日本血吸虫抗原在大肠杆菌中的表达

本文将免疫筛选的阳性克隆转染大肠杆菌Y_(1039),IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE后银染色,显示有一条大于β-半乳糖苷酶(Mw=116kDa)的融合蛋白条带,分子量约140—150kDa.融合蛋白能被感染兔血清所识别,ELISA显示抗体滴度为1:1230.结果表明,经免疫筛选的阳性克隆能在大肠杆菌中诱导表达,表达产物为日本血吸虫抗原.     

日本血吸虫重组32kD抗原的纯化和诊断应用

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结合电渗洗脱的方法分离、纯化日本血吸虫重组３２ｋＤ抗原（ｒＳｊ３２）；用酶联免疫印迹技术（ＥＩＴＢ）分析纯化抗原的免疫活性。用纯化抗原、日本血吸虫成虫抗原（ＡＷＡ）和可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）分别检测慢性血吸虫病人、肺吸虫病人、肝吸虫病人、钩虫病人和健康人血清抗体。结果表明：纯化的ｒＳｊ３２分子量为３７ｋＤ，有较好的免疫活性；用其检测日本血吸虫病的敏感性和特异性与虫源性抗原（ＡＷＡ和ＳＥＡ）无显著性差异。提示ｒＳｊ３２可代替ＡＷＡ和ＳＥＡ用于日本血吸虫病诊断     

日本血吸虫循环免疫复合物中抗原的鉴定

用低浓度ＰＥＧ（ＭＷ６０００）提取的日本血吸虫感染兔血清中循环免疫复合物（ＣＩＣ）直接免疫家兔，制备ＣＩＣ兔血清。采用酶联免疫印迹技术（ＥＩＴＢ）分析鉴定日本血吸虫ＣＩＣ中抗原成份。结果表明，ＣＩＣ中成虫及其排泄分泌物源性抗原成份有１７种，虫卵源性抗原成份有５种。且ＩＦＡＴ方法分析ＣＩＣ中抗原成份定位于成虫表膜及肠腔上皮。     

日本血吸虫成虫和虫卵主要血清学抗原的鉴定和理化学分析

应用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳、化学染色和免疫印斑对日本血吸虫成虫和虫卵的主要血清学抗原进行了鉴定和理化学分析。成虫有8个主要的血清学抗原分子,其分子量和化学性质分别为152kDa、脂蛋白;145kDa、脂蛋白;32kDa、脂蛋白;30kDa、脂蛋白;28kDa、糖脂蛋白;15kDa、糖脂蛋白;12kDa、糖脂蛋白;11kDa、糖脂蛋白。虫卵有7个主要血清学抗原分子,其分子量和化学性质性质分别为32kDa、脂蛋白;28kDa、脂蛋白;15kDa、糖蛋白;12.5kDa、脂蛋白;12kDa、糖蛋白;11kDa、糖蛋白;10.5kDa、糖蛋白。     

重组Calpain蛋白诱导抗体产生及检测日本血吸虫感染的研究

目的 研究在大肠杆菌中表达的日本血吸虫Calpain蛋白的免疫原性及其在日本血吸虫病诊断上的应用。方 法用重组Calpain蛋白免疫BALB／c小鼠，ELISA法测定特异性IgG抗体的动态变化及其IgG亚型(IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3)产生特征；同时用重组Calpain蛋白作为诊断抗原，粪检血吸虫病阳性患者血清作为一抗，肝吸虫阳性患者血清作为考核交叉反应血清。结果 重组Calpain抗原免疫小鼠后，产生了一个极高的抗Calpain特异性抗体，免疫4周IgG类抗体达到高峰，与对照组鼠相比较免疫鼠血清中IgG1，IgG2a，IgG2b特异性抗体也显著上升；Calpain重组抗原血清检测日本血吸虫和粪检的符合率为100％，粪检阳性EPG低的个体抗Calpain抗体滴度高，EPG高的患者抗Calpain抗体滴度反而低，与肝吸虫的交叉反应率为37％。结论 日本血吸虫Calpain是一个具有免疫原性的蛋白，能够激发宿主产生高水平的免疫球蛋白，能够敏感地测定日本血吸虫的感染，提示Calpain可以发展成为日本血吸虫病的诊断抗原和日本血吸虫疫苗候选分子。     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的分析

采用免疫沉淀技术和ＥＩＴＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）。结果：能被ＳＩＥＡ免疫血清识别的ＳＩＥＡ带主要于３０．８ＫＵ到４９．６ＫＵ之间，其主要反应带为４９．６ＫＵ，３９．７ＫＵ和３３．７ＫＵ。推测４９．６ＫＵ和３３．７ＫＵ这两怕 诱导宿主产生抗卵或熟过程中可能起着重要作用。     

未成熟日本血吸虫卵的组分蛋白及其免疫学特性的研究

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ对日本血吸虫４周、５周和６周－ＳＥＡ进行分析，分别出现２１、１４和２０条组分蛋白带，三者间既有共同组分又存在差异，显著出不同的分子基础。     

重组日本血吸虫副肌球蛋白的表达与纯化

用基因重组技术 ,将日本血吸虫副肌球蛋白 (rSj97)基因亚克隆至表达载体pQE30上。在IPTG诱导下 ,重组日本血吸虫副肌球蛋白在大肠杆菌中得以高效表达。通过快速蛋白质液相色谱仪 (FPLC) ,经TALON柱和离子交换柱两步分离纯化 ,获得大量高纯度的重组日本血吸虫副肌球蛋白 ,为水牛现场试验提供了充足的抗原     

抗日本血吸虫循环抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

为检测日本血吸虫宿主循环抗原提供有价值的McAb,用小鼠骨髓瘤细胞SP2/O株与日本血吸虫循环抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞进行融合,融合率90.20%。经用ELISA和IFA检测,总阳性率34.13%。经多次筛选和克隆化后,获得2株分泌McAb的细胞株:G-A12和H-E9。它们均属IgG2a亚类。Western blot结果表明G-A 12所针对的靶抗原为sjCAg31KD,H-E9为SjAW 31 KD。IFA检测发现H-E9主要定位于成虫表膜;G-A12主要定位于成虫肠道。这2株杂交瘤细胞在体外培养下稳定地分泌特异性抗体迄今已达6个月。     

抗日本血吸虫单克隆抗体制备及其靶抗原性质的研究

为建立两株抗日本血吸虫单克隆抗体－ＣＡ－７、ＣＡ－８，（均为ＩｇＭ型）。用单抗ＤＯＴ－ＥＬＩＳＡ方法可检测出血吸虫感染兔血清中的靶抗原。ＣＡ－７的靶抗原存在于虫卵、尾蚴中；ＣＡ－８的靶抗原存在于虫卵、尾蚴和成虫中。用亲和导析的方法分离纯化了这两株单抗的靶抗原，实验结果表明ＣＡ－７和ＣＡ－８的靶抗原是中性糖含量分别为２３．３％和１４．７％，Ｍｒ为２２０×１０＾３和２００×１０＾３的糖蛋白，这两种抗原     

日本血吸虫表面膜抗原23KDα的克隆及其鉴定

根据已报道的２３ＫＤα基因序列，设计了２个寡核苷酸引物，应用聚合酶链反应技术，将提取的日本血吸虫成虫的总ＲＮＡ逆转录成ｃＤＮＡ进行扩增。扩增的基因克隆到质粒ｐＢｌｕｓｒｉｐｔ中，重组质粒转化Ｅ．ｃｏｌｉ ＴＧ１，在ＬＢ平板上挑阳性克隆经酶切分析，ＰＣＲ扩增及测序鉴定含完整２３ＫＤα基因的重组质粒。     

日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原及其组分抗原的研究

目的:探讨日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵的可溶性抗原雄虫(AWA-m、雌虫AWA-f、虫卵SEA)及其组分抗原的特性.方法:用DE22纤维素层析柱对日本血吸虫AWA-m,AWA-f,SEA抗原进行纯化,得到相应组分抗原.分别以SDS-PAGE和Western blot对组分抗原进行全面分析,并与相应未经纯化的可溶性抗原作比较.结果:经DE22纤维素层析处理的AWA-m,AWA-f,SEA,均能获得含多种蛋白的组分抗原.SDS-PAGE结果表明,AWA-m见10条主带和9条次带,其中Mr 37 000,28 000,25 000为特异性条带,出现8条免疫反应阳性带;而AWA-m组分抗原为9条蛋白带和6条免疫反应阳性带.AWA-f见15条蛋白带,其中Mr 26 500为特异性条带,组分抗原为8条蛋白带.AWA-f粗抗原及其组分抗原均见9条反应带.SEA见8条主带和10条次带,13条为免疫反应阳性条带;SEA组分抗原见11条带,其中9条为免疫反应阳性带.结论:AWA-m,AWA-f,SEA经DE22纤维素层析纯化获得组分抗原,方法简单、可靠.该组分抗原含有粗抗原的主要免疫反应成分,去除了多种与日本血吸虫病免疫反应无关的蛋白.     

日本血吸虫成虫分泌抗原的鉴定

目的制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原,对其免疫原性以及免疫反应性进行初步鉴定。方法日本血吸虫尾蚴感染家兔,42 d后剖杀获取成虫,将虫体置无血清DMEM培养基中,5%CO2孵箱37℃培养4 h,得到成虫分泌代谢抗原;用该抗原免疫小鼠,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体反应;用该抗原包板,ELISA法检测血吸虫感染人血清抗体效价;采用十二烷基硫酸钠聚丙酰烯胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其组分进行分析,然后用Western blot分析其对抗成虫分泌代谢抗原单抗发生反应的蛋白条带。结果成功制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原;免疫小鼠可产生较高滴度(1∶16 000)抗体反应;急性血吸虫病患者、慢性血吸虫病患者、晚期血吸虫病患者和钩虫病患者血清抗该抗原的抗体效价分别为1∶800、1∶400、1∶800和1∶100,华支睾吸虫患者和正常人血清均为阴性;SDS-PAGE显示其具有4条蛋白条带,分子量分别是13、40、60和180 ku左右;Westernblot结果表明该抗原能够被抗成虫分泌代谢抗原单抗在5ku左右处识别。结论制备的日本血吸虫成虫分泌代谢抗原具有较强的免疫原性和免疫反应性。     

日本血吸虫表面膜抗原23KDa的克隆及其鉴定

根据已报道的２３ＫＤａ基因序列，设计了２个寡核苷酸引物，应用聚合酶链反应技术，将提取的日本血吸虫成虫的总ＲＮＡ逆转录成ｃＤＮＡ进行扩增（ＲＴ－ＰＣＲ）。扩增的基因克隆到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ中，重组质粒转化Ｅ．ｃｏｌｉＴＧ１，在ＬＢ（Ａｍｐ＋）平板上挑阳性克隆经酶切分析，ＰＣＲ扩增及测序鉴定等含完整２３ＫＤａ基因的重组质粒     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原诱导抗卵免疫的初步研究

采用日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）及成熟虫卵可溶性抗原（ＳＥＡ）分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，发现ＳＩＥＡ诱导小鼠产生显著的抗生殖及抗卵胚发育的免疫力，与对照组比较，ＳＩＥＡ免疫鼠在攻击感染后４６天，肝，肠组织内总虫卵数明显下降，成熟虫卵数和粪卵数分别降低了５９．９８％，６６．８６％和６６．９７％，粪卵下降程度与肝，肠组织中成熟虫卵的减少相一致，ＳＥＡ免疫后未呈现上述效应。     

抗日本血吸虫单克隆抗体制备及其靶抗原性质的研究

为建立两株抗日本血吸虫单克隆抗—ＣＡ－７、ＣＡ－８，（均为ＩｇＭ型）。用单抗ＤＯＴ－ＥＬＩＳＡ方法可检测出血吸虫感染兔血清中的靶抗原。ＣＡ－７的靶抗原存在于虫卵、尾蚴中；ＣＡ－８的靶抗原存在于虫卵、尾蚴和成虫中。用亲和层析的方法分离纯化了这两株单抗的靶抗原。实验结果表明ＣＡ－７和ＣＡ－８的靶抗原是中性糖含量分别为２３．３％和１４．７％，Ｍｒ为２２０×１０３和２００×１０３的糖蛋白。这两种抗原经高碘酸氧化后，都丧失与单抗结合的能力；但经蛋白酶消化后，仍保留抗原活性，表明与单抗ＣＡ－７、ＣＡ－８结合的位点均在糖蛋白的糖链上。ＣＡ－７靶抗原经碱水解去除Ｏ－糖链后，丧失与ＣＡ－７单抗结合的能力；ＣＡ－８靶抗原经碱水解后仍保留抗原活性，说明ＣＡ－７靶抗原决定簇位于Ｏ－糖链上，ＣＡ－８靶抗原决定簇位于Ｎ－糖链上。