未经处理的细胞株分别接种于10裸鼠皮下，观察裸鼠成瘤率及肿瘤转移情况。结果 MSP检测用5-氮-2’-脱氧胞苷处理过的人乳腺癌MDA-MB-435s细胞株，Syk基因启动子没有甲基化，RT-PCR可检测到Syk基因，用有Syk基因再表达的MDA-MB-435s细胞株接种于10只裸鼠皮下，8周后有2只形成肿瘤，无1例肺部转移。而无Syk基因表达细胞株10只都形成肿瘤，并在肺部形成转移灶。对照组的成瘤率及肺转移率显著高于治疗组。结论 5-氮-2’-脱氧胞苷通过去甲基化使MDA-MB-435细胞株中Syk基因再表达。Syk基因的再表达可抑制荷瘤裸鼠乳腺癌的生长和转移。     

肼苯哒嗪与三苯氧胺协同抗雌激素受体α阴性乳腺癌的研究

目的观察肼苯哒嗪对雌激素受体(ER)α阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435ERα基因诱导表达作用；肼苯哒嗪联合三苯氧胺(TAM)对ERα阴性乳腺癌细胞的体外抑制作用。方法肼苯哒嗪处理ERα阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435，逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测ERα mRNA表达；肼苯哒嗪、TAM分别或联合作用于MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞，噻唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞仪测定细胞周期分布和凋亡率。透射电镜观察细胞超微结构。结果肼苯哒嗪能诱导MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞表达ERα mRNA。当肼苯哒嗪浓度≥10μmol／L可抑制MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞生长、阻滞细胞周期于G0／G1期，诱导这两种细胞凋亡，凋亡率分别为11．20％和8．71％；TAM对MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞生长、细胞周期无影响；联合用药组显著抑制细胞生长，诱导这两种细胞凋亡，凋亡率分别为48．8％和53．1％。对照组和TAM组细胞形态较好；肼苯哒嗪作用组细胞变性改变多见；联合用药组主要表现为细胞坏死，但未发现有凋亡小体的存在。结论肼苯哒嗪能诱导ERα阴性乳腺癌表达ERα mRNA，恢复ERα阴性乳腺癌细胞对TAM的敏感性，联合TAM能协同抑制ERα阴性乳腺癌细胞生长，诱导细胞凋亡，从而为ERα阴性乳腺癌开辟新的内分泌治疗途径提供实验依据。     

蓝萼乙素对三阴性乳腺癌 MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨蓝萼乙素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法:体外培养人乳腺癌细胞MDA-MB-231,加入不同浓度(0、2、4、8μmol/L)蓝萼乙素干预处理,采用MTT法检测细胞增殖能力;划痕实验考察细胞迁移能力;Transwell小室法考察细胞侵袭能力;Western blotting法检测细胞内p38MAPK、p-p38MAPK、FOXO3a及上皮-间质转化(EMT)相关标志物(E-cadherin、Vimentin及N-cadherin)的表达水平。结果:蓝萼乙素浓度为2、4、8μmol/L时,细胞增殖率分别为(83.2±6.90)%、(70.72±6.53)%、(45.43±7.51)%,较空白对照组[(100.00±7.84)%]降低;细胞侵袭数量分别为(300.54±24.91)、(255.44±23.59)、(208.66±36.18),较空白对照组(368.44±28.32)降低;细胞迁移距离分别为(487.11±53.00)μm、(394.93±61.91)μm、(312.88±35.42)μm,较空白对照组[(559.37±75.77)μm]降低;p-p38MAPK表达量分别为(1.38±0.11)、(1.69±0.13)、(2.23±0.19),较空白对照组(1.00±0.09)增加;FOXO3α表达量分别为(1.40±0.16)、(1.97±0.31)、(2.44±0.26),较空白对照组(1.00±0.18)增加;E-cadherin表达量分别为(1.15±0.11)、(1.77±0.22)、(1.86±0.15),较空白对照组(1.00±0.11)增加;Vimentin表达量分别为(0.86±0.04)、(0.49±0.05)、(0.54±0.04),较空白对照组(1.00±0.04)减少;N-cadherin表达量分别为(0.66±0.07)、(0.58±0.08)、(0.42±0.04),较空白对照组(1.00±0.12)减少,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论:蓝萼乙素可通过介导p38MAPK/FOXO3a信号传导有效干扰肿瘤细胞EMT进程,发挥其抑制三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用。     

生长抑素对人胆管癌SK-ChA-1细胞生长和侵袭能力的影响

胆管癌的预后恶劣 ,其治疗手段主要依赖于早期手术。化疗和放疗通常缺乏明显的疗效 ,为此迫切需要寻找一种新的有效的治疗方法。本研究应用ＭＴＴ、3 Ｈ 胸腺嘧啶脱氧核苷 (3 Ｈ ＴｄＲ)掺入法和人工基底膜技术 ,观察人工合成的八肽生长抑素(ＳＭＳ2 0 1 995 ,ＳＭＳ)对一株生长抑素受体阳性的胆管癌细胞株(ＳＫ ＣｈＡ 1 )增殖和侵袭的影响。材料与方法1 .人胆管癌细胞株 (ＳＫ ＣｈＡ 1 )由ＫｎｕｔｈＡ教授惠赠。ＳＭＳ由Ｓｕｔｅｒ教授惠赠。本实验设对照组和实验组 ,在 96孔培养板接种细胞悬液 1 0 0 μｌ(5 0 0 0个 /孔) ,实验组加入…     

10-HCPT对人肝癌细胞HepG2体外生长及凋亡的影响

我们观察了 10 羟基喜树碱(10 HCPT)对人肝癌细胞株HepG2体外生长及其凋亡率的影响,为10 HCPT在肝癌辅助治疗中的应用提供了实验依据。材料与方法一、材料人肝癌HepG2 细胞株(HepG2)由重庆医科大学肝脏病研究所提供。10 HCPT由中国医学科学院药植所新药中心提供。二、方法1     

1,25二羟维生素D3与5-氟尿嘧啶对乳腺癌细胞生长及凋亡的影响

目的研究1，25二羟维生素D3[1，25(OH)2D3]与5-氟尿嘧啶(5-Fu)对人乳腺癌细胞株MCF-7生长及凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞术测定细胞周期和凋亡率，免疫组织化学法检测bcl-2蛋白表达。结果1，25(OH)2D3与5-Fu均可抑制MCF-7细胞生长、1，25(OH)2D3阻滞细胞周期于G0／G1期，5-Fu阻滞细胞周期于S期，并可诱导细胞凋亡；当两药联合应用时，上述作用得到显著加强，凋亡率明显上升。两药均可下调bcl-2蛋白表达，当两药联合应用时，bcl-2蛋白几乎不表达。结论1，25(OH)2D3与5-Fu联合应用对乳腺癌细胞具有协同抑制生长和诱导凋亡作用。     

p21活化激酶4蛋白对乳腺癌细胞凋亡、迁移侵袭和上皮-间充质转化的影响

目的:探讨p21活化激酶4(PAK4)蛋白对乳腺癌细胞凋亡、侵袭迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:选取2018年7月至2019年7月河南省人民医院收治的175例乳腺癌和癌旁组织作为研究对象,采用免疫组织化学分析PAK4蛋白表达水平。MCF-7细胞随机分为两组,采用慢病毒介导PAK4短发卡RNA(shRNA)...     

三阴性乳腺癌中linc00921通过靶向调控微小RNA-9-5p对细胞侵袭能力的影响

目的观察三阴性乳腺癌细胞中长链非编码RNA linc00921靶向调控微小RNA(miR)-9-5p对细胞侵袭能力的影响。方法收集2019年4月至2020年4月期间河北医科大学第四医院乳腺外科三阴性乳腺癌及癌旁标本共30例作为研究对象, 利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析linc00921与miR-9-5p表达的相关性;将MDA-MB-231细胞分为linc00921过表达组和对照组, 利用细胞侵袭实验观察其对细胞侵袭能力的影响;利用实时荧光定量PCR检测linc00921对miR-9-5p表达的影响;采用生物信息学分析及双荧光素酶报告基因验证linc00921与miR-9-5p的关系;将细胞分为miR-9-5p mimics+ linc00921组和miR-NC+linc00921组, 观察linc00921影响细胞的侵袭能力是否与miR-9-5p有关。两组间比较采用t检验。结果过表达linc00921组侵袭细胞数[(154.50±12.06)个]低于对照组细胞[(400.50±6.36)个, t=61.500, P<0.05];生物信息学分析及双荧光素酶报告基因验证结...     

蛋白酶体激活因子REG gamma基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的影响

目的 观察蛋白酶体激活因子REGgamma(REGy)基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的影响.方法 构建真核表达重组体PcDNA3.1-REGy并将其以脂质体转染法导入细胞,以600 mg/L浓度的G418连续筛选转染细胞6周,获得稳定高表达该基因的细胞株.分别以噻唑蓝(MTT)、流式细胞仪(FCM)、软琼脂集落形成试验检测其对细胞生长的影响.免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果 转染REGy/的细胞有外源REGy/基因的整合及表达,经Western blot检测其表达较未转染组和仅转染空载体组明显增加.MTT法检测发现转染REGy细胞生长加速;FCM检测提示转染REGy组、未转染组和仅转染空载体组在S+G2+M增殖期的细胞比例分别为55.91%、44.09%、43.69%;软琼脂集落形成试验显示其平均集落形成率分别为10.23%、3.67%、4.06%.转染REGy/基因后PCNA表达明显增强.结论 转染外源野生型REGy基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有加速其生长、促进其增殖的作用.     

微小RNA-518b在乳腺浸润性导管癌中的表达及其功能

目的 观察miR-518b在乳腺癌中的表达,以及对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖、细胞周期、凋亡和侵袭能力的影响.方法 运用定量逆转录聚合酶链反应(PCR)检测乳腺癌及正常组织中miR-518b的表达量,结合临床病理资料,分析其异常表达与各病理因素的相关性.并运用噻唑蓝(MTT)比色法了解其增殖,流式细胞仪分析细胞的周期、凋亡,Transwell 实验观察其对细胞侵袭能力的影响.结果 乳腺癌组织中miR-518b表达水平为2.751 585±5.856 351,正常组织中为7.334841±9.843 424,癌组织中miR-518b表达明显低于正常组织(P＜0.01).miR-518b在乳腺癌中的表达异常与淋巴结转移相关(P＜0.01),与病理分期、肿瘤大小、原癌基因人类表皮生长因子受体2(HER-2)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、p53无明显相关性.在48h浓度为150 nmol/L时,miR-518b对乳腺癌细胞的抑制作用最明显,抑制率为59.9％.与空对照组和负对照组比较,G0/G1期细胞未见明显增多(75.52±1.78)％,S期无明显减少(9.52±0.91)％,早期凋亡细胞比例未见明显升高(2.60±0.06)％(P＞0.05).Transwell实验结果显示随着miR-518 bmimics浓度的增加,穿出小室膜肿瘤细胞大致呈递减趋势,并与对照组差异明显(P＜0.01).结论 miR-518b在乳腺癌患者中异常表达,癌组织中的表达明显低于正常组织,miR-518b对乳腺癌细胞株的增殖和侵袭能力有明显抑制作用,其在肿瘤发生发展中可能担任着抑癌基因的角色.     

透明质酸酶及基质金属蛋白酶-9在人乳腺癌侵袭与转移中的意义

目的研究透明质酸酶(HAase)与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在人乳腺癌侵袭与转移中的意义。方法应用组织匀浆、酶连吸附测定法及免疫组化等方法测定HAase和MMP-9在人乳腺癌中的表达和其病理特征比较。结果①乳腺癌组织学分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级组HAase的分别为4.89±2.55、8.03±2.66、12.00±3.96 mU/g(n=10,20,3),Ⅲ级组>Ⅱ级组>Ⅰ级组(P<0.05)。乳腺癌有腋淋巴结转移组HAase表达(8.27±3.26 mU/g,n=23)明显高于无腋淋巴结转移组(5.53±2.82 mU/g,n=10)(t=-2.305,P=0.028)。②MMP-9阳性率在淋巴结转移组为(78.3%,18/23),明显高于无淋巴结转移组(30.0%,3/10)(P=0.016)。③MMP-9阳性组(n=21)HAase(8.57±3.12)mU/g明显高于阴性组(n=12)(5.47±2.85)mU/g(t=2.830,P=0.008)。结论HAase和MMP-9一样,与人乳腺癌侵袭与转移有关。     

RNA干扰沉默JMJD2A基因表达对人乳腺癌细胞MCF-7的影响

目的 观察特异性小干扰RNA(siRNA)技术沉默JMJD2A基因表达对人乳腺癌细胞MCF-7生物学特性的影响.方法 体外化学合成JMJD2A序列特异性双链siRNA,经HiPerFect Transfection Reagent转染人乳腺癌细胞株MCF-7.收集siRNA干扰的细胞,Real time逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白印迹分别检测JMJD2A mRNA和蛋白的抑制水平,并采用WST-8法、流式细胞仪测定细胞增殖能力和细胞周期的变化,Transwell小室测定细胞侵袭、迁移能力的变化.结果 JMJD2A siRNA能有效抑制JMJD2A mRNA和蛋白的表达(P<0.05);经siRNA干扰后的细胞,细胞增殖能力显著减低[1.45±0.05比1.73±0.02(48 h A值),P<0.05];Go/G1期细胞百分比明显增加(53.80±1.80比44.84±1.86,P<0.05).S期细胞百分比明显减少(36.55±1.52比47.06±1.26,P<0.05);细胞侵袭、迁移能力明显降低(P<0.05).结论 采用siRNA干扰JMJD2A mRNA和蛋白表达后,能有效逆转乳腺癌细胞的某些恶性生物学特点,表明JMJD2A与乳腺癌的发生、发展及转移有一定关系.     

肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因对人乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响

目的 观察肿瘤相关钙信号传导蛋白-2(TROP-2)基因小干扰RNA (siRNA)对乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响.方法 培养人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株,以荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)方法检测TROP-2基因mRNA表达;筛选出TROP-2表达最高者.采用TROP4基因siRNA转染乳腺癌细胞,分别以荧光实时定量RT-PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因mRNA和蛋白水平,然后以噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力.结果 人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-35、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株TROP-2 mRNA分别是1.362±0.057、2.207±0.056、2.997±0.052、0.136±0.045、0.122±0.025、0.194±0.028和2.706±0.039,以MCF-7细胞最高;以TROP-2 siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后,癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;黏附实验结果显示,5、10、20 nmol/L siRNA组黏附率分别为(52.9±2.5)％、(25.6±2.3)％、(12.8±2.2)％(P＜0.01);Transwell实验结果显示,5、10和20 mol/L siRNA组穿过滤膜的细胞分别为78±17、39±15、19±16,而对照组分别为136±25、139±21(P＜0.01).结论 TROP-2基因在乳腺癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染乳腺癌细胞,可抑制乳腺癌细胞黏附和侵袭能力.     

不同浓度罗哌卡因对乳腺癌MCF-7细胞增殖和细胞周期的作用研究

目的观察不同浓度罗哌卡因对乳腺癌MCF-7细胞增殖和细胞周期的影响并探讨其机制。方法人乳腺癌细胞MCF-7接种于培养板培养24h,随机分为四组:对照组(C组)、罗哌卡因100μg/ml组(R1组)、罗哌卡因200μg/ml组(R2组)和罗哌卡因400μg/ml组(R3组)处理乳腺癌MCF-7细胞48h后,检测其细胞增殖能力(细胞活力)和细胞周期。检测R3组作用于MCF-7细胞48h后TCF-4、beta-catenin的蛋白表达水平。结果 R2、R3组MCF-7细胞活力明显低于C组(P0.05);R1、R2、R3组MCF-7细胞G0/G1期细胞明显少于C组,S期和G2/M期细胞明显多于C组(P0.05);R3组TCF-4和beta-catenin蛋白表达水平明显低于C组(P0.05)。结论罗哌卡因可能通过下调TCF-4和beta-catenin蛋白表达水平抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖。     

肿瘤抑制基因DBC2抑制乳腺癌MDA-MB-435S细胞增殖并诱导凋亡

目的 观察肿瘤抑癌基因DBC2(deletion in breast cancer 2)的过表达在乳腺癌MDA-MB-435S细胞中的功能.方法 野生型DBC2基因的真核表达载体pEBG-DBC2瞬时转染MDA-MB-435S细胞72 h,噻唑蓝(MTT)比色法绘制DBC2转染前后MDA-MB-435S细胞生长曲线;流式细胞术检测DBC2的瞬时过表达对MDA-MB-435S细胞周期的影响,TUNEL方法 原位检测DBC2的过表达诱导MDA-MB-435S细胞凋亡.结果 DBC2基因在MDA-MB-435S细胞中的过表达可显著抑制该细胞的增殖,同时DBC2基因的过表达可诱导该乳腺癌细胞周期的G_1期阻滞(64.05%比71.72%)和细胞凋亡(0.09%比5.29%).TUNEL实验证实DBC2诱导MDA-MB-435S细胞凋亡的百分比为8%.结论 DBC2基因体外抑制乳腺癌细胞生长的功能,可能通过细胞周期G_1期停滞,以及诱导细胞凋亡等机制实现.     

熊果酸对MCF-7乳腺癌细胞生长的影响

目的 观察熊果酸对MCF-7乳腺癌细胞增殖、凋亡、细胞侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响.方法 将1、10、100 μmol/L的熊果酸分别作用于乳腺癌MCF-7细胞12、24、48 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力变化及生长抑制率,流式细胞术及Transwell小室法检测熊果酸作用48h时MCF-7细胞周期、细胞凋亡率及细胞侵袭力.将乳腺癌MCF-7细胞接种于裸鼠,成瘤后分为生理盐水对照组、熊果酸低剂量组(每日1 mg/kg)、中剂量组(每日5 mg/kg)和高剂量组(每日25 mg/kg),检测5、10、15 d裸鼠移植瘤体积、肿瘤生长抑制率及15 d时肝肾功能、血常规变化.结果 随熊果酸浓度增加及作用时间延长,MCF-7细胞生长及凋亡发生受到显著影响,100 μmol/L熊果酸作用48 h时,细胞生长抑制率为46.0%,生长周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率为(16.48±2.46)%,细胞侵袭力显著下降.熊果酸组裸鼠移植瘤体积显著小于对照组,15 d时熊果酸高剂量组肿瘤体积为(323.5±33.5)mm3生长抑制率为50.9%.各组肝肾功能和血常规无明显变化.结论 熊果酸可引起体外乳腺癌McF-7细胞增殖抑制、细胞凋亡率增加及细胞侵袭力下降,可显著抑制裸鼠乳腺癌移植瘤生长.     

封闭乳腺癌转移抑制基因1的表达可抑制乳腺癌细胞MCF-7的转移

目的 构建乳腺癌中乳腺癌转移抑制基因1( BRMS1)反义基因重组腺病毒载体,并观察其对乳腺癌细胞MCF-7转移能力的影响。方法 应用基因重组技术将BRMS1反义基因构建于腺病毒载体pAD-X,转染293包装细胞得到高滴度重组腺病毒,并用real-time聚合酶链反应(PCR)进行BRMS1基因表达的验证。将重组腺病毒pAD-aBRMS1感染MCF-7细胞后,应用Tran-°swell小室法观察对细胞侵袭和运动能力的影响。结果 酶切结果与预期相符,real-time PCR可检测到感染BRMS1反义基因重组腺病毒后MCF-7细胞没有BRMS1基因表达。病毒转染后Transwell 小室可见,MCF-7细胞的侵袭和运动能力均受到显著的抑制(P值均＜0.01)。结论 重组反义BRMS1腺病毒载体正确构建,其对乳腺癌细胞MCF-7的侵袭和运动都有抑制作用。